XXVIII Congresso de Iniciação Científica
Cultura de células em espécies de Serrasalmidae (Characiformes) para estudo citogenético.
Leticia Batista Soares1, Fabilene Gomes Paim1, Fausto Foresti1, Claudio Oliveira1
1 UNESP - Universidade Estadual Paulista “Júlio Mesquita Filho”- Campus Botucatu, Ciências Biológicas. Departamento de Morfologia – Laboratório de Biologia e Genética de Peixes
titiciasoares@hotmail.com
Palavras Chave: aquicultura, linhagens celulares, cromossomos, FISH.
Introdução
Colossoma macropomum “Tambaqui” e Piaractus mesopotamicus “Pacu” são espécies da família Serrasalmidae com grande importância ecológica e econômica, especialmente para pesca comercial e esportiva e na aquicultura (Nelson, 2006). Essas espécies são consideradas bons modelos e tem sido amplamente utilizadas em diferentes áreas de estudos (Ribeiro et al. 2017; Mastrochirico-Filho et al. 2016), entretanto o desenvolvimento de linhagens celulares para estudos citogenéticos ainda é pouco explorado.
Objetivos
O presente estudo teve como objetivo investigar a organização genômica de 18S DNAr, 5S DNAr, U1 snRNA e U2 snRNA nas linhagens celulares das espécies C.macropomum e P. mesopotamicus para identificar marcadores citomoleculares para essas espécies.
Material e Métodos
As células do tecido muscular foram isoladas usando enzimas proteolíticas e cultivadas em frascos T-25 com meio completo. As células isoladas foram mantidas à 27,5ºC e 5%CO2 e observadas diariamente até alcançar 80% de confluência, então subcultivadas em novos frascos.
As células semeadas para preparações cromossômicas foram tratadas com colchicina e, posteriormente realizado tratamento hipotônico e fixação das células. Enquanto outras células foram criopreservadas com viabilidade de 95% em nitrogênio líquido.
As sondas foram obtidas via PCR e mapeadas pela aplicação da técnica de hibridação in situ fluorescente (FISH) descrita por Pinkel et al. (1986).
Resultados e Discussão
As células aderidas de C.macropomum e P.
mesopotamicus apresentaram confluência celular após 10 dias (Figura 1A e 1B). As preparações cromossômicas das células cultivadas de ambas as espécies revelaram um número modal de 2n = 54 cromossomos. Experimento de FISH em C.
macropomum utilizando as sondas de 18S DNAr, 5S
DNAr, U1 snRNA e U2 snRNA revelaram sítios desses genes em diferentes pares cromossômicos, enquanto em P. mesopotamicus os sítios de 18S DNAr e U1 snRNA estão localizados no mesmo cromossomo (Figura 2).
Figura 1. Populações de células musculares de Colossoma macropomum (A) e Piaractus mesopotamicus (B) subcultivadas na segunda passagem.
Figura 2. Metáfases mitóticas de Colossoma macropomum (A) e Piaractus mesopotamicus (B) com sondas 5SDNAr (verde) e U2 snRNA (vermelho).
Conclusões
O estabelecimento das linhagens celulares e o emprego da técnica de FISH possibilitou caracterizar essas linhagens com à localização de sequências exclusivas em cada uma das espécies aqui estudadas, sendo marcadores efetivos para serem utilizados em estudos futuros de biotecnologia aplicáveis a aquicultura.
Agradecimentos
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1Nelson JS. Fishes of the world. John Wiley and Sons, New York, USA, 2006.
2Vito Antonio Mastrochirico-Filho,V.A.; Hata, M.S.; Sato, L.S.;Jorge, P.H.;Foresti, F.;Rodriguez, M.V.; Martínez, P.; Porto-Foresti, F.;
Hashimoto, D.H. SNP discovery from liver transcriptome in the fish Piaractus mesopotamicus. Cons. Gen. Res. 2016, 8(2),109-114.
3Pinkel D, Straume T, Gray JW. Cytogenetic analysis using quantitative, highsensitivity, fluorescence hybridization. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1986; 83:2934–2938.
4Ribeiro, L.B.; Moraes, N. A.; Artoni, R.F.; Matoso, D. A.; Feldberg, E.
Zebrafish 2017, 14(2): 155-160. https://doi.org/10.1089/zeb.2016.1378
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