A COMPARATIVE STUDY OF THE
IMMUNOANTIGENICITY OF EIGHT PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS ISOLATES
L. M . V . BIAGIONI (1), T. SADATSUNE ( 2 ) , M . F. FRANCO (3), M . C. F. I . MATTOS (3)
S U M M A R Y
T h e p r e s e n t s t u d y w a s c a r r i e d o u t t o i n v e s t i g a t e d i f f e r e n c e s i n t h e i m m u n o ¬ a n t i g e n i c i t y o f 8 P . b r a s i l i e n s i s i s o l a t e s f r o m 3 e n d e m i c a r e a s ( B o t u c a t u : Pb 1, 2 a n d 3; S ã o P a u l o : P b 18, 192 a n d 265; V e n e z u e l a : P b 9 a n d 7 3 ) . T h e a n t i g e n i c r e a c t i v i t y o f each i s o l a t e i n t h e i n d i r e c t f l u o r e s c e n t t e s t ( I I ) and i n t h e i m m u -n o d i f f u s i o -n t e s t ( I D ) w a s s t u d i e d usi-ng a p a -n e l o f 20 p o s i t i v e c o -n t r o l s e r a f o r p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s . T h e h u m o r a l ( m e a s u r e d b y i m m u n o d i f f u s i o n ) a n d the c e l l u l a r ( m e a s u r e d b y t h e f o o t p a d t e s t ) i m m u n e r e s p o n s e i n d u c i n g c a p a c i t y of e a c h i s o l a t e w a s a s s e s s e d b y t h e i m m u n i z a t i o n o f m i c e . I t w a s o b s e r v e d : 1. P b 265 a n d P b 9 s h o w e d t h e h i g h e s t r e a c t i v i t y i n I I ; 2 . P b 192 a n d P b 73 w e r e t h e m o s t r e a c t i v e i n I D ; 3 . T h e s e r e s u l t s d e m o n s t r a t e d i f f e r e n c e s i n a n t i g e n i c i t y a m o n g these i s o l a t e s ; 4. P b 18 e x h i b i t e d w e a k c e l l u l a r i m m u n e r e s p o n s e i n d u c i n g p o w e r a n d g r e a t c a p a c i t y o f e v o k i n g a n t i P . b r a s i l i e n s i s a n t i b o d y p r o d u c t i o n i n t h e i m m u n i z e d m i c e s h o w i n g d i s s o c i a t i o n o f i t s i m m u n o g e n i c i t y . T h e s e d i f f e r e n c e s m a y i n d i c a t e t h e o c c u r r e n c e o f s t r a i n s o f t h e fungus o r m a y r e f l e c t m o d i -f i c a t i o n o -f t h e p a r a s i t e i n t h e h o s t o r d u r i n g c u l t u r i n g .
K E Y W O R D S : P a r a c o c c i d i o i d e s b r a s i l i e n s i s — I m m u n o a n t i g e n i c i t y o f i s o l a t e s .
I N T R O D U C T I O N
I n t e r e s t i n t h e i m m u n o l o g i c a l d i a g n o s i s o f p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s h a s l e d t o t h e d e v e l o p m e n t o f m a n y s e r o l o g i c a l t e c h n i q u e s using se-v e r a l t y p e s o f a n t i g e n s , e s p e c i a l l y e x t r a c t s a n d f i l t r a t e s , p r e p a r e d b o t h f r o m t h e m y c e l i a l a n d t h e y e a s t - l o k e p h a s e o f P a r a c o c c i d i o i d e s brasi-l i e n s i s ( P . b r a s i brasi-l i e n s i s 3 ) . D i f f e r e n t i s o brasi-l a t e s o f t h e f u n g u s w e r e s o o n f o u n d t o h a v e v a r i a b l e a n t i g e n i c i t y , a n d t h e r e f o r e i t w a s p r o p o s e d t h a t a p o o l o f s e v e r a l s a m p l e s s h o u l d b e u s e d i n t h e p r e p a r a t i o n o f t h e a n t i g e n s f o r t h e sé-r o d i a g n o s t i c sé-r e a c t i o n s3
.
