I
Boletim
. . . .d e
. .Pesquisa-
. . . . .1
SSN151
7-5219
Outubro, 2000r '
-
valiação
+
- . Cde
~xtr';itorep
de
Substâncias
Húmicas
l i 7jdeum
1
WSSOLO
-
-->:-- .
L;
-
rn .-wI
stroférr
República Federativa do Brasil
Presidente: Fernanda Henrique Cardoso
Ministkrio da AgnluJtura e da
Abast&menfa
Ministro:
Marçus Vinicius Pratini de MarassErnpmsa Brast7t~irira de Pesquisa Agropecudda IEmbrapfiI
Presidente: Alberto Duque Portugal
Diretores: Elza Ângela Battaggia Brito da Cunha
Jose Roberts Rodrigues Peres
Dante Daniel Giacomelli Sealari
Embrapa Salas
Chefe Gerar: Doracy Pessoa Ramos
Chefe Adjunto de Pesquisa e Desenvolvimento: Celso Vainer Mán tátts
BOLETIM DE PESQUISA No
7
ISSN 1517-5219
Outubro, 2000
Tony Jarbas Ferreira Cunha
Neli do Amara1 Meneguelli Mauro da Conceição
Pedro Luiz Oliveira de Almeida Machado
Copyright O 2000. Embrapa
Embrapa Solos. 8oletim de Pesquisa no 7
Exemplares desta publicação podem ser adquiridos na:
Embrapa Solos
Rua Jardim Botanico, 1.024
22460-000 Rio de Janeiro, RJ Tel: (0-21 ) 274-4999 Fax: (0-2 11 274-529 1 E-mail: embrapasolos@cnps.embrapa.br Site: http:/lwww.cnps.embrapa.br Trat~nt~nto Wtorisl
Jacqueline Silva Rezende Mattos
R ~ v ~ s &
de
textoAndrB Luiz da Silva Lopes
I V O ~ ~ ~ ~ Z ~ J O
Nw~grBnca
Maria da Penha DelaiaRevi.s&o find
Jacqueline Silva Rezende Mattos
1 a. edição
Tiragem desta edição: 300 exemplares
Todos w direitos raaewdos.
A r e p d u ç b n h autorizada desta pubkaçh, no todo ou em parte.
tona vbteçúo d# dfrehos autorais (Ld n. 9.610).
CIP-Braall. Catalogaçiona-puMkaçb.
Embrapa W s
Avaliação
de extratores
de substâncias húmicas de umIatossolo
vermelhodistrof&rico
/Tony
Jarbas Ferreira
da Cunha
...
[et al.).
-
Rio de
Janeiro
:Embrapa Solos,
2000.
1
5
p.-
(Embrapa Solos.Boletim de
Pesquisa
;n,
7).
ISSN
1517-5219I
.
Solo
-
LatossoloVermelho
Distroférrico
-
Análise.
2. Substâncias
húmicas
-
Extração
-
Método. 3.
Subsiânçias húmicas-
Caracterização
I.
Cunha,Tony
Jarbas Ferreira
da. 11.Meneguclii,
Neli
do
Amsirsil.
111.ConceiçBo,
Mauro
da.
N
Machado,Pedro
Luiz
Oliveira de
Almeida.V.
Freixo,
AUTORIA
Tony
Jarbas
ferreira
Cunha
Neli
do
Amaral
Meneguelli
Mauro
da
Conceição
Pedro
Luiz
Oliveira
de
Almeida
Machado
Alessandra
Alexandre
Freixo
Pequisador, Eng. Agrbn., M.Sc., Embrapa Solos. E-mail: tony@cnps.embrapa.br, neli@cnps.emhpa.br, mauro@cnps.embrapa.br.
Pesquisador, Eng. Agrôn., Ph,O,, Embrapa Solos. E-mail: pedro@enps.embrapa.br Estagbhia Embrapa Solos.
