Imunização de camundongos com "vacina" viva avirulenta do Trypanosoma cruzi: III. variação do meio de cultura.

IMUNIZAÇÃO DE CAMUNDONGOS COM «VACINA» VIVA

AVI-RULENTA DO

T R Y P A N O S O M A C R U Z I

III — VARIAÇÃO DO MEIO DE CULTURA

H um berto M enezes * e R osa

D .

R. Albuquerque **

O s

a u to re s d e m o n s tr a m a tr a v é s de te s te s e m c a m u n d o n g o s q u e va r ia n d o

o m eio d e c u ltiv o a a v ir u lê n c ia d a ce p a Y , cu ltiv a d a , do

T r y p a n o s o m a c r u z i

se c o n serva in a lte ra d a .

D ia n te da p o ssib ilid a d e d e que se tr a te de u m m u ta n te da m e s m a lin h a ­

g e m Y v ir u le n ta , m a n tid a e m a n im a is, su g e re m a d esig n a çã o d e PF

(P edreira

de F reita s) p a ra essa n o v a cepa.

I N T R O D U Ç Ã O

A d m i t i n d o - s e q u e o s p r o c e s s o s d e t r a n ­ s i ç ã o , n o c i c lo v i t a l d o s t r i p a n o s o m a s , e n ­ v o l v a m a l g u m a f a s e o u f a s e s c r í t i c a s t e r - m o s e n s í v e i s q u e p o s s a m s e r i n d u z i d a s p o r m o d i f i c a ç õ e s d o m e i o n u t r i e n t e (1 2 ) e q u e v á r i o s f a t o r e s l i g a d o s a o m e i o d e c u l t u r a i n f l u e n c i e m a i n f e c t i v i d a d e d e f o r m a s d e c u l t u r a ( 3 ) , p r o p u s e m o - n o s v e r i f i c a r o c o m p o r t a m e n t o d a a v i r u l ê n c i a d a c e p a Y , m a n t i d a e m c u l t u r a e m d i f e r e n t e s m e i o s .

M A T E R I A L E M É T O D O S

U t i l i z a m o s a c e p a Y , i s o l a d a p o r S i l v a & N u s s e n z w e i g ( 1 1 ) , s o b a s u a f o r m a a v i - r u l e n t a d e s c r i t a p o r u m d e n ó s (4 , 5 ) .

E s s a c e p a d o

T ry p a n o so m a cruzi,

a l é m d o c u l t i v o e m m e i o s ó l i d o d e P a c k - c h a n i a n ( 1 0 ) , f o i t a m b é m c u l t i v a d a n o s m e i o s l í q u i d o s d e W a r r e n (1 3 ) e d e N õ l - l e r ( 9 ) . N o s d o i s p r i m e i r o s , o s r e p i q u e s f o r a m f e i t o s c a d a 15 d i a s e n o ú l t i m o c a d a 8 d i a s .

A s c u l t u r a s f o r a m m a n t i d a s à t e m p e ­ r a t u r a a m b i e n t e q u e e m R i b e i r ã o P r ê t o v a r i o u d e 1 0 ,5 °C a 4 2 ,0 °C .

A s e x p e r i ê n c i a s f o r a m c o n d u z i d a s n a s é p o c a s d e m a i o r e d e m e n o r e l e v a ç ã o t é r ­ m i c a .

A s c u l t u r a s c o m 2 0 a 2 5 d i a s , n o m e i o d e P a c k c h a n i a n , c o m 15 d i a s n o d e W a r ­ r e n e c o m 8 d i a s n o d e N o l l e r f o r a m c e n ­ t r i f u g a d a s e l a v a d a s v á r i a s v ê z e s e m s o ­ l u ç ã o s a l i n a , a t é s e o b t e r u m s o b r e n a d a n - t e l í m p i d o .

A c o n c e n t r a ç ã o f i n a l d o s t r i p a n o s o m a s v a r i o u d e 2 ,5 x 1 01’» a 5 x 1 0 s p a r a s i t a s p o r m l.

O p e r c e n t u a l d e f o r m a s m e t a c í c l i c a s f o i d e a p r o x i m a d a m e n t e 5 p o r c e n t o n o m e i o d e W a r r e n , 2 ,5 p o r c e n t o n o d e N o l l e r e d e c ê r c a d e 10 p o r c e n t o n o d e P a c k c h a n i a n .

A s “ v a c i n a s ” f o r a m u t i l i z a d a s lo g o a p ó s o s e u p r e p a r o e t i n h a m s e m p r e f o r m a s v iv a s , c u j a p e r c e n t a g e m v a r i o u d e 5 0 a 9 0 p o r c e n t o .