I m m u n o c h e m i c a l s t u d i e s h a v e d i s c l o s e d t h e
e x i s t e n c e o f 25 a n t i g e n f r a c t i o n s o f P .
brasi-liensis w h i c h v a r y a m o n g t h e d i f f e r e n t fungal i s o l a t e s1 5 1 6
. O n t h e o t h e r h a n d , m o r p h o l o g i
-cal, b i o c h e m i c a l , m e t a b o l i c a n d p a t h o g e n i c
va-r i a t i o n s a m o n g P . b va-r a s i l i e n s i s s a m p l e s h a v e n o t
b e e n e x t e n s i v e l y s t u d i e d1 5
. W e r e c e n t l y i s o l a t e
s e v e r a l P . b r a s i l i e n s i s s a m p l e s f r o m t h e
secre-t i o n s o f p a secre-t i e n secre-t s w i secre-t h p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s f r o m t h e e n d e m i c a r e a of B o t u c a t u , b u t c o u l d
n o t d e t e r m i n e w i t h c e r t a i n t y w h e t h e r t h e s e
w e r e d i f f e r e n t s t r a i n s o r i s o l a t e s o f t h e s a m e
s t r a i n a f f e c t i n g s e v e r a l p a t i e n t s . T o c o n t r i b u
-t e -t o -t h e s -t u d y o f -t h e i m m u n o a n -t i g e n i c d i f f e r e n c e s a m o n g P . b r a s i l i e n s i s i s o l a t e s , w e
carri-e d o u t t h carri-e p r carri-e s carri-e n t s t u d y t o d carri-e t carri-e r m i n carri-e p o s s i b l carri-e
(1) Biologist — Department of Pathology — Faculty of Medicine — UNESP, 18600 Botucatu, S. Paulo, Brazil (2) Assistant Professor — Department of Microbiology and Immunology — Basic Institute of Medical and Agricultural
Biology — UNESP
a n t i g e n i c a n d i m m u n o g e n i c d i f f e r e n c e s a m o n g 8 P . b r a s u i e n s i s s a m p l e s c o l l e c t e d f r o m d i f f e r -e n t -e n d -e m i c a r -e a s .
M A T E R I A L A N D M E T H O D S
E X P E R I M E N T A L D E S I G N — "We s t u d i e d t h r e e P . b r a s i l i e n s i s s a m p l e s i s o l a t e d f r o m pa-t i e n pa-t s f r o m pa-t h e e n d e m i c a r e a o f B o pa-t u c a pa-t u ( B pa-t 1, B t 2 a n d B t 3 ) , t h r e e s a m p l e s f r o m t h e C o l l e c -t i o n o f f u n g i o f -t h e D e p a r -t m e n -t o f M i c r o b i o l o g y , F a c u l t y o f M e d i c i n e , U n i v e r s i t y o f S a o P a u l o ( P b 18, P b 192 a n d P b 265), a n d t w o sam-p l e s f r o m t h e V e n e z u e l a n I n s t i t u t e o f S c i e n t i f i c I n v e s t i g a t i o n , C a r a c a s ( P b 9 a n d P b 7 3 ) . Ex-p e r i m e n t s w e r e c a r r i e d o u t o n t h e s e 8 s a m Ex-p l e s w i t h t h e f o l l o w i n g o b j e c t i v e s : 1. T o test t h e a n t i g e n i c i t y o f e a c h s a m p l e b y i n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e a n d b y d o u b l e i m m u n o d i f f u s i o n o n a g a r g e l f o r t h e s e r o d i a g n o s i s o f p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s : 2. T o test the i m m u n o g e n i c i t y o f e a c h s a m p l e b y d e t e r m i n i n g t h e i m m u -n e h u m o r a l a -n d c e l l u l a r r e s p o -n s e i -n d u c e d i-n s p e c i f i c a l l y i m m u n i z e d m i c e .
I N D I R E C T I M M U N O F L U O R E S C E N C E T E S T — T h e test w a s p e r f o r m e d b y the t e c h n i q u e des-c r i b e d b y F R A N C O e t a l * a n d P E T A N A & W A N K EI 0
. S u s p e n s i o n s t h e 8 P . b r a s i l i e n s i s s a m p l e s w e r e u s e d s e p a r a t e l y as a n t i g e n i c subs-t r a subs-t e a f subs-t e r c u l subs-t u r i n g i n F A V A N E T T O ' S2
m e -d i u m f o r 14 -d a y s at 37°C.
