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4. Estudo da hidrólise enzimática do bagaço de caju pré tratado com peróxido de hidrogênio

4.2 Resultados s discussões

4.2.6 Sacarificação e Fermentação Simultânea do BC-PHA

As Figuras 4.5A e 4.5B apresentam os perfis de glicose, xilose e etanol durante os processos SFS utilizando as cepas K. marxianus ATCC e K. marxianus CCA510, respectivamente.

Como pode ser observado nas Figuras 4.5A e 4.5B, o perfil da concentração de glicose são diferentes para as duas cepas de K. marxianus avaliadas. Utilizando a levedura K. marxianus ATCC36907, ocorre um aumento na concentração de glicose com 2 h do processo SFS e após uma diminuição drástica permanecendo constante durante todo o processo e aproximadamente igual a zero. Isto indica que rapidamente a

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levedura fermentou o açúcar e mais rápido que a conversão da celulose em glicose ela é hidrolisada (Lee et al., 2013; Chen et al., 2008).

No entanto, o processo conduzido com K. marxianus CCA510, ocorre uma aumento gradativo da concentração de glicose, alcançando um valor máximo de aproximadamente 30 g/L, valor próximo ao obtido na hidrólise enzimática (36 g/L) avaliada em etapas anteriores desse estudo. Esse perfil indica que a levedura K. marxianus CC510 não consumiu a glicose formada no processo de sacarificação para a produção de etanol. Provavelmente as condições realizadas no processo, temperatura de 45 ºC, não favoreceu o crescimento da levedura.

Para a levedura K. marxianus ATCC36907 obteve-se um nível máximo de 18,0 g/L de etanol usando a cargas de 4 gcelulose (9% m/v de BC-PHA) com 48 h de processo, permanecendo praticamente constante após esse período. Essa concentração de etanol corresponde a aproximadamente 98% de conversão da celulose adicionada no processo SFS. Comparando o tempo combinado (72 + 6 = 78 h), necessários para o processo de hidrólise enzimática e fermentação separado (72 h) e um tempo mínimo médio de fermentação do hidrolisado (6 h), SFS oferece uma vantagem única de completar o processo de produção de etanol com redução do tempo em 38% (48 h).

Integração dos processos de sacarificação e fermentação é importante para a redução do custo da produção de etanol a partir de qualquer matéria-prima lignocelulósica (Saha e Cotta, 2011). Processo SFS, combinando a hidrólise enzimática da celulose com a fermentação da glicose, reduz a acumulação de celulose e de glicose, inibidores da enzima celulase, aumentando assim a taxa de sacarificação e rendimentos de etanol (Chen et al., 2008).

Analisando a Figura 6A, a glicose produzida foi rapidamente convertido em etanol, sem nenhuma acumulação, enquanto a xilose foi utilizado mais lenta do que a glicose, este resultado é semelhante ao obtido por Zhao e Xia (2009).

hidrogêniopara produção de etanol por HFS e SFS. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 Conc e n tr ão ( g/L ) Tempo (h) (A) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 0 5 10 15 20 25 30 35 Conc e n tr ão ( g/L ) Tempo (h) (B)

Figura 4.5 Produção de etanol por SFS, utilizando bagaço de caju pré-tratado com peróxido de hidrogênio alcalino (BC-PHA), 30 FPU/gBC-PHA do complexo celulase, 66 CBU/gBC-PHA β-glicosidase, 4 gcelulose/100 mL, a 45 ºC e 150 rpm utilizando os micro- organismos: (A) K. marxianus ATCC36907 e (B) K. marxianus CCA510. (●) Glicose;

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Tem sido mostrado que os rendimentos mais elevados de etanol podem ser obtidos por Sacarificação e Ferementação Simultânea (SFS) quando comparados com a Hidrólise e Fermentação Separada (HFS) (Tomás-Pejo et al., 2009). No entanto, uma das principais desvantagens de um processo SFS é a temperatura ideal para o crescimento do micro-organismo e para as enzimas. Considerando que, a hidrólise enzimática tem uma temperatura ótima de cerca de 45 a 50 ºC, porém a maioria dos micro-organismos usados na produção de etanol, têm uma temperatura ótima variando entre 30 e 37 °C (Jorgensen et al., 2007), com base no resultados do presente trabalho, a temperatura de 45 °C pode ser aplicada no o processo SFS do bagaço de caju pré- tratado com peróxido de hidrogênio alcalino usando a a levedura K. marxianus

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4.3 Conclusão

Resultados obtidos neste capítulo mostraram que a fibra do caju apresenta potencial em carboidratos para produção de etanol por fermentação. Inicialmente, faz-se necessário o pré-tratamento da fibra com vistas à disponibilização dos açúcares presentes na hemicelulose e celulose. O pré-tratamento com peróxido de hidrogênio promoveu uma elevada solubilização na lignina, tornando a celulose mais disponível ao ataque enzimático.

