A caracterização química do óleo essencial de cravo por GC/MS revelou a presença dos componentes principais eugenol (83,97%), cariofileno (3,04%), humuleno (0,42%) e acetato de eugenol (12,58%). Composições do óleo essencial de cravo-da-índia (botões florais secos) e seus tempos de retenção pela técnica de cromatografia gasosa.
CARRAPATO Rhipicephalus (Boophilus) microplus
Ciclo de vida do carrapato
Os bovinos são então soltos, iniciando a fase de vida livre (AGNOLIN et al., 2012). Essas larvas, em decorrência do geotropismo negativo, instalam-se no topo do talo das plantas e aguardam o hospedeiro, o gado, iniciando assim a fase parasitária (FURLONG et al., 2005).
Controle do carrapato
Os produtores utilizam esses agrotóxicos de forma indiscriminada, o que geralmente reduz sua eficácia e cria grandes oportunidades para o desenvolvimento de resistência à substância utilizada (ANDREOTTI et al., 2002). Isto mostra que mesmo com o eventual surgimento de cepas resistentes, o desenvolvimento de novos produtos químicos é atualmente a ferramenta mais eficaz para o controle dos carrapatos (SAKAMOTO et al., 2013).
Resistência aos carrapaticidas
Além disso, sabe-se que os produtores rurais não utilizam equipamentos de proteção individual, levando ao risco de toxicidade aguda e crônica durante a aplicação do produto nos animais (CHAGAS et al., 2002; FURLONG et al., 2007). Fatores como falta de critérios para aquisição de carrapatos, utilização de doses inferiores às recomendadas para o produto, desconhecimento sobre a eficácia terapêutica e ação dos carrapatos, além da falta de estratégia de controle de carrapatos por desconhecimento do ciclo biológico levam ao surgimento de resistência (MERLINI et al., 1998).
PRINCIPAIS CLASSES DE CARRAPATICIDAS QUÍMICOS, MECANISMO DE
- Organofosforados
- Piretróides
- Formamidinas
- Lactonas macrocíclicas
- Fenilpirazóis
O segundo mecanismo, menos compreendido, envolve a resistência metabólica, através da inativação de drogas mediada pela ação de esterases e do citocromo P450 (MILLER et al., 1999). A deltametrina também induziu aberrações cromossômicas e micronúcleos em células da medula óssea de camundongos (GARRIDO FRENICH, A. et al., 2005). Assim como o seu mecanismo de ação, o mecanismo de resistência ao amitraz ainda não foi totalmente elucidado.
Essa classe de ectoparasiticidas apresenta baixa toxicidade para mamíferos, mas possui comprovado potencial carcinogênico, o que reduziu seu uso (TAYLOR et al., 2007). A maior parte da eliminação da ivermectina ocorre inalterada nas fezes (TAYLOR et al., 2007). Esses resíduos no meio ambiente podem alterar o microhabitat de uma diversificada fauna de artrópodes, bem como afetar peixes e outros organismos aquáticos ( MARCHIORI et al., 2000 ).
UTILIZAÇÃO DE PLANTAS MEDICINAIS COMO ALTERNATIVA AOS PRODUTOS
2012), relatam que a atividade em dois pontos de ação desempenha um papel fundamental em retardar ou prevenir a formação de altos níveis de resistência a esta droga. Um dos principais problemas observados é o surgimento do risco de exposição ocupacional de seres humanos quando o fipronil é utilizado, por exemplo, pelo operador do pulverizador. A utilização de produtos naturais minimiza o desequilíbrio ecológico e a poluição ambiental causada pelo uso intensivo de produtos químicos sintéticos.
Porém, as pesquisas na área veterinária utilizando plantas medicinais, apesar do aumento, ainda são incipientes (AGNOLIN et al., 2009; ALVES et al., a atividade dos produtos naturais pode ser devida aos efeitos de um único composto ou através de um grupo substâncias que podem atuar sinergicamente, dificultando a seleção de carrapatos resistentes.Diversas plantas têm sido utilizadas em pesquisas de controle de carrapatos como opção para reduzir o uso de produtos acaricidas sintéticos, como Neem (Azadirachta indica), Gordura de Grama (Melinis multiflora Beauv) , Capim Comum (Panicum maximumi), Timbó (Ateleia glazioveana Baill), Limão Selvagem (Zanthoxylium tingoassuiba), Citronela de Javan (Cymbopogon winterianus), Alecrim Horta (Rosmarinus officinalis) e por fim Cravo (Syzygium Aromatum; et al., 2011; NOGUEIRA et. al., 2014;) O controle de carrapatos com plantas medicinais eficazes pode trazer grandes vantagens ao produtor, porém, caso o extrato utilizado não seja comprovadamente eficaz, há risco de infestação em massa no rebanho. , com consequências graves, como diminuição da produção, além da perda de animais (CASTRO et al. 2010).