E a c h s a m p l e w a s t e s t e d against a p a n e l o f 20 p o s i t i v e s t a n d a r d s e r a a n d 20 n e g a t i v e stan-d a r stan-d s e r a f o r p a r a c o c c i stan-d i o i stan-d o m y c o s i s . T h e d i a g n o s i s o f p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s w a s conf i r m e d b y h i s t o p a t h o l o g y a n d / o r c y t o p a t h o l o -g y . T h e s t a n d a r d sera w e r e i n i t i a l l y t e s t e d at 1:32 d i l u t i o n in p h o s p h a t e - b u f f e r e d saline ( P B S ) , p H 7 . 2 . T h e f l u o r e s c e i n a t e d c o n j u g a t e u s e d w a s t o t a l h u m a n a n t i - I g s e r u m l a b e l l e d w i t h f l u o r e s c e i n i s o t h i o c y a n a t e ( B i o M e r i e u x -L a b o r a t o r y ) .
T h e s e r a t h a t w e r e p o s i t i v e at t h i s dilu-t i o n w e r e dilu-t h e n dilu-t i dilu-t r a dilu-t e d adilu-t dilu-t w o f o l d d i l u dilu-t i o n s i n e a c h o f t h e a n t i g e n i c s u b s t r a t e s .
D O U B L E I M M U N O D I F F U S I O N O N A G A R G E L — T h e t e s t w a s p e r f o r m e d b y t h e t e c h n i q u e d e s c r i b e d b y P E R A C O L I e t a l A W e u s e d t h e s o l u b l e a n t i g e n o f e a c h s a m p l e p r e p a r e d f r o m y e a s t l i k e f o r m s f r o m 14-day cultures. T h e f u n g i w e r e w a s h e d 3 t i m e s w i t h saline a n d
r e s u s p e n d e d i n a n e q u a l v o l u m e o f s a l i n e . T h e s u s p e n s i o n w a s s o n i c a t e d 20 t i m e s i n a T h o r n -t o n c e l l d i s r u p -t o r f o r 20 m i n a-t 60-70 c y c l e s / sec a n d c e n t r i f u g e d a t 12,000 r p m f o r 20 m i n at 4°C. T h e s u p e r n a t a n t ( A g S P b ) w a s s t e r i l i z e d b y p a s s i n g t h r o u g h M i l l i p o r e p r e f i l t e r s a n d f i l t e r s 0.45 a n d 0.22 mp t h i c k . P r o t e i n w a s m e a -s u r e d i n e a c h -s a m p l e b y t h e m e t h o d o f L O W R Y e t a l . 6
. ( T a b l e 1 ) .
T o d e t e r m i n e t h e d i l u t i o n t o b e e m p l o y e d i n t h e r e a c t i o n , e a c h a n t i g e n w a s i n i t i a l l y
tes-t e d a tes-t 4 tes-t w o f o l d - d i l u tes-t i o n s a g a i n s tes-t a p o s i tes-t i v e c o n t r o l s e r u m f o r p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s . T h e d i l u t i o n w a s s e l e c t e d t a k i n g i n t o c o n s i d e r a t i o n
t h e s e r u m t i t e r , t h e s h a r p n e s s o f t h e p r e c i p i t a t i o n l i n e s , a n d t h e p r o t e i n m e a s u r e m e n t ( T a -b l e 1 ) .
E a c h a n t i g e n w a s t h e n t e s t e d a g a i n s t t h e
p a n e l o f p o s i t i v e a n d n e g a t i v e s e r a f o r p a r a c o c
-c i d i o i d o m y -c o s i s as u s e d i n t h e i m m u n o f l u o r e s
c e n c e t e s t . T h e s t a n d a r d s e r a w e r e i n i t i a l l y
t e s t e d u n d i l u t e d , a n d t h e p o s i t i v e s e r a w e r e
t h e n t i t r a t e d at t w o f o l d - d i l u t i o n s i n s a l i n e .
