IMUNIZAÇÃO DE CAMUNDONGOS COM «VACINA» VIVA
AVIRULENTA DE
T R Y P A N O S O M A CRU ZI
I — Ensaio da avaliação do menor inoculo eficiente.
H m n h f i r W ) M e n e z n s *
O A utor procura verificar qual o m enor núm ero ãe
T r y p a n o s o m a c ru z i,da cepa Y avirulenta, capaz ãe conferir a camundongos im unidade eficiente
contra uma ulterior infecção com a cepa Y virulenta do m esm o parasita.
Considerações gerais sôbre o possível m ecanism o da imunização são es
boçadas .
E m t r a b a l h o s a n t e r i o r e s p r o c u r a m o s d e m o n s t r a r o e f e i t o p r o t e t o r d e u m a c e p a a v i r u l e n t a d o
Trypanosom a cruzi
c o n t r a in f e c ç ã o e x p e r i m e n t a l c o m c e p a a l t a m e n t e v i r u l e n t a d o m e s m o f l a g e la d o (7, 11. 13) N a q u e le s t r a b a l h o s fo i u tiliz a d o , d e lib e r a d a m e n t e , u m in ó c u lo m u i t o g r a n d e , p o is o o b je tiv o e r a d u p lo : m o s t r a r o p a p e l i m u - n i z a n t e d a v a c i n a u s a d a e a o m e s m o t e m p o a s u a a v i r u l ê n c i a .V is a n d o u m a p o s s ív e l a p l i c a ç ã o p r á t i c a p o s t e r i o r p r o c u r a m o s a v a l i a r a q u a n t i d a d e m í n i m a d e t r i p a n o s o m a s a v i r u l e n t o s c a p a z d e p r o t e g e r e f i c i e n t e m e n t e c a m u n d o n g o s c o n t r a u m a in f e c ç ã o v i r u l e n t a .
M A T E R IA L E M É T O D O S
U tiliz a m o s c o m o “ v a c i n a ” u m a c u l t u r a d e
Trypanosom a cruzi,
c e p a Y , m a n t i d a e m m e io d e c u l t u r a d s P a c k c h a n i a n ( s u b - in o c u l a ç ã o n .° 306 d o D e p a r t a m e n t o d e P a r a s i t o l o g i a d a F . M . R . P . ) , c o m 28 d ia s d e i d a d e .O líq u id o d e c o n d e n s a ç ã o d o m e io fo i c e n t r i f u g a d o e o s e d i m e n t o s u s p e n s o e m s o lu ç ã o s a l i n a , c e n t r i f u g a d o v á r i a s v ê z e s ,
à b a i x a r o t a ç ã o , a t é s e o b te r u m s o b r e n a - d a n t e l ím p id o .
O s e d im e n to f o i m a i s u m a v e z s u s p e n s o e m s o lu ç ã o s a l i n a , t e n d o s id o f e i t a im e d i a t a m e n t e u m a a v a l i a ç ã o d o n ú m e r o d e f o r m a s v iv a s p r e s e n t e s , c a l c u l a n d o - s e e s ta s e m c ê r c a d e 60% d e to d o s o s p a r a s i t a s .
D e ix o u - s e s e c a r u m a g ô t a d e “ v a c i n a ” s ô b r e u m a l â m i n a e p o s t e r i o r m e n t e p r o - c e d e u - s e a u m a c o lo r a ç ã o p e lo G ie m s a .
C o m o a u x ílio d e u m a o c u l a r i n t e g r a d o - r a Z e is s e t e n d o c o m o p a d r ã o u m e s f r e g a ç o d e s a n g u e c u jo n ú m e r o d e h e m á c i a s p o r m m ’> e r a c o n h e c id o , p r o c e d e u - s e à e s t i m a t i v a d o n ú m e r o d e p a r a s i t a s p o r m l.
A m e s m a l â m i n a e x a m i n a d a c o m i m e r s ã o p e r m i t i u a v a l i a r o p e r c e n t u a l d e f o r m a s m e t a c í c l i c a s .
D ê s s e m o d o c a lc u lo u - s e q u e 1 m l d a v a c i n a p o s s u ia : 2 ,4 x 10" p a r a s i t a s d o s q u a is 60% e s t a v a m v iv o s . A s f o r m a s m e ta c í c l i c a s c o r r e s p o n d i a m m a i s o u m e n o s a 10%
d o s t r i p a n o s o m a s p r e s e n t e s n a p r e p a r a ç ã o . A “ v a c i n a ” f o i e n t ã o d iv id id a e m q u a t r o f r a ç õ e s s e n d o n ã o d i l u i d a a p r i m e i r a e a s d e m a is d i l u i d a s a 1 /1 0 , 1 /1 0 0 e 1/1000, s u c e s s i v a m e n t e .
