REVISÃO DA LITERATURA
3.3 VALIDAÇÃO ANALÍTICA
Para o desenvolvimento de uma validação analítica, se faz necessário cumprir certos requisitos convenientemente descritos no Guia de Validação de Procedimentos Analíticos. A linearidade é uma delas; ela consiste na comprovação de que um procedimento analítico habilitado pode obter resultados diretamente proporcionais a concentração da substância à ser analisada numa amostra (ICH, 1996).
A linearidade pode ser determinada diretamente pela substância a ser analisada por diluições de uma solução padrão ou por pesagens isoladas de misturas sintéticas dos componentes (ICH, 1996). No caso de haver uma correlação linear, os dados devem ser avaliados através de métodos estatísticos e, nos casos em que não houver, a amostra deve ser descrita por uma função adequada à concentração da substância analisada na amostra. Para o estabelecimento da linearidade, é recomendada a análise de pelo menos cinco níveis de concentrações diferentes. O critério mínimo aceitável do coeficiente de correlação (r) deve ser 0,99 (ANVISA, 2002; BAKSHI; SINGH, 2003).
Outro importante fator é a especificidade de uma amostra. Trata-se de um termo analítico que consiste na capacidade de avaliar de forma precisa uma substância na presença de outros componentes que pode eventualmente compartilhar de um mesmo meio numa amostra. Esses podem ser: impurezas, produtos de degradação, matriz ou simplesmente os componentes da formulação. Tal definição tem como base a identificação, de modo inequívoco, do analito em questão (LI, 2008).
A exatidão de um procedimento analítico expressa o grau de concordância entre o valor que é aceito como verdadeiro ou um valor de referência aceito. Isso às vezes é chamado de rigor e, é normalmente esse valor é expresso em porcentagem. Precisão é um procedimento analítico que expressa o grau de concordância entre uma série de medições obtidas por uma amostragem múltipla de uma mesma amostra. Para se considerar a precisão de um método, são necessárias três determinações: a repetitibilidade que expressa à precisão nas condições de funcionamento em um curto espaço de tempo; a precisão intermediária, que é demonstrada em situações distintas como: dias diferentes, analistas diferentes e equipamentos diferentes; e, por ultimo, a reprodutibilidade, que exprime, sobretudo, a precisão entre laboratórios, sendo esse último mais utilizado em validações que se pretende indexar em farmacopéias
(DEJAEGHER; VANDER HEYDEN, 2006). A precisão de um método analítico pode ser expressa como o desvio padrão ou desvio padrão relativo (coeficiente de variação) de uma série de medidas. A precisão pode ser expressa como desvio padrão relativo ou coeficiente de variação, segundo a fórmula 1,
DPR x100 (1)
em que, DP é o desvio padrão e CMD, a concentração média determinada. O valor máximo aceitável deve ser definido de acordo com a metodologia empregada, a concentração do analito na amostra, o tipo de matriz e a finalidade do método, não se admitindo valores superiores a 5%.
O limite de detecção (LD) de um método analítico consiste em um processo individual de análises, onde se determina a menor quantidade da substância analisada que pode ser detectada. No entanto, ela pode não ser quantificada. O limite de quantificação (LQ) consiste na detecção precisa e exata da menor quantidade de uma substância que se encontra numa amostra. Esse método é empregado para ensaios quantitativos em que há baixos níveis de compostos nas matrizes. E é utilizado para determinação de impurezas e produtos de degradação que venham a estar na amostra. Os limites de detecção e de quantificação são expressos pelas equações 2 e 3 abaixo, onde “σ” é o desvio padrão da resposta e “S” é o slope, ou inclinação da curva de calibração (RIBANI et al., 2004).
LD 3,3 (2)
10 (3) A robustez deve ser considerada durante a fase de desenvolvimento do método e
depende do tipo de procedimento em estudo. Deve expressar a confiabilidade da análise quando submetido a variações deliberadas nos parâmetros do método, se as medições são susceptíveis a variações nas condições analíticas. As condições analíticas devem ser adequadamente controladas ou uma declaração de precaução deve ser incluída no procedimento. Exemplos de variações típicas são: a estabilidade das soluções analíticas, tempo de extração, a influencia do pH na fase móvel, diferentes colunas (lotes e/ ou fornecedores), influencia na composição da fase móvel, temperatura, entre outras (ICH, 1996).
Todos os dados devem utilizar testes estatísticos que comprovem a fiabilidade dos dados, no nível de confiança de 95%. Com base nesses parâmetros, é possível se validar analiticamente qualquer composto e com isso ter uma ferramenta hábil para a determinação de compostos em diversas matrizes (ANVISA, 2002).
4 CONCLUSÕES
O presente trabalho permitiu o desenvolvimento e validação de um método analítico de quantificação da trans-desidrocrotonina sem a interferência da matriz analítica;
O método de dosagem t-DCTN utilizando cromatografia líquida de alta eficiência foi assaz aplicado em nanocápsulas convencionais e furtivas;
O método cromatográfico utilizou um simples processo de solubilização dos constituintes da formulação;
O método obtido se mostrou seletivo, sensível, preciso, reprodutível, com limites de detecção e quantificação abaixo da faixa de trabalho e com baixa interferência da matriz;
O estudo demonstrou que as nanocápsulas contendo trans-desidrocrotonina obtidas pelo método de nanoprecipitação possuíam uma eficiência de encapsulação superior a 97%.
O estudo ainda permitiu observar que as formulações de nanocápsulas continham valores superiores a 1,0 mg.mL-1 de t-DCTN.
5 PERSPECTIVAS
Tem-se a perspectiva de produzir um artigo sobre os nanosistemas utilizados no presente trabalho. Para isso, deve-se caracterizar físico-quimicamente o sistema nanoparticulados obtido; determinar a cinética de liberação in vitro da t-DCTN a partir das nanocápsulas; analisar o comportamento dos nanossistemas em sistemas biológicos (in vivo) e verificar uma possível diminuição da toxicidade da t-DCTN após a utilização dos sistemas nanoparticulados.
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