Resuma
*
v;;Abstract
*
rX
2
MATERIAL
E MÉTODOS
r3
2.1
M6todos
d e
extração
desubstâncias
hijrnicas
3
2.2
Fracionamento
das
substâncias húrnicas
extraídas
do
~016
*
52,3
Caracterizacão
dassubstâncias húmicas
6
Objetivando-se avaliar quatro diferentes tipos de extratores
químicos de substancias húmicas, quais sejam: 1) resina quelatizante,
2) m6todo de Kononova (Na,P,O, O, l m o l L-'
+
NaOH 0,lmolL"),
3)rnhtodo da Soda, Schnitzer (1 982) (NaOH
O,l
mo1L"),
4)
Dabin (pré-tratamento com H,PO, 2mol L-', seguido de extração com Na,P,O,
0,1 moi
t"
e NaOH O,I
mo1 L-'), coletaram-se amostras do horizonte A(0-1 6cm) de um Latossolo Vermelho DistrofGrrico sob floresta tropical
subperenif6Tia
em
Bela Vista do Paraiso, PR. Utilizou-seo
metodo dacoluna cromatográfica por exclusão, com esferas porosas de vidro, para
fracionamento das subtancias hdmicas obtidas com os diferentes
extratores. Foi observada a seguinte ordem de extração: Dabin (Na,P,O,
O, 1 mol L-')
>
Schnitzer (NaOH O, 1 mal L-')>
Dabin (NaOHO,
I
mo1 L")= Kononova
>
Resina quelatizante. Na maioria dos extratos houvepredominância de ácidos fúlvicos.
Termos de
indexação:
rnat6ria orggnica, ácidos fúlvicos, ácidosFour
extraction proçedures including ionic exchange aesin,Kononova rnethod
(0,l
mol L-' Na,P,O,+
0,lmolL"
NaOH), rnethodrecommended by Schnitzer
(O,l
mol LmJ NaOH) and Dabin rneitkiod(pretreatment with 2 mo1 L-' H,PO, followed by extraction with
O,l
rnol L-'
Na,P,O, and0.1
rnolL"
NaOH), were used to extract humicsubstances
from the A horizon (0-1 Ocm) of a Rhodic Ferralsol
under
semi-evergreentropical forest in Bela Vista do Paraíso,
ParanA
State, Brazil. Grey humicacids, brown hurnic acids and fulvic acids w e f e analysed
c hromatagraphically
on
controlled pore glass. Extractabilities decreased inthe following order: Dabin
(0,l
mol L" Na,P,O,)>
Schinitzer (O, 1 rnolL"
NaOH)
>
Dabin (6,1 mol L" NaOH)=
Konanava method>
ionic exchangeresin. The majority of the extraets conitained
predominantly
fulvic acids.Sndex
terms:
organic mãtter, fu'lvic acids, humie acids, humine, tropical forest, Paraná.As
substâncias
hiimicas, que constituem aproximadamente90
%da
matbriaorgânica
do
solo, são definidas como substâncias coioidaisamorfas, de ocorrência natural, heteroghneas e de alto peso molecular
variando de 800 a valores superiores a 1,000.000 Daltons (Aiken et
al.,
1 985). Estas exercem influência amplamente reconhecida
.
naspropriedades quimicas, ffsicas e biológicas do solo e, conseqüentemente,
no crescimento das plantas (Roth et ai., 1992).