As condições de hidrólise que proporcionaram maior concentração de glicose e xilose foram com a combinação enzimática do complexo celulase com β-glicosidase, a proporção de 0,61: 0,39. A carga enzimática com 30 FPU/gBC-AHP do complexo celulase e 66 CBU/gBC-AHP de β-glicosidase proporcionou o melhor rendimento em açúcar. Visando uma maior concentração de açucares para uma posterior fermentação, a carga de celulose referente a 4,0 g celulose/100 mL de solução foi utilizada na realização da hidrólise com produção de hidrolisado composto por 35,7 g/L glicose e 13 g/L xilose.

A fermentação em HFS para as três cepas avaliadas resultou em um coeficiente de rendimento de produto com base no consumo de substrato (YP/S) de aproximadamente 0,50 getanol/gglicose valor próximo ao rendimento teórico 0,51. Na fermentação em SFS a temperatura de 45 ºC não favoreceu ao metabolismo celular da cepa de K. marxianus CCA 510, para a cepa de K. marxianus ATCC 36907 obteve-se um nível máximo de 18,0 g/L de etanol.

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REFERÊNCIAS

ALFANI, F., GALLIFUOCO, A., SAPOROSI, A., SPERA, A., AND CANTARELLA, M. Comparison of SHF andSSF processes for the bioconversion of steam-exploded wheat straw. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnolgy, v. 25, p. 184- 192, 2000.

BAILEY, M.J.; BIELY, P.; POUTANEN, K. International testing of methods for assay ofxylanase activity. Journal of Biotechnology, v. 23, p. 257-270, 1992.

BANERJEE, G.; CAR, S.; SCOTT-CRAIG, J.; HODGE, D.B.; WALTON, J.D. Alkaline peroxide pretreatment of corn stover: effects of biomass, peroxide, and enzyme loading and composition on yields of glucose and xylose. Biotechnology for Biofuels, v. 4, p.16, 2011.

BRADFORD, M. M.; A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of proteins utilizing the principles of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. v.72,p. 248-254, 1976.

BUCHAMAN, B., GRUISSEM, W., JONES, R. L. Biochemistry and molecular biology of plants (3rd ed.). Rockville, MD: Courier Companies, Inc. 2006.

CAO, W.; SUN, C.; LIU, R.; YIN, R.; WU, X. Comparison of the effects of five pretreatment methods on enhancing the enzymatic digestibility and ethanol production from sweet sorghum bagasse. Bioresource Technology. v.111, p.215–221, 2012. CHEN, F.; DIXON, R. A.; Lignin modification improves fermentable sugar yields for biofuel production. Nat Biotech. v.25, p.759-761. 2007.

CHEN, H.; HAN, Y.; XU, J. Simultaneous saccharification and fermentation of steam exploded wheat straw pretreated with alkaline peroxide. Process Biochemistry, v.43, p. 1462-1466, 2008.

hidrogêniopara produção de etanol por HFS e SFS.

FENGEL, D.; WEGENER, G. Wood chemistry, ultrastruture, reactions, Berlin: Walter de Gruyter, p.613, 1989.

GAN, Q.; ALLEN, S. J.; TAYLOR, G. Kinetic dynamics in heterogeneous enzymatic hydrolysis of cellulose: an overview, an experimental study and mathematical modeling. Process Biochemistry, v.38, p.1003-1018, 2003.

GHOSE, T. K.; Measurement of cellulase activities. Pure Appl. Chem., v.59, p. 257- 268, 1987.

GNANSOUNOU, E.; DAURIAT, A. Techno-economic analysis of lignocellulosic ethanol: A review. Bioresource Technology, v.101, p.4980–4991, 2010.

GOUVEIA, E.R.; DO NASCIMENTO, R.T.; SOUTO-MAIOR, A.M.; ROCHA, G.J.M.; ROCHA, G.J.M. Validação de metodologia para a caracterização química de bagaço de cana-de-açúcar. Química Nova, v.32, p.1500–1503, 2009.

HEIKINHEIMO, L. Trichoderma reesei cellulases in processing of cotton, Tese (doutorado), VTT Publications 483, Espoo, Finlândia, 2002.

JEOH, T.; ISHIZAWA, C.; DAVIS, M.; HIMMEL, M.; ADNEY, W.; JOHNSON D. Cellulase digestibility of pretreated biomass is limited by cellulose accessibility. Biotechnol. Bioeng.v.98, p.112-122, 2007.

JORGENSEN H, KRISTENSEN JB, FELBY C. Enzymatic conversion of lignocellulose into fermentable sugars: challenges and opportunities. Biofuels Bioprod Bioref, v.1, p.119–34, 2007.

KARAGÖZ, P.; ROCHA, I. V.; ÖZKAN, M.; ANGELIDAKI, I. Alkaline peroxide pretreatment of rapeseed straw for enhancing bioethanol production by Same Vessel

hidrogêniopara produção de etanol por HFS e SFS.

Saccharification and Co-Fermentation. Bioresource Technology., v.104, p. 348-357, 2012.