A s e x p e r i ê n c i a s f o r a m c o n d u z i d a s e m c a m u n d o n g o s a l b i n o s d e u m a m e s m a l i ­ n h a g e m , m a n t i d a h á 1 6 a n o s n o B i o t é r i o d a F a c u l d a d e d e M e d i c i n a d e R i b e i r ã o P r ê t o .

O s a n i m a i s e r a m t o d o s d o s e x o m a s ­ c u l i n o e p e s a v a m , n o i n í c i o d a e x p e ­ r i m e n t a ç ã o , 10 g , e m m é d i a .

( * ) U . S . P . D e p a r t a m e n t o d e P a t o l o g i a . F a c u l d a d e d e M e d i c i n a d e R i b e i r ã o P r ê t o , S ã o P a u l o , B r a s i l . ( * * ; D e p a r t a m e n t o d e C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s . F a e . F a r . O d o n t . R i b e i r ã o . P r ê t o .

70

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. IV — N'-' 2

F o r a m u t i l i z a d o s 1 56 c a m u n d o n g o s , d i ­ v i d i d o s e m 4 g r u p o s .

N o p r i m e i r o g r u p o h a v i a 3 6 a n i m a i s q u e f o r a m “ v a c i n a d o s p o r v i a s u b c u t â n e a c o m 0 ,2 m l d a “ v a c i n a ” p r e p a r a d a e m m e i o d e P a c k c h a n i a n .

C o m a “ v a c i n a ” d e W a r r e n f o r a m i m u ­ n i z a d o s 2 2 c a m u n d o n g o s e c o m a d o m e i o d e N o l l e r 19.

Q u a t r o s e m a n a s a p ó s , t o d o s o s a n i ­ m a i s “v a c i n a d o s ” e m a i s 7 9 o u t r o s , t o m a ­ d o s c o m o c o n t r o l e s , f o r a m i n o c u l a d o s c o m t r i p a n o s o m a s d a c e p a Y , v i r u l e n t a , d o

T r y

-p a n o so m a cruzi.

m a n t i d a e m c a m u n d o n ­ g o s .

O i n ó c u l o f o i o m e s m o p a r a t o d o s o s a n i m a i s , i.e ., 5 .0 0 0 p a r a s i t a s p o r g r a m a d e p ê s o c o r p o r a l .

A n t e s d a i n f e c ç ã o v i r u l e n t a f o i f e i t o x e n o d i a g n ó s t i c o e m 10 d o s c a m u n d o n g o s i m u n i z a d o s c o m a “ v a c i n a ” d o m e i o d e N o l l e r e e m 8 d o s d o m e i o d e W a r r e n .

C i n c o n i n f a s d e

R h o d n iu s p ro lix u s

f o ­ r a m a p l i c a d a s a c a d a a n i m a l d o p r i m e i r o g r u p o e c i n c o n i n f a s d e

R h o d n iu s n e g lec

-tu s

a c a d a u m d o s 8 a n i m a i s d o s e g u n d o g r u p o . T o d o s o s t r i a t o m í n e o s s e m o s t r a ­ r a m i s e n t o s d e t r i p a n o s o m a s q u a n d o f o ­ r a m e x a m i n a d o s 3 0 d i a s d e p o i s .

P a r a s i t e m i a s d o s c a m u n d o n g o s i n f e c t a ­ d o s f o r a m r e a l i z a d a s s e g u n d o a t é c n i c a d e P i z z i - B r e n e r ( 1 ) , n o s 8 .°, 1 5 .° e 3 0 .° d i a s a p ó s a i n o c u l a ç ã o .

O s p e r c e n t u a i s d e m o r t a l i d a d e f o r a m r e f e r i d o s a e s s a s d a t a s e a s e x p e r i ê n c i a s f o r a m c o n s i d e r a d a s e n c e r r a d a s n o 3 0 .° d i a , e m b o r a , e m a l g u n s c a s o s , o s a n i m a i s t i ­ v e s s e m s i d o o b s e r v a d o s a t é 9 0 d i a s , s e m m o d i f i c a ç õ e s n o s r e s u l t a d o s .

R E S U L T A D O S

A T a b e l a 1 e o s G r á f i c o s I e I I r e s u ­ m e m o s d a d o s o b t i d o s .