Em
sua hidráliseAcida,
aparecem
substâncias insolúveis denominadas dcidoshúmicos;
nahidrdlise alcalina, encontram-se os Acidos fúlvicas;
e,
finalmente, ahumina que B insolúvel tanto em meio 4cido como em meio alcalino,
Para se fazer um estudo minucioso das substâncias hijmicas dos
solos, investigando suas caracteristicas estruturais e comportamento
químico, hA a necessidade de se isolar estes materiais orgãnicos do
componente argilo-mineral. O uso de soluções de NaOH
O,l
mo1L"
[Stevenson, 19941, KOH
O,
1mol
L" e 0,25mol L*' (Cegarra et al. 19941,e de Pirofosfato de S6dio O, 1 mo1.L" (Yormah et ai,, 19971,
tem
sido
empregada para o
isolamento
de substâncias húmicas dos solos.Apesar de muitas substâncias serem usadas para a extração das
substâncias húmicas
do
solo, as mais usadas têm sido soluções alcalinasdiluídas, principalmente NaOH, Por outro lado, o melhor extratar deve
ser
aquele
que poderemover
todas assubstâncias
hfimicas sem produzirartefatos durante
a
extração. Todavia, devidoheterogeneidade
dohúmus do
solo
e3
complexidadede
suainteração
com componentesminerais, não B surpresa que a quantidade e composição das
substancias
2 MATERIAL E MÉ~ODOS
Para a condução deste estudo, foi selecionado
um
IATOSSOLOVERMELHO DistrofBrriço no rnunicipio de Bela Vista do ParaFso-PR, sob
floresta tropical subperenif6liã. A profundidade de emostragem foi de O a
10cm,
com
tr6s repetições. As amostras foram previamente secas $isombra por, aproximadamente, 12 horas antes de serem transferidas
para o Laboratório
de
Embrapa Solos, no Rio de Janeiro, RJ. Em seguida,foram secas ao ar (35°C), mordas e passadas em peneira com abertura
de 2mm para caracterização quimica e física do solo (Tabela 11,
conforme Embrapa ( 1 9971,
e
posterior condução do estudo.TABECA 1
.
Características
f ldcas a qufmicaa dosolo
estudado.Emiinulwnetria CBtions trodveis
g.kg.$ C mmot dm" Acidez total
O pH 0rpO"iio P
Areia Areia H20 H
A
mg.kpv'Aipb S i k tina pmtra *
Ca"
Mp.'K.
mma,dmJ 0,O 91 26 4,79 78 12.1 M4todos de sxtracgo de substdncias húmicas
Foram utilizados
os
seguintes rnetodos de extração:método
d8 ResinaQuaJat;zante
{D~nnebetg
&U m ,
79821-
as subst~neias húmicas foram extrafdas do
solo,
utilizando-seAgua
deionizada e resina quelatirante saturada com s6dio(CHELEX 100, 100-200 mesh, BioRad, EUA), numa relação
sofo/resina/Agua de 1 :2,5:5. Apbs agitação por 1 6 horas e
centrifugaçgo por 30 minutos a 15.000rpm e,
sob
temperatura nunca superior a
2S°C,
o sobrenadante,contendo hgua e subst6ncias húrnicas, foi transferido para
um frasco de polietileno e, ap6s secagem a frio, os extratcs
foram armazenados congelados, em refrigerador, ate
o
uma
extração adequada,pois
o
isolamento de substancias hQmicas em meio alcalino (pH 9.0 a 12,0),sob
temperaturas elevadas.pode
levarB
formaç5o dehcMos
húmicos com maiwpeso
molecular (Cegsrra et af.,
1 994).&to&
&Kmmuvs tK&mwu,
r9661
-
assubst8nciaa
hi5micas
foram extrafdascom
solução de NarP207 0,lmolL"
+
NaOH 0,lrnolL",
numa
relação solo/soluç~o de 1:20.com
agitação,,eent
rif ugaçao, liof ili zaqãoe
armazenamento iddntico ao m6todo descritono
tópico A.mdfodb
&Swlb
( S m ,7982)
-
as substbnciashúmicas
foram extrafdes com soluçio de NaOH 0,lmol
L"
numa
relação solo/soluçio de 1:10. A suspensao foi agitada horizontalmente a 250rpm,
por
24horas.
Ap6s agitaçso,a
suspensão foi centrifugada,
o
sobrenadente isolado, liofilizadoe o
extratohdmico
armazenado demodo
semelhante ao procedimento descrito no tópicoA.