ÓLEOS ESSENCIAIS
Syzygium aromaticum (L.) Merr. & L. M. Perry – CRAVO-DA-ÍNDIA
O cravo, originário da Indonésia, é a gema da flor seca da planta e foi espalhado para outros países pelos alemães. Embora o cravo seja geralmente chamado de Syzygium Aromatum, outros sinônimos botânicos são encontrados como Caryophyllus Aromamus L. MORAIS et al., 2009), Eugenia caryophyllata Thunb. SHARMA et al., 2016) e Myrtus caryophyllus Spreng (PUGAZHVENDAN; ELUMALI, 2013), devendo ser incluídos em pesquisas bibliográficas sobre os efeitos biológicos do cravo-da-índia.
Contém também acetato de eugenol, β-cariofileno e humuleno (Figura 4) (CORTÉS-ROJAS et al., 2014).
EUGENOL
O óleo essencial dos botões florais pode ser extraído por hidrodestilação e tem como principal ingrediente o eugenol, um fenilpropanóide volátil amplamente utilizado na indústria farmacêutica. O processo de hidrodestilação dos botões florais secos de Syzygium Aromaticum resulta na obtenção do óleo essencial e do hidrolato. O óleo essencial também pode ser obtido por percolação de material vegetal com solvente orgânico apolar e posterior filtração e evaporação.
Para o isolamento do eugenol do óleo essencial de cravo-da-índia, pode-se utilizar também a técnica de cromatografia líquida em coluna clássica, realizada pela eluição gradiente de hexano e diclorometano e separação das frações obtidas, após análise e identificação por CG/EM (SUDARMA; ULFA, 2009). Na odontologia, é utilizado em combinação com o óxido de zinco para formar um cimento polimerizado utilizado em procedimentos cirúrgicos, obturações temporárias, agentes niveladores e revestimentos pulpares e cavitários (BOHNERT et al., 2008). O eugenol comercial é obtido a partir do óleo de cravo, canela ou manjericão obtido por destilação a vapor, que é então refinado e purificado (ZHENG et al., 1992; BARCELOUX et al., 2008; BEDOUKIAN, P.Z., 1986).
MECANISMO DE AÇÃO DO EUGENOL E DO ÓLEO ESSENCIAL DE CRAVO-DA-
TOXICIDADE DO EUGENOL E DO ÓLEO ESSENCIAL DE CRAVO-DA-INDIA
A análise dos dados mostrou que o eugenol ou óleo de cravo isolado tem potencial muito baixo para causar esses efeitos (ROTHHENSTEIN et al., 1983). A toxicidade de diversas substâncias como canela, óleo essencial de canela, óleo essencial de cymbopogon (capim-limão), timol, óleo essencial de tomilho, óleo de cravo, eugenol e extrato de raiz de gengibre foi avaliada por Koci et al. 2015) em células do túbulo proximal canino utilizando ensaio de viabilidade e marcadores de lesão renal. Dos voláteis utilizados, o óleo essencial de cravo e o eugenol foram os que apresentaram menor toxicidade.
O metileugenol, um dos componentes encontrados no óleo essencial fitoterápico, não causou danos ao DNA do fígado, pulmão, bexiga, medula óssea ou rim de ratos Wistar expostos a 400 e 1000 mg/kg. Porém, quando a concentração foi aumentada para 2.000 mg/kg, o metileugenol causou danos ao DNA e à medula óssea (DING et al., 2011). Dados os dados de toxicidade apresentados na literatura, o óleo essencial de cravo e o eugenol, caso tenham eficácia comprovada em matar carrapatos, representam potencial para o desenvolvimento de novos produtos matadores de carrapatos.
OBJETIVO GERAL
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
LOCAIS DE DESENVOLVIMENTO DOS TRABALHOS
OBTENÇÃO DAS AMOSTRAS
EXTRAÇÃO DO ÓLEO ESSENCIAL
CARACTERIZAÇÃO QUÍMICA DO ÓLEO ESSENCIAL
DESENVOLVIMENTO DA FORMULAÇÃO
Primeiramente, amostras das formulações foram submetidas a um processo de centrifugação a 3.000 rpm por 30 minutos e avaliadas visualmente ao final do teste. O teste de centrifugação coloca pressão na amostra, simula um aumento na gravidade, aumenta a mobilidade das partículas e antecipa possíveis instabilidades como precipitação, separação de fases, aglomeração e coalescência, entre outras. As amostras também foram submetidas a testes preliminares de estabilidade, também conhecidos como Teste de Triagem, Estabilidade Acelerada ou Estabilidade de Curto Prazo.