LEE, J.Y.; LI, P.; LEE, J.; RYU, H.J.; OH, K.K.; Ethanol production from Saccharina japonica using an optimized extremely low acid pretreatment followed by simultaneous saccharification and fermentation. Bioresource Technology. v.127, p.119–125, 2013. LLOYD, T. A.; WYMAN, C. E. Combined sugar yields for dilute sulfuric acid pretreatment of corn stover followed by enzymatic hydrolysis of the remaining solids. Bioresour Technol. v.96, p.1967-1977, 2005.

MCINTOSH, S.; VANCOV, T. Optimisation of dilute alkaline pretreatment for enzymatic saccharification of wheat straw. Biomass Bioenergy. v.35, p. 3094-3103, 2011.

MILLER, G.L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugars. Analytical Chemistry, v. 31, p. 426-428, 1959.

ROCHA, M.V.P.; RODRIGUES, T.H.S.; MELO, V.M.M.; GONÇALVES, L.R.B.; MACEDO, G.R. Cashew apple bagasse as a source of sugars for ethanol production by

Kluyveromyces marxianus CE025. J Ind Microbiol Biotechnol, v.38, p.1099-1107, 2011.

PINHEIRO, A. D. T.; ROCHA, M. V. P.; MACEDO, G. R.; GONÇALVES, L. R. B. Evaluation of cashew apple juice for the production of fuel ethanol. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 148, p. 227-234, 2008.

RODRIGUES, T. H. S.; ROCHA, M. V. P.; MACEDO, G. R.; GONÇALVES, L. R. B. Ethanol Production from Cashew Apple Bagasse: Improvement of Enzymatic Hydrolysis by Microwave-Assisted Alkali Pretreatment. Appl Biochem Biotechnol., v. 164, p. 929- 943, 2011.

hidrogêniopara produção de etanol por HFS e SFS.

SAHA, B. C.; COTTA, M. A. Ethanol Production from Alkaline Peroxide Pretreated Enzymatically Saccharified Wheat Straw. Biotechnol. Prog, v. 22, p. 449-453, 2006.

SAHA, B.C.; COTTA, M.A. Comparison of pretreatment strategies for enzymatic saccharification and fermentation of barley straw to ethanol. New Biotechnol, v.27, p. 10-16. 2010.

SANTOS, V. T. O. Composição e digestibilidade enzimática do bagaço de cana-de açúcar pré-tratado com ácido sulfúrico diluído em reator estático. Dissertação (Mestrado em Ciências) – Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de São Paulo, Lorena – SP, 2010.

SELIG, M.; WEISS, N.; JI Y. Enzymatic saccharification of lignocellulosic biomass.Laboratory Analytical Precedure (LAP)., Technical report, NREL, 2008.

SELIG, M. J.; VINZANT, T. B.; HIMMEL, E. M.; DECKER, S.R. The effect of lignin removal by alkaline peroxide pretreatment on the susceptibility of corn stover to purified cellulolytic and xylanolytic enzymes. Appl Biochem Biotechnol, v.155, p. 397-406, 2009.

SLUITER, A.; HAMES, B.; HYMAN, D.; PAYNE, C.; RUIZ, R.; SCARLATA, C.;SLUITER, A.; SLUITER, J.; TEMPLETON D.; WOLFE, J. Determination of Total Solids in Biomass and Total Dissolved Solids in Liquid Process Samples Laboratory Analytical Procedure (LAP) Issue Date: 3/31/2008. Technical Report NREL/TP-510- 42621 Revised March 2008a.

SLUITER, A.; HAMES, B.; RUIZ, R.; SCARLATA, C.; SLUITER, J;.TEMPLETON, D.;CROCKER, D. Determination of Structural Carbohydrates and Lignin in Biomass Laboratory Analytical Procedure (LAP) Issue Date: 4/25/2008 Technical Report NREL/TP-510-42618Revised April 2008b

hidrogêniopara produção de etanol por HFS e SFS.

SUN, Y.; CHENG, J., Hydrolysis of lignocellulosic materials for ethanol production: a review. Bioresour. Technol. v.83,p. 1-11. 2002.

TOMÁS PEJÓ, E.; OLIVA, J.M.; GONZÁLEZ, A.; BALLESTEROS, I.; BALLESTEROS, M. Bioethanol production from wheat straw by the thermotolerant yeast Kluyveromyces marxianus CECT 10875 in a simultaneous saccharification and fermentation fed-batch process. Fuel. v.88, p.2142–2147, 2009.

VÁSQUEZ, M. P.; SILVA, J. N. C.; SOUZA JR., M. B.; PEREIRA JR., N. Appl. Biochem.and Biotechnol. 136-140, 141-154, 2007.

ZHAO, J., XIA, L. Simultaneous saccharification and fermentation of alkaline- pretreated corn stover to ethanol using a recombinant yeast strain. Fuel Processing Technology, v. 90, p. 1193–1197, 2009.