&tu&
dk
DaMn(D&fnI
79771
-
para extraçãodas
substancias hdmicas,
s
amostra de solo foi peneiradaa
80mesh e tratada, preliminarmente, com H3P04 2mol
L"
(densidade 1:I),
objetivando-se separar materiais orgdnicos leves que, ao serem postos em contato direto com opirofosfato ou
a
soda, podem resultar numa 'neo-sintese."de
%cicios
f0lvicos ou húmicos (Dabin,1971
). As soluç8esBcidas
foramrecalhidas
e
separadas.
Após
a
centrifugaçãa,a
fraç90 pesadado
d o foi lavadaduas
vezes
com 6gua deianizada parase
extrair oexcesso
de deido.Após
a
lavagem, efetuaram-se duas extrações com Na4P2070,lmol
t"
a
ptl
9,8 seguindo os mesmos passos de agitação ecentrifwaçllo descritos
no
tb&eo
A.Todos as suspensões correspondentes a cada extração foram
misturadas apds a céntrifugaç80. Foi efetuada
a
liofilizaçãodas
subst8ncias
húmicas
obtidas
eo
congelamentodas mesmas, para
Apds a extracão com Na4P;iOi O. 1 rnol
L',
seguiram-se mais duasextrações com NaOH
O,l
mo!L"
no residuo da amostrade
solo.
Todosos liquidos correspondentes
a
cada extração foram misturadosap8s
a
centrlfugaçSo, Foi efetuada a Iiofilização das substancias húmicas
obtidas e o congelamento das mesmas para posterior fracionamento.
2.2
Fraeionamento das subst8ncias húmicas extraidas do soloO
fracionamentode
todosos
extratos foi realizado porcrornatograffa de exclusão, segundo rnbitodo proposto por Danneberg
E1 9771, onde os
Scidcrs
húrnicos cinzas e marrons ou brunos e os 6cidosfiSlvicos foram caracterizados, cromatograficamente, em coluna tipo
C:
(Pharmacia
Wíotech,
Uppsala, Suécia), de 100cm decomprimento
por16mm de d i h e t r o interno. A coluna foi empacotada com esferas
porosas de vidro, CPG "Controled Pore Glass" 001 708, com tamanho de
particula de
720
a
2ç)Omesh e diâmetro de porode
f7nm
(CPG Inc.,Lincoln Park, NJ,
EUA).
Em relaçãocoluna
contendo gel,como
Sephadex, uma vantagem do fracionamento das substâncias húmlcas em colunas contendo CPG reside
no
fato de tratar-sede
um materialinerte, que nso reage ou não causa efeitos de adsorcão com o
componente organico a ser fracionado. Uma outra vantagem
6
o maiortempo de uso do CPG sem necessidade de troc4-lo com freqüência.
Descrição mais detalhada sobre
a
fabricação, os princfpios e asvantagens da cromatografia em esferas porosas de vidro pode ser obtida
em
Haller
(1965). Como solucao eluente, utilizou-se o Na2B407 0,02rnalC"
e NaCI 0,05m0F.L'~, de pH9.0.
P a r h e t r o s de calibração, tais como volume total QVt) e volume
mosto (Vo), foram determinados
após
ernpacotarnento da coluna. Para ovolume morto (Vo), usou-se uma
solução
contendo Blue Dextran2.000
a 0,5% (Pharmacia Fine Chernicals; Uppsala, SuBcia), enquanto que,
para a determinação do volume total (Vt), utilizou-se uma solução de
fenolftalelrna a T
0%.
