Imunização de camundongos com «vacina» viva avirulenta de Trypanosoma cruzi: II Ensaio da avaliação do tempo de eficiência da vacina.

(1)

I M U N I Z A Ç Ã O D E C A M U N D O N G O S C O M « V A C I N A » V I V A A V I 

R U L E N T A D E

TR Y PAN OSO M A CRUZI

II — E n s a i o d a a v a l i a ç ã o d o t e m p o d e e f i c i ê n c i a d a v a c i n a

H u m b e r t o M e n e z e s *

C a m u n d o n g o s “v a c i n a d o s ” c o m v a c i n a v i v a a v i r u l e n t a d e T. c r u z i s e m o s t r a r a m 'p r o t e g i d o s c o n t r a i n f e c ç ã o v i r u l e n t a , a t é 20 s e m a n a s a p ó s a i m u  n i z a ç ã o .

E s s a p r o t e ç ã o f o i i n f e r i o r à o b s e r v a d a a v ó s 4 s e m a n a s d e i m u n i z a  ç ã o e m e n o r a i n d a d o q u e a a p r e s e n t a d a p o r a n i m a i s i n f e c t a d o s 4 s e m a n a s a p ó s a “v a c i n a ç ã o ” e r e i n f e e t a d o s 15 s e m a n a s d e p o i s . N e s t e ú l t i m o c a s o , a p r i m e i r a i n f e c ç ã o p a r e c e t e r a t u a d o c o m o u m a d o s e d e r e f o r ç o .

O A u t o r a s s i n a l a a d i f i c u l d a d e e m d e t e r m i n a r o t e m p o d e v a l i d a d e d a v a c i n a , e m v i r t u d e d a r e s i s t ê n c i a n a t u r a l a p r e s e n t a d a c o m a i d a d e , m e s m o p e l o s a n i m a i s m a i s s e n s í v e i s .

D e n t r e os v á r io s f a t ô r e s q u e se t ê m de l e v a r e m c o n t a p a r a o uso p r á t i c o d e u m a v a c i n a q u a lq u e r , o s e u t e m p o de e f ic á c ia é u m d o s p r i n c i p a i s .

0 p r e s e n t e t r a b a l h o t e m p o r o b je tiv o a v a l i a r o p e r ío d o d e e f ic iê n c ia d a “v a c i n a ” viv a d e T r y p a n o s o m a c r u z i q u e v im o s e s tu d a n d o h á a l g u m t e m p o e q u e j á foi a s s u n t o de o u t r a s c o m u n ic a ç õ e s Í2,3).

M A T E R IA L E .M É T O D O

1 — U m g r u p o d e n o v e c a m u n d o n g o s a lb in o s c o m 10 g de pê s o foi v a c in a d o . C a d a a n i m a l r e c e b e u p o r v ia s u b c u t â n e a 1,1 x 107 p a r a s i t a s vivo s d a c e p a Y a v i r u l e n t a , m a n t i d a e m m e io d a c u l t u r a de P a c k c h a n i a n . A c u l t u r a t i n h a 30 d ia s de id a d e e o líq u id o d e c o n d e n s a ç ã o foi c e n tr i f u g a d o e l a v a d o v á r i a s vêzes e m s o lu ç ã o s a lin a .

A v a c i n a foi u t i l i z a d a logo a p ó s o se u p r e p a ro .

U m a p e s q u is a de p a r a s i t a s n o s a n g u e c i r c u la n t e , p e la t é c n i c a d a g ô t a e s p ê ss a ,

foi f e i t a n o 8.° d ia a p ó s a v a c in a ç ã o , co m r e s u l t a d o n e g a tiv o .

V in te s e m a n a s após, to d o s os a n i m a i s “i m u n i z a d o s ” e m a is 9 o u tr o s d a m e s m a id a d e e o r ig e m f o r a m i n f e c ta d o s , c a d a , com 5.000 p a r a s i t a s / g de pêso.

O s t r i p a n o s o m a s i n f e c t a n t e s e r a m d e c e p a Y v i r u l e n t a m a n t i d a e m c a m u n d o n gos.

