MICHAEL JACKSON DA SILVA LIRA
SUSCEPTIBILIDADE DO OVÁRIO DE Bombyx mori L., 1758 (LEPIDOPTERA:
BOMBYCIDAE) AO VÍRUS DA POLIEDROSE NUCLEAR MÚLTIPLO
Maringá – PR
2007
MICHAEL JACKSON DA SILVA LIRA
SUSCEPTIBILIDADE DO OVÁRIO DE Bombyx mori L., 1758 (LEPIDOPTERA:
BOMBYCIDAE) AO VÍRUS DA POLIEDROSE NUCLEAR MÚLTIPLO
Orientador: Prof. Dr. Hélio Conte
Co-orientadora: Prof
a. Dr
a. Rose Meire Costa Brancalhão
Maringá – PR
2007
Dissertação apresentada ao curso de
Pós-graduação em Ciências Biológicas (área
de concentração - Biologia Celular), da
Universidade Estadual de Maringá, para
obtenção do grau de Mestre em Ciências
Biológicas.
Dados Internacionais de Catalogação-na-Publicação (CIP)
(Biblioteca Central - UEM, Maringá – PR., Brasil)
Lira, Michael Jackson da Silva
L768s Suceptibilidade do ovário de Bombyx mori L.,
1758(Lepidoptera Bombycidae) ao virus poliedrose nuclear múltiplo / Michael Jackson da Silva Lira. – Maringá, PR : [s.n.], 2007.
56 f. : il.
Orientador : Prof. Dr. Hélio Conte.
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Maringá. Curso de Pós-graduação em Ciências Biológicas, 2007.
1. Bicho da seda (Bombyx mori L.) - Patógenos -
Infecção. 2. Bicho da seda (Bombyx mori L.) - Ovário -
Análise. 3. Bicho da seda (Bombyx mori L.) - Poliedrose nuclear(BmMNPV). 4. Bicho da seda (Bombyx mori L.)- Células germinativas. 5. Bicho da seda (Bombyx mori L.) -
Citopatologia. I. Universidade Estadual de Maringá. Curso de Pós-graduação em Ciências Biológicas. II. Título.
Nada se conquista sozinho, por mais esta etapa vencida
é com amor e carinho que dedico este trabalho à
AGRADECIMENTOS
À Deus, por me pegar no colo e carregar em seus braços nos momentos mais difíceis de
minha vida;
Ao programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas, área de concentração em Biologia
Celular, da Universidade Estadual de Maringá, pela oportunidade de realização do curso de
mestrado e à Fundação Araucária pela concessão de bolsa de estudo;
À Universidade Estadual do Oeste do Paraná, por disponibilizar espaço físico e equipamentos
do laboratório de Biologia Celular e Microtécnica, indispensáveis para a realização deste
trabalho;
À doutora Maria Aparecida Fernandes, coordenadora do banco de germoplasma da
Universidade Estadual de Maringá, pelo fornecimento das lagartas;
Aos doutores Hélio Conte e Rose Meire Costa Brancalhão pela orientação criteriosa e
dedicação na realização deste trabalho, em especial à Rose, minha mãe científica deste a
graduação, não só por compartilhar seu conhecimento, mas também pelas dicas profissionais
e pessoais que serão sempre lembradas ao longo de minha vida;
À minha família, por sempre fazer de tudo para que eu pudesse realizar mais este sonho que
hoje se concretiza;
Ao meu amorzinho Milene Miranda Almeida, pelo amor e carinho nos momentos de
preocupação, e pela compreensão quando era necessário estar ausente;
Aos meus amigos do mestrado, em especial à Eliana, Fabrícia, Graciene, Kátia, Marcus
(doutorado genética), Nereida (doutorado), Rafael (doutorado), Sônia, Thais (mestrado
genética), pelos momentos de dedicação aos estudos e também de descontração no
Kanarinhus;
Aos amigos de graduação, Antonio, Carla e Treco, Juliana e Sando, por compartilharem
minhas conquistas e preocupações que obtive no decorrer do mestrado;
Aos meus amigos de Cascavel, em especial à República Tcheca (Ana Paula, Andréia e Lígia)
pelas reuniões tererísticas, churrascos, e uso da net.
