T4 Livre Veterin
ário
2 IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, 2010-08-24)
Português
Uso Previsto: Somente para uso animal
com o analisador IMMULITE 2000 – para a medição quantitativa de tiroxina (T4) sem ligação proteica em soro, como auxílio na avaliação clinica do estado da tireoide em animais.
Número de Catálogo: L2KVF42 (200 testes)
Código do Teste: VF4 Cor: Violeta
Resumo e Explicação
O principal hormônio da tireoide, tiroxina (T4), circula quase que inteiramente ligado a proteínas transportadoras, incluindo 3 globulinas e a albumina em cães. O T4 livre presente no soro representa uma pequena fração biologicamente ativa do T4 total (<0,1%).
A concentração de proteína
transportadora alterada induz alterações nos níveis de T4 Total, e concentrações de T4 livre tendem a permanecer dentro de uma faixa restrita. Por esta razão, as medições de T4 Total nem sempre refletem a situação da tireoide. Visto que níveis anormais de T4 podem significar tanto função anormal da tireoide quanto variações na proteína transportadora (fisiológica ou patológica), medições de T4 livre são mais correlacionadas com a situação da tireoide do que as medições de T4 Total.
O hipotireoidismo é considerado a desordem endócrina mais comum em cães, ao passo que o hipertireoidismo nesta espécie é relativamente desconhecido. A maioria dos casos de hipotireoidismo canino é de natureza primária, envolvendo a produção prejudicada dos hormônios da tireoide, T4 e T3. Nesta condição, são esperados níveis de TSH elevados. Hipotireoidismo secundário ou terciário, onde a produção de hormônio tireoidiano é baixa como consequência de doenças hipotalâmicas ou hipofisárias, é responsável por menos de 5% dos casos de hipotireoidismo canino. Nas últimas condições, a redução nos níveis de TSH seria esperada. Normalmente, hipotireoidismo em cães é baseado na história clínica do animal e na presença de níveis reduzidos de hormônios da tiroide. No
entanto, níveis de hormônio tireoidiano suprimidos não são indicadores específicos de doenças, uma vez que esses níveis são observados em doenças não tireoidianas. O hipertireoidismo (glândulas da tiroide super ativas) é uma desordem comum em gatos mais velhos. É causada por um aumento na produção de hormônios tireoidianos a partir das glândulas da tiroide.
Princípio do Procedimento
O T4 Livre Veterinário IMMULITE 2000 é um imunoensaio análogo competitivo, quimioluminescente e com uma fase sólida. A fase sólida (pérola) é revestida com um anticorpo monoclonal murino anti-T4. A fase líquida consiste de fosfatasse alcalina (intestino de vitela) conjugado com T4. A amostra animal e o reagente são incubados juntos com a perola revestida durante 30 minutos. Durante esse tempo, o T4 livre na amostra compete com a enzima T4 conjugada no reagente por um número limitado de sítios ativos nos anticorpos presente na pérola. A amostra do paciente não ligada e os conjugados de enzima são então removidos por lavagem por centrifugação. Finalmente, o substrato quimioluminescente é adicionado ao tudo de reação contendo a pérola, e o sinal é gerado em proporção à quantidade de enzima ligada.O ensaio T4 Livre Veterinário IMMULITE 2000 é um teste direto e único, no sentido de que os seus resultados não são calculados como uma função do T4 total, mas interpolado a partir de uma curva de calibração padronizada (armazenada) em termos de concentrações de T4 livre6. A este respeito, ele difere do método clássico de equilíbrio de diálise e das chamadas determinações do índice de T4 livre. O ensaio não exige um passo de pré-incubação nem um isolamento preliminar da fração livre por diálise ou cromatografia de coluna.
O ensaio utiliza diversos recursos para preservar o equilíbrio entre T4 livre e T4 conjugado a proteína e para medir com precisão a fração livre. Em primeiro lugar, o análogo de T4 tem uma afinidade de ligação não detectável com TBG. Segundo, o anticorpo específico do ensaio se liga ao T4 tão firmemente quanto a albumina se liga ao T4 e, assim, evita a remoção do hormônio por proteínas de ligação tireoidianas. Finalmente, o processo opera à temperatura, pH e força iônica
T4 Livre IMMULITE
®IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, 2010-08-24) 3
fisiológicos.
Ciclos de Incubação: 1 × 30 minutos Tempo para o Primeiro Resultado: 35
minutos.
Coleta da Amostra
Colete o sangue do animal por punção venosa em tubos simples e separe o soro das células.
Recomenda-se o uso de uma
ultracentrífuga para clarear amostras lipémicas.
Amostras hemolisadas podem indicar tratamento incorreto de uma amostra antes do envio para o laboratório; portanto os resultados devem ser interpretados com cautela.