P a r a s i t e m i a s , p e l a té c n i c a de P iz z i- B r e - n e r (1) , f o r a m r e a l i z a d a s n o 8.°, 15.° e 30.° d ia a p ó s a in fe c ç ã o .

O p e r c e n t u a l de s o b r e v id a foi r e l a c i o n a d o c o m a s d a t a s a c i m a r e f e r i d a s .

Ao f i m do 30.° dia, to d o s os a n i m a i s s o b r e v iv e n te s f o r a m s a c r if ic a d o s p a r a a r e a liz a ç ã o de e x a m e h is to p a to ló g ic o .

2 — U m g r u p o de oito c a m u n d o n g o s a l b in o s c o m 10g d e p ês o foi v a c in a d o .

C a d a a n i m a l r e c e b e u p o r via s u b c u t â n e a d o se i d ê n t i c a d a m e s m a “v a c i n a ” do g r u p o a n t e r i o r .

O ito d ia s a p ó s a i m u n i z a ç ã o foi f e i t a ' u m a p e s q u is a de p a r a s i t a s n o s a n g u e c i r c u l a n te .

(2)

Q u a t r o s e m a n a s a p ó s o e m p r e g o d a “v a c i n a ” tc d o s o s a n i m a i s f o r a m i n f e c t a dos c o m 5.000 p a r a s i t o s v i r u le n to s p o r

g r a m a de pêso.

Os t r i p a n o s o m a s i n f e c t a n t e s e r a m d a m e s m a c e p a Y, v i r u l e n t a , m a n t i d a e m c a m u n d o n g o s .

Q u in z e s e m a n a s d e p o is d a p r i m e i r a i n f e c ç ã o os a n i m a i s f o r a m s u b m e tid o s a u m a s e g u n d a , i d ê n t i c a à a n t e r i o r .

S i m u l t a n e a m e n t e u m g r u p o c o n t r o l e de 8 c a m u n d o n g o s , co m a m e s m a id a d e , foi in f e c ta d o .

P a r a s i t e m i a s p e la m e s m a t é c n i c a a n t e r i o r m e n t e d e s c r ita f o r a m r e a l i z a d a s n o s p e r ío d o s j á m e n c io n a d o s .

A e x p e r i ê n c i a foi c o n s i d e r a d a e n c e r r a d a n o 30.° d ia a p ó s a s e g u n d a in f e c ç ã o , q u a n d o f o r a m s a c r if ic a d o s to d o s os a n i m a is s o b r e v iv e n te s p a r a a o b t e n ç ã o d e m a t e r i a l p a r a e x a m e histo ló g ic o .

R E S U L T A D O S

As t a b e l a s 1 e 2 e os G r á f i c o s I e II r e s u m e m os d a d o s o b tid o s n o s dois e x p e r im e n to s .

A im u n i z a ç ã o c o n f e r i d a p e l a “v a c i n a ” p r c l o n g c u - s e a t é 20 s e m a n a s , e m b o r a c o m m e n o r e f ic iê n c ia ( n o q u e diz r e s p e ito à p a r a s i t e m i a ) do q u e n o s ca s o s e m q u e os a n i m a i s f o r a m i n f e c t a d o s n a 4,a s e m a n a p ó s “v a c i n a ç ã o ” (2,3).

N o q u e c o n c e r n e à so b r e v id a , o r e s u l t a d o f c i e x c e le n te , m a s n ã o d if e r iu do dos a n i m a i s c o n tr o le s . I s to se deve , c e r t a m e n te, à id a d e dos a n i m a i s de a m b o s os g r u p o s .

O e x a m e h is to ló g ic o r e v e lo u n o s a n i m a i s “v a c i n a d o s ” a e x i s t ê n c i a de v á r io s foco s d e i n f i l t r a ç ã o h i s t i o - l i n f o c i t á r i a n o m io c á r d io , e s p e c i a l m e n t e lo c a li z a d a s n a s b a s e s v e n t r i c u l a r e s (Fig . 1).