M O U S E I M U N I Z A T I O N — G r o u p s o f 10 S w i s s
w h i t e o u t - b r e d m a l e m i c e a g e d 28 d a y s w e r e
i m m u n i z e d w i t h a n t i g e n s f r o m e a c h o f t h e 8
P . b r a s i l i e n s i s s a m p l e s . T h e a n i m a l s w e r e i m m u n i z e d w i t h d e a d y e a s t - l i k e f o r m s a c c o r d
i n g t o t h e p r o c e d u r e o f R I F K I N D e t a l . " , i.e
O n e w e e k a f t e r t h e l a s t i m m u n i z i n g d o s e , t h e anti-P. b r a s i l i e n s i s i m m u n e r e s p o n s e o f
e a c h a n i m a l w a s t e s t e d . D e l a y e d h y p e r s e n s i t i -v i t y w a s e -v a l u a t e d b y t h e f o o t p a d t e s t7
, a n d h u m o r a l i m m u n i t y b y t h e d o u b l e i m m u n o d i f f u -s i o n te-st o n a g a r g e l A
T h e s o l u b l e a n t i g e n u s e d t o m e a s u r e t h e
i m m u n e r e s p o n s e w a s a p o o l o f t h e a n t i g e n s
o f the 8 P . b r a s i l i e n s i s s a m p l e s . T o s e l e c t t h e
f o o t p a d test, t h e p o o l w a s i n i t i a l l y t e s t e d at 3 t w o f o l d - d i l u t i o n s o n g r o u p s o f 5 m i c e w i t h
a n d w i t h o u t p r e v i o u s s p e c i f i c i m m u n i z a t i o n
( T a b l e 2 ) T h e s e l e c t e d a n t i g e n i c d i l u t i o n w a s
1:2, s i n c e t h i s d i l u t i o n w a s n o t t o x i c a n d y i e l d
-e d t h -e h i g h -e s t i n d i c -e s i n t h -e i m m u n i z -e d m i c -e .
T o asses c e l l i m m u n i t y , 0.05 m l o f t h e
p o o l w a s i n j e c t e d i n t o the r i g h t h i n d f o o t p a d of each a n i m a l ( t e s t f o o t p a d ) , and 0.05 m l of
t h e diluent w a s i n j e c t e d i n t o t h e l e f t h i n d f o o t
-p a d ( c o n t r o l f o o t -p a d ) . T h e v o l u m e o f t h e
f o o t p a d s w a s m e a s u r e d 24 hs l a t e r b y
plethys-m o g r a p h y a n d t h e i n d i c e s w e r e e x p r e s s e d b y
t h e d i f f e r e n c e i n v o l u m e b e t w e e n t h e t e s t a n d c o n t r o l f o o t p a d .
T o s e l e c t t h e a n t i g e n i c d i l u t i o n t o b e e m
-p l o y e d i n i m m u n o d i f f u s i o n , t h e -p o o l w a s
ini-t i a l l y ini-t e s ini-t e d a g a i n s ini-t a p o s i ini-t i v e c o n ini-t r o l s e r u m
f o r p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s a t 3 t w o f o l d d i l u -t i o n s ( T a b l e 2 ) . T h e s e l e c -t e d d i l u -t i o n w a s 1:2.
T o e v a l u a t e t h e s p e c i f i c a n t i b o d y p r o d u c
-t i o n o f -t h e m i c e , -t h e s e r a w e r e -t e s -t e d b o -t h
q u a l i t a t i v e l y a n d q u a n t i t a t i v e l y at t w o f o l d d i -l u t i o n s
R E S U L T S
I N D I R E C T I M M U N O F L U O R E S C E N C E — T a b l e 3 s h o w s t h e t i t e r s o f t h e 20 p o s i t i v e s t a n d a r d s e r a t e s t e d against t h e P . b r a s i l i e n s i s i s o l a t e s . T h e y s h o w e d s i m i l a r a n t i g e n i c i t y , e x c e p t f o r P b 265 a n d P b 9, w h i c h y i e l d e d s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t i t e r s w h e n K r u s k a l - W a l l i s a n a l y s i s o f v a r i a n c e w a s a p p l i e d t o t h e d a t a ( H = 29.47; p < 0 . 0 5 )5
. T h e 20 n e g a t i v e s t a n d a r d s e r a s h o w e d n o t i t e r i n a n y o f t h e a n t i g e n i c subs-t r a subs-t e s subs-t e s subs-t e d .