E v i d e n c i a - s e p e l o s m e s m o s u m a n í i t d a e f o r t e p r o t e ç ã o , c o n f e r i d a s p e l a s 3 v a c i ­

n a s q u e n ã o d i f e r e m s i g n i f i c a t i v a m e n t e e n t r e s i.

O n e r c e n t u a l d e m o r t a l i d a d e f o i i n s i g ­ n i f i c a n t e e n t r e o s a n i m a i s i m u n i z a d o s Q l p o r c e n t o , 4 p o r c e n t o e 0 p o r c e n t o ) m a s e m c o n t r a p o s i ç ã o m o s t r o u - s e e x t r e ­ m a m e n t e e l e v a d o (8 1 p o r c e n t o ) e n t r e o s a n i m a i s c o n t r o l e s .

D I S C U S S Ã O E C O N C L U S Õ E S

U m d e n ó s (6. 7 ) j á d e m o n s t r o u q u e e m h o s p e d e i r o s v e r t e b r a d o s , a f o r m a a v i - r u l e n t a d o

T r y p a n o s o m a c ru zi

c o n s e r v a s u a a v i r u l ê n c i a , a d e s p e i t o d o s v á r i o s m e i o s e m p r e g a d o s , s e j a p a r a d i m i n u i r a r e s i s ­ t ê n c i a d o h o s p e d e i r o s , s e j a p a r a e x a c e r ­

b a r a v i r u l ê n c i a d o f l a g e l a d o .

M o n t e i r o (8 > c o n s e g u i u d e m o n s t r a r q u e t a m b é m n o h o s p e d e i r o i n v e r t e b r a d o o t r i p a n o s o m a d a c e p a a v i r u l e n t a n ã o é c a ­ p a z d e r e t o r n a r à s u a p r i m i t i v a v i r u l ê n ­ c i a p a r a c a m u n d o n g o s .

C o m o p r e s e n t e t r a b a l h o v e r i f i c a m o s q u e , p e l o m e n o s c o m o s m e i o s d e c u l t u r a e m p r e g a d o s , a a v i r u l ê n c i a d o t r i p a n o s o m a s e m a n t é m i n a l t e r a d a , q u a n d o s e f a z v a ­ r i a r o m e i o n u t r i e n t e .

E m b o r a n o s f a l t e m e s t u d o s c i t o - g e n é t i - c o s , e s t a m o s c a d a v e z m a i s i n c l i n a d o s a a d m i t i r q u e a c e p a c u l t i v a d a , c o m a q u a l t e m o s t r a b a l h a d o , r e p r e s e n t a u m m u t a n ­ t e d a c e p a Y q u e a t é h o j e s e t e m m a n t i d o a l t a m e n t e v i r u l e n t a , p o r s u c e s s i v a s p a s s a ­ g e n s , e m c a m u n d o n g o s .

D ê s s e m o d o e c a s o e s s a s u p o s i ç ã o s e v e j a c o n f i r m a d a p o r e s t u d o s l a b o r a t o r i a i s a d e q u a d o s , j u l g a m o s j u s t o c o n s i d e r a r a c e p a a v i r u l e n t a c o m o u m a n o v a l i n h a g e m p a r a a q u a l s u g e r i m o s d e s d e lo g o a d e s i g ­ n a ç ã o P F e m h o m e n a g e m a P e d r e i r a d e F r e i t a s ( 2 ) , q u e c h e f i o u a e q u i p e q u e e s t u ­ d o u a p a c i e n t e d e q u e m a c e p a Y f o i i s o ­ l a d a .

S U M M A R Y

T h e a u th o r s th r o u g h e x p p e r im e n ts in m ice h a v e d e m o n s tr a te d t h a t th e

a v iru le n ce o f th e Y s tr a in o f

T . c r u z i ,

d escrib ed b y one o f th e m

( H .M .)

r e m a m

u n a lte r e d i f th e c u ltu r e m é d iu m is c h a n g e d .

EM

5

m

m

J

OE

S

A

N

G

U

E

Março/Abril, 1970

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

71

G R A F I C O t

- A - À ' A - V A C . M E I O ^ A C K C H A N I A N ■ ■ M m VA C- M E i 0 W A R R E N ... V A C. M E i 0 N Ô L L E R

— C O N T R O L E S

1 5

0 Í A S A P 0*S I N F E C Ç Ã O

T A B E L A

M e io d e c u l t u r a N ú m e r o d e

8 .° d i a p ó s i n f e c .

d a v a c i n a

c a m u n

-d o n g o s P a r a s i t e m i a

( m e d i a n a )

N .° m o r t e s

P a c k c h a n i a n 36 87 0

W a r r e n 22 0 0

N o l l e r 19 0 0

T o t a l d e v a c i n a d o s 77

1

1 5 .° d i a p ó s i n f e c . 3 0 .° d i a p ó s i n f e c .