APRESENTAÇÃO
Em consonância com a Resolução Nº 01/2003-CCPBC do Programa de Pós-Graduação em
Ciências Biológicas da Universidade Estadual de Maringá, essa dissertação de mestrado é
composta por um artigo científico completo, redigido de acordo com as normas exigidas pela
revista científica em que pretendemos publicá-lo, assim sendo:
LIRA, M. J. S., CONTE, H., BRANCALHÃO, R. M. C. Susceptibilidade do ovário de
Bombyx mori L., 1758 (Lepidoptera: Bombycidae) ao vírus da poliedrose nuclear múltiplo /
Susceptibility of Bombyx mori L., 1758 (Lepidoptera: Bombycidae) ovary to multiple nuclear
polyhedrosis vírus. Este artigo será submetido à apreciação do corpo editorial da revista
Resumo geral
Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae), conhecido popularmente como bicho-da-seda, é um inseto de
grande importância na agroindústria brasileira, uma vez que seus casulos são utilizados na fabricação dos fios de seda. No aprimoramento da sericicultura no país, matrizes das raças Chinesa e Japonesa de B.
mori são cruzadas nas indústrias sericícolas, e o híbrido resultante é entregue aos produtores rurais;
contudo, para a obtenção de casulos de qualidade é fundamental que o inseto esteja livre de patógenos. Dentre os entomopatógenos mais importantes que infectam B. mori temos o vírus da poliedrose nuclear (família Baculoviridae, gênero Nucleopolyhedrovirus), subgrupo múltiplo, o BmMNPV. Este vírus afeta diretamente a produção de fios, uma vez que as lagartas infectadas, quando não morrem, tecem um casulo de baixa qualidade que as empresas de fiação utilizam na produção de subprodutos com menor valor agregado. Sendo B. mori um inseto domesticado pelo homem, todo o seu ciclo de vida deve ser conduzido por um rigoroso controle, onde as matrizes devem estar isentas de patógenos. Muitos destes podem, entretanto, serem transmitidos às próximas gerações, causando prejuízos às indústrias sericícolas na obtenção de um híbrido de boa qualidade genética, bem como aos produtores rurais, com sérias conseqüências sócio-econômicas para o país. Assim, o presente estudo objetivou verificar se o BmMNPV infecta o ovário de lagartas híbridas e matrizes Chinesas e Japonesas de B. mori. Neste sentido, lagartas
de 5º instar foram inoculadas oralmente com uma suspensão viral de 8x108 COPs/mL (corpos de oclusão
poliédricos por mililitro). Para análise citopatológica e histopatológica, as lagartas foram anestesiadas e dissecadas no tempo de 48 a 168 horas pós-inoculação, com intervalo de 24 horas, onde os ovários foram retirados e fixados em Bouin. O material biológico fixado seguiu o procedimento histológico de rotina para microscopia de luz, sendo corado pela técnica de Hematoxilina/Eosina, P.A.S. e Azan modificada para corpos de oclusão viral. A análise do laminário revelou a presença de viroplasma e poliedros virais no núcleo das células do epitélio de revestimento do ovário, células do estroma, do revestimento do ovaríolo e células do tecido pré-folicular. Contudo, houveram diferenças nos tempos de infecção nestes tecidos ao se comparar lagartas híbridas, matrizes Chinesas e Japonesas. Estas diferenças ocorrem devido ao fato das matrizes Chinesas serem consideradas mais resistentes à patógenos em geral. Não foram verificados indícios de infecção nas células germinativas em nenhum dos tempos analisados. É importante salientar que as células que apresentaram maior número de poliedros se encontravam circunvizinhas às células do epitélio traqueal, reforçando seu papel como órgão dispersor de infecção.
General abstract
Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae), known popularly as silkworm, it is an insect of great
importance in the Brazilian agroindustry, once your cocoons are used in the silk threads production. B.
mori matrixes of the Chinese and Japanese races are crossed on sericulture industrial premises and
producers receive the resulting hybrids that are sent to producers. However, for the obtaining of quality cocoons it is fundamental that the insect is free from pathogens. Among the most important entomopathgens than they infect B. mori we have the nuclear poliedrosis virus (Baculoviridae family,
Nucleopolyhedrovirus genus), multiple subgroup, BmMNPV. This virus affects the threads production,
once the infected larvae, when they don't die, they weave a cocoon of low quality that the sericulture industrial use in production of subproducts with smaller aggregate value. Being B. mori a domestical insect, all your life cycle should be led by a rigorous control, where the matrixes should be exempt of pathogens. Many of these may, however, they be transmitted to the next generations, like this, the present work analyzed if BmMNPV infects the ovary of hybrid, Chinese and Japanese races of B. mori larvae.
Fifth instar larvar were oraly inoculated with 8x108 OBs/mL (occlusion bodies for millilitre) viral
suspension. For cytophatological and histopathologycal analysis, larvae were anesthetized and dissected from 48 to 168 hours post-inoculation, at 24-h intervals, where the ovaries were removed and conditioned in Bouin. The biological material following routine histological stages for light microscopy, being colored by Azan technique, modified for viral occlusion body. The analysis revealed the viroplasm and OBs presence in ovary and ovariole sheath, stroma cells, and pre-folicular cells. However, there were differences in the times of infection in these tissues when comparing hybrids, Chinese and Japanese matrixes larvae. These differences happen because the Chinese matrix they are considered more resistant to pathogens in general. Infection were not verified in germ cells in none of the analyzed times. It is important say that the cells that presented larger OBs number were adjacent to the tracheal cells, reinforcing your role as organ infection spread.
