Neste informativo buscamos levar informações especializadas e técnicas aos nossos médicos e parceiros sobre análises hormonais na saliva.
Historicamente, as primeiras análises em fluidos salivares foram realizadas em 1980, porém foram deixadas de lado na prática médica passando a serem mais comumente usadas em pesquisas clinicas. A partir de 1995, juntamente com o conceito de medicina preventiva, as análises salivares tornaram-se populares nos USA e agora cada vez, no Brasil.
Logo, é fundamental que o médico ou pesquisador sejam amplamente informados de suas aplicações e cientes das possíveis diferenças geradas pelos diferentes métodos analíticos para que possam interpretar adequadamente os resultados de seus pacientes.
Hormônios Esteróides na Saliva
Os Hormônios Esteróides são moléculas de baixo peso molecular (250-350 Da) com estruturas químicas muito semelhantes e não são espécies-específicas. São resistentes ao calor e, portanto, estáveis à temperatura ambiente por mais de 72 horas e refrigeradas por até 7 dias.As concentrações destes hormônios na saliva são da ordem de nanomoles (nmol/L) ou picomoles por litro (pmol/L). Para sua dosagem são necessários ensaios muito sensíveis e devido à semelhança estrutural dos esteroides, é necessário ainda, o uso anticorpos monoclonais altamente específicos. Nas análises na saliva são determinadas a fração livre e biologicamente ativa dos hormônios (2-10%), isto é, quantidade de hormônios disponíveis para as células realizarem suas funções, diferentemente das análises no sangue que determinam os hormônios totais (livres e conjugados as proteínas de transporte).
Devido a este fator é que podem ser encontrados valores dentro da normalidade nos exames de sangue e os pacientes apresentarem inúmeros sintomas de deficiência, sendo possível apenas serem diagnosticados pelo exame de saliva Nesta Edição Nesta Edição Nesta Edição Nesta Edição Introdução
Hormônios Esteróides na Saliva Coletas das Amostras Salivares
Métodos Analíticos para Hormônios Salivares Diferenças Analíticas (Sangue x Urina x Saliva) Hormônios dosados na Saliva
Envio de Amostras salivares ao Laboratório Resultados & Laudos
As amostras de saliva são obtidas por procedimento simples, não invasivo, livre de estresse da venopunção, podendo ser realizadas por pessoas não treinadas ou na própria residência do paciente (4-9).
Para coleta das amostras salivares, não é necessário jejum, observando-se apenas o cuidado de não escovar os dentes pelo menos 15 minutos antes da coleta ou ainda evitar a coleta no dia em que o paciente se submeteu a tratamento odontológico.
Faze-se importante salientar que algumas medicações principalmente, corticoides podem interferir nos resultados das análises e recomenda-se fazer o uso de medicações somente após a coleta da saliva pela manhã.
Devido à praticidade da coleta das amostras salivares estas podem ser coletadas várias vezes ao dia e a noite, o que permite a avaliação dinâmica da secreção dos hormônios livres.
As medidas dos esteróides salivares independem da taxa de fluxo de saliva (2,3).
Como as amostras salivares são muito estáveis em temperatura ambiente estas podem ser transportadas ao laboratório pelo correio ou pelo portador, sem nenhuma perda da atividade dos hormônios (10).
Introdução
Coleta das Amostras de Saliva
A medida precisa da concentração dos hormônios na saliva pode ser realizada por diferentes métodos analíticos uma vez que estes apresentam boa correlação com as amostras de sangue (Figura1). No entanto, alguns métodos ap
algumas restrições, principalmente relacionadas ao sua sensibilidade e especificidade. O método mais comumente utilizado é o Radioimunoensaio (RIE), devido a sua sensibilidade e especificidade, o que permite determinar com precisão hormônios de peso molecular muito baixo na faixa de nanogramas (10-9) e picogramas (10
de Radioimunoensaio utilize-se anticorpos monoclonais específicos conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. O isótopo mais utilizado é o Iodo 125,
requer do laboratório algumas medidas operacionais especiais como: maior investimento em biossegurança,
altamente qualificados e registro na CNEN (Comissão Nacional de Energia Nuclear) (Figura 2)
Devido a estes fatores operacionais muitos laboratórios optam por técnicas que empregam métodos não isotópicos, como o Enzimaimunoensaio (ELISA).