D O U B L E I M M U N O D I F F U S I O N O N A G A R G E L — T a b l e 4 s h o w s t h e t i t e r s o f t h e p o s i t i v e stan-d a r stan-d s e r a o b t a i n e stan-d w i t h t h e a n t i g e n s o f each P . b r a s i l i e n s i s i s o l a t e s . T h e y s h o w e d s i m i l a r a n t i g e n i c i t y , e x c e p t f o r P b 192 a n d F b 73 w h i c h y i e l d e d s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t i t e r s t h a n P b 265, B t 1, B t 2 a n d B t 3, w h e n t h e d a t a w e r e analyz-e d b y K r u s k a l W a l l i s a n a l y s i s o f v a r i a n c analyz-e ( H = 55.37; p < 0 . 0 0 1 ) . T h e n e g a t i v e s t a n d a r d s e r a s h o w e d n o t i t e r s i n a n y o f t h e a n t i g e n s t e s t e d .
riance ^ A l l o f t h e a n i m a l s i m m u n i z e d -with
t h e d i f f e r e n t s a m p l e s s h o w e d p o s i t i v e c e l l
im-m u n e r e s p o n s e , w i t h i n d i c e s v a r y i n g f r o im-m 0.5
t o 4 . 8 . I n d i c e s f r o m P b 18 w e r e l o w e r than
all o t h e r i s o l a t e s , b e i n g s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t
f r o m t h o s e o f B t 2 a n d B t 3 ( p < 0 . 0 5 ) . T h e
i n d i c e s o f t h e o t h e r i s o l a t e s d i d n o t d i f f e r
a m o n g s t t h e m s e l v e s ; t h e h i g h e s t i n d i c e s w e r e
g i v e n b y P b 192, B t 1, B t 2 a n d B t 3.
T a b l e 6 s h o w s t h e a n t i P . b r a s i l i e n s i s
anti-b o d y t i t e r s d e t e c t e d anti-b y i m m u n o d i f f u s i o n i n
t h e s e r a o f i m m u n i z e d m i c e . T h e a n i m a l s
i m m u n i z e d w i t h P b 265, B t 1, B t 3 a n d P b 9
d i d n o t d e v e l o p s p e c i f i c a n t i b o d i e s . P b 192,
P b 73, B t 2 a n d P b 18 i n d u c e d a h u m o r a l r e s
p o n s e i n 30%, 30%, 50% a n d 80% o f t h e i m m u
-n i z e d a -n i m a l s , r e s p e c t i v e l y . O -n l y P b 18 s h o w e d
s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t i t e r s than t h e o t h e r
sam-p l e s 5 .
D I S C U S S I O N
I n t h e p r e s e n t study, t h e a n t i g e n i c i t y o f 8 P . b r a s i l i e n s i s i s o l a t e s f r o m t h r e e d i f f e r e n t
en-d e m i c a r e a s w a s a s s e s s e en-d b y t w o s e r o l o g i c a l t e s t s against a p a n e l o f 20 p o s i t i v e s e r a f o r p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s . P b 265 ( S ã o P a u l o ) a n d P b 9 ( V e n e z u e l a ) w e r e m o r e a n t i g e n i c in
t h e i n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e t e s t , a n d P b 192 ( S ã o P a u l o ) a n d P b 73 ( V e n e z u e l a ) w e r e m o r e a n t i g e n i c i n d o u b l e i m m u n o d i f f u s i o n t e s t
o n a g a r g e l . T h e s e d a t a d e m o n s t r a t e d i f f e r -e n c -e s i n a n t i g -e n i c i t y a m o n g t h -e i s o l a t -e s t -e s t -e d .
R e c e n t s t u d i e s u s i n g s e r o l o g i c a l , i m m u n o e l e c t r o p h o r e t i c a n d b i o c h e m i c a l t e c h n i q u e s h a v e d e m o n s t r a t e d i m p o r t a n t a n t i g e n i c differ-e n c differ-e s b differ-e t w differ-e differ-e n s t r a i n s 192 a n d 265 o f P . brasi-l i e n s i s 1 5
a n d d i f f e r e n c e s i n t h e b i o c h e m i c a l c o n s t i t u t i o n of t h e c e l l w a l l b e t w e e n s t r a i n s 9 a n d 73 l a
. T h e s e data a g r e e w i t h o u r r e s u l t s ,
w h i c h c h a r a c t e r i z e f u r t h e r these s a m p l e s o f P. b r a s i l i e n s i s as c h a r a c t e r i z e f u r t h e r these samp l e s o£ P . b r a s i l i e n s i s as r e a l s t r a i n s . R E S T R E -P O1 2
t e s t e d , i n t h e d o u b l e i m m u n o d i f f u s i o n test, s o l u b l e a n t i g e n s p r e p a r e d f r o m the t w o m o r p h o l o g i c a l p h a s e s of 6 s t r a i n s o f P. brasi-l i e n s i s against p a n e brasi-l o f 8 p o s i t i v e s e r a f r o m p a t i e n t s w i t h p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s . M o s t o f t h e s t r a i n s p r o d u c e d a c o m m o n a n t i g e n , b u t r e a c t i o n s o f p a r c i a l i d e n t i t y a n d o f n o n i d e n t i t y w e r e r e c o r d e d f o r t w o s t r a i n s . T h i s t e n d s t o i n d i c a t e t h a t i n d i v i d u a l i s o l a t e s , w h e n g r o w in v i t r o , v a r y i n t h e p r o d u c t i o n o f a n t i g e n s , as a l s o r e v e a l e d in t h e p r e s e n t study.
