Estudo químico e biológico dos fungos endofíticos Microascus sp. e Nodulisporium sp. associados à alga vermelha Asparagopsis Taxiformis

(1)

RESSALVA

(2)

Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita

Filho”

-

UNESP

Programa de Pós-Graduação em Química- PPGQ

Camila Souza Santos

Estudo químico e biológico dos fungos endofíticos

Microascus

sp. e

Nodulisporium

sp. associados à alga

vermelha

Asparagopsis Taxiformis

Araraquara-SP, Março de 2016

Núcleo de Bioensaios, Biossíntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais NuBBE

(3)

Camila Souza Santos

Estudo químico e biológico dos fungos endofíticos

Microascus

sp. e

Nodulisporium

sp. associados à alga

vermelha

Asparagopsis Taxiformis

Orientadora: Profª. Drª. Dulce Helena Siqueira Silva

Araraquara-SP, Março de 2016

Dissertação apresentada à Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, como parte das

(4)

FICHA CATALOGÁFICA

Santos, Camila Souza

S237e

Estudo químico e biológico dos fungos endoíticos

Microascus

sp. e

Nodulispoium

sp. associados à alga

vermelha

Aparagopsis Taxiformis

/

Camila Souza Santos

-Araraquara : [s.n], 2016

143 f. : il.

Dissertação (mestrado)- Universidade Estadual Paulista,

Instituto de Química

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva

1. Fungos endoíticos. 2. Alga marinha. 3. Metabólitos.

4. Produtos naturais. 5. Análise cromatograica. I. Título.

(5)

DADOS CURRICULARES

DADOS PESSOAIS

Nome: Camila Souza Santos

Filiação: Otalício Nery dos Santos e Luci Ramos de Souza santos

Nascimento: 12/03/1991 - Ibirataia-Ba-Brasil.

Endereço Profissional: NuBBE “Núcleo de Bioensaio, Biossíntese e

Ecofisilogia de Produtos Naturais”. Departamento de Química Orgânica,

Instituto de Química de Araraquara – Universidade Estadual Paulista “Júlio Mesquita Filho”- UNESP, Araraquara - SP.

Endereço eletrônico: cssantos12@gmail.com

FORMAÇÃO ACADÊMICA

2010-2014

Graduação: Bacharel em Química

Instituição: Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia- Campus Jéquié Jéquié-Ba.

2014-2016

Mestrado: Química, Área de Concentração - Química Orgânica

Instituiçãoμ Universidade Estadual Paulista “Júlio Mesquita Filho”- UNESP- Instituto de Química de Araraquara- SP.

Dissertação: Estudo Químico e Biológico dos Fungos Endofíticos Microascus

sp. e Nodulisporium sp. Associados à Alga Vermelha Asparagopsis Taxiformis

Orientadora: Profª. Drª. Dulce Helena Siqueira Silva

PRODUÇÃO BIBLIOGRÁFICA

Livros e capítulos de livro:

Camila Souza Santos.; Dennis Russowsky.; Comprehensive Organic Chemistry Experiments of the Laboratory Classroom, RSC Eds, 2015.

Trabalhos ou resumos em eventos científicos:

JAMILLE SANTOS DOS REIS.; CAMILA SOUZA SANTOS.; JAYCE GABRIELLE TELES DA SILVA LEITE.; VANDERLÚCIA FONSECA DE PAULA. CONSTITUINTES QUÍMICOS ISOLADOS DO CAULE E DAS CASCAS DO CAULE DE Zanthoxylum rhoifolium Lam (RUTACEAE). IV Simpósio de Plantas

Medicinais do Vale do São Francisco–PLAMEVASF. Juazeiro-BA, 2013.

CAMILA SOUZA SANTOS.;JAMILLE SANTOS DOS REIS.; VANDERLÚCIA FONSECA DE PAULA.ISOLAMENTO DOS CONSTITUINTES QUÍMICOS PRESENTES NO EXTRATO BRUTO METANÓLICO DA CASCA DO CAULE

DE ZANTHOXYLUM RHOIFOLIUM LAM. (RUTACEAE). In: 65ª Reunião Anual

(6)

CAMILA SOUZA SANTOS.;JAMILLE SANTOS DOS REIS.; VANDERLÚCIA FONSECA DE PAULA.Constituintes químicos isolados da casca do caule de

Zanthoxylum petiolare (RUTACEAE). XXII Simpósio de Plantas Medicinais do

Brasil. Bento Gonçalves-RS, 2012.

