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QBQ0105-BIOQUÍMICA & BIOLOGIA MOLECULAR
(Enfermagem 2011)
AULAS DE LABORATÓRIO
NORMAS E RECOMEDAÇÕES NO LABORATÓRIO
USO DE AVENTAL NAS AULAS PRÁTICAS É OBRIGATÓRIO. COMER, BEBER E FUMAR NO RECINTO DO LABORATÓRIO NÃO É PERMITIDO.
- Leia cuidadosamente os procedimentos experimentais (protocolos) e atente para as instruções fornecidas antes de iniciar o experimento.
- Familiarize-se com o ambiente do laboratório, particularmente, com os reagentes, vidraria e equipamentos disponíveis, procurando utilizá-los com propriedade para evitar erros experimentais, desperdícios de material e acidentes.
- Mantenha sua bancada de trabalho organizada e livre de objetos e uso pessoal. Ao terminar o experimento passe água na vidraria utilizada e a coloque no local indicado.
- Qualquer dúvida ou acidente peça auxílio aos monitores, aos professores ou à técnica do laboratório.
GUIA PARA RELATÓRIO DE LABORATÓRIO
INTRODUÇÃO: Deve conter os fundamentos bioquímicos da metodologia empregada (aspectos
teóricos da aula prática encontrados na literatura).
OBJETIVOS: Colocar o(s) objetivo(s) da aula prática de forma clara e concisa.
MATERIAIS E MÉTODOS: Descrever os procedimentos executados em laboratório incluindo todos
os reagentes, materiais e equipamentos utilizados.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Colocar todos os dados obtidos (utilizar tabelas, caso julgue
necessário). Os gráficos serão aceitos em papel milimetrado ou no Excel. Comentar os resultados, discutir possíveis diferenças obtidas comparando com dados da literatura.
CONCLUSÃO: Comentar quais as conclusões da aula prática. Ser claro e objetivo nas conclusões.
Esclarecer se os objetivos propostos foram atingidos ou não.
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MICROPIPETADORES
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LABORATÓRIO 1: TITULAÇÃO DE AMINOÁCIDOS
FUNDAMENTO
As unidades constituintes das proteínas são os L -aminoácidos. Como o próprio nome indica, estes compostos apresentam pelo menos um grupo amino (-NH2) e um grupo carboxílico
(-COOH). Em conseqüência deste fato, ao serem dissolvidos em água, os aminoácidos apresentam caráter anfotérico, ou seja, comportam-se como ácido e como base. Os grupos amina e carboxila podem sofrer protonações e desprotonações reversíveis, comportando-se como eletrólitos fracos. Se os considerarmos em suas formas de ácidos conjugados: -NH3+ e -COOH, veremos que cada um
deles apresentará um valor de pKa. Assim, um aminoácido apresenta pelo menos dois valores de pKa e dependendo da natureza do grupo R ligado ao carbono , pode ocorrer ou não um terceiro valor de pKa. Em pH 7,0, o grupo amino apresenta-se protonado (forma ácida) e o grupo carboxila desprotonado (forma básica).
H3N + C H COOH R OH H3N C H COO R OH H2N C H COO R
A curva de titulação mostra como varia o pH em função de equivalentes do titulante (ácido ou base forte) adicionados. Para um aminoácido, deve-se observar no mínimo dois patamares nessa curva correspondendo à titulação dos grupos -arboxilato e -amino, respectivamente. No meio de cada um desses patamares há um ponto de inflexão, cujo valor de pH é numericamente igual ao pKa do grupo correspondente. Essa relação numérica entre pH e pKa é facilmente compreensível através da análise da equação de Henderson-Hasselbalch.
OBJETIVOS
O objetivo desta aula prática é compreender o efeito tamponante de ácidos fracos e estudar as propriedades ácido-base dos aminoácidos. Para esta finalidade, a aula compreenderá a construção de curvas de titulação para soluções contendo: (a) ácido forte (HCl); (b) ácido fraco monoprótico (ácido acético); e (c) três soluções de aminoácidos diferentes.
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PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
TITULAÇÃO:
1. Colocar 50 ml da solução do ácido forte (HCl 0,1 M) em um béquer e titular com solução de 0,5 M de KOH medindo o pH após cada adição de 0,5 ml até atingir o pH 12,0.
2. Colocar 50 ml de ácido fraco (ácido acético 0,1 M) em outro béquer e titular com solução 0,5 M de KOH medindo o pH após cada adição de 0,5 ml até pH 12,0.
3. Colocar 50 ml da solução do aminoácido (0,1M) em pH 1,0 em um béquer e titular com solução 0,5 M de KOH medindo o pH após cada adição de 0,5 ml até atingir o pH 12,0. Repetir o mesmo procedimento para as outras soluções de aminoácido desconhecido
OBS.: Antes de iniciar a experiência, acertar o pH-metro com a solução padrão pH 4,0 e pH 7,0
para calibrar o aparelho.
ANÁLISE DOS RESULTADOS
1. Fazer o gráfico de titulação do ácido acético. Comparar as curvas de titulação do ácido forte e do ácido fraco.
2. Fazer o gráfico de titulação dos aminoácidos desconhecidos com base nos resultados obtidos. Estimar os valores de pKa e comparar estes valores obtidos com aqueles descritos nas tabelas de pKa de aminoácidos.
3. Identificar os aminoácidos desconhecidos, escrever suas estruturas e suas sucessivas ionizações verificadas ao se aumentar o pH, indicando a carga líquido do aminoácido. Estimar o valor do pI dos aminoácidos analisados utilizando os valores de pKa determinados experimentalmente.
4. Com base nas curvas de titulação obtidas para os aminoácidos, discutir sobre as suas possíveis capacidades tamponantes no organismo, levando-se em consideração que o pH fisiológico é aproximadamente 7.
OBSERVAÇÃO: O Relatório deverá ser elaborado pelo GRUPO e entregue, de preferência digitado em computador até o dia 22 de março (não serão aceitos relatório entregues após esta data!).
