Sinalização da Grelina em linhagem hipotalâmica mHypoA 2/29 (CLU189)

Baseados nos resultados acima da imunofluorescência, e também no fato de que o hipotálamo apresenta diferentes respostas aos estímulos pré e pós prandiais, pensamos em um experimento em que as células teriam maior ou menor concentração de glicose a fim de

Dessa maneira, tratamos as linhagens hipotalâmicas com DMEM (meio com baixa concentração de glicose)

de Hexarelina por 2, 4, 6 e 8 horas. Verificamos diminuiçã Orexina (Hcrt) após duas horas de tratamento,

quatro horas. Isso reforça nossa ideia de que a expressão de

por Hcrt, pois uma diminuição na expressão gênica deste último pode te diminuição na expressão gênica de

de AgRP após seis horas de incubação com Hexarelina, indicando que a célula apresentou uma resposta orexigênica ao tratamento realizado em baixa concentração de glicose.

Figura 7. a) Expressão gênica de tratamento com DMEM low glucose teste estatístico Anova One Way.

5.7) Sinalização da Grelina em linhagem hipotalâmica mHypoA

Baseados nos resultados acima da imunofluorescência, e também no fato de que o hipotálamo apresenta diferentes respostas aos estímulos pré e pós prandiais, pensamos em um experimento em que as células teriam maior ou menor concentração de glicose a fim de simularmos os estados pré e pós prandiais.

Dessa maneira, tratamos as linhagens hipotalâmicas com DMEM

(meio com baixa concentração de glicose), 0,5% FBS (situação pré prandial) e 1mM de Hexarelina por 2, 4, 6 e 8 horas. Verificamos diminuição na expressão gênica de

após duas horas de tratamento, seguido da diminuição de Isso reforça nossa ideia de que a expressão de Th

, pois uma diminuição na expressão gênica deste último pode te

diminuição na expressão gênica de Th. Em contrapartida, houve aumento do mRNA após seis horas de incubação com Hexarelina, indicando que a célula apresentou uma resposta orexigênica ao tratamento realizado em baixa

e.

Expressão gênica de Th; b) Expressão gênica de Hcrt e c) AgRP em células CLU189 após o low glucose com 0,5% de FBS e 1mM de Hexarelina por 2, 4, 6 e 8 horas. n≥6, p<0,05, teste estatístico Anova One Way.

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5.7) Sinalização da Grelina em linhagem hipotalâmica mHypoA -2/29 (CLU189) Baseados nos resultados acima da imunofluorescência, e também no fato de que o hipotálamo apresenta diferentes respostas aos estímulos pré e pós prandiais, pensamos em um experimento em que as células teriam maior ou menor

simularmos os estados pré e pós prandiais.

Dessa maneira, tratamos as linhagens hipotalâmicas com DMEM low glucose 0,5% FBS (situação pré prandial) e 1mM o na expressão gênica de seguido da diminuição de Th após Th pode ser modulada , pois uma diminuição na expressão gênica deste último pode ter levado à . Em contrapartida, houve aumento do mRNA após seis horas de incubação com Hexarelina, indicando que a célula apresentou uma resposta orexigênica ao tratamento realizado em baixa

em células CLU189 após o com 0,5% de FBS e 1mM de Hexarelina por 2, 4, 6 e 8 horas. n≥6, p<0,05,

Quando tratamos as linhagens hipotalâmicas com DMEM

com alta concentração de glicoise) 0,5% FBS, portanto, simulando uma situação pós prandial; e 1mM de Hexarelina por duas e seis horas, verificamos que há uma diminuição do mRNA de

aumento na expressão gênica de expressão gênica de Orexina (

variação na concentração de glicose durante o tratamento com situações pré-prandiais (em meio DMEM

estimular a fome; e situações pós prandiais (em meio DMEM aumentando a resposta hedônica (com tendência de aumento de Th).

Figura 8. Expressão gênica de

glucose com 0,5% de FBS e 1mM de Hexarelina por 2, 4, 6 e 8 horas. n≥6, p<0,05, test T student. Quando tratamos as linhagens hipotalâmicas com DMEM

com alta concentração de glicoise) 0,5% FBS, portanto, simulando uma situação pós prandial; e 1mM de Hexarelina por duas e seis horas, verificamos que há uma diminuição do mRNA de AgRP após 6 horas de tratamento, enquanto que há um aumento na expressão gênica de Th seguido da tendência de aumento na expressão gênica de Orexina (Hcrt) após 2 horas de incubação. É possível que a variação na concentração de glicose durante o tratamento com

prandiais (em meio DMEM low glucose), aumentando AgRP para estimular a fome; e situações pós prandiais (em meio DMEM

aumentando a resposta hedônica (com tendência de aumento de

Expressão gênica de Th, Hcrt e Agrp em células mHypoA-2/29 após o tratamento com DMEM com 0,5% de FBS e 1mM de Hexarelina por 2, 4, 6 e 8 horas. n≥6, p<0,05, test T student.

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Quando tratamos as linhagens hipotalâmicas com DMEM high glucose (meio com alta concentração de glicoise) 0,5% FBS, portanto, simulando uma situação pós prandial; e 1mM de Hexarelina por duas e seis horas, verificamos que há uma após 6 horas de tratamento, enquanto que há um seguido da tendência de aumento na após 2 horas de incubação. É possível que a variação na concentração de glicose durante o tratamento com a Hexarelina simule ), aumentando AgRP para estimular a fome; e situações pós prandiais (em meio DMEM high glucose), aumentando a resposta hedônica (com tendência de aumento de Hrct e aumento de

2/29 após o tratamento com DMEM high com 0,5% de FBS e 1mM de Hexarelina por 2, 4, 6 e 8 horas. n≥6, p<0,05, test T student.

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6) Conclusão

As células Neuro 2a são capazes de se diferenciar em neurônios dopaminérgicos através do aumento na expressão gênica de Tirosina hidroxilase. Também foi verificado um aumento da expressão gênica de Hcrt e de seu receptor Hcrtr1 concomitante ao aumento de Th.

A inibição através de um siRNA do receptor Hcrtr1 repercutiu na ausência do aumento da expressão gênica de Th e de Hcrt, revelando que a via de sinalização da orexina parece ter importante papel na expressão gênica de Th e possível influência na produção de dopamina em células Neuro 2a. Além disso, essas células não respondem ao tratamento com Hexarelina. Já a linhagem celular hipotalâmica mHypoA - 2/29 é responsiva à Hexarelina, e esta resposta é dependente da concentração de glicose presente no meio de cultura.

De forma geral, concluímos que a orexina parece exercer um importante papel em células dopaminérgicas (Neuro 2a), influenciando a expressão gênica de Th. Entretanto, essas células parecem não responder diretamente à Hexarelina (análogo grelina). Contudo, a Hexarelina apresenta função relevante nas células hipotalâmicas na medida em que é capaz de ativar a expressão gênica de AgRP e induzir a orexigênese quando em baixa concentração de glicose.

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