Métodos Analíticos para Hormônios Salivares
As análises hormonais salivares realizadas por
linked Immunosorbent Assay) baseiam-se na imobilização de um dos componentes, em fase sólida, e na utilização de um conjugado ligado a uma enzima. Como o substrato forma um
produto colorido, a alteração de cor é mon visualmente ou por meio de espectrofotômetro que relaciona a quantidade de substância dosada à intensidade de cor.
Devido as caracteristicas do ensaio enzimático para as análises de hormônios saliva, o método de ELISA traz
Figura 2– Radioimunoensaio (RIE) (Laboratório e Kit Analitico)
A medida precisa da concentração dos hormônios na saliva pode ser realizada por diferentes métodos analíticos uma vez que estes apresentam boa correlação com as amostras de sangue (Figura1). No entanto, alguns métodos apresentam algumas restrições, principalmente relacionadas ao sua
O método mais comumente adioimunoensaio (RIE), devido a sua alta sensibilidade e especificidade, o que permite determinar de peso molecular muito baixo na 9) e picogramas (10-12). Na técnica
se anticorpos monoclonais específicos conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. O isótopo mais utilizado é o Iodo 125, fator que requer do laboratório algumas medidas operacionais especiais investimento em biossegurança, profissionais qualificados e registro na CNEN (Comissão Nacional
s muitos laboratórios optam todos não isotópicos, como o
Métodos Analíticos para Hormônios Salivares
s salivares realizadas por ELISA (Enzyme-se na imobilização de um dos componentes, em fase sólida, e na utilização de um conjugado ligado a uma enzima. Como o substrato forma um
alteração de cor é monitorada
ou por meio de espectrofotômetro que
substância dosada à intensidade
Devido as caracteristicas do ensaio enzimático para as lises de hormônios saliva, o método de ELISA traz
Figura1.Correlação dos níveis de cortisol sérico e salivar
Figura 3 – Ensaio ELISA
algumas vantagens, porém vantagens estão a simplicidade,
a possibilidade de automação. Contudo dentre as desvantagens estão as reações cruzadas, possiveis interferentes das amostras salivares (mucinas que podem interferer na co
alguns reagentes e mais passivel a erros operacionais (Figura 3).
Atualmente outros médodos analíticos estão sendo testados para este tipo de análise como a Imunofluorescencia e a Espectrometria de Massa.
(Laboratório e Kit Analitico)
Figura1.Correlação dos níveis de cortisol sérico e salivar
Ensaio ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)
porém muitas restrições. Dentre as vantagens estão a simplicidade, rapidez , baixo custo e a possibilidade de automação. Contudo dentre as desvantagens estão as reações cruzadas, possiveis interferentes das amostras salivares (mucinas que podem interferer na cor da reação) a instabilidade de alguns reagentes e mais passivel a erros operacionais
Atualmente outros médodos analíticos estão sendo testados para este tipo de análise como a Imunofluorescencia e a Espectrometria de Massa.
Diferenças Analíticas
Sangue x Urina x Saliva
Hormônios no Sangue
Exames de sangue são comumente usados os níveis de hormônios pela maioria dos m
hormonais no sangue determinam a quantidade total de
hormônios (livres e conjugados). Este atualmente considerado como o menos precis
métodos disponíveis. Os testes sorológicos são incapazes de distinguir os hormônios na forma ligada às proteínas carreadoras (forma inativa do hormônio)
e biologicamente ativa. Os testes sorológicos representam apenas uma estimativa aproximada dos níveis hormonais, o pode levar o clinico ao diagnóstico inadequado, uma vez que os níveis hormonais séricos, na maioria das vezes estão dentro dos limites de normalidade, porém quando os níveis de hormônios livres e ativos são testados e que as deficiências são identificadas. Além disso, os resultados das análises no soro refletem apenas a quantidade de
fora das células e não refletem os níveis
disponíveis para as células e tecidos alvos cumprir sua função fisiologica.