N ão foi p os síve l a id e n t i f i c a ç ã o de p s e u - d o c is to s n o s v á r io s c o r te s e x a m i n a d o s .

N o f íg a d o p u d e r a m s e r vistos, co m f r e q ü ê n c ia , p e q u e n o s a c ú m u l o s h i s t i o - l i n f o - c i tá r io s n o p a r ê n q u i m a (Fig. 2) e r a r a m e n t e g r a n d e i n f i l t r a ç ã o d e a l g u n s e s p a ços p o r t a p o r h is tió c ito s , lin f ó c ito s e eo- sinó filos .

E m n e n h u m ca so f o r a m v is to s p s e u d o - cistos.

N os c a m u n d o n g o s do g r u p o c o n tro le , a i n f i l t r a ç ã o c e l u l a r i n f l a m a t ó r i a , a p e s a r de

n ã o t e r sido m a i o r do q u e a de m a i o r i n t e n s i d a d e e n t r e os a n i m a i s “ v a c i n a d o s ” , se a c h a v a a c o m p a n h a d a d e v á r io s p s e u d o - c is tc s i n t e g r e s e r o m p id o s (Fig. 3).

No f íg a d o , h a v i a a m p l a s á r e a s de n e - c r c s e de c o a g u la ç ã o (Fig. 4i, g r a n d e i n f il t r a ç ã o c e lu la r i n f l a m a t ó r i a dos e s p a ç o s p o r ta is , g r a n d e s a c ú m u l o s h i s t i o - l i n f o c i t á - r ie s n o p a r ê n q u i m a e p r o n u n c i a d a h i p e r - p l a s i a e h i p e r t r o f i a d a s c é lu la s de K ú p f f e r . L e i s h m a n i ó i d e s f o r a m v is to s e m g r a n d e q u a n t i d a d e .

N a s e g u n d a e x p e r iê n c ia , r e s u m i d a n a T a b e l a 2 e n o G r á f i c o 2, v e r if ic o u - s e u m a t o t a l p r o t e ç ã o do s a n i m a i s “v a c i n a d o s ” e i n f e c t a d o s c o m a u s ê n c i a d e p a r a s i t a s n o s a n g u e p e r if é r ic o e d e ca s o s f a ta is .

O e x a m e h is to ló g ic o do s c a m u n d o n g o s “v a c i n a d o s ” m o s t r o u n o c o r a ç ã o r a r í s s i m o s e d is c r e tís s im o s a g l o m e r a d o s d e lin f ó c ito s e h is t ió c i to s (Fig. 5), g e r a l m e n t e s u b - e p i - c á rd ic o s . N ã o f o r a m e n c o n t r a d o s p a r a s i ta s.

No f íg a d o , a s lesões e r a m t a m b é m e x t r e m a m e n t e d is c r e ta s (Fig . 6), i g u a l m e n t e s e m p a r a s i t a s .

Nos a n i m a i s c o n tro le s , o p r o c e s s o c e lu - l u l a r i n f l a m a t ó r i o n o c o r a ç ã o e r a b a s t a n t e p r o n u n c i a d o , e m b o r a o n ú m e r o de

p s e u d o c is t o s fô ss e d i m i n u t o (F ig . 7>. No f íg a d o , a l é m dos focos de i n f i l t r a ç ã o h i s t i o - l i n f o c i t á r i a do p a r ê n q u i m a , h a v i a g r a n d e a c ú m u l o de h is tió c ito s , lin f ó c ito s , n e u t r ó - filos e e o s in óf ilo s n o s e s p a ç o s p o r ta i s , b e m c om o á r e a s d e n e c r o s e s d e c o a g u la ç ã o dos h e p a t ó c i t o s (Fig. 8 ).

E m n e n h u m do s ca s o s e x a m i n a d o s foi p os síve l i d e n t i f i c a r p a r a s i t a s n o f íg a d o .