As formulações foram acondicionadas em tubos de vidro transparentes com tampa para garantir boa vedação. As amostras foram submetidas ao aquecimento em estufa a 37 ± 2°C, resfriamento em geladeiras a 5 ± 2°C e ciclos alternados de congelamento e aquecimento (ciclos de 24 horas a 50 ± 2°C e 24 horas a - 5 ± 2°C). °C), exposição à luz solar e temperatura ambiente protegida da luz. As amostras foram analisadas em 24 horas e no 15º dia, quanto às características organolépticas (aparência, cor e cheiro), pH e separação de fases por centrifugação.
AVALIAÇÃO CARRAPATICIDA IN VITRO
Teste de pacote de larvas
Teste com fêmeas ingurgitadas
A eficácia do tratamento (Fórmula 2) depende do resultado da reprodução média estimada do grupo controle (Fórmula 1). Essa reprodução estimada é comparada com a reprodução dos tratamentos, e espera-se que a reprodução seja inferior à do grupo controle. Poderão existir situações em que o tratamento tenha uma taxa de reprodução superior à do grupo controle, o que tornará negativa a eficácia do tratamento.
Pela pesagem de cada ovo posto obtém-se o índice de produção de ovos (IPO) do grupo controle negativo e dos tratamentos. Uma leitura direta (%) de larvas eclodidas na seringa foi utilizada para estimar a eclosão larval (EL). Espera-se que a eclosão de larvas diminua à medida que a concentração de ingredientes ativos na formulação aumenta.
Análise estatística
Os resultados de eficiência do tratamento com formulações contendo óleos essenciais foram comparados com dados da Portaria 48, de 12 de maio de 1997, do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento - MAPA (BRASIL, 1997), que estabeleceu valor mínimo de eficiência de 95% em vivo para que um produto seja considerado acaricida.
OBTENÇÃO DO ÓLEO ESSENCIAL DE CRAVO-DA-ÍNDIA
IDENTIFICAÇÃO QUÍMICA DOS COMPONENTES DO ÓLEO ESSENCIAL
Em uma análise qualitativa de GC/MS realizada pelo mesmo grupo de pesquisa em óleo essencial de cravo, foram identificados 4 componentes: eugenol, acetato de eugenol, β-carofileno e óxido de cariofileno (DE MELLO et al após obtenção do óleo essencial de Syzygium Aromaticum por 4 horas de hidrodestilação, caracterizou seus componentes utilizando a técnica GC/MS para identificação e GC/FID para quantificação. Em trabalho de revisão sobre a espécie Syzygium Aromatum, Cortés-rojas e colaboradores (2014), descreveram que o rendimento do óleo essencial obtido através.
DESENVOLVIMENTO DA FORMULAÇÃO
AVALIÇÃO IN VITRO DA ATIVIDADE CARRAPATICIDA
Teste de pacote de larvas
Teste de imersão com fêmeas ingurgitadas
O tratamento das fêmeas com óleo essencial de cravo e eugenol em soluções hidroetanólicas reduziu significativamente a produção de ovos a partir de uma concentração de 5% para o óleo essencial e 10% para o eugenol. Utilizando a mesma formulação base suplementada com óleo essencial na concentração de 10,0%, observou-se que as formulações não tiveram efeito significativo na produção de ovos. Ao comparar os tratamentos realizados com eugenol e óleo de cravo carreados na solução hidroetanólica e na formulação, constatou-se melhor eficácia do tratamento do eugenol e do óleo essencial quando carreados na solução hidroetanólica.
2014) também avaliaram in vitro a atividade do óleo essencial de cravo em matar carrapatos em fêmeas inchadas de R. Considerando todos os tratamentos realizados nas fêmeas, constatou-se que o uso de eugenol, substância purificada (99-100%), não não fornece um tratamento de eficiência significativamente maior em comparação com o óleo essencial de cravo. Esses resultados reforçam o potencial da utilização do óleo essencial de cravo como agente matador de carrapatos, por ser uma alternativa de fácil acesso, baixo custo e altamente rentável no processo de extração.
Os resultados deste estudo mostraram a atividade significativa de eliminação de carrapatos do eugenol e do óleo essencial de cravo, mesmo em concentrações abaixo de 0,5% nas larvas e a partir de 5% nas fêmeas. Através dos testes realizados foi possível confirmar o importante potencial do óleo essencial de cravo e do eugenol, sugerindo a sua utilização como acaricidas ou em conjunto com acaricidas sintéticos com o objetivo de reduzir o impacto ambiental e o desenvolvimento de resistência.