Atividades extracurriculares:

Iniciação Científica: Prospecção química de espécies do gênero Zanthoxylum

(Rutaceae) e avaliação de suas propriedades farmacológicas. Bolsista da PIBIC/CNPq. Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia. Vanderlúcia Fonseca de Paula, 2012-2014.

Estágio em síntese orgânica. Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Porto Alegre, 2014.

Monitoria: Química Orgânica II. (Carga horária: 192h).

Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, UESB, Brasil.

(7)

(8)

RESUMO

O presente trabalho apresenta os resultados obtidos sobre o estudo químico e biológico dos fungos endolíticos Nodulisporium sp. e Microascus sp.

associados à alga vermelha Asparagopsis taxiformis. Para tanto, fez-se uso

das técnicas cromatográficas de separação CLAE (cromatografia líquida de alta eficiência), CG-EM (cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas) e cromatografia em coluna (CC), além da avaliação dos potenciais antifúngico, anticolinesterásico e citotóxico dos extratos brutos, frações e subfrações de Nodulisporium sp. e Microascus sp. O estudo químico levou ao

isolamento de quatro substâncias pertencentes à classe das diidroisocumarinas (substâncias S1, S2, S10 e S11), duas dicetopiperazinas (substâncias S3 e

S4), um composto fenólico (S12), uma isoflavona (S8), um derivado hidroxiimino (S9), uma mistura contendo uma amida (S5) e um diol vicinal (S6), além do isolamento de um composto aromático (substância S7), ainda em fase de identificação. As estruturas das substâncias isoladas foram identificadas com base nos dados espectroscópicos de ressonância magnética nuclear uni e bidimensional (RMN de 1H, RMN de 13C, TOCSY-1D, HSQC, HMBC, COSY e HSQC-TOCSY), UV-Vis e espectrometria de massas (EM). Comporta ressaltar que o diol vicinal (S6) está sendo descrito pela primeira vez na literatura e que as demais substâncias isoladas não haviam sido relatadas para os gêneros

Nodulisporium ou Microascus. A avaliação das atividades antifúngica e

anticolinesterásica evidenciaram o potencial de bioatividade de extratos e frações de Nodulisporium sp. e Microascus sp, sendo reveladas atividades forte

e moderada frente às enzimas acetilcolinesterase humana e de enguia elétrica. Este é o primeiro estudo químico e biológico relatado na literatura para os endófitos Nodulisporium sp. e Microascus sp. associados à alga vermelha Asparagopsis taxiformis e seus resultados promissores destacam a elevada

quimiodiversidade dos extratos e frações dos fungos endofíticos obtidos do ambiente marinho, bem como seu potencial de bioatividade. Evidenciam ainda a importância de se aprofundar os estudos destas linhagens fúngicas visando contribuições relevantes na busca de protótipos para novos agentes terapêuticos através da exploração sustentável da biodiversidade marinha brasileira.

Palavras-chave: fungo endofítico, alga marinha, Nodulisporium, Microascus,

(9)

ABSTRACT

This work presents results from the chemical and biological study of endophytic fungal strains of Nodulisporium sp and Microascus sp associated to

the red alga Asparagopsis taxiformis. Chromatographic separation techniques

as HPLC, GC-MS and CC have been used in addition to bioassays for evaluation of the antifungal, anticholinesterasic and cytotoxic potential of crude extracts, fractions and subfractions of Nodulisporium sp and Microascus sp

fungal strains. The chemical study led to the isolation of four dihydroisocoumarins (compounds S1, S2, S10 and S11), two diketopiperazines (compounds S3 and S4), one phenolic compound (S12), one isoflavone (S8), one hydroxyl-imino derivative (S9), a mixture containing one amide (S5) and one novel vicinal diol (S6), in addition to one aromatic compound (compounds

