2. REVISÃO DA LITERATURA
5.7 Proteinograma sérico
O proteinograma obtido em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) possibilitou a detecção de até 30 proteínas, cujos pesos moleculares variaram de 24.000 D a 236.000 D (Figura 55). Destas, 10 proteínas foram submetidas às análises estatísticas em razão da sua importância diagnóstica e da evidência de diferença entre os grupos experimentais (Tabela 57). Os resultados obtidos após a inoculação com Salmonella Dublin, mostraram aumento dos níveis séricos de IgGA, ceruloplasmina, haptoglobina, glicoproteína ácida, e proteínas de peso molecular de 34.000 D e 33.000 D, ambas não identificadas nominalmente, e pequenas variações dos níveis séricos de transferrina, albumina e IgG de cadeia leve e pesada.
Segundo GRUYS et al. (1994) e GODSON et al. (1996), a ceruloplasmina, a haptoglobina e a glicoproteína ácida são consideradas proteínas de fase aguda, sintetizadas pelo fígado em resposta às citocinas inflamatórias. Por outro lado, a transferrina e a albumina são consideradas proteínas negativas de fase aguda (KANEKO et al., 1997), uma vez que pode haver redução da concentração destas proteínas nos etágios iniciais do processo inflamatório.
Num estudo sobre a cinética das proteínas de fase aguda em bezerros com pneumonia, FAGLIARI et al. (2003) observaram aumento significativo dos níveis séricos de ceruloplasmina, α1-antritipsina, haptoglobina e glicoproteína ácida em bezerros inoculados com Mannheimia haemolytica.
De acordo com ECKERSALL & CONNER (1988), a haptoglobina é considerada uma das principais proteínas de fase aguda nos bovinos, podendo ser utilizada como importante indicador de infecções bacterianas nesta espécie.
A esse respeito, DEIGNAN et al. (2000), utilizando ensaio imunoenzimático, verificaram aumento dos níveis séricos de haptoglobina três dias após a infecção oral de bezerros com Salmonella, enquanto que no grupo controle os níveis de haptoglobina permaneceram normais. Estes autores observaram ainda correlação da gravidade da infecção com os níveis séricos de haptoglobina.
De maneira semelhante, os resultados obtidos com a técnica de SDS-PAGE também mostram aumento significativo do nível sérico da haptoglobina 72 horas após a infecção experimental nos animais do grupo 2 (Tabela 57), mostrando que esta proteína pode ser utilizada no monitoramento da progressão da salmonelose em bezerros.
Quanto à concentração das imunoglobulinas, verificou-se pequena variação dos níveis séricos de IgG de cadeia leve e pesada em todos os grupos avaliados, enquanto que no grupo 2 observou-se aumento do nível sérico de IgA no final da fase experimental.
Estes resultados provavelmente estão relacionados à idade dos animais, pois segundo PERINO & WITTUN (1995), os níveis séricos de IgG colostral presente no soro de bezerros declinam lentamente e alcançam valores mínimos por volta dos 60 dias, enquanto que as concentrações de IgA atingem valores mínimos cerca de 21 dias após o nascimento.
Além disso, a presença de elevadas concentrações de imunoglobulinas de origem materna retardam a resposta imune ativa do bezerro neonato (TIZARD, 2000).
Figura 55. Exemplo do traçado eletroforético do proteinograma sérico de bezerro infectado
Tabela 57. Concentração das proteínas séricas (média±desvio padrão), obtidas em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), em bezerros do grupo
controle (Grupo 1), bezerros infectados experimentalmente com 108 UFC de Salmonella Dublin (Grupo 2), bezerros infectados
experimentalmente com 108UFC de Salmonella Dublin e tratados com florfenicol (Grupo 3) e bezerros infectados experimentalmente
com 108UFC de Salmonella Dublin e tratados com florfenicol associado à fluidoterapia (Grupo 4) antes da inoculação (0 hora) e 12, 24,
36, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132, 144, 156 e 168 horas após a infecção experimental.