D IS C U S S Ã O E C O N C L U SÕ E S

O e m p r e g o d e “v a c i n a ” v iv a a v i r u l e n t a c o n f e r e a c a m u n d o n g o s u m a i m u n i d a d e d e lo n g a d u r a ç ã o , i m u n i d a d e e s ta q u e se e x a l t a se o a n i m a l s o f r e u m a in f e c ç ã o v i r u l e n t a p o u c o t e m p o a p ó s a im u n i z a ç ã o . J á v im o s e m t r a b a l h o s a n t e r i o r e s (2,3) que e s t a p r i m e i r a in f e c ç ã o , q u a t r o s e m a n a s a p ó s o e m p r ê g o d a “v a c i n a ”, é d is c r e ta , c o m m u i t o b a i x a p a r a s i t e m i a e d is c r e tís - s im a s lesões o r g â n i c a s (1.4,5).

(3)

-J a n . / F e v . , 1 9 7 0 R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p . 3

T A B E L A 1

C a m u n d o n g o s i n f e c t a d o s 20 s e m a n a s a p ó s v a c i n a c à o

N ú m e r o de p a r a s i t a s 5 m m - le s a n g u e

D P i ~L> O o pl O

N ú m e r o

oO 15 30

1 525 35 0

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CO 4 2.590 35 0

O 0 945 0 0

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£ 8 7.875 7.350 0

hH 9 175 0 0

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> _{M É D IA} _1.802

927 0

M E D IA N A 787 0 0

1 2.730 2.765 0

-~> _4.725 _2.555 ₀

3 3.920 560 0

4 7.280 595 0

5 3.290 — —

CO ₆ _2.520 ₄₂₀ ₀

a ₇ _2.485 ₈₀₅ ₀

o 8 6.125 4.410 0

03 9 3.780 1.610 0

Z

! O M É D IA 4.095 1.715 0

ü

M E D IA N A 3.780 1.207 0

E n c o n t r a d o m o r t o 90 d ia s a p ó s a v a c i n a ç a o .

:.as de '‘v a c i n a ç ã o '’ e m e n o r a i n d a q u e a a p r e s e n t a d a p e lo s a n i m a i s c o m p r é v i a i n j e ç ã o v i r u l e n t a . E s t a ú l t i m a a g iu co m o a m a d os e d e r e f o rç o , n o s s u g e r i n d o n o r a t u r o o e m p r ê g o d e m a i s d e u m a d os e de

v a c i n a ” n a i m u n i z a ç ã o dos a n i m a i s .

A b a i x a m o r t a l i d a d e v e r i f i c a d a e m to - := os g r u p o s d e a m b a s a s e x p e r i ê n c i a s r í i l e t e a d if i c u l d a d e q u e se t e m e m f a z e r

(4)

G R Â F i C O l

" V A C ; N A D C S

— C 3 N T R C L E 3

(5)

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J a n . / F e v . , 1 9 7 0 R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p . 5

g r â p i

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" V A C ! N A D G S ”

CONTROLES

8 15 3 0

(6)

6 R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p . V o l . I V — N ? 1

T- A B E L A 2

C a m u n d o n g o s v a c i n a d o s e infe c t a d o s d u a s vézes

1." o a N.° p a r a s i t a s - õ m i i i " s a n g u e

I n f e e c à o I n i e c ç a o

N.° T e m p o a p ó s

V a c in a ç ã o T e m p o a p ó s a l . Ll

■

D ias a p ó s r e i n f e c ç ã o

8 15 30

V A C IN A D O S 2 3 4 5 6 7 8

4 s e m a n a s 15 s e m a n a s 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

M É D IA 0 0 0

M E D IAN A 0 0 0

K W o 1 2 3 4 5 6 7 8 — 21.455 15.645 6.685 20.475 11.200 6.090 8.190 6.020

' 630 525 805 1.330 945 735 630 0 0 0 0 0 0 0 is O

Ü M É D IA 11.970 800 0

M E D IA N A 9.695 735 0

S U M M A R Y

M i c e i m m u n i z e d w i t h a s i n g l e d o s e o f l i v e “v a c c i n e ” o f a v i r u l e n t T r y p a n o s o m a c r u z i p r e s e n t a g o o d p r o t e c t i o n a g a i n s t c h a l l e n g e u n t i l 20 w e e ic s a f t e r t h e “v a c c i n a t i o n ”.