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5
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3
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298
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
Vol. III — N.° 6
G R A F I C O N 2 1
n n n V A C I N A N ÃO D I L U Í D A
8
15
D I AS APOS I N F E C Ç Ã O
V a c in a C a m u n d o n - g o N .°
N ú m e r o p a r a s i t a s / 5 m m 3 d e s a n g u e D ia s a p ó s a I n f e c ç ã o
8
1 15 30
1 0 70 0
2 105 175 0
3 0 0 0
4 0 35 0
5 1330 175 0
"O 6 35 0 0
7 0 0 0
■a
8 0 0 0O 9 385 0 0
ic3 10 0 0 0
M é d ia 185 45 0
M e d i a n a 0 0 0
1 0 35 0
2 140 0 0
3 105 0 0
4 0 35 0
5 0 35 0
6 0 0 0
7 0 0 0
o
H 8 0 0 0
i —i 9 0 0
10 210 ft 0
M é d ia 45 10 0
M e d i a n a 0 0 0
1 70 0 0
2 70 0 0
3 140 70 0
4 105 35 0
5 185 0 0
6 70 35 0
O
O 7 175 0 0
T-t 8 0 0 0
i"H
9 105 0 0
10 70 70 0
M é d ia 99 21 0
M e d i a n a 87 0 0
1 245 35 0
3 35 70 0
3 1 .4 0 0 0 0
4 105 0 0
5 35 0 0
6 525 280 0
O 7 105 0 0
o
o 8 245 70 0
t-H
9 0 35 0
1—1
10 4 .7 9 5 315 —
M é d ia 769 80 0
M e d i a n a 175 35 0
1 4 .3 7 5 — —
CO 2 2 1 .0 0 0 1 .3 3 0 —
W 3 7 .8 2 5 — —
i4 4 3 5 .0 0 0 — —
O 5 1 7 .5 0 0 1 .2 6 0 —
tó 6 1 0.500 1 .0 8 5 —
H 7 4 .7 2 5 — —
53 8 4.0 ?5 1 .9 9 5 0
O 9 2 1 .0 0 0 1 .7 8 5 0
O 10 7 .5 2 5 — —
M é d ia 1 3.3 4 7 1 .4 9 1 0
Nov.-Dez., 1969
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
301
Q u a r e n t a c a m u n d o n g o s a lb in o s , m a c h o s , c o m 10 g d e p ê s o f o r a m d iv id id o s e m g r u p o s d e 10 e a c a d a g r u p o s e i n j e t o u , p o r v ia s u b c u t â n e a , 0,2 m l d e u m a d a s f r a çõ e s d a “ v a c i n a ” .
D e z a n i m a i s d a m e s m a p r o c e d ê n c ia , p ê s o e s e x o , m a n t i d o s n a s m e s m a s c o n d iç õ e s , f o r a m t o m a d o s c o m o c o n t r o l e s .
P e l a t é c n i c a d a g ô t a e s p ê s s a fiz e m o s u m a p e s q u is a d e t r i p a n o s o m a s n o s a n g u e p e r if é r ic o d e to d o s o s a n i m a i s “ v a c i n a d o s ” , 8 e 15 d i a s a p ó s a “V a c i n a ç ã o ” .
Q u a t r o s e m a n a s a p ó s a im u n i z a ç ã o t o d o s o s a n i m a i s , in c lu s iv e o s c o n tr o le s , f o r a m i n f e c t a d o s , p o r v ia p e r i t o n e a l , c o m 5 .0 0 0 t r i p a n o s o m a s / g d e p ê s o .
O s f l a g e l a d o s i n f e c t a n t e s p r o v i n h a m d e s a n g u e h e p a r i n i z a d o d e c a m u n d o n g o s n o 8 .° d i a d a i n f e c ç ã o c o m a c e p a v i r u l e n t a Y d o
Trypanosom a cruzi.