TodQ o sistema foi hermeticamente fechado para2.3
13aracterizaçgo das substrincias hfimieasUtilizaram-se os seguintes parbmetros para a caracterização das
subst3ncias hiirnicas:
Grau de
candensaç&o
mulecular IEWE6)-
o grau de condensação molecular foi obtido atraves das relações deabsonrância no comprimento de onda de 400 e 600nrn dos extratos
(Chen
et a/., 1977).
i Coeficiente
de
partiçIo
-
Valor
de Kd (Tan & GiddensI7972)
-
o
coeficientede
partição foi calculado atravbs da f6rmula:onde:
Ve = volume
de
eiluição; Vo =volume vazio; eVt
= volume total.A
densidade
6tica porgrama
de solo(d.o.lg
de
solo)
foi calculadapela integração da pico de absorvância.
Todos os resultados apresentados referem-se
h
mddia de trgsaepeti~ões. Os dados referentes
As
substAneias húmicas totais GSMT) e4cidos húmicas cinzentos (AHC) foram analisados estatisticamente,
usando-se o procedimento PROC GLM
do
SAS (schlotzhaver&
Litterl,1987). Para os &idos húrnicos marrons
(AHM)
+
gcidos fúlvicos (AF), não foram efetuadas tais análises, em virtude do fracionamenta realizadocom
os extratores 1,2
e 3 não ter separado estes dois componentesAv&@ d8 &TBIWRF de SuhtLdw HdmM de um &tas& U é m d b Oktmfdrtkv 7
3
RESULTADOS E OISCUSS~ONa Tabela 2, são apresentados os teores e as caracterfsticas das
substbncias húmicas totais extraidas do solo,
TABELA
2.
Caracterlsticas das substâncias húmicas emrafdas do solo estudado.MRrodo
AHC
Valor AF + AHM Valor AF Valor SHT d.o.g4' Kd d.0.0" Kd d.o.gl I(d d.0.0" Resina Quebiinre 0,384 e 0,016 0,402 0,723-
7,07 d Kononwa 1,243 c-
0,022 3,080 0,571 47,27 c Soda 6,557a-
0,0082,933
0,505-
69.05 bNa4P2010,I mo1
L"
lOabinl 2,620b
0,048 10,594 0,725 8,257 0,963 183.9 a NaOH 0,l mo1L"
IDabinl 0,252 c 0,014 2,444 0,887 1,948 1,053 35,65 cAHC: &do húmico cinza; AF: ácido fuivico; AHM: &ido húmico marrom; SHT: subst8ncia hbmica total; d.0.g":
densidade btica por grama de solo; Kd: coeficiente de partiç8o.
Nota: medias seguidas de mesma letra, na mesma coluna, n5o diferem entre si pelo teste
de Tukey ao nlvel de 1 % de probabilidade.
Embora o fracionamento ou separação das substancias húmicas
em dcidos húmicos e fúlvicos seja normalmente conduzido pela
acidif icação do extrato e posterior centrif ugação, foi adotado o
fracionamento
em
coluna por exclusão, para todos os extratos, pelapossibilidade de menor ocorrgncia de erro operacional ou de
manipulação. As substancias húmicas de alto peso molecular (Acidos
húmicos cinzentos), independentemente do tipo de extrator qulrnico,
situaram-se num valor de Kd 0,0 (Tabela 2). Substâncias húmicas de
baixo peso molecular (dcidos hi5micos marrom e principalmente dcidos
fúlvicos) concentraram-se num valor de Kd 5 0,6. No fracionamento dos
observou-se um terceiro pico
no
valor deKd
= 1,O. Trata-se, possivelmente, de um pico relacionado aosBcidos
fúlvicos (Figura 1).FIGURA 1. Cromatogramas das
subst8ncias
húmlcasentraidas
por diferentes extratores. 1': pico de absow8ncia referente s deidos húmicos cinza;Zm: pico de absorváncia referente a Bcidos hdmicos marrons
+
ácidos fúlvicos; 3O: pico de absorvlncia referente a deidos fi5lvlcos; d.o.lg solo: densidade 6tica por grama de solo; valor de Kd: coeficiente de partiqio.Quanto
As
quantidades de substdncias húmicas extraidas,s
solução de NaaP2Ot 0,lmol
t"
(mdtodo de Dabinl foia
que extraiu maiores quantidades de substâncias hdmicas totais (183,9d.o.g" de solo). seguida das soluções de NaOH O, 1 mo1 L' (mdtodo da Soda),NaOH
