Reconhecimento de Objetos

A tarefa de reconhecimento de objetos foi realizada de acordo com Lager et al., (2013) ,esta tarefa foi realizada em uma câmara de madeira de dimensões 30x 30 x 30 cm, com paredes pintadas em preto, a parede frontal é feita em acrílico e o chão coberto com etil vinil acetato. Os objetos utilizados foram tijolos plásticos de montagem, cada um com diferentes formas e cores, porém mesmo tamanho. Ao longo das experiências os objetos foram utilizados de modo contrabalanceado a fim de mostrar que os animais não demonstram preferência por qualquer um dos objetos. A câmara e os objetos foram completamente limpos antes e depois de cada ensaio com etanol 30% (Figura 7).

Esta tarefa consiste de três fases distintas, cada uma com 10 minutos de duração: uma sessão de habituação, uma sessão de treino e uma sessão de teste no qual o animal deveria discriminar um objeto familiar de um objeto novo. Na primeira sessão, os camundongos foram habituados ao aparelho comportamental sem a presença de objetos e, em seguida, devolvidos à sua gaiola de origem. Vinte e quatro horas após foi realizada a sessão de treino, em que os animais foram expostos a dois objetos iguais (objeto A), e o tempo de exploração foi registrado com dois cronômetros. Uma hora de trinta minutos após o treino, foi realizada a sessão teste na qual foi colocado o camundongo novamente na câmara com um objeto A (famíliar) e o outro foi substituído pelo objeto B (novo) e cronometrado o tempo em que o animal explorou cada objeto para avaliar a memória de curto espaço. Vinte e quatro (24) horas após a sessão treino os camundongos foram colocados na câmara de comportamento e um dos objetos familiares (objeto A) foi substituído por um novo objeto (objeto B).

O tempo explorando o objeto familiar e o objeto novo foi cronometrado. A exploração foi considerada quando o animal atingiu, tocou ou direcionou o focinho para o objeto a uma distância de menos de 2 cm. Escalar ou sentar no objeto não foi considerado exploração.

Um escore de discriminação foi então calculado, levando em consideração a diferença entre o tempo de exploração do objeto novo e familiar no dia do teste, e utilizado como um parâmetro cognitivo (Tnovo - Tfamiliar). (LAGER et al., 2013).

Figura 7: Câmara de reconhecimento de objetos com objetos familiares. Fonte: Imagens do próprio pesquisador.

4.7 EUTANÁSIA

Após os testes comportamentais, os camundongos foram eutanasiados, através de inconsciência por aprofundamento de plano anestésico, em câmara de vaporização com isoflurano, durante 5 minutos, seguido de deslocamento cervical.

O método escolhido tem como vantagem a ausência de contaminação do material biológico; procedimento rápido quando executado de forma adequada e por profissional qualificado, são indicados para animais abaixo de 7 kg ou em casos de dificuldade de venopunção; o isofluorano não são inflamáveis e nem explosivos nas concentrações utilizadas (CONCEA, 2013). Após o procedimento, os animais foram descartados apropriadamente e coletados por empresa especializada.

4.8 ASPECTOS ÉTICOS

O presente trabalho respeitou todas as normas estabelecidas por Guias de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório com constituição, deveres e responsabilidades regidos pela Lei nº 11.794, de 2008 (SILVANIA et al., 2013).

4.9 ANÁLISE ESTATÍSTICA

Os dados estatísticos foram computados no software estatístico, sendo expressos pela média e o desvio padrão da média por grupo (D.P.M.), a diferença foi considerada estatisticamente significativa para valores de p<0,05. Os dados foram analisados através do teste de Kruskal-Wallis seguido do teste post-hoc de Dunn.

5. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os resultados encontrados neste trabalho demonstram uma análise da anatomia vegetal da folha do Rosmarinus officinalis e o efeito do extrato hidroalcoólico de Rosmarinus officinalis no tratamento crônico de depressão, ansiedade, compulsão e défict de memória.

5.1 ANÁLISE ANATÔMICA

A epiderme unisseriada com células recobertas por cutícula delgada que impedem a perda de água da planta (Figura 8A-E). Apresentam tricomas tectores unicelulares, multicelulares (Figura 8A), simples e ramificados na face abaxial e tricomas glandulares que estão presentes em ambas as faces, é nos tricomas glandulares que o óleo da planta fica armazenado, nas nervuras e nas margens foliares, sendo que os da face abaxial são maiores que os da face adaxial. Estão presentes dois tipos de tricomas glandulares: séssil formado por quatro células na glândula, encontrado somente na face abaxil e outros menores e pendunculado, presentes em ambas as faces.

Figura 8: Seção transversal da lâmina foliar de Rosmarinus officinalis L. (A) TR (tricoma) 1 – Tricoma glandular em face interna, CT (corte transversal) 1 - A epiderme, recoberta por cutícula delgada, de secção transversal com aumento de 200x. (B) CT2 - A epiderme, recoberta por cutícula delgada, de secção transversal com aumento de 200x.(C) CT3 - A epiderme, recoberta por cutícula delgada, de secção transversal com aumento de 400x. (D) CT4 - A epiderme, recoberta por cutícula delgada, de secção transversal com aumento de 400x. (E) CT5 - A epiderme, recoberta por cutícula delgada, de secção transversal com aumento de 400x.

Devido estudos sobre a anatomia vegetal de Rosmarinus officinalis serem escassos na literatura, neste estudo foram utilizados artigos que falam sobre as caracteristicas anatomicas de plantas que pertencem a mesma família do

Rosmarinus officinalis, a familia Lamiaceae para discussão dos resultados.

Em secção transversal, a lâmina foliar de Ocimum gratissimum L. (Manjericão) um subarbusto aromático pertencente à família Lamiaceae, mesma família do Alecrim, possui epiderme unisseriada, com células da face adaxial maiores em relação às da face abaxial (FERNANDES et al., 2014), já a Salvia

hispanica L. (Chia) possui epiderme adaxial é unistrata com grandes células

prismáticas de paredes e cutícula convexas radiais e tangenciais finas, a epiderme abaxial possui células iguais de forma, menor, cutícula lisa e fina, planta que também pertence a família Lamiaceae (DI SAPIO et al. 2012).

De Oliveira et al., 2013 afirma que a Scutellaria agrestis A. St. –Hil Lamiaceae, possui diversos tricomas de tector com preservação, é composta por células simples ou múltiplas e uniseriadas; eles são geralmente, ligeiramente curvo no ápice e raramente reto, e revestidos com uma cutícula granulada, os tricomas do tector longo com um maior número de células são observados no lado adaxial, cobrindo toda a superfície da lâmina da folha, enquanto pequenos tricomas estão concentrados nas margens, cobrindo as veias em ambos os lados.

Em um estudo realizado por Félix-Silva, 2012 mostra que a folha de Alecrim apresenta tricomas tectores em forma de estrela e tricomas glandulares e epiderme superior contendo células poligonais de contorno reto.

5.2 TESTES COMPORTAMENTAIS