P a r a s i t e m i a N .° P a r a s i t e m i a N .°

( m e d i a n a ) m o r t e s ( m e d i a n a ) m o r t e s

4

0 2 0

1

35 0 0

0

0 0 0

Março/Abril, 1970

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

73

S S A F 1 . C 0 n

LJ

o

ec a

« 5 0

□ [ A S A P O S

B I B L I O G

1 . B R E N E R , Z . — C o n t r i b u i ç ã o a o e s ­ t u d o d a t e r a p ê u t i c a e x p e r i m e n t a l d a D o e n ç a d e C h a g a s . T e s e . F a c . F a r m . O d o n t . U n i v . M i n a s G e r a i s , B e l o H o ­ r i z o n t e , 1 9 61 .

2 . F R E I T A S , J . L .P .; L I O N , M .F , & P A R - T A R I , J .T .A . — R e s u l t a d o s d e u m a i n v e s t i g a ç ã o s ô b r e M o l é s t i a d e C h a ­ g a s r e a l i z a d a n o M u n i c í p i o d e M a r í - l i a e o u t r o s , c o m e s t u d o c l í n i c o d e d o i s c a s o s a g u d o s d a d o e n ç a . R e v . H o s p . C l í n i c a s (S . P a u l o ) . 8 :8 1 - 9 2 , 1953.

3 . G E I G Y , R . & K A U F M A N N — O n t h e i n f e c t i v i t y o f c u l t u r e t r y p a n o s o m a o f t h e

T. b ru c ei

g r o u p . 8 ' 11 I n t . C o n g r e . T r o p . M e d . M a l á r i a , T e h e r a n , 1968 ( A b s t r a c t s R e v i e w s , p á g . 3 2 4 ) .

4 . M E N E Z E S , H . — P r o t e c t i v e e f f e c t o í a n a v i r u l e n t ( c u l t i v a t e d ) s t r a í n o f

T. c ru zi

a g a i n s t e x p e r i m e n t a l i n f e c - t i o n i n m i c e . R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o . 1 0 :1 - 4 , 1 96 8.

□ V A C . M E I O P A C K C H A N í A N

§ V A C . M E I O 'MA R R E N

V A C . M E I O N C L L E R

■ C O N T R O L E S

3 3

í N F E C Ç A 0

R A F I A

5 . M E N E Z E S , H . — A c t i v e i m m u n i z a t i o n o f d o g s w i t h a n o n a v i r u l e n t s t r a i n o f

T ry p a n o so m a cruzi.

R e v . I n s t . M e d .

T r o p . S . P a u l o . 1 1 :2 5 8 - 2 6 3 , 1 969 .

6 . M E N E Z E S , H . — I — T h e a v i r u l e n c e o f t h e c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f

T r y p a ­

n o so m a cruzi.

R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o — N o p r e l o .

7 . M E N E Z E S , H . — I I — T h e a v i r u l e n c e o f t h e c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f

T r y p a ­

n o so m a cruzi.

R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o — N o p r e l o .

8 . M O N T E I R O , J .C . — A a v i r u l ê n c i a d a c e p a Y c u l t i v a d a , d o

T. c r u z i

, n o h o s p e d e i r o i n v e r t e b r a d o . E m e l a b o ­ r a ç ã o .

9 . N Õ L L E R , W . — B l u t u n d I n s e k t e n - f l a g e l l a t e n Z ü c h t u n g a u f P l a t t e n . A r c . S c h i f f s . u . T r o p e n . H y g . 2 1 : 5 3 -

94, 1 9 1 7.

74

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. IV —

2

1 1 . S IL V A , L .H .P . d e C . & N U S S E N - Z W E I G , V . — S ô b r e u m a c e p a d e

T. c ru zi

a l t a m e n t e v i r u l e n t a p a r a o c a m u n d o n g o b r a n c o . F o l i a . C l i n . B io l.

( S . P a u l o ) . 2 0 :1 9 1 - 2 0 8 , 195 3.

1 2 . S IL V A , L .H . P E R E I R A ; & C A M A R ­ G O , E .P . — D i f f e r e n t i a t i o n i n t h e

l i f e c y c l e o f t r y p a n o s o m e s . R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o . 6 :1 8 8 - 1 9 2 , 1 9 64 .