Outro fator importante, é que ao monitorar os níveis hormonais quando o paciente está em terapia
transdérmicos (creme/gel) as análises séricas não precisas ainda, isto porque o hormônio ex
através da pele para corrente sanguinea.
se ligam às membranas dos glóbulos vermelhos, a fim de minimizar as interações desfavoráveis com o meio aquoso ligando assim a camada lipoproteica uma vez que
dos hormônios tem afinidades pelas gorduras.
coletada a amostra de sangue e o material é centrifugado para liberação do soro ou plasma, ocorre a precipitação dos
Análises Hormonais na Saliva
“A técnica de Radioimunoensaio apresenta
precisão, alta sensibilidade e especificidade
para determinação de hormônios de baixo
peso molecular, na ordem de n
9) e picogramas
(10-Diferenças Analíticas
Figura 4. Estrutura química de
Exames de sangue são comumente usados para determinar médicos. Os exames
quantidade total de
Este tipo de teste é menos preciso de todos os Os testes sorológicos são incapazes de forma ligada às proteínas (forma inativa do hormônio) da sua forma livre estes sorológicos representam s uma estimativa aproximada dos níveis hormonais, o
gnóstico inadequado, uma vez que os níveis hormonais séricos, na maioria das vezes estão dentro dos limites de normalidade, porém quando os níveis de hormônios livres e ativos são testados e que as Além disso, os resultados das a quantidade de hormônios refletem os níveis de hormonios veis para as células e tecidos alvos cumprir sua
é que ao monitorar os níveis hormonais quando o paciente está em terapia hormonal com s séricas não menos exógeno é absorvido . Já no sangue estes se ligam às membranas dos glóbulos vermelhos, a fim de com o meio aquoso ligando assim a camada lipoproteica uma vez que a maioria gorduras. Assim, quando o material é centrifugado, para liberação do soro ou plasma, ocorre a precipitação dos
Análises Hormonais na Saliva
das células vermelhas e removidos antes mesmo
descrito por Frank Z. Stanczyk. Isto ocorre principalmente com a progesterona e em menor grau com os outros hormônios. Nos testes sorológicos de progesterona pacientes em terapia hormonal
observados o aumento nos níveis de progest
depois de semanas de aplicação, já nos testes de saliva niveis aumentados de progesteron
após duas horas do seu uso. Estudos clínicos realizados pela Academia Americana de Anti
pacientes demonstrou que todos os pacientes cujos níveis hormonais foram considerados em níveis ótimos por testes sangüíneos, apresentavam em níveis excessiv
progesterona com base nos testes de saliva.
utilizadas para alcançar ótimos níveis séricos foram muito maiores do que as doses fisiológicas para atingir os níveis ótimos nos testes de saliva.
pacientes foram reduzidas ótimos pelo testes de saliva.
Figura 6. Amostras da coleta de sangu
ioimunoensaio apresenta
precisão, alta sensibilidade e especificidade
para determinação de hormônios de baixo
nanograma
(10--12).”
Figura 4. Estrutura química de estrógenos naturais e sintéticos.
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e desta forma os hormonios são mesmo da análise. Este fenómeno foi descrito por Frank Z. Stanczyk. Isto ocorre principalmente e em menor grau com os outros ônios. Nos testes sorológicos de progesterona nos
hormonal transdérmica, não são observados o aumento nos níveis de progesterona mesmo depois de semanas de aplicação, já nos testes de saliva, niveis aumentados de progesterona podem ser detectados após duas horas do seu uso. Estudos clínicos realizados pela Academia Americana de Anti-Envelhecimento em mais de 300 pacientes demonstrou que todos os pacientes cujos níveis hormonais foram considerados em níveis ótimos por testes apresentavam em níveis excessivamente altos de progesterona com base nos testes de saliva. As doses utilizadas para alcançar ótimos níveis séricos foram muito maiores do que as doses fisiológicas para atingir os níveis ótimos nos testes de saliva. Em todos os casos as doses dos foram reduzidas até que fossem atingidos os niveis timos pelo testes de saliva.