S7) still under structural investigation. Their structures were identified based on 1D and 2D NMR spectroscopic data (1H and 13C NMR, TOCSY-1D, HSQC, HMBC, COSY and HSQC-TOCSY), UV-Vis and mass spectrometry (MS). Compound S6 is an aliphatic vicinal diol and is herein described as a novel compound whereas the remaining compounds had not been described before neither for Nodulisporium nor Microascus genera. Antifungal and

anticholinesterase activities evaluation of extracts and fractions of

Nodulisporium sp e Microascus sp evidenced their strong and moderate

potential against human and electric eel acetylcholinesterase enzymes. This is the first report on the chemical and biological studies of endophytic fungi

Nodulisporium sp and Microascus sp, associated to the red algae Asparagopsis taxiformis. Their promising results highlight the outstanding chemodiversity of

extracts and fractions from such fungal strains from marine environment as well as their bioactivity potential. They also evidence the importance of further investigating such fungal strains aiming at relevant contributions in the search for novel therapeutic agents through sustainable exploration of Brazilian marine biodiversity.

Keywords: endophytic fungi, marine algae, Nodulisporium, Microascus,

(10)

i

LISTA DE FIGURAS

Figura 1- Classificação taxinômica de Nodulisporium sp... 27

Figura 2- Substâncias isoladas de endófitos pertencentes ao gênero

Nodulisporium sp...28 Figura 3- Classificação taxinômica de Microascussp...29

Figura 4- Substâncias isoladas de endófitos pertencentes ao gênero

Microascus sp. ...30

Figura 5- Obtenção das sete linhagens de fungos endofíticos associados à

Asparagopsis taxiformis...34

Figura 6- Etapas para obtenção dos extratos brutos de cada linhagem

fúngica...35

Figura 7- Biorreator (A) e estocagem do biorreator (B)...40

Figura 8- Cromatograma do extrato AT02 (superior) e do branco (inferior). Gradiente exploratório modo analítico 5 a 100% MeOH:H2O v/v à 1 mL.min-1-

254nm: Coluna C-18 Phenomenex Luna (250 x 4.60 mm; 5 m; 110Å)...43

Figura 9- Espectro de RMN de 1H do extrato AT02 (DMSO-d6, 600 MHz)...44

Figura 10- Cromatograma da fração AT02-3 (gradiente exploratório modo

analítico 5 a 100% MeOH:H2O v/v à 1 mL.min-1-254nm: Coluna C-18

Phenomenex Luna (250 x 4.60 mm; 5 m; 110Å) e espectros de UV-Vis dos picos principais...45

Figura 11- Correlações observadas no mapa de contorno de COSY da

substância S1...47

Figura 12- Correlações observadas no mapa de contorno de HMBC da

substância S1...48

Figura 13- Espectro de RMN de 1_{H da substância}_S1_(MeOH-_d

4, 600

MHz)...97

Figura 14- Espectro de RMN de 13_{C da substância}_S1_(MeOH-_d

4, 150

MHz)...98

Figura 15- Mapa de contorno de HSQC da substância S1 (MeOH-d4, 600

MHz)...99

Figura 16- Espectro de RMN de 1H da substância S2 (MeOH-d4, 600

(11)

ii

Figura 17- Espectro de RMN de 1_{H da substância} _S3_(CHCl

3-d, 300

MHz)...100

Figura 18- Espectro de RMN de 13C da substância S3 (CHCl3-d, 75

MHz)...101

substância S3. ...52

substância S3...53

Figura 21- Mapa de contorno de HSQC da substância S3 (CHCl3-d, 300

MHz) ...102

Figura 22- Espectro de RMN de 1_{H da substância} _S4_(MeOH-_d

4, 300

MHz)...103

Figura 23- Espectro de RMN de 13_{C da substância} _S4_(MeOH-_d

4, 75

MHz)...104

substância S4...55

substância S4...56

Figura 26- Mapa de contorno de HSQC da substância S4 (MeOH-d4, 300

MHz)...105

Figura 27- Espectro de RMN de 1_{H da substância} _S4_(CHCl

3-d, 300

MHz)...106

Figura 28- Espectro de RMN de 1H da mistura contendo as substâncias S5 e

S6 (MeOH-d4, 600 MHz)...107

Figura 29- Espectros de TOCSY-1D com irradiações seletivas em δH 2,78 e

3,38 referentes a substância S5 (MeOH-d4, 600 MHz)...57

Figura 30- Espectro de RMN de 13_{C da mistura contendo as substâncias}_S5

e S6 (MeOH-d4, 150 MHz)...108

Figura 31- Correlações observadas nos mapas de contorno de HMBC

e COSY ...59

Figura 32- Valores de J referentes aos sinais para hidrogênios em 5,06 e

5,19 ppm...60

(12)

