MATERIAL E MÉTODOS
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Este é um convite para o(a) senhor(a) participar da pesquisa “Estudo imuno- histoquímico e in vitro do ativador de plasminogênio tipo uroquinase (uPA) e sua relação com a proliferação e invasão celular em carcinomas de células escamosas de língua oral”, que é coordenada pelo Prof. Dr. Leão Pereira Pinto. Sua participação é voluntária, o que significa que o(a) senhor(a) poderá desistir a qualquer momento, retirando seu consentimento, sem que isso lhe traga nenhum prejuízo ou penalidade.
Esta pesquisa procura avaliar a presença de proteínas relacionadas com o desenvolvimento e a evolução do carcinoma de células escamosas de língua (tipo mais comum de câncer de boca), visando contribuir para uma maior compreensão do comportamento biológico deste tumor.
Caso decida aceitar o convite, o(a) senhor(a) autorizará a coleta de dados contidos na sua ficha clínica, no Hospital Dr. Luiz Antônio, em Natal-RN. Também nos dará a permissão de manusear o material removido cirurgicamente da sua boca, na época do seu tratamento. Este material encontra-se guardado no Serviço de Anatomia Patológica do Hospital Dr. Luiz Antônio da Liga Norte Riograndense Contra o Câncer, e assim, não haverá qualquer desconforto para o(a) senhor(a).
Todas as informações obtidas serão sigilosas e seu nome não será identificado em nenhum momento. Os dados serão guardados em local seguro e a divulgação dos resultados será feita de forma a não identificar os voluntários. Se o(a) senhor(a) tiver algum gasto que seja devido à sua participação na pesquisa, será ressarcido(a), caso solicite. Em qualquer momento, se o(a) senhor(a) sofrer algum dano comprovadamente decorrente desta pesquisa, terá direito a indenização.
O(a) senhor(a) ficará com uma cópia deste Termo, e qualquer dúvida a respeito desta pesquisa poderá ser esclarecida com o Prof. Dr. Leão Pereira Pinto, no Departamento de Odontologia da UFRN, no endereço: Av. Senador Salgado Filho, 1787, Lagoa Nova, Natal-
RN, CEP 59056-000, ou pelo telefone: (84) 3214-4138. Em caso de dúvidas sobre a conduta ética desta pesquisa, o(a) senhor(a) poderá entrar em contato com o Comitê de Ética em Pesquisa da UFRN, localizado no Campus Universitário da UFRN, ou pelo telefone (84) 3215-3135.
Consentimento livre e esclarecido
Eu, ______________________________________________________, concordo em participar voluntariamente da pesquisa “Estudo imuno-histoquímico e in vitro do ativador de plasminogênio tipo uroquinase (uPA) e sua relação com a proliferação e invasão celular em carcinomas de células escamosas de língua oral”. Declaro que compreendi o modo como os dados serão coletados, os objetivos e importância desta pesquisa, além de conhecer os riscos e benefícios que ela trará para mim e ter ficado ciente de todos os meus direitos. Assino o presente documento em duas vias de igual teor e forma, ficando uma em minha posse.
Natal-RN, ____/____/____
_______________________________________________
Assinatura do participante Impressão digital
Declaração do pesquisador responsável
Como pesquisador responsável pelo estudo “Estudo imuno-histoquímico e in vitro do ativador de plasminogênio tipo uroquinase (uPA) e sua relação com a proliferação e invasão celular em carcinomas de células escamosas de língua oral”, declaro que assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodológicos e direitos que foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo, assim como manter sigilo e
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confidencialidade sobre a identidade do mesmo. Declaro ainda estar ciente de que, na inobservância do compromisso ora assumido, estarei infringindo as normas e diretrizes propostas na Resolução 466/12 do Conselho Nacional de Saúde (CNS), que regulamenta pesquisas envolvendo seres humanos.