Hormônios na Urina 24 horas
Hormônios na Saliva
A determinação de hormônios em urina de 24 horas métodos mais precisos, mais difíceis e mais caros.
os testes hormonais em urina de 24 horas apresentam uma grande inconveniência que é a sua própria de coleta. Coletar urina de 24 horas, implica recolher todas as urinas de todas micções por um dia inteiro, sem que seja perdido
volume, sob risco de vieses nos resultados.
limitante é o armazenamento das coletas urinárias uma vez que mesmas devem ser mantidas sob refrigeração (não é pertimido uso de conservantes), durante todo periodo de coleta, o que pode trazer certo desconforto e constragimento ao paciente. Contudo, elimina
problemas com a coleta, o teste urinário permite monitorar terapia hormonal bioidêntica através da obtenção de uma média diária de seus níveis hormonais ao invés de um “ponto específico” obtido no momento exato em que você fez a coleta de sangue ou da saliva .
A análise hormonal na saliva mede a forma livre e, biologicamente ativa de vários hormônios
saliva foi aprovado amplamente pela comunidade científica por refletir de forma precisa os níveis hormonais presentes no interior das células, onde a ação dos hormônio
enquanto que os exames de sangue medem os hormônios fora das células.
A análise salivar hoje é considerada como
para hormônios pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e são amplamente utilizados pela NASA em suas pesquisas Apesar da recomendação da OMS, muitas vezes o método ainda é criticado e negligenciado por muitos
sendo que muitos ainda se recusam a solicitar os devido a falta de informação sobre as diferenças testes de sangue e saliva, levando-os geralmente criticas sobre a validação dos testes salivares.
“
Os testes sorológicos são incapazes de
distinguir os hormônios na for
ma ligada às
proteínas carreadoras (forma inativa do
hormônio) de sua forma livre e
biologicamente ativa.
Urina 24 horas
Ao final deste informativo há uma que comprovam que o teste de saliva sangue e referências sobre a
Os exames salivares podem ser solicitados pelo médico de forma isolada ou através de Perfis Ho
Feminino, Masculino, Menopausa, Andropausa, Envelhecimento, Stress, Sono, entre outros, de acordo com
clinica.
O kit para coleta de saliva poderá ser retirado no laboratório pelo paciente, familiar,amigo ou
casa, escritório ou empresa. O kit traz
impressas na sua embalagem, escritas de maneira didática e de fácil compreensão.
Figura 5 – Kit de Coleta de Saliva
A determinação de hormônios em urina de 24 horas é um dos e mais caros. Contudo, s testes hormonais em urina de 24 horas apresentam uma própria de coleta. Coletar implica recolher todas as urinas de todas seja perdido nada de volume, sob risco de vieses nos resultados. Outro fator limitante é o armazenamento das coletas urinárias uma vez que mesmas devem ser mantidas sob refrigeração (não é pertimido uso de conservantes), durante todo periodo de coleta, o que pode trazer certo desconforto e constragimento ao paciente. Contudo, eliminando estes rmite monitorar a s da obtenção de uma média diária de seus níveis hormonais ao invés de um “ponto específico” obtido no momento exato em que você fez a
mede a forma livre e, nios. Os testes na amplamente pela comunidade científica os níveis hormonais presentes hormônios ocorrem, enquanto que os exames de sangue medem os hormônios
como padrão-ouro pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e
em suas pesquisas. muitas vezes o método muitos médicos, solicitar os exames, s diferenças sobre geralmente a fazer criticas sobre a validação dos testes salivares.