iii

6,27 ppm...61

Figura 34- Valores de J referentes ao sinal para hidrogênio em 5,76

ppm...62

Figura 35- Espectros de TOCSY-1D com irradiações em δH 5,06 e 5,19

(MeOH-d4, 600 MHz) ...109

Figura 36- Proposta estrutural parcial para a unidade I da substância

S6...62

Figura 37- Espectros de TOCSY-1D com irradiações em δH 1,71 (MeOH-d4,

600 MHz)...110

ppm...63

ppm...64

Figura 41- Proposta estrutural parcial para a unidade II da substância

S6...65

Figura 42- Espectros de TOCSY-1D com irradiações em δH 4,00 e 3,95

(MeOH-d4, 600 MHz)...111

Figura 43- Espectro de RMN de 1_{H da mistura contendo as substâncias}_S5_e

S6 (DMSO-d6, 600 MHz)...112

Figura 44- Proposta estrutural para a substância S6...65

Figura 45- Mapa de contorno de COSY da mistura contendo as substâncias

S5 e S6 (MeOH-d4, 600 MHz)...113

Figura 46- Mapa de contorno de HSQC da mistura contendo as substâncias

S5 e S6 (MeOH-d4, 600 MHz)...114

Figura 47- Mapa de contorno de HMBC da mistura contendo as substâncias

S5 e S6 (MeOH-d4, 600 MHz)-Ampliação da região 1,6-4,3 ppm...115

Figura 48- Mapa de contorno de HMBC da mistura contendo as substâncias

S5 e S6 (MeOH-d4, 600 MHz)- Ampliação da região 5,1-7,5 ppm...116

Figura 49- Mapa de contorno de HSQC-TOCSY da mistura contendo as

substâncias S5 e S6 (MeOH-d4, 600 MHz)...117

(13)

iv

Figura 51- Espectro de massas da substância S7...118

Figura 52- Espectro de RMN de 1H da substância S7 (DMSO-d6, 600

MHz)...119

Figura 53- Mapa de contorno de COSY da substância S7 (DMSO-d6, 600

MHz)...120

Figura 54- Mapa de contorno de HSQC da substância S7 (DMSO-d6, 600

MHz)...121

Figura 55- Mapa de contorno de HMBC da substância S7 (DMSO-d6, 600

MHz)...122

Figura 57-Cromatograma da substância S8 e espectro de UV-Vis. Gradiente

exploratório modo analítico 5 a 100% MeOH:H2O v/v à 1 mL.min-1-254 nm:

Coluna C-18 Phenomenex Luna (250 x 4.60 mm; 5 m; 110Å)...67

Figura 58- Espectro de RMN de 1_{H da substância}_S8_(DMSO-_d

6, 600 MHz).

Ampliação da região δH 6,7-9,8 ppm...124

Figura 59- Mapa de contorno de HSQC da Substância S8 (DMSO-d6, 600

MHz). Ampliação da região δH 6,1-8,7 ppm...125

Figura 60- Mapa de contorno de HMBC da substância S8 (DMSO-d6, 600

MHz). Ampliação da região δH 6,6-9,8 ppm...126

6, 600 MHz).

Ampliação da região δH 5,2-10,2 ppm. Isolada de Microascus sp...127

Figura 62- Espectro de RMN de 13C da Substância S8 (DMSO-d6, 150 MHz).