A p a r a s i t e m i a d e to d o s o s a n i m a i s f o i f e i t a n o 8.°, 15.° e 30 .° d i a s a p ó s a i n f e c ç ã o , u s a n d o - s e a t é c n i c a d a c o n t a g e m p r e c o n i z a d a p o r P iz z i e m o d i f i c a d a p o r B r e - n e r ( 1 ) .
O p e r c e n t u a l d e s o b r e v id a d o s a n i m a i s f o i t o m a d o t a m b é m e m r e l a ç ã o c o m a q u e l a s d a t a s .
R E S U L T A D O S
O s r e s u l t a d o s o b tid o s s e a c h a m r e s u m i d o s n a T a b e l a 1 e n o s G r á f ic o s I e n .
P o r ê le s s e v e r i f i c a q u e t ô d a s a s f r a ç õ e s d a “ v a c i n a ” p r o t e g e r a m o s a n i m a i s , c o n t u d o a s q u e c o n f e r i r a m m e l h o r p r o t e ç ã o f o r a m a s p o s s u i d o r a s d e m a i o r n ú m e r o d e p a r a s i t a s . O s a n i m a i s i m u n iz a d o s c o m “ v a c i n a ” n ã o d i l u i d a e d i l u i d a a 1 /1 0 n ã o c h e g a r a m s e q u e r a a p r e s e n t a r , n a s u a m a io r ia , p a r a s i t e m i a a p ó s a i n f e c ç ã o .
U m d o s a n i m a i s p r o t e g i d o s c o m a “ v a c i n a ” a 1 /1 0 m o r r e u n o 17.° d i a p ó s i n f e c ç ã o e e m b o r a n ã o t e n h a m o s f e i t o e s t u d o h i s to p a to ló g ic o , d a d o o e s t a d o d e p u t r e f a ç ã o e m q u e f o i e n c o n t r a d o , é q u a s e c e r t o n ã o t e r m o r r i d o d a p a r a s i t e m i a , p o is t i v e r a d u a s p a r a s i t e m i a s n e g a t i v a s n o s d ia s 8 e 15 a p ó s a i n f e c ç ã o .
O s a n i m a i s p r o t e g i d o s c o m a “ v a c i n a " a 1 /1 0 0 0 q u e t e o r i c a m e n t e r e c e b e r a m 288 t r i p a n o s o m a s v iv o s , s e n d o 29 f o r m a s m e - ta c í c l i c a s , t i v e r a m u m a p a r a s i t e m i a d i s c r e t a ( e x c e ç ã o d e d o is a n i m a i s ) n o 8.° e 15.° d i a e n e g a t i v a n o 3 0 .° .
A ú n i c a m o r t e d ê s s e g r u p o s e d e v e u , d e f a to , à i n f e c ç ã o t r i p a n o s o m ó t i c a e o c o r r e u n o 16.° d i a p ó s i n f e c ç ã o .
Q u a n t o a o s c o n t r o l e s c o m p o r t a r a m - s e c o m o to d o s o s o u t r o s d a s d e m a is e x p e r i ê n c ia s n o s s a s e m q u e u tiliz a m o s a m e s m a c e p a e a m e s m a d o s e i n f e c t a n t e (6 , 7, 11, 1 3 ); i . é . , a p r e s e n t a r a m u m a a l t a p a r a s i t e m i a n o 8 .° d i a q u e f o i d e c l i n a n d o a t é se t o r n a r n e g a t i v a n o 30 .° d i a .
A m o r t a l i d a d e s e in ic io u n o 15.° d i a p ó s i n f e c ç ã o e s e t o r n o u m á x i m a n o 21 .° d ia , c o n s e r v a n d o o m e s m o p e r c e n t u a l a t é o 30.° d i a q u a n d o a e x p e r i ê n c i a f o i c o n s i d e r a d a e n c e r r a d a .
A s p e s q u is a s p a r a s i t á r i a s p ó s v a c in a ç ã o e p r é - i n f e c ç ã o f o r a m t ô d a s n e g a t i v a s .
C O M E N T Á R IO S E C O N C L U S Õ E S
E m b o r a s e j a p o s s ív e l q u e v e n h a m o s a t e r d e n t r o e m b r e v e v a c i n a s m o r t a s e f i
c i e n t e s c o n t r a a tr i p a n o s o m o s e s u l - a m e r i c a n a (2, 4 e 1 4 ), o s m e lh o r e s r e s u l t a d o s
v e r i f i c a d o s a t é a g o r a t ê m s id o c o m a s “ v a c i n a s ” v iv a s .