A centrifugação de amostras de soro antes da formação completa do coagulo pode resultar na presença de fibrina. Para prevenir resultados errados devido à presença de fibrina, certifique-se que a formação do coágulo foi completa antes da centrifugação de amostras.
Tubos de coleta sanguínea de fabricantes diferentes podem apresentar valores diferentes, dependendo dos materiais e aditivos, incluindo gel ou barreiras físicas, ativadores de coágulos e/ou anticoagulantes.
Volume de Amostra Necessário: 10 µL
de soro animal.
Armazenamento: 7 dias a 2–8°C, ou 1
mês congelado a –20°C.9
Advertências e Precauções
Somente para uso animal.Reagentes: Manter a 2–8°C. Elimine de
acordo com as leis aplicáveis.
Substrato Quimioluminescente:
Evite contaminação e exposição à luz solar direta. (Ver bula.)
Água: use água destilada ou deionizada.
Materiais Fornecidos
Os componentes são um conjunto fechado. Os rótulos de código de barras são necessários para o ensaio.
Pack de Pérolas T4 Livre Veterinário (L2VF412)
Com código de barras. 200 pérolas
revestidas com anticorpo monoclonal murino anti-T4. Estável a 2–8°C até a data de expiração. L2KVF42: 1 pack.
Frasco de Reagente T4 Livre Veterinário (L2VF4A2)
Com código de barras. 11,5 mL de fosfatase alcalina (intestino de vitela) conjugado com T4 em tampão. Estável a 2–8°C até a data de expiração. L2KVF42: 1 frasco.
Antes do uso, retire a parte superior da etiqueta na perfuração, sem danificar o código de barras. Remova o selo de alumínio do topo da embalagem; encaixe a tampa deslizante nas rampas da tampa do reagente.
Ajustadores T4 Livre Veterinário (LVF4L, LVF4H)
Dois frascos (baixo e alto) de T4 livre liofilizado em soro canino processado. Reconstitua cada frasco 2,0 mL de água destilada ou deionizada. Misture por inversão com movimentos lentos até o material liofilizado dissolver completamente. Estável por 4 meses (alíquota) a –20°C.
L2KVF42: 1 conjunto.
Antes de passar os controles, coloque as Etiquetas de Alíquota apropriadas
(fornecidas com o kit) em tubos de ensaio, de modo que os códigos de barras possam ser lidos pelo leitor on-board.
Componentes do Kit Fornecidos
Separadamente
L2SUBM: Substrato Quimioluminescente
L2PWSM: Solução de Lavagem de Probe
L2KPM: Kit de Limpeza de Probe LRXT: Tubos de reação (descartáveis) K9TCM: Um módulo de controle binível,
com base em soro canino, contendo T4 livre como um dos 3 ensaios constituintes. Também Necessário
Pipetas de transferência de amostra, água destilada ou deionizada e controles.
Procedimento de Ensaio
Nota-se que para um desempenho ótimo, é importante realizar todos os procedimentos de manutenção de rotina, conforme definido no Manual do Operador do IMMULITE 2000.
Veja o Manual do Operador do Sistema IMMULITE 2000 para procedimentos de: preparação, programação, diluições, ajustes, ensaios e controle de qualidade.
4 IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, 2010-08-24)
Intervalo Recomendável entre Ajustes:
2 semanas
Controle de Qualidade de Amostras:
Use controles ou conjunto de amostras de soro com pelo menos dois níveis de T4 livre.
Valores Esperados
Cada laboratório deve estabelecer seus próprios intervalos de referência.
Dados de Desempenho
Veja Tabelas e Gráficos para dados representativos de desempenho do ensaio. Os resultados estão expressos em ng/dL. (Salvo quando especificado, todos os resultados são gerados de amostras de soro caninas ou felinas coletadas em tubos sem barreiras de gel, ou aditivos promotores de coagulação).Fator de Conversão:
ng/dL 12,87 pmol/L
Intervalo Reportável: 0,3 – 6 ng/dL
(3.9 – 77.2 pmol/L).
O ensaio é rastreável com um padrão interno manufaturado usando materiais qualificados e procedimentos de medição.
Sensibilidade Analítica: Limite do
Branco (maior valor esperado para uma amostra sem o analito, determinada de acordo com CLSI EP17-A7): 0,04 ng/dL (0,51 pmol/L).
Limite de Detecção (menor concentração detectável, determinada de acordo com CLSI EP17-A7): 0,10 ng/dL (1,29 pmol/L).
Sensibilidade Funcional: (concentração
com 20% do coeficiente de variação (CV) determinado de acordo com CLSI EP5-A28): 0,25 ng/dL (3,2 pmol/L).
Precisão: As amostras foram analisadas
em duplicata ao longo de 10 dias, quatro ensaios por dia, para um total de 40 ensaios e 80 réplicas (Consulte a tabela “Precisão”).
