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Resumo de Tese Rev. bras. hematol. hemoter. 2003;25(1):73-74
Resumo de Tese/Thesi s
Di ssertação apr esen tada para obten ção do Grau de Doutor, Un i versi dade Estadual de Campi n as-SP
Cor r espondênci a par a:Cármi n o An ton i o de Souza
Hemocen tr o de Campi n as – Ci dade Un i versi tári a Zeferi n o Vaz – Di stri to de Barão Geraldo Cai xa Postal 6198; CEP: 13083-970 – Campi n as-SP – Brasi l
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Testes pr ogn ósti cos de r ejei ção e doen ça do en x er to con tr a o
h ospedei r o em tr an spl an tes de cél ul as pr ogen i tor as h em atopoi éti cas
com doador es HLA i dên ti cos
Pr ognosti c tests of r ej ecti on and gr af t-ver sus-host di sease i n allogenei c
hematopoi eti c stem cell tr ansplantati on wi th H LA-i denti cal donor s
Jean e E. L.Vi sen tai n er
Or i entador
Cár mi n o A.Sou za
Resum o
O transplante alogênico de células progenitoras hematopoiéticas é o tratamento de escolha para mui-tas doenças hematológicas e imunodeficiências primá-rias. A seleção de doadores é baseada na definição de moléculas A e -B por sorologia, de alelos HLA-DRB1 e –DQB1 por técnicas de biologia molecular e na cultura mista de linfócitos clássica (CML). Apesar dis-to, a doença do enxerto contra o hospedeiro (GVHD) é ainda uma grave complicação, que ocorre em aproxi-madamente 35% dos receptores de medula HLA-idên-ticos. O presente estudo teve por objetivo avaliar o poder prognóstico da ocorrência de rejeição e GVHD dos seguintes testes laboratoriais: 1– cultura mista de linfócitos clássica (CML) e potencializada com citocinas exógenas (CMLp); 2 – tipagem dos genes reguladores de citocinas, pela técnica de PCR-SSP; e 3 – seguimen-to do nível sérico de ciseguimen-tocinas dos pacientes transplan-tados, empregando-se métodos imunoenzimáticos quan-titativos. No estudo, foram avaliados 118 transplantes, com doadores HLA-idênticos, realizados no Centro de Hematologia e Hemoterapia da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), durante o período de agosto de 1994 a fevereiro de 2002. Na CMLp, a resposta dos
linfócitos do doador contra as células do receptor (DxR) foi aumentada 1,9 e 4,1 vezes, com a adição de IL-4 (100ηg/ mL) e IL-2 (10ηg/ mL), respectivamente. To-davia, a resposta do doador contra suas próprias células (DxD) também sofreu um incremento de 2,0 e 6,4 vezes, respectivamente. Como o tratamento avaliado também induziu aumento das respostas autólogas, o emprego da CMLp não trouxe vantagens adicionais ao método tradicional (CML), que mostrou correlação (ris-co relativo=2,5) (ris-com a incidência de GVHD crônica.
A análise do polimorfismo dos genes reguladores de citocinas mostrou que os genótipos de TNF-α-308, IFN-γ-874, IL-6-174, IL-10-1082, -819, -592e TGF-β1+869, +915 não foram associados ao risco aumentado de GVHD aguda e rejeição do enxerto, em 106 doadores e 109 recep-tores avaliados, enquanto o fenótipo de baixo produtor de IL-6, do doador e receptor, mostrou associação esta-tisticamente significante ao risco de ocorrência de GVHD crônica. O acompanhamento da variação dos níveis séricos de sIL-2R, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γe TGF-β1 dos receptores até 15 semanas pós-transplante reve-lou que os níveis médios de sIL-2R e IL-10 foram mai-ores no grupo que desenvolveu GVHD aguda (776,4 ± 65,5ρg/ ml e 10,9 ± 3,3ρg/ ml) em relação ao grupo que não desenvolveu esta doença (541,1 ± 17,3ρg/ ml e 2,5 ± 2,2ρg/ ml). Os níveis de sIL-2R no período de pega do enxerto (1.165,0 ± 179,2ρg/ ml vs. 578,0 ± 47,2 ρg/ ml) e ao tempo da GVHD aguda (926,4 ± 142,5ρg/ ml vs. 496,5 ± 48,7ρg/ ml) também diferiram entre os grupos. A cinética destas citocinas também revelou que os níveis de TNF-α e TGF-β1 foram correlacionados com o desenvolvimento de GVHD aguda, quando analisados em determinados períodos
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de tempo após o transplante. Nas primeiras semanas após o transplante, os níveis de TNF-αforam maiores no grupo com GVHD aguda que no grupo sem a do-ença (72,7 ± 2,6ρg/ ml vs. 38,1 ± 1,7ρg/ ml). Nas últi-mas semanas, os níveis deTGF-β1 foram menores no grupo que desenvolveu a GVHD aguda (7,5 ± 1,4ηg/ ml), comparado ao grupo sem a doença (17,0 ± 1,6 ηg/ ml). Assim sendo, o monitoramento dos níveis séricos de sIL-2R, IL-10, TNF-αe TGF-β1 no pós-transplante poderia fornecer ao clínico um indicativo do risco de GVHD aguda, enquanto a genotipagem de IL-6-174 po-deria oferecer um novo método para identificar paci-entes ao risco de GVHD crônica.