A in d a s e e n c o n t r a a r r a i g a d o n o e s p ír ito d a m a i o r i a d o s p a r a s i t o l o g i s t a s q u e s e d e d i c a m a o e s tu d o d a i m u n i d a d e d e s s a p a r a - s ito s e , o p r i n c í p i o e l a b o r a d o e m 1931 p o r C o llie r (3 ) d e q u e a i m u n i d a d e d o s a n i m a i s d e l a b o r a t ó r i o , i n f e c t a d o s , e s t á n a d e p e n d ê n c i a d a p r e s e n ç a p e r m a n e n t e d o p a r a s i t a n o te c id o s o m á t i c o .
A “ p r e m u n i ç ã o ” q u e é o t ê r m o d a d o a ê s s e t i p o d e i m u n i d a d e é, n a o p in iã o d e L u m s d e n (5 ) u m t ê r m o m e r a m e n t e d e s c r itiv o , n a d a s i g n i f i c a n d o q u a n t o a o m e c a n is m o i m u n i t á r i o .
Ê s te , s e g u n d o o m e s m o A u to r , d e v e s e r s e m e l h a n t e t a n t o n a s in f e c ç õ e s p a r a s i t á r i a s c o m o n a s v i r ó t i c a s e b a c t e r i a n a s .
N o n o s s o c a s o e s t a m o s c o n v ic to s d e q u e o s p a r a s i t a s v iv o s a v i r u l e n t o s u s a d o s p a r a i m u n i z a r o s a n i m a i s , p r o d u z e m u m a i n f e c ç ã o t r a n s i t ó r i a n o s m e s m o s , m a s n ã o u m a i n f e c ç ã o - d o e n ç a .
302
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
Vol. III
N.° 6
G R A F I C O
N 2 2
100
Ld
Q e t O
c r o
5 0
10
I 1 V A C I N A N A0 D I L U Í D A
Ei 0 V A C I N A l / l 0
V A C I N A 1 / 1 0 0
V A C I N A 1 / 1 0 0 0 C O N T R O L E S
DI A S
1 5
A P 0 S
N F ECÇ A 0
q u a l q u e r t r a t a m e n t o s e j a p o r p r o c e s s o s q u ím ic o s o u f ís ic o s in d u z a l t e r a ç õ e s c o m p e r d a o u d i m in u iç ã o a c e n t u a d a d o s e u p o - c íe r im c rn a g ê n ic ra .
C o m o s t r i p a n o s o m a s v iv o s d a c e p a a v i - r u l e n t a o s a n t í g e n o s s e r i a m le v a d o s , i n a l te r a d o s , a o i n t e r i o r d a s c é lu la s , s e m c o n t u d o s e m u l t i p l i c a r e m n a s m e s m a s .
D ê s s e m o d o s e d e s e n v o lv e r ia m o s f e n ô m e n o s i m u n i t á r i o s s e m q u e h o u v e s s e d o e n ç a .
S e g u n d o e s t a l i n h a d e p e n s a m e n t o , a d m itim o s q u e s e j a p o s s ív e l, c o m t é c n i c a s r e f i n a d a s , a o b te n ç ã o d e a n t í g e n o s c o m u m m ín im o d e a l t e r a ç õ e s e s t r u t u r a i s , c a p a z e s d e i n d u z i r e f i c i e n t e r e s p o s t a i m u n o ló g ic a .
A té q u e t a l o b je tiv o s e j a a t i n g i d o d e m o d o p r á t i c o , a e x i s t ê n c i a d e u m a c e p a a v i - r u l e n t a , c o m e l e v a d a c a p a c i d a d e i m u n i - z a n t e , s e n o s a f i g u r a c o m o a m a n e i r a m a is
s e g u r a d e s e o b t e r u m a a d e q u a d a p r o t e ç ã o d o s m a m í f e r o s c o n t r a i n f e c ç ã o p e lo
T rypanosom a cruzi.
T ô d a s a s p r o v a s l a b o r a t o r i a i s r e a l i z a d a s a g o r a (9 e 10) m o s t r a m q u e a c e p a Y c u l t i v a d a p e r d e u r e a l m e n t e a c a p a c i d a d e d e i n f e c t a r a n i m a i s d e l a b o r a t ó r i o , s e j a q u a l f o r a d o s e e a v ia e m p r e g a d a .
Nov.-Dez., 1969
Kev. Scc. Bras. Med. Trop.