(7)

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(8)

F ig . 1 ^ 1 — A n i m a l F r 2 1 /5 — V a c in a d o e i n f e c t a d o 1 v e z . B a s e d o v e n t r í c u l o e s q u e r d o . F o c o s d e i n f i l t r a ç ã o h i s t i o . l i n f o c i t á r i a , s e m p a r a s i t a s .' O r i g i n a l 100x.

F i g . 1 - 2 — M e s m o a n i m a l . F ig a d o . D is c r e tí s s im o s f o c o s d e i n f i l t r a ç ã o h i s t i o - l i n f o c i t á r i a n o p a r ê n q u i m a . A u s ê n c i a d e p a r a s i t a s . O r i g i n a l 160x.

F ig . 1 - 3 — A n i m a l F r 2 1 / 4 — C o n t r o l e — P a r e d e d e a u r í c u l a c o m p s e u d o c i s t o s . O r i g i n a l 400x.

F ig . 1 - 4 — M e s m o a n i m a l . F íg a d o c o m g r a n d e i n f i l t r a d o i n f l a m a t ó r i o - c r ô n i c o e á r e a s d e

n e c r o s e . O r i g i n a l 160x,

F ig . 1 - 5 — A n i m a l F r 3 4 /1 — V a c i n a d o e i n f e c t a d o d u a s v ê z e s . P a r e d e d o V . E . c o m ra r.o s e d i s c r e t í s s i m o s fo c o s i n f l a m a t ó r i o s c r ô n ic o s . A u s ê n c i a d e p a r a s i t a s . O r i g i n a l 100x.

F ig . 1 6 — M e s m o A n im a l. F íg a d o . R a r o s e p e q u e n o s a c ú m u l o s d e h i s t ó c i t o s e l i n f ó c i t o s n o p a r é n q u i m a . A u s ê n c ia d e p a r a s i t a s . O r i g i n a l 100x.

F ig . i - 7 — A n i m a l F r 3 4 /7 — C o n t r o l e — G r a n d e s fo c o s d e i n f l a m a ç ã o c r ô n i c a n a b a s e d o s

v e n t r í c u l o s e n a s p a r e d e s a u r i c u l a r e s . F o r a m vist-o s r a r o s p s e u d o c i s t o s . O r i g i n a l 160x.

(9)

J a n . / F e v . , 1 9 7 0 R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p . 9

B I B L I O G R A F I A

B R E N E R , Z. — C o n t r i b u i ç ã o ao e s t u do d a t e r a p ê u t i c a e x p e r i m e n t a l d a d o e n ç a d e C h a g a s . T es e . F a c . F a r m . O d o n t. U n iv. M i n a s G e r a is , B e lo H o

r iz o n te , 1961.

M E N E ZE S, H. — P r o t e c t i v e e f f e c t of a n a v i r u l e n t ( c u l t i v a t e d ) s t r a i n

o f T . c r u z i a g a i n s t e x p e r i m e n t a l i n

f e c t i o n in m ic e. R ev. I n s t. M ed. T ro p . S ã o B a ulo, 10:1-4, 1968.

3. M E N E Z E S, H. — A ctiv e i m m u n i z a t i o n o f d o g s w i t h a n o n v i r u l e n t s t r a i n of T . c r u z i . R e v. I n s t . M ed.

T ro p . S ã o P a u lo . No p re lo .

4. M E N EZ E S, H. — L e sõ e s h is to ló g ic a s

e m c a m u n d o n g o s “v a c i n a d o s ” co m u m a c e p a a v i r u l e n t a do T . c r u z i . R ev.

B r a s . M ed., 25:160-165. 1968.

5. M E N E Z E S , H. — L esõe s h is to ló g ic a s do c o r a ç ã o e m c ã e s “v a c i n a d o s ” co m u m a c e p a a v i r u l e n t a de T . c r u z i .

Rev. B r a s il. M e d., 26:281-283, 1969.