Isolada de Microascus sp...128

Figura 63- Cromatograma do terceiro sólido precipitado (Gradiente

exploratório modo analítico 5 a 100% MeOH:H2O v/v à 1 mL.min-1-254nm:

Coluna C-18 Phenomenex Luna (250 x 4.60 mm; 5 m; 110Å) e espectros de

UV-Vis do pico principal...70

Figura 64- Espectro de RMN de 1H da inosina (MeOH-d4, 600

MHz)...71

Figura 65- Cromatogramas obtidos por CG-EM do meio de cultivo PDB (A) e

AT04Mar (B)...129

Figura 66- Cromatogramas obtidos por CG-EM da F.A.AT04MQ (A) e do

(14)

v

Figura 67- Espectro de RMN de 1_{H da Substância} _S9_(DMSO_-d

6, 600

MHz)...131

Figura 68- Espectro de RMN de 13C da Substância S9 (DMSO-d6, 150

MHz)...132

Figura 69- Mapa de contorno de HSQC da substância S9 (DMSO-d6, 600

MHz)...133

Figura 70- Mapa de contorno de COSY da substância S9 (DMSO-d6, 600

MHz)...134

substância S9...74

6, 600

MHz)...136

Figura 74- Espectro de RMN de 13_{C da substância}_S10_(DMSO-_d

6, 150

MHz)...137

substância S10...76

Figura 77- Mapa de contorno de HSQC da substância S10 (DMSO-d6, 600

MHz)...138

Figura 78- Espectro de RMN de 1H da substância S11 (DMSO-d6, 600

MHz)...139

Figura 79- Espectro de RMN de 13C da substância S11 (DMSO-d6, 150

MHz)...140

MHz)...141

Figura 83- Biossíntese das diidroisocumarinas derivadas da meleína...81

(15)

vi

MHz)...,....142

Figura 85- Espectro de RMN de 13C da substância S12 (DMSO-d6, 150

MHz)...143

MHz)...144

Figura 89- Representação da catálise da acetiltiocolina e reação de

Ellman...85

Figura 90- Cromatograma ilustrando o decrescimento da atividade

(16)

vii

LISTA DE TABELAS

Tabela 1- Preparo das soluções estoque...40

Tabela 2- Dados de RMN de 1_{H (MeOH-}_d

4, 600 MHz) e RMN de 13C (150

MHz) para a substância S1...46

4, 600 MHz) para a substância

S2...49

Tabela 4- Dados de RMN de 1_{H (CHCl}

3-d, 300 MHz) e RMN de 13C (75 MHz)

para a substância S3...51

4, 300 MHz) e RMN de 13C (75

4, 600 MHz) e RMN de 13C (150

Tabela 7- Dados de RMN de 1H (MeOH-d4, 600 MHz) e RMN de 13C (150

MHz para a substância S6...66

Tabela 8- Dados de RMN de 1H (MeOH-d4, 600 MHz) e RMN de 13C (150

MHz para a substância S8...69

Tabela 9- Dados de RMN de 1H (DMSO-d6, 600 MHz) e RMN de 13C (150

Tabela 10- Dados de RMN de 1H (DMSO-d6, 600 MHz) e RMN de 13C (150

MHz) para a substância S10...75

Tabela 11- Dados de RMN de 1_{H (DMSO-}_d

6, 600 MHz) e RMN de 13C (150

Tabela 12- Dados de RMN de 1_{H (DMSO-}_d

6, 600 MHz) e RMN de 13C (150

Tabela 13- Atividade antifúngica dos extratos, AT04Mar, AT02 e suas

frações obtidas por bioautografia em CCD#...84

Tabela 14- Atividade citotóxica dos extratos AT04Mar, AT02 e suas

frações...85

Tabela 15- Atividade anticolinesterásica dos extratos, frações e substâncias

(17)

viii

LISTA DE ESQUEMAS

Esquema 1- Fracionamento do extrato AT02 por CC (fase reversa C18)...36

Esquema 2- Fracionamento do extrato AT04Mar por CC (fase reversa

C18)...37

Esquema 3- Fracionamento do extrato AT04MQ por CC (sílica-gel)...37

(18)

ix

LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SÍMBOLOS

AcOEt Acetato de Etila

BDA Batata Dextrose Ágar ICERs Biorreatores

COSY Correlation Spectroscopy

CCD Cromatografia em Camada Delgada

CCDC Cromatografia em Camada Delgada Comparativa CC Cromatografia em Coluna

CLAE Cromatografia Líquida de Alta Eficiência DAD Detector de Arranjo de Diodos

AChE Enzima Acetilcolinesterase

AChE-ee Enzima Acetilcolinesterase de Enguia Elétrica AChE-hu Enzima Acetilcolinesterase Humana