Os testes sorológicos são incapazes de
ma ligada às
proteínas carreadoras (forma inativa do
Como Solicitar os Exames de Saliva
há uma lista de inúmeras publicações o teste de saliva é superior aos exames devalidação do mesmo.
exames salivares podem ser solicitados pelo médico de forma isolada ou através de Perfis Hormonais (Hormonal Feminino, Masculino, Menopausa, Andropausa, Envelhecimento, Stress, Sono, entre outros, de acordo com a necessidade
e saliva poderá ser retirado no laboratório amigo ou ainda ser enviado, para sua casa, escritório ou empresa. O kit traz as instruções de coleta
na sua embalagem, escritas de maneira didática e de
Kit de Coleta de Saliva
As amostras de saliva deverão ser coletadas de instruções do kit, salvo a necessidade de outra
específica. Para cada horário de coleta há um tubo devidamente identificado em o paciente
horário da coleta e o nome. Após o término das
material deve ser enviado diretamente para o laboratório para análise. Devem acompanhar as amostras de saliva o
Formulário de Identificação do Paciente, médico solicitante e os exames ou perfil a serem realizados e o
Levantamento Indivudualizado de Sinais e Sintomas (LISS),
devidamente preenchido. Para o envio das amostras necessário o envio das mesmas sob refrigeração, salvo áquelas vindas de locais em que o SEDEX pode
de 72 horas. Nestes casos, as amostras refrigeradas e enviadas acondicionadas em caixa de com gelo em gel.
Figura 7 – Diferentes tipos de laudos salivares conforme os perfis solicitados
Análises Hormonais na Saliva
Envio das Amostras de Saliva
ao Laboratório
Hormônios dosados na Saliva
Muitos são os hormônios que podem sersaliva tais como os hormônios esteróide algumas aminas. Dentre os quais podemos destacar
Estrona (E1), Estradiol (E2), Estriol (E3), Testosterona, DHEA (Dehidroepiandrosterona), (Sulfato de DHEA, Androstenediona, 17OH (17 OHP), DHT (Diidrotestosterona), Melatonina, hGH, Grelina, PPY e Leptina, além de citocinas IL2 e TNF-α, entre outras.
As amostras de saliva deverão ser coletadas de acordo com as necessidade de outra orientação específica. Para cada horário de coleta há um tubo deverá anotar o rmino das coletas o
para o laboratório Devem acompanhar as amostras de saliva o , médico solicitante e os exames ou perfil a serem realizados e o Formulários de
Levantamento Indivudualizado de Sinais e Sintomas (LISS),
Para o envio das amostras não é sob refrigeração, salvo em que o SEDEX pode demorar mais Nestes casos, as amostras devem ser em caixa de isopor
Diferentes tipos de laudos salivares conforme os perfis solicitados
“Os laudos de exames salivares são
apresentados de forma descriti
também em gráficos de acordo com a
faixa etária do paciente
Análises Hormonais na Saliva
Envio das Amostras de Saliva
Resultados
Laudos
Os laudos para as análises salivares são elaborado
software específico que visam apresentar os resultados de forma didática e de fácil interpretação. Cada resultado é apresentado de forma descritiva e
acordo com a faixa etária do paciente laudo permite ainda que o p
acompanhar a sua evolução
terapêutica, fato que muito auxilia a adesão ao tratamento
Hormônios dosados na Saliva
determinados na esteróides, peptidicos e destacar: (E3), Progesterona, (Dehidroepiandrosterona), SDHEA 17OH-Progesterona Melatonina, Insulina,
citocinas como: IL6,
Os laudos de resultados dos exames salivares são liberados de 10 a 15 dias depois da chegada do material no Laboratório ou conforme o seu grau de complexidade.
“Os laudos de exames salivares são
apresentados de forma descritiva e
também em gráficos de acordo com a
faixa etária do paciente.”
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Os laudos para as análises salivares são elaborados com software específico que visam apresentar os resultados de forma didática e de fácil interpretação. Cada resultado é apresentado de forma descritiva e também gráfica de
a faixa etária do paciente. Este modelo de o próprio paciente possa
acompanhar a sua evolução no tratamento ou na resposta à , fato que muito auxilia a adesão ao tratamento. Os laudos de resultados dos exames salivares são liberados de
depois da chegada do material no Laboratório ou conforme o seu grau de complexidade.
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