O,
1 mo1t"
+
Na4P207O,l
mal L'' (metodo deKononova),
NaOH0,lmol
L"
(mdtodo de Dabin) e mbtodo da resina, com valores m6dios de69,05;
47,27; 35,65 e 7,07d.o.g*' de solo, respectivamente. A açãodo extrator contendo sddio da-se atravds da troca desse chtion monovalente
(Na*)
do extrator por um cátion polivalente no solo, que, por sua vez, age como metal ligante no comple~o organo-mineral (Kutsch, 1985). Kononova (1966) constatou quea
extração com solução de Na4P207 6menos
eficiente que a procedida com NaOH. Neste estudo, as maiores quantidades de substâncias húmicas extraidas em solução de Na4P207 0,lmol L' poderiam ser explicadaspelas
duassucessivas extrações conduzidas. Esta tambdm poderia ser a provável explicaç5o para o fato do extrato
obtido
em soluçãode
NaOH do mdtodode Dabin, conter quantidades duas vetes
menor
que no extrato em solução de NaOHdo
metodo da Soda, embora as soluções tivesserii as mesmas concentrações de NaOH.Exceto
para o mdtodo da Soda, todosos
outros se caracterizaram par apresentar mais dcidos fúlvicose
ácidos hdmicos marrons que deidos húmicos cinza. Machado & Gerzabek (1993) tambdm observaram semelhante configuração num Latossolo Roxo damesma
região (Londrina, PR) utilizando o mdtodo de Kononova e da resina. Entretanto, este maior teor de componentes orgbnicos de menor peso molecular (bcidos fúlvicos e Bcidos húmicos marrom) pode tratar-se de artefatos produzidos durante a extração, pois extrações conduzidas emsoluções
fortemente alcalinas, como as presentes no rn8todo deOabin, Kononova e da Soda, podem levar
4
oxidação de componentesorgânicos (Bremner, 1
950).
com conseqüente "quebra"de
dcidoshijrnicos (Swift & Posner, 1972). Schuppli
&
Mckeague (1 984) tambbmdemonstraram problemas de produção
de
artefatos ou componentes ocg8nicos de baixo peso molecular, como Bcidos fúlvicos. nas extrações com soluções fortemente alcalinas.V8rios trabalhos constataram que também a resina, por ser um extrator
mais
ameno,
evita a produç5o de artefatos organicos durante acapacidade de extração, que segundo
Gerzabek
& Ullah (1 989), variaentre 13,5 e 5 5 3 % . A variação na capacidade de extração deve-se,
principalmente,
As
caracteristicas do extrator qufmico, da mineralogia eda textura do solo
(Kutsch,
1985) e, segundo Stevenson (1994), tanto aextração completa com frações representativas
como
a extraçãosem
alteração das substâncias húrnicas são dois requisitos de um extrator
ideal.
Na
Tabela 3, são apresentados os valores da relação E41E6 dassubstâncias húmicas extraidas. A relação E41E6 diminui com o aumento
da condensação molecular e aromaticidade e, aparentemente, pode ser
utilizada como um indice de humificação (Stevenson, 1 9941. Uma
relação de
7
a 8 ou maior B normalmente observada para dcidos fúluicosou frações húmicas
com
peso molecular relativamente baixo. Por outrolado,
uma relação de 3 a 5 ou menor é característica de ácidos hbrnicose outros componentes de alto peso molecular (Kononova, 1966). A
relação E4E6 poderia, assim, corroborar os resultados obtidos no
fracionamento em coluna por exclusão. Observa-se,
na
Tabela 3, que osvalores da relação E4/E6m, referentes aos extratos obtidos com a resina
e hidrbxido de sódio, tanto do metodo de Dabin
como
o daSoda/Schnitzer, estão em consonância com o fracionarnento, ou seja,
são valores que caracterizam substgncias húmicas constiturdas,
predominantemente, de componentes orgânicos de baixo peso
molecular
.