EM Espectrometria de Massas

ESI-EM Espectrometria de Massas – Ionização por Electrospray Phe Fenilalanina

gHMBC Gradient Heteronuclear Multiple Bond Coherence gHMQC Gradient Heteronuclear Multiple Quantum Coherence

Leu Leucina

HCT-116 Linhagem de Célula Tumoral de Cólon Humano MCF-7 Linhagem de Célula Tumoral de Mama Humana MHz/Hz Megahertz/Hertz

MBD Meio de Batata e Dextrose min. Minutos

nm Nanômetro

PDA Potato-Dextrose-Agar Pro Prolina

RMN de 13C Ressonância Magnética Nuclear de Carbono 13 RMN de 1_{H Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio}

C18 Sílica Gel de Fase Reversa Tipo Octadecil Silano TOF Time of Flight (Tempo de Vôo)

(19)

x

UV Ultravioleta [M+Na]+ _{Aduto de sódio}

Comprimento de onda

J Constante de acoplamento

δ Deslocamento químico

d Dubleto

dd Duplo dubleto ddd Duplo duplo dubleto dqd Duplo quarteto de dubleto

Micro

[M+H]+ Molécula protonada

m Multipleto q Quadrupleto

m/z Relação massa-carga

s Singleto

sl Singleto largo

t Tripleto

(20)

xi

SUMÁRIO

1. 1. INTRODUÇÃO...22

2. 2. REVISÃO DE LITERATURA ...24

2.1. Macroalgas...24

2.2. Asparagopsis taxiformis...24

2.3. Fungos endofíticos...25

2.4. Gênero Nolulisporium sp...27

2.5. Gênero Microascus sp...29

3. 3. OBJETIVOS...31

3.1. Objetivo geral...31

3.2. Objetivos específicos...31

4. 4. PARTE EXPERIMENTAL

...

.32

4.1. MATERIAIS

...

.32

4.1.1. Meios de Cultivo dos Micro-organismos...32

4.1.2. Cromatografia em Camada Delgada (CCD) ...32

4.1.3. Cromatografia em Coluna (CC)

...

.32

4.1.4. Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detector de Arranjo de Diodos (CLAE-DAD)

...

.32

4.1.5. Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio e Carbono (RMN de 1_H e RMN de 13C)

...

.33

4.1.6. Espectrometria de Massas

...

.33

4.1.7. Cromatografia Gasosa Acoplada à Espectrometria de Massas (CG-EM)

...

.33

4.2. MÉTODOS...33

4.2.1. Crescimento dos fungos endofíticos e obtenção dos extratos brutos...34

4.2.2. Análise do perfil cromatográfico dos extratos

...

.36

(21)

xii

4.2.4. Isolamento dos metabólitos presentes na fração AT02-3...37

4.2.5. Isolamento dos metabólitos presentes na fração AT02-2...38

4.2.6. Isolamento dos metabólitos presentes na fração AT04MQ-1...38

4.3. Ensaios Biológicos...39

4.3.1. Avaliação da atividade antifúngica frente a Cladosporium cladosporioides e C. sphaerospermum...39

4.3.2. Avaliação do potencial citotóxico...39

4.3.3. Avaliação da atividade anticolinesterásica por cromatografia de bioafinidade...40

4.4. Análise por CG-EM...41

5. RESULTADOS E DISCUSSÃO 5.1. Análise do perfíl químico do extrato AT02 (gênero Nodulisporium sp)...41

5.1.1. Estudo da fração AT02-3...44

5.1.1.1. Elucidação estrutural da substância S1...45

5.1.2. Estudo da fração AT02-2...50

5.1.2.3. Elucidação estrutural das substâncias S5 e S6...56

5.1.2.3.1. Substância S5...57

5.1.2.3.2. Substância S6...59

5.2. Análise do perfíl químico do extrato AT04Mar (gênero Microascus sp.)...70

5.3. Análise do perfíl químico do extrato AT04MQ (gênero Microascus sp.)...72

5.3.1. Elucidação estrutural da substância S9...72

5.3.2. Elucidação estrutural da substância S10...74

(22)

xiii

5.5. Avaliação do potencial citotóxico...84

5.6. Avaliação da atividade anticolinesterásica por cromatografia de bioafinidade...85

6. CONCLUSÕES...88

REFERÊNCIAS...90

(23)

Introdução ---Santos, C. S. Dissertação.