U s i n g a m e t h o d o l o g y s i m i l a r t o o u r s , P O U -L A I N e t a l " d e m o n s t r a t e d t h a t n o t a l l s t r a i n s o f C a n d i d a a l b i c a n s s h o w t h e s a m e r e a c t i v i t y i n t h e i n d i r e c t f l u o r e s c e n t test against s e r a f r o m p a t i e n t s w i t h c a n d i d o s i s . T h e s e a u t h o r s a l s o s h o w e d t h a t s t r a i n s f r e s h l y i s o l a t e d f r o m p a t i e n t s g i v e m u c h s t r o n g e r r e a c t i o n s t h a n t h o s e s u b c u l t u r e d f o r a l o n g t i m e in the la-b o r a t o r y . T h i s f i n d i n g w a s n o t c o n f i r m e d la-b y t h e p r e s e n t study, s i n c e the t h r e e B o t u c a t u s a m p l e s , w h i c h w e r e t h e m o s t r e c e n t l y i s o l a t e d o n e s , d i d n o t s h o w g r e a t e r r e a c t i v i t y in e i t h e r s e r o l o g i c a l test u s e d .
T h e i m m u n e r e s p o n s e i n d u c i n g c a p a c i t y o f t h e 8 P . b r a s i l i e n s i s i s o l a t e s w a s assessed b y i m m u n i z i n g g r o u p s o f m i c e w i t h p a r t i c u l a t e a n
t i g e n s . W i t h the e x c e p t i o n of P b 18, all isola-t e s i n d u c e d s i m i l a r c e l l u l a r and h u m o r a l anisola-ti- anti-P . b r a s i l i e n s i s i m m u n e r e s p o n s e . T h i s s t u d y r e v e a l e d d a t a o f g r e a t i n t e r e s t . P b 18 s h o w e d w e a k c e l l i m m u n e r e s p o n s e - i n d u c i n g p o w e r a n d g r e a t c a p a c i t y o f e v o k i n g anti-P. b r a s i l i e n s i s a n t i b o d y p r o d u c t i o n i n the i m m u n i z e d a n i m a l s .
S i n c e t h e h o s t c o n d i t i o n s w e r e c o n s t a n t , this r e s u l t d e m o n s t r a t e s that t h e fungus i t s e l f m a y b e t h e r e s p o n s i b l e f o r t h e d i s s o c i a t i o n b e t w e e n t h e h u m o r a l and c e l l u l a r i m m u n e r e s p o n s e
in-d u c e in-d i n t h e a n i m a l . T h i s m i g h t b e o n e expla-n a t i o expla-n f o r t h e f r e q u e expla-n t d e t e c t i o expla-n o f p a t i e expla-n t s w i t h p a r a c o c c i d i o i d o m y c o s i s w h o s e anti-P.
bra-siliensis c e l l i m m u n e r e s p o n s e is d e p r e s s e d a n d w h o s e h u m o r a l r e s p o n s e is m a i n t a i n e d o r e v e n e x a c e r b a t e d,
-8 .
T o g e t h e r w i t h P B 192, t h e t h r e e B o t u c a t u i s o l a t e s y i e l d e d the h i g h e s t i n d i c e s of c e l l u l a r i m m u n e r e s p o n s e i n the m i c e , m a y b e indicat-i n g t h a t f o r t h indicat-i s indicat-i m m u n o l o g indicat-i c p a r a m e t e r the s h o r t e r t h e t i m e o f i s o l a t i o n the s t r o n g e r the i m m u n e r e s p o n s e i n d u c i n g c a p a c i t y of t h e s a m p l e .