Entretanto, semelhante equival6ncia não foi observada paraos extratos obtidos pelo método de Kononova e de Dabin (NaaPz07
0,Irnol L , onde os valores da relação E4/E6 R 2 9 e 1,97,
respectivamente) não refletem as configurações das substâncias
húmicas obtidas no fracionarnento em coluna por exclusão, seguido de
determinação em espectrofot6metro a 400nm. Provavelmente,. no
momento da determinação dos valores de E4JE6, o alto valor de pH dos
extratos (pH 9 a 12) pode ter ocasionado o surgimento de valores baixos
TABELA 3. Relaçiio E41E6 de substancias htirnicas de Latossolo Roxo distrbfico.
Resina Quelatizante
Kononova Soda
NaaP2O;r O, 1 mal L" (Dabin) NaOH O, I mo1 L" IDabin)
Neste estudo, foi constatado que os diferentes extratores apresentam diferentes capacidades de extração de subst6nçias húmicas
com diferentes configurações. Parsonç (1 988) observou semelhante
comportamento para solos de clima temperado. E necessário que
novas
comparaçoes sejam conduzidas, em outras classes desolos,
utilizando- se as t6cnicas espectrosc6picas como a ressonância magntltica nuclear einfra-vermelho com transformada de Fourier, para melhor constatar as
Os mdtodos testados aptesenteram diferentes capacidades de extração de substancias hilmicas, onde
os
extratores alcalinoscomo
Na4P~07
0,lmol
L"
(mdtodo de Dabin) e NaOH0,l
mo1t"
(mdtodo
dasoda) foram os que extrafram as maiores quantidades. O extrator mais
fraco foi a resina quelatizante.
As quantidades de Acidos húmicos
+
fúlvicos tambbm variaramdependendo do extrator, onde, exceto para o metodo da Soda, todos os
outros extratores continham mais ácidos fúlvicos que hiSmicos.
O método de Dabin, envolvendo soluções de NaOH e Na4P207,
levou ao surgimento de um terceiro pico no cromatograma, que pode ser
AIKEN, G . R.; McKNlGHf, O.
M.;
WERSMAW, R. L. ; McCARTHY, P. Anintroduction to hurnic substances in mil, sediment and water, In:
AIKEN, G.R. et al., ed. Hurnic substances in soil, sediment and water.
New
York: Wiley-lnterscience, 1 985. p. 1 -9.BREMNER, J.
M.
Some abserwations an the aeidation of soil organicmatter in the presence of
alkali.
The Jowmal o5 Soil Science, Oxford,v. 1, n. 2, p.198-204, 1950.
CEGARRA, J.; GARCIA, O.; NAVARRO, A*; BERNAL, M. P. Effects af
heat on the alkali extraction of humic substances fram peat.
Communications Fn Soil Science and Blant Analysis, New Xork, v.
25,
~~2685-2695,
1994.CHEN, Y . ; SENESI,
N.;
SCHNITZER, M. Infarmation provided on humicsubstances by E4JE6 ratios. Soil Science Society of America Journal,
Madison, v.40, p.682-686, 1
977.
OABIN,
W.
Etuded'une
metode de fractionnement des mati6reshumiques
du
sol, ScEeneedu
Sol, Versailles, v.I ,
p.47-63, 1 971.-
QANNEBERG,
O.
H. Chromatography of humic substances on controlledpore
glass,
In: SYMPOSIUM ON SOIL ORGANIC M A T f ER STUDIES,1 976, Braunschweig, Germany. Proceedings
...