Tempo após a inoculação com Salmonella Dublin Proteína e Grupo 0h 24h 48h 72h 96h 120h 144h 168h Imunoglobulina A (PM 167.000; mg/dl) Grupo 1 99,9±53,8Aa 88,4±29,1Aa 88,4±32,2Aa 103±31,8Aa 108±41,2Aa 108±35,0Aa 114±26,2Aa 116±45,5Aa Grupo 2 104±44,6Aa 120±67,7Aa 100±27,3Aa 97,1±32,7Aa 98,3±29,6Aa 99,9±38,1Aa 103±46,8Aa 140±28,4Aa Grupo 3 88,8±44,4Aa 110±40,8Aa 99,5±33,7Aa 115±29,2Aa 103±28,1Aa 112±21,8Aa 119±21,9Aa 120±21,2Aa Grupo 4 88,9±46,4Aa 106±68,1Aa 88,0±60,5Aa 84,5±19,8Aa 106±31,8Aa 91,0±6,06Aa 104±16,6Aa 93,7±14,4Aa Ceruloplasmina (PM 110.000; mg/dl) Grupo 1 3,45±4,24Aa 3,38±4,98Aa 3,57±4,85ABa 3,32±4,73Aa 3,04±3,51Aa 3,31±5,30Aa 2,38±3,68Aa 3,45±4,24Aa
Grupo 2 5,56±5,69Aa 6,27±6,89ABa 4,85±5,45ABa 4,75±5,68Aa 5,06±4,93Aa 4,19±4,13Aa 3,72±5,00ABa 5,56±5,69Aa
Grupo 3 7,16±4,82Aa 4,96±5,98ABa 3,87±6,08Ba 5,60±5,64Aa 5,42±5,50Aa 5,16±5,71ABa 5,17±5,30ABa 4,62±5,07ABa
Grupo 4 7,41±4,15Aa 8,21±3,31Ba 7,07±3,79Aa 6,81±4,05Aa 6,78±3,48Aa 7,80±2,41Ba 6,21±3,60Ba 8,40±3,64Ba Transferrina (PM 81.000; mg/dl) Grupo 1 295±41,9Aa 296±55,6Aa 303±65,4Aa 328±65,3Aa 322±63,4Aa 329±72,4Aa 329±73,5Aa 295±41,9Aa Grupo 2 331±90,9Aa 313±67,1Aa 314±86,2Aa 329±106Aa 329±97,0Aa 312±95,5Aa 293±113Aa 331±90,9Aa Grupo 3 353±62,4Aa 367±85,5Aa 355±55,2Aa 338±55,3Aa 342±41,5Aa 351±65,6Aa 348±73,8Aa 326±44,1Aa Grupo 4 309±38,4Aa 296±38,3Aa 294±47,1Aa 303±44,3Aa 308±31,1Aa 301±46,9Aa 301±26,1Aa 321±55,0Aa
IgG cadeia pesada (PM 57.000; mg/dl)
Grupo 1 1.155±268Aa 1.157±316Aa 1.151±317Aa 1.166±285Aa 1.130±260Aa 1.124±218Aa 1.022±176Aa 1.155±268Aa
Grupo 2 1.156±340Aa 1.105±343Aa 1.098±295Aa 1.079±300Aa 1.006±288Aa 1.039±326Aa 1.167±199Aa 1.156±340Aa
Grupo 3 986±284Aa 1.099±406Aa 1.084±402Aa 1.092±293Aa 956±335Aa 931±353Aa 925±359Aa 935±358Aa
Grupo 4 1.238±414Aa 1.231±355Aa 1.173±407Aab 1.013±464Aa 1.042±394Aab 1.029±413Aab 954±415Aab 886±402Ab
Albumina (PM 65.000; mg/dl)
Grupo 1 4.047±232Aa 3.953±152Aa 3.968±165Aa 3.999±172Aa 4.010±201Aa 3.976±193Aa 4.033±203Aa 4.047±232Aa
Grupo 2 3.909±265Aa 3.806±268Aa 3.854±289Aa 3.873±337Aa 3.750±153ABa 3.763±92,2ABa 3.668±196Aa 3.909±265Aa
Grupo 3 4.138±570Aa 4.067±566Aa 3.978±598Aa 3.959±537Aa 3.911±620ABa 3.867±502ABa 3.935±422Aa 3.766±444Aa