Su mmar y
Allogen ei c hematopoi eti c stem cell tran splan tati on i s the chosen treatmen t for man y hematologi cal di seases and primary immunodeficiencies. Donor selection has been based on the serologi cal defi n i ti on of HLA-A an d -B, in the definition of HLA-DRB1 and –DQB1 by DNA-based molecular methods an d i n the stan dard mi xed lymphocyte culture (MLC). Even so, graft-versus-host di sease (GVHD) i s sti ll on e of several compli cati on s, and thisoccursin approximately 35% of HLA-identical bon e marrow reci pi en ts. The objecti ve of thi s study was to evaluate the progn osti c power of rejecti on an d GVHD development in laboratorial assays: 1 – standard mi xed lymphocyte culture (MLC) an d poten ti ali zed ( MLCp) wi th ex ogen ou s cytoki n es; 2 – typi n g of cytoki n e regulator gen es, by PCR-SSP; an d 3 – follow-ups of serum level cytoki n es of tran splan ted pati en ts u si n g qu an ti tati ve en zyme-li n ked i mmu n oassays. Fr om Au gu st 1 9 9 4 t o Febr u a r y 2 0 0 2 , 1 1 8 transplantationswith HLA-identical donorswhich were per for med i n the Hematologi cal an d Hemotherapy Cen ter at Campi n as State Un i versi ty (Un i camp) were analyzed. Until September 2002, thedata wereupdated. In the MLCp, the don or lymphocyte respon se versus receptor cells (DxR) was augmen ted 1.9 an d 4.1 ti mes w i t h I L- 4 ( 1 0 0 ηg/ m L) a n d I L- 2 ( 1 0 ηg/ m L) su pplemen tati on , r especti vely. However, the don or respon seversus their own cells(DxD) also augmen ted, 2.0 an d 6.4 ti mes, respecti vely. Si n ce thi s treatmen t also sti mulated an i n crease of autologous respon ses, MLCp di d n ot have advan tagesi n relati on to stan dard method (MLC) that showed a cor r elati on (r elati ve risk=2.5) with theincidenceof chronic GVHD. Cytokine gen e polymorphi sm an alysi s showed that TNF-α−308, IFN-γ-874, IL-6-174, IL-10-1082, -819, -592, an d TGF-β1+869, +915 genotypeswere not associated to increased risk of acute GVHD and rejection, in 106 donorsand 109 evaluated reci pi en ts, whereas the IL-6 low producer phen otype of don or an d reci pi en t showed si gn i fi can t stati sti cal
associ ati on to chron i c GVHD. The follow-up of sIL-2R, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ, an d TGF-β1 reci pi en t serum levelsdurin g 15 weekspost-tran splan t showed that sIL-2R an d IL-10 average levels were hi gher i n the group wi th acute GVHD (776.4 ± 65.5 ρg/ml an d 10.9 ± 3.3 ρg/ml, than in the group without the disease (541.1 ± 17.3 ρg/ml an d 2.5 ± 2.2 ρg/ml) . Solu ble IL-2 receptor levelsat the en graftmen t an d at on set of acute GVHD were also differen t between the groupswith an d wi thout acute GVHD (1,165.0 ± 179.2ρg/ml vs. 578.0 ± 47.2 ρg/ml an d 926.4 ± 142.5 ρg/ml vs. 496.5 ± 48.7ρg/ml), respecti vely. The cytoki n e ki n eti cs also showed that TNF-α an d TGF-β1 levels were associ ated wi th acute GVHD, when post-tran splan t peri ods were an alyzed. In the fi r st weeks after the tr an splan t, TNF-α levelswere higher in the group with acute GVHD than those i n the group wi thout the di sease (72.7 ± 2.6 ρg/mlvs. 38.1 ± 1.7 ρg/ml). In the last weeks, TGF-β1 levelswere lower in the group with acute GVHD (7.5 ± 1.4ηg/ml) than those i n the group wi thout the di sease (17.0 ± 1.6ηg/ml). Therefore, the mon i tori n g of sIL-2R, IL-10, TNF-α, an d TGF-β1 serum levels after the transplant may provide the physician an indication of acute GVHD ri sk, whi le the IL-6-174gen otype may offer a new method for identifying patientsat increased ri sk of chron i c GVHD.
Recebi do: 19/02/2003 Acei to: 22/02/2003