303
S U M M A R Y
A fter having dem on strateã th a t th e cu ltivated Y strain of
T r y p a n o s o m a c r u z ibecam e avirulent to laboratory anim ais w ith ou t losing its protective
a c tiv ity against a fu rth er viru len t infection, th e Author concludes th a t a very
sm all dose of live trypanosom es
(about
3m etaciclic form s per gram of body
w eight) is able to afford good im m u n ity to m ice. G eneral considerations about
th e probable m echanism of th e im m u n ity are m ade.
B I B L I O G R A F I A
1. B R E N E R , Z. — C o n tr ib u iç ã o a o e s t u d o d a t e r a p ê u t i c a e x p e r i m e n t a l d a D o e n ç a d e C h a g a s . T e s e . F a c . F a r m . O d o n t . U n iv . M in a s G e r a is , B e lo H o r i z o n t e , 1961.
2 . C A P P A , S . M . G . ; S C H M U N IS , G . A . ; T R A V E R S A , O . C . ; Y A V A N O V S K Y , J . F . & P A R O D I, A . S . — C o m p le m e n t f i x a t i o n t e s t s s k i n t e s t a n d e x p e r i m e n t a l i m m u n i z a t i o n w i t h a n t i g e n s o f
T. cruzi
p r e p a r e d u n d e r p r e s s u r e . A m . J . T r o p . M e d . & H y g . 17: . . . . 70 9-7 1 5 , 1968.3 . C O L L IE R , W . — ü b e r I m m u n i t a t b e i d u C h a g a s K r a n k h e i t d u W e is s e n m a n s . Z . H y g . I n f e k t i o n s k r . 112: . . 8 8 -9 2 , 1931.
4 . G O B L E , F . C . — E x p e r i m e n t a l i m - m u n o lo g y 8.th I n t . C o n g . T r o p . M e d . & M a l a r i a . T e h e r a n . 1 9 6 8 . A b s t r a c t s & R e v ie w s . P á g . 3 6 6 .
5 . L U M S D E N , W . H . R . — T r e n d s i n R e s e a r c h o n t h e I m m u n o lo g y o f T r y - p a n o s o m i a s . B u l i . W ld . H l t h . O r g . 3 7 : 16 7-175 , 1967.
6 . M E N E Z E S , H . — T h e e f f e c t o f p h e n o l a t e d “ v a c c in e s ” a g a i n s t e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n i n m i c e . R e v . I n s t . M e d . T r o p . S ã o P a u lo , 2 :5 9 -6 6
1968.
7 . M E N E Z E S , H . — P r o t e c t i v e e f f e c t o f o n a v i r u l e n t ( O u l t i v a t e d ) s t r a i n o f
Trypanosom a cruzi
a g a i n s t e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n i n m ic e . R e v . I n s t . M e d . T r o p . S ã o P a u lo , 10: 1-4, 1968. 8 . M E N E Z E S , H . — L e s õ e s h is to ló g ic a s
e m c a m u n d o n g o s “ v a c i n a d o s ” c o m u m a c e p a a v i r u l e n t a d o
Trypanosoma
cruzi,
R e v . B r a s i l . M e d . 25: 160-165, 1968.9 . M E N E Z E S , H . — I — T h e a v ir u le n c e o f t h e c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f
Trypa
nosoma cruzi.
R e v . I n t . M e d . t r o p . S ã o P a u l o . N o p r e lo .10. M E N E Z E S , H . — I I — T h e a v ir u le n c e o f t h e c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f
Trypa
nosom a cruzi.
E m p r e p a r o .11. M E N E Z E S , H . — A c tiv e i m m u n i z a t io n o f m ic e w i t h t h e a v i r u l e n t Y s t r a i n o f
Trypanosom a cruzi
a g a i n s t h e t e r o l o g o u s v i r u l e n t s t r a i n s o f t h e s a m e p a r a s i t e . R e v . I n s t . M e d . t r o p . S ã o P a u l o . N o p r e l o .12 . M E N E Z E S , H . — L e s õ e s h is to ló g ic a s d o c o r a ç ã o e m c ã e s “ v a c i n a d o s ” c o m u m a c e p a a v i r u l e n t a d o
Trypanoso
m a cruzi.
R e v . B r a s . M e d . N o p r e lo . 13. M E N E Z E S , H . — A c tiv e i m m u n i z a t io n o f d o g s w i t h a n o n v i r u l e n t s t r a i n o f