Especificidade: Os anticorpos utilizados
no procedimento do T4 Livre Veterinário IMMULITE 2000 são altamente específicos para T4 livre. (Veja tabela “Especificidade”).
Efeito do Ácido Oleico: Nenhum efeito
significativo. (Veja tabela “Efeito do Ácido Oleico).
Referências
1) Ferguson DC. Thyroid function tests in the dog. Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice 1984; 14:783-808. 2) Panciera DL. Hypothyroidism in dogs; 66 cases (1987- 1992. JAVMA 1994; 204: 761-7. 3) Nesbitt GH, Izzo J, Peterson L, Wilkins RJ. Canine hypothyroidism; A retrospective study of 108 cases. JAVMA 1980; 177: 1117-22. 4) Feline advisory bureau (fab) information sheet;
Hyperthyroidism in cats, updated Novermber 2008. FAB, Taeselbury, High Street, Tisbury, Wiltshire, UK, SP3 6LD. 5) Witherspoon LR, El Shami AS, et al. Chemically blocked analog assays for free thyronines. Clin Chem 1988;34:9–16 and 17–23. 6) Wosilait WD. A
theoretical analysis of the distribution of thyroxine among sites on thyroid binding globulin, thyroid binding prealbumin and serum albumin. Res Commun Chem Pathol Pharmacol 1977;16:541–8. 7) CLSI. Protocols for the Dtermination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI document EP17-A Vol. 24 (No. 34). CLSI, 2004.
8) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline-Second Edition. CLSI document EP5- A2. CLSI, 2004. 9) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 4rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1996: 1046.
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Tabelas e Gráficos
Precisão (ng/dL) Intraensaio Total Média SD CV SD CV 1 0,59 0,064 10,8% 0,070 11,9% 2 1,07 0,081 7,6% 0,089 8,3% 3 1,88 0,110 5,9% 0,123 6,5% 4 3,15 0,159 5,0% 0,186 5,9% 5 5,87 0,207 3,5% 0,250 4,3%IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, 2010-08-24) 5 Especificidade ng/dL Somada Albumina Aparente ng/dL %Reação cruzada
Mudanças desta edição:
cc#19681: criada nova IFU.
cc#19681A: Revisado o Limite de Branco e o Limite de detecção de valores
. 5,000,000,000 2,22 ND D-T4 1,000 ND ND 3,5-Diodo-L-tironina 10,000 ND ND 3,5-Diodo-DL-tirosina 100,000 1,32 0,001% L-T3 100,000 3,70 0,004% 5,5-Difenilhidantoína 4,000,000 10,97 ND 3-Monoiodo-L-tirosina 10,000 ND ND Ácido Salicílico 50,000,000 ND ND Ácido 3,3',5,5'-Tetraiodotiroacético 2,000 ND ND 6-n-Propil-2-tiouracila 1,000 ND ND Metimazol 1,000,000 ND ND Fenilbutazona 1,000,000 ND ND ND: não detectável.
Efeito do Ácido Oleico (ng/dL) Ácido Oleico
Adicionado
(mmol/L) T4 Livre Dosado
10 ND
ND: Não detectável.
IMMULITE® é uma marca registrada
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Origem: Reino Unido
Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom
2010-08-24 PIL2KVF4 – 3
Compreenda os Símbolos
Os seguintes símbolos podem aparecer nas etiquetas dos produtos:
Definição do Símbolo
Número no Catálogo
Fabricante
Consulte as instruções de uso
Cuidado! Potencial risco biológico
Limite de temperatura (2–8°C)
Limite superior de temperatura (≤ -20°C)
Limite inferior de temperatura (≥2°C)
Não congele (> 0°C)
Não reutilize
Mantenha longe da luz solar
Código do lote
Contém o suficiente para (n) testes
6 IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, 2010-08-24) Definição do Símbolo
2008-01 Formato da data (ano-mês)
Usado por
Prejudicial
Corrosivo
Tóxico
Perigoso para o ambiente
Pack de Perolas
Unidade de Teste
Definição do Símbolo
Controle
Controle Positivo
Controle Positivo Baixo
Controle Negativo
Controle Anticorpo
Solução Pré Tratamento
Frasco de Reagente Solução Ditiotreitol
Solução Tampão Borato-KCN Calibrador Calibrador, baixo Calibrador, alto Calibrador, Anticorpo Diluente de Amostra REAG WEDGE A REAG WEDGE B ADJUSTOR L ADJUSTOR H ADJUSTOR AB CONTROL 1 CONTROL 2 CONTROL 3 CONTROL + CONTROL – CONTROL AB PRE A PRE B CONTROL BEAD PACK TEST UNIT DITHIOTHREITOL REAG WEDGE BORATE-KCN BUF ADJUSTOR DIL CONTROL + L REAG WEDGE D