_______________________________________________ Prof. Dr. Leão Pereira Pinto
Pesquisador Responsável
APÊNDICE B
- Ficha para coleta de dados clínicos -
Data da coleta: ____/____/____
Nº do prontuário: Nº do bloco: ________________
Idade: _____
Sexo: ( ) Masculino ( ) Feminino
Localização do tumor primário: _________________________
Histórico de tabagismo: ( ) Sim ( ) Não Histórico de etilismo: ( ) Sim ( ) Não Data de início do tratamento: ____/____/____
Tratamento recebido: ( ) (1 = cirurgia; 2 = radioterapia; 3 = quimioterapia) Tamanho do tumor primário: ______________
Metástase linfonodal: ( ) Sim ( ) Não Data: ____/____/____ Metástase à distância: ( ) Sim ( ) Não Data: ____/____/____ Estadiamento clínico: T_____ N_____ M_____
Recidiva local: ( ) Sim ( ) Não Data: ____/____/____
Segundo tumor primário: ( ) Sim ( ) Não Data: ____/____/____
Óbito/causa do óbito: ( ) Sim/ câncer ( ) Sim/ outras causas ( ) Não
Data do último seguimento: ____/____/____ Data do óbito: ____/____/____
Desfecho clínico: ( ) (1 = remissão; 2 = doença em progressão; 3 = óbito)
OBS:
___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________
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APÊNDICE C
- Ficha para coleta de dados referentes à gradação histopatológica de malignidade, conforme os parâmetros do sistema BD (ALMANGUSH et al., 2015) -
Caso Profundidade de invasão Tumor budding Escore total Risco histopatológico
(baixo/ intermediário/ alto)
APÊNDICE D
- Ficha para análise imuno-histoquímica -
Caso
Escore de positividade (1) Intensidade de marcação (2)
uPA uPAR (C) uPAR (M) PAI-1 (C) PAI-1 (M) uPA uPAR (C) uPAR (M) PAI-1 (C) PAI-1 (M)
Legenda: C, citoplasma; M, membrana plasmática.
(1): 0 = 0%; 1 = 1-10%; 2 = 11-50%; 3 = 51-80%; 4 = > 80%. (2): Ausente; Fraca; Moderada; Forte.
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APÊNDICE E
- Resultados suplementares –
Tabela S1. Associação entre os escores de imunopositividade citoplasmática e membranar para uPAR. Natal-RN, 2020. Imunoexpressão uPAR (membrana) Baixa n (%) Alta n (%) p uPAR (citoplasma) Baixa 37 (78,7) 10 (21,3) 0,205ª Alta 8 (61,5) 5 (38,5)
Fonte: Dados da pesquisa.
Legenda: a Qui-quadrado de Pearson (χ2).
Tabela S2. Associação entre os escores de imunopositividade citoplasmática e membranar para PAI-1. Natal-RN, 2020. Imunoexpressão PAI-1 (membrana) Baixa n (%) Alta n (%) p PAI-1 (citoplasma) Baixa 8 (47,1) 9 (52,9) 0,345ª Alta 26 (60,5) 17 (39,5)
Fonte: Dados da pesquisa.
Legenda: a Qui-quadrado de Pearson (χ2).
Tabela S3. Associações dos escores de imunopositividade para uPAR e PAI-1 com os escores de imunopositividade para uPA. Natal-RN, 2020.
Imunoexpressão uPA Baixa n (%) Alta n (%) p uPAR (citoplasma) Baixa 20 (42,6) 27 (57,4) 0,469ª Alta 7 (53,8) 6 (46,2) uPAR (membrana) Baixa 21 (46,7) 24 (53,3) 0,653ª Alta 6 (40,0) 9 (60,0) PAI-1 (citoplasma) Baixa 9 (52,9) 8 (47,1) 0,437ª Alta 18 (41,9) 25 (58,1) PAI-1 (membrana) Baixa 16 (47,1) 18 (52,9) 0,714ª Alta 11 (42,3) 15 (57,7)
Fonte: Dados da pesquisa.
Tabela S4. Associações entre os escores de imunopositividade para uPAR e PAI-1. Natal-RN, 2020. Imunoexpressão
PAI-1 (citoplasma) PAI-1 (membrana)
Baixa n (%) Alta n (%) p Baixa n (%) Alta n (%) p uPAR (citoplasma) Baixa 11 (23,4) 36 (76,6) 0,107ª 30 (63,8) 17 (36,2) 0,056b Alta 6 (46,2) 7 (53,8) 4 (30,8) 9 (69,2) uPAR (membrana) Baixa 15 (33,3) 30 (66,7) 0,192b 26 (57,8) 19 (42,2) 0,764ª Alta 2 (13,3) 13 (86,7) 8 (53,3) 7 (46,7)
Fonte: Dados da pesquisa.
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Figura S1. Curvas de Kaplan-Meier com estimativas de sobrevida específica da doença de acordo com parâmetros clínicos.
Figura S2. Curvas de Kaplan-Meier com estimativas de sobrevida específica da doença de acordo com parâmetros morfológicos.
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Figura S3. Curvas de Kaplan-Meier com estimativas de sobrevida específica da doença de acordo com variáveis imuno-histoquímicas.
Figura S4. Curvas de Kaplan-Meier com estimativas de sobrevida livre da doença de acordo com parâmetros clínicos.
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Figura S5. Curvas de Kaplan-Meier com estimativas de sobrevida livre da doença de acordo com parâmetros morfológicos.
Figura S6. Curvas de Kaplan-Meier com estimativas de sobrevida livre da doença de acordo com variáveis imuno-histoquímicas.
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ANEXO A