Grupo 4 3.736±299Aa 3.919±240Aa 3.848±152Aa 3.847±192Aa 3.664±150Ba 3.639±195Ba 3.800±238Aa 3.764±256Aa Haptoglobina (PM 41.000; mg/dl) Grupo 1 11,2±3,82Aa 11,3±2,23Aa 12,1±2,16Aa 14,2±5,15Aa 11,5±5,64Aa 14,7±5,97Aa 12,1±4,32Aa 11,2±3,82Aa Grupo 2 20,0±20,3Aa 22,8±27,5Aa 19,3±23,0Aa 34,0±29,5Ba 16,9±10,8Aa 14,0±5,08Aa 13,4±3,79Aa 20,0±20,3Aa Grupo 3 16,3±15,6Aa 16,6±9,97Aa 16,3±8,41Aa 25,9±17,9ABa 26,7±18,5Aa 24,7±20,2Aa 25,2±21,7Aa 23,4±16,7Aa Grupo 4 14,1±7,10Aa 18,0±16,4Aa 14,5±7,89Aa 14,7±6,62Aa 16,0±6,67Aa 16,0±6,23Aa 16,3±7,92Aa 13,4±6,31Aa Glicoproteína ácida (PM 39.000; mg/dl)
Grupo 1 13,2±6,34Aa 10,5±5,45ABa 9,19±1,73ABa 11,5±4,52Aa 10,1±5,41Aa 11,4±5,50Aa 13,1±2,59Aa 13,2±6,34Aa
Grupo 2 14,5±5,12Aa 17,2±5,43Aa 15,6±8,05Ba 16,5±9,69Aa 16,5±8,37Aa 19,3±9,42Aa 15,3±10,2Aa 14,5±5,12ABa
Grupo 3 9,30±8,60Aa 7,03±6,03Ba 8,38±6,62ABa 10,5±5,22Aa 7,56±7,26Aa 9,33±9,40Aa 9,37±7,61Aa 12,1±8,08ABa
Grupo 4 9,07±7,39Aa 11,6±7,67ABa 6,84±7,30Aa 5,92±3,68Aa 7,27±7,48Aa 6,10±3,05Aa 7,36±4,28Aa 4,50±2,72Ba
continuação... NI (PM 34.000; mg/dl)
Grupo 1 7,18±3,87Aa 8,19±5,59Aa 8,31±4,05Aa 8,20±4,42Aa 7,58±5,06Aa 6,40±5,38Aa 8,45±2,54Aa 7,18±3,87Aa
Grupo 2 8,19±9,68Aa 22,7±32,9Aab 24,9±34,5Aab 24,6±23,6Aab 26,4±17,2Aab 43,7±32,4Bab 50,3±51,3Bb 8,19±9,68Bb
Grupo 3 33,5±40,9Aa 28,8±28,0Aa 24,0±22,3Aa 16,4±26,4Aa 11,0±11,4Aa 13,0±15,5ABa 3,49±4,75Aa 5,62±6,58Aa Grupo 4 7,90±6,67Aa 10,6±11,6Aa 9,29±8,28Aa 9,57±13,1Aa 6,33±6,05Aa 3,23±4,83Aa 5,07±5,58Aa 1,39±2,36Aa NI (PM 33.000; mg/dl) Grupo 1 3,56±5,95Aa 3,13±5,02Aa 1,63±2,52Aa 6,96±6,58Aa 2,31±3,58Aa 3,49±6,13Aa 0,0±0,0Aa 3,56±5,95Aa Grupo 2 5,94±6,35Aa 17,3±25,1Aa 13,4±28,4Aa 13,1±20,5Aa 2,20±2,17Aa 2,45±3,70Aa 2,63±5,26Aa 5,94±6,35Aa Grupo 3 8,01±19,6Aa 3,24±3,80Aa 18,2±29,4Aa 10,8±17,8Aa 8,94±10,4Aa 6,93±5,69Aa 12,6±7,79Aa 9,54±8,29Aa Grupo 4 8,01±6,84Aa 3,80±6,36Aa 3,63±6,63Aa 4,97±4,46Aa 3,17±5,01Aa 8,04±4,45Aa 4,42±3,48Aa 6,25±4,97Aa
IgG cadeia leve (PM 27.000; mg/dl)
Grupo 1 460±244Aa 483±212Aa 478±192Aa 450±222Aa 456±204Aa 467±183Aa 445±154Aa 460±244Aa
Grupo 2 397±149Aa 395±201Aa 364±183Aa 349±152Aa 385±192Aa 376±195Aa 438±161Aa 397±149ABa
Grupo 3 419±222Aa 378±207Aa 345±158Aa 379±268Aa 310±130Aa 383±249Aa 354±245Aa 380±198ABa
Grupo 4 442±242Aa 398±189Aab 374±199Aab 351±192Aab 337±175Aab 321±197Aab 301±159Aab 286±153Bb
Médias seguidas de letras maiúsculas iguais na mesma linha e letras minúsculas iguais na mesma coluna não diferem entre si pelo teste de Tukey (P>0,05) PM= Peso molecular