Microscópio. Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz. O microscópio é um instrumento que permite observar objetos não visíveis a olho nu.

Vera Andrade

http://histologiavvargas.wordpress.com/

Microscópio

• O microscópio é um instrumento que permite

observar

objetos não visíveis a olho nu

.

• Isto se consegue através de um

sistema

óptico composto por lentes de cristal

que aumentam a imagem do objeto.

Microscopia de Luz

Evolução do microscópio de luz

• Galileu Galilei

inventou o telescópio no século

XVI – duas lentes num tubo

• Zacarias Jansen

(holandês) inventou o primeiro

microscópio composto, em 1660 Século XVII,

formado por

três tubos encaixados

Microscopia de Luz

Evolução do microscópio de luz

Leeuwenhoek,

final de 1600

Microscopia de Luz

Evolução do microscópio de luz

Robert Hooke

Microscopia de Luz

Microscópio óptico, Microscópio composto ou

Microscópio de Campo claro

• Instrumento usado pelo estudante de

citologia, histologia, microbiologia e outras

disciplinas que estudam microrganismos

ou objetos com medidas micrométricas

• Constituído por uma parte mecânica e

uma parte óptica

Parte Mecânica

• Parte Mecânica

– Base ou pé  suporte

– Coluna ou braço  apoio paras as estruturas

– Tubo  peça de ligação entre a ocular e o revólver

– Revólver  peça giratória que contém as lentes

objetivas

– Platina  suporta a preparação

– Parafuso Macrométrico, de passo largo, é para

movimento de grande amplitude

– Parafuso Micrométrico, de pequeno passo, é

destinado a focar o material

Parte Óptica

Condensador

Parte Óptica

–

Condensador

, concentra os raios

luminosos  objeto

•

possui um diafragma de diâmetro

modificável, proporciona uma maior ou menor

intensidade luminosa

–

Lentes objetivas

, próximas do objeto,

projetam a imagem ampliada do objeto em

direção a ocular

–

Lente ocular

, funciona como uma lupa,

amplia a imagem fornecida pela objetiva

Parte Óptica

• CONDENSADOR

– geralmente

negligenciado - não interfere no

aumento da imagem, mas ele influencia

em sua

nitidez e riqueza de detalhes

• Age no

LIMITE DA RESOLUÇÃO

do

sistema óptico, embora esta propriedade

dependa principalmente das lentes

objetivas

LIMITE DE RESOLUÇÃO

• LR de um microscópio é a

capacidade de:

– Separar detalhes

– Produzir imagens separadas de

partículas muito próximas

– É a menor distância que deve existir

entre dois pontos para que eles

apareçam separado

Limite de Resolução

LR = K . 

AN

– K é uma constante 0,612

–  é o comprimento de onda luz branca

(verde-amarelo) = 0,55 m

– AN é a abertura numérica da lente objetiva

LR = 0,612 . 0,55

AN

– O limite e resolução é diretamente proporcional ao comprimento de onda e inversamente proporcional a abertura numérica.

• ABERTURA NUMÉRICA (AN),

vem gravado na

lente objetiva e sua determinação cabe ao

fabricante da lente.

• Indica a resolução de uma lente objetiva

• Capacidade de captar a luz

• Fornecer detalhes da amostra

AN = n. sen 

– n = menor índice da refração

–  = semi-ângulo de abertura

• As objetivas trazem outras informações

– 160 ou 170, indica em milímetro o comprimento do

tubo do microscópio, onde devem ser usadas as

objetivas para que dêem melhores resultados.

– 0,17, distância de trabalho, que significa o tamanho

da lamínula, para a qual as aberrações são corrigidas.

Códigos de cores das lentes objetivas

Aumento

Cores

4X ou 5X

Vermelho

10X

Amarelo

40 ou 50X

Azul claro

100X

Imersão – óleo

Branco

Imagem real ampliada e invertida

• Outros tipos de microscópios

–

Microscópios Ópticos – MO

• Microscópio de Contraste de Fase

• Microscópio de Campo Escuro

• Microscópio de Fluorescência

• Microscópio de Polarização

–

Microscópio Eletrônico – ME

Microscópio de contraste de fase – células vivas

• Usa as propriedades da

refração da luz

– Refração é a passagem da luz de um meio para outro.

• Microscópio de contraste

de fase transforma

diferentes fases

luminosas em diferentes

intensidade luminosa

Microscopia de luz convencional Microscopia de contraste de fase

Microscópio de campo escuro

• Condensador é

substituído por um

condensador de fundo

escuro

• A preparação é iluminada

por raios oblíquos

• A célula fica com

aparência brilhante e o

fundo escuro

CONDENSADOR LUZ

Objetiva

Microscópio de Polarização

atravessa certas substâncias do nosso corpo  acontece uma dupla refração • Substâncias como dentes,

ossos, fibras de colágeno e outras possuem um estado cristalino, arranjo molecular interno

• Prisma utiliza as propriedades de um único raio eliminando o outro

2 raios de luz = Raios polarizados

Microscópio de luz polarizada: Fibras de colágeno exibem birrefringência (brilhantes ou amarelas).

Microscópio de luz polarizada: da dentina (dente).

Microscópio de Fluorescência

Utiliza luz fluorescente – permite detectar proteínas ou estruturas marcadas com compostos fluorescentes

Similar ao MO, exceto pela luz empregada 

Luz

ultra-violeta

Cultivo de astrócitos. Imunofluorescência verde contra GFAP (proteína de filamentos intermediários) e azul (união com DNA) Alberts et al. Biología Molecular de la célula. (1996) p. 856.

Microscopia Eletrônica

Microscopia

Eletrônica

• Inventado em 1932,

na Alemanha,

Ernest Ruska e

Max Knoll

• Utiliza

elétrons

,

comprimento de

onda muito

pequeno, limite de

resolução

1.000X

menor que

microscópio de luz

Microscopia eletrônica, músculo estriado cardíaco.

Medidas

Unidade de medida Símbolo Valor

Micrômetro m 0,001 mm

Nanômetro nm 0,000001 mm (10-6_{mm) ou 10}-3_m

Medidas

Discuta com seus colegas e responda:

• Para transportar um microscópio, qual a melhor maneira de segurá-lo?

• Que peça é movimentada quando giramos o parafuso macrométrico?

• Para que serve o parafuso micrométrico? O que ocorre quando o giramos? O movimento é tão nítido quanto o do parafuso macrométrico?

• Como calcular o aumento que o microscópio fornece? • Onde deve ser colocada a lâmina contendo a preparação para

observação? Qual objetiva deve ser inicialmente usada para o procedimento de focalização?

• Qual parafuso deve ser usado inicialmente para focalizar o material?

• Acoplado ao condensador existe um diafragma. Descrever o que ocorre quando se move a alavanca do diafragma.