Viena: IAEA, 1 977.~ 2 2 1 - 2 2 8 ,
DANNEBERG, O. H,; ULLAH, S.
M,
Cromatagraphische Unterscheidungvoni Hurninstof fen wnd Nic hthuminstof f en aus Se hwanzerdehurnus.
Zeitschrift Fuer W3anzenernaehrung
und
Boden kunde, Weinheim,~ ~ 1 4 5 , p.526-538, í
982.
EMBRAPA. Centro Nacional de Pesquisa
de
Solos(Ria de
Janeiro, RJ).Manual de métodos de anhlise de solo. 2.ed. Rio de Janeiro, 1997.
GERZABEK,
M. H.; ULLAH, S. M Humic substances in soils fromBangladesh, Namibia and Canada. Agrophydes,
Budapest,
v,5,
p. 1
97-203,
1989.
HALLER, W. Chromatography on glass
of
controlled poresite. Nsture,
London,
v.206, p.693-696,
1965.
KONONOVA,
M.
M.Som
organic
mttet.2.ed.
London: Pergamon,1966.
544p.
KUTSCH, H. Zur Verwendung
von
chelatisierendenHarzen
beidsr
Extra ktion von Hurninstof f en aus Mineral boeden. Landwirtschaftliche
Forschung, Frankfurt aM., v.38, p.245-254, 1985,
MACHADO, 9. L. O. de
A.;
GERZABEK, M. H. Tillage and crop rotationinteractions on humic substances of
a
Typic Haplorthox fromSouthern Brazil. Soil & iilbge
Research,
Amsterdam, ~ ~ 2 6 , p.227-
236, 1993.
ORIOLI,
G.
A.&
CURVETTO, N. R. Evaluationof
extractants forsoil
humic substances. I. Isotachophoretic Studies. Ptant and Soil 66,1
980,
p. 353-361.
PARSONS,
J. W. Isolation of humic substances from soils and sediments. In:FRIMMEL, F,H
,; CHRISTMAN, R.F.Humic
substancessnd thelr
role
in
the
environment. Chichester: John
Wiley, 1988.
p.3-
14.
ROTH, C. H.; WILCZYNSKI, W.; CASTRO FILHO, C. Effect of tillage ar~d
liming on organic matter composition in a Rhodic Ferralsol from
Southern Brazil. Zeitachrift fuer Pfianzenernaehrung und Bodenkunde, Weinheim, v. 1 55, p* 1 75- 1
79,
1992.
SCHLOTZHAVER, S. O.; LITTELL, R. C. System for elsmentary
statisticsl
SCHNITZER, M. Organic rnatter chaaacterizatian. In: PAGE, A. L.;
MILLER, R.
H.
& KEENEY, D.R.
ed. Methads of soil analysis, part2.
Chemical
and microMologica1 groperties. Za ed. ASS, SSSA,publisher. Madison, Wisconsin USA, 1
982.
SCHUPPLl, P. A.; McKEAGUE, S. A. Limitations of a3kali-extractabie
organic fractions as bases of soil classification criteria. Canadian
Journal of Soil Science, Ottawa, v.64, p. 173-1 86, 1984.
STEVENSON, F,
J.
Hurnus chsrnistry: genesis, cornposition, reactions.2ed.
New York,: J . Wiley, 1994. 496p.SWIFT, R. S. & POSNER, A. M. Autoxidãtion of hurnic acid undsr
a1 kaline condftians. The Journal af
Soil
Science, Oxford, Y-23,
p.38
1-
393,
1972.TAN, K. H.; GIDDENS, J. E. MolecuaPr weights and spectnal
characteristics o7 hurnic
and
futvlc acids.Geodema,
Arnsterdam, v.8, p.221-229, 1972.
YORMAH, T. B. R.; HAVES, M. H. B.; WILSON, W. S. Humic substances
from a tropical
soil.
Humie
substanees insoils,
peatsand
waters:health