22

1_{WHEELWRIGH, E. G.}_{Medicinal plants and their history}_._{New York: Dover Publications, 1974.}

1. INTRODUÇÃO

Os produtos naturais e a medicina apresentam conectividade há milhares de anos por meio da medicina popular. Segundo Dias (2012), nas duas últimas décadas, a humanidade vem percebendo a importância dos produtos naturais para a manutenção de uma vida mais saudável. Historicamente, os primeiros estudos fitoquímicos com base científica foram realizados a partir do século XIX e resultaram no isolamento de substâncias com propriedades medicinais, a exemplo os alcaloides morfina (1), quinina (2) e cocaína (3), obtidos a partir de plantas usadas na medicina tradicional, papoula (Papaver somniferum),

quina-amarela (Cinchona calisaya) e coca (Erythroxylum coca), respectivamente

(WHEELWRIGH1 apud HALBERSTEIN, 2005).

morfina (1) quinina (2) cocaína (3)

Vários fatores contribuíram para o desenvolvimento exponencial da química de produtos naturais nas últimas décadas. Primeiramente, por proporcionar a descoberta de substâncias biologicamente ativas, que são biossintetizadas in natura (SILVA, 2010). Em segundo lugar, as substâncias

(24)

Introdução ---Santos, C. S. Dissertação.

23

Werner Bergmann foi um dos primeiros pesquisadores na década de 50 a investigar a química de produtos naturais de micro-organismos marinhos (COSTA-LOTUFO, 2009). Após este período, nas últimas duas décadas, o estudo destes grupos de micro-organismos ganhou destaque, sendo que, em 2010 foram descritas na literatura 1011 novas substâncias isoladas de organismos marinhos (STROBEL, 2004; BLUNT, 2012).

Os micro-organismos marinhos, em especial os fungos associados às macroalgas, apresentam grande importância na pesquisa de produtos naturais, não apenas pela ampla gama de metabólitos secundários produzidos, mas também, pela sustentabilidade associada à produção de matéria prima em larga escala através de processos fermentativos (COSTA-LOTUFO, 2009) e principalmente, pelos efeitos biológicos, tais como antifúngico, antimicrobiano, antimalárico, antimicobacteriano, citotóxico e antiviral, dentre outros, que as substâncias produzidas por estes micro-organismos associados à macroalgas são capazes de produzir (ZHANG, 2014), e que representam fontes importantes de protótipos para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos.

(25)

Conclusões ---Santos, C. S. Dissertação.

88

6. CONCLUSÕES

Após realizar o estudo químico e biológico dos fungos endofíticos

Nodulisporium sp. e Microascus sp. associados à Asparagopsis taxiformis foi

possível verificar a variada produção de metabólitos secundários, sendo a maioria pertecente a classe das diidroisocumarinas e dicetopiperazinas. Além disso, foram isolados uma isoflavona, um derivado hidroxiimino, um composto fenólico, além de uma amida e um diol vicinal insaturado, identificados em mistura. Vale ressaltar que, este diol está sendo descrito pelo primeira vez na literatura.

A variação na produção metabólica foi observada quando variou-se a composicão do meio de cultivo com água do mar para água ultrapura MilliQ®_no

crescimento do fungo endofítico do gênero Microascus (AT04). Foram

produzidos metabólitos mais interesantes do ponto de vista químico e biológico quando o crescimento foi realizado em água ultrapura MilliQ®_{, evidenciando}

influência importante da água do mar no metabolismo do fungo Microascus sp.

O ensaio antifúngico contra os fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum indicaram que o fungo

pertencente ao gênero Nodulisporium produziu uma ou mais substâncias com

potencial atividade antifúngica. Deve-se ressaltar que as bioatividade de diidroisocumarinas e dicetopiperazinas isoladas e identificadas neste trabalho, foram anteriormente relatadas na literatura, incluindo atividade antifúngica. Já o ensaio anticolinesterásico evidenciou atividade de algumas frações e do extrato AT02 frente às enzimas acetilcolinesterase humana e de enguia elétrica.

(26)

Conclusões ---Santos, C. S. Dissertação.

89

(27)

Referências ---Santos, C. S. Dissertação.

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