W h e n d a t a f r o m the a n t i g e n i c i t y s t u d y w e r e c o m p a r e d w i t h t h o s e f r o m t h e i m m u n o -g e n i c i t y e x p e r i m e n t , i t w a s o b s e r v e d a p o s i t i v e c o r r e l a t i o n b e t w e e n the h i g h r e a c t i v i t y o f P b 192 and P b 73 i n t h e i m m u n o d i f f u s i o n test and their g o o d h u m o r a l r e s p o n s e i n d u c i n g c a p a c i t y i n m i c e , as d e t e r m i n e d b y t h e s a m e s e r o l o g i c a l t e c h n i q u e . T h i s d a t a s h o w s the p r e s e n c e o f P . b r a s i l i e n s i s c o m p o n e n t s t h a t a r e b o t h capab l e of a n t i g e n i c s p e c i f i c i t y a n d o f i m m u n o g e
-n i c i t y .
O n the w h o l e , d a t a f r o m t h e p r e s e n t study s h o w e d d i f f e r e n c e s i n t h e a n t i g e n i c c o m p o s i -t i o n a n d i n -t h e i m m u n o g e n i c i -t y b e -t w e e n P . bra-siliensis i s o l a t e s . T h e s e d i f f e r e n c e s m a y indi-c a t e the o indi-c indi-c u r r e n indi-c e of s t r a i n s o f the fungus o r m a y r e f l e c t a d a p t a t i o n o f t h e s a m e p a r a s i t e i n d i f f e r e n t h o s t s o r e v e n a l t e r a t i o n o r mu-t a mu-t i o n of mu-t h e p a r a s i mu-t e d u r i n g c u l mu-t u r i n g a n d m a n t a i n a n c e "in v i t r o " , as b e e n s h o w e d t o Can-d i Can-d a a l b i c a n s 1 1
.
F u r t h e r s t u d i e s s h o u l d b e d o n e t o c l a r i f y t h e s e q u e s t i o n s .
R E S U M O
E s t u d o c o m p a r a t i v o d a imuno-antigenicidade de 8 a m o s t r a s de Paracoccidioides brasiliensis
p l a n t a r ) e m c a m u n d o n g o s i m u n i z a d o s c o m
an-t í g e n o s d e c a d a a m o s an-t r a . O b s e r v a m o s : 1. A s
a m o s t r a s P b 265 e P b 9 m o s t r a r a m - s e m a i s
rea-t i v a s n a I I ; 2 . O s a n rea-t í g e n o s d a s a m o s rea-t r a s P b
192 e P b 73 f o r a m s i g n i f i c a t i v a m e n t e m a i s
reat i v a s n a I D ; 3. E s reat e s d a d o s d e m o n s reat r a m d i f e
-r e n ç a s d e a n t i g e n i c i d a d e e n t -r e e s t a s a m o s t -r a s ;
4 . A a m o s t r a P b 18 m o s t r o u b a i x o p o d e r
ind u t o r ind e r e s p o s t a i m u n e c e l u l a r e a l t a c a p a c i
d a d e d e i n d u ç ã o d e r e s p o s t a i m u n e h u m o
-r a l e m c a m u n d o n g o s i m u n i z a d o s , -r e v e l a n d o
dis-s o c i a ç ã o d e dis-sua i m u n o g e n i c i d a d e .
E s t a s d i f e r e n ç a s p o d e m i n d i c a r a e x i s t ê n
c i a d e c e p a s d i s t i n t a s d o f u n g o o u r e f l e t i r m o
-d i f i c a ç õ e s -d o p a r a s i t a n o h o s p e -d e i r o o u -du
r a n t e s e u c u l t i v o .
A C K N O W L E D G E M E N T S
W e t h a n k D o c t o r N o r m a G e r u s a d a S i l v a
M o t a f o r h e p f u l d i s c u s s i o n , D o c t o r P a u l o C u r y
f o r t h e s t a t i s t i c a l a n a l y s i s , a n d M r . L u i z G a s t ã o
C h a m m a a n d M r s . S o n i a O r s i f o r t e c h n i c a l
as-s i as-s t a n c e .
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