INSTRUÇÕES DE USO
Calibradores para QuantStudio™ 5 DX Placa III
Instruções de uso
Quantidade 1 placa calibradora
Modelo: A31908 - Placa calibradora 3 com 96 poços 0.2 mL
Usado para estabelecer a pureza espectral dos fluoróforos TAMRA, NED e Cy5. Conservar entre a temperatura de -20ºC e sobre o abrigo de luz.
Descrição e propósito de uso:
Calibradores para QuantStudio™ 5 DX Placa III proporciona a calibração de uma gama de 10 fluoróforos (fluoróforos espectrais) conforme comprimento de onda absorvível por cada um deles e assim, emitir fluorescência ao equipamento QuantStudio™ 5 DX Sistema de PCR em Tempo Real (cadastrado à parte a este pleito) para permitir a identificação de componentes de DNA marcado, com a finalidade de monitorar, diagnosticar e ou auxiliar em um diagnóstico susceptível à análise de DNA.
ATENÇÃO! Leia as Fichas de dados de segurança e siga as instruções de manuseio. Use óculos de proteção
apropriados, roupas e luvas. Somente para uso profissional.
As Fichas de dados de segurança (SDSs) estão disponíveis em www.lifetechnologies.com/support.
A relação dos fluoróforos conforme comprimento de onda absorvível dos cada um deles, são descritas a seguir:
Fluoróforos
Composição básica
Comprimento de onda
de absorção
TAMRA
TMGlicerina e tetrametilrodamina
578+/-4 nm
NED
TMGlicerina e Azodeto de sódio
570+/-4 nm
CY5
TMGlicerina monosuccinimidil ester
659+/-8 nm
Calibradores para QuantStudio™ 5 DX Placa III é composta por: Forma de apresentação
A31909 - Placa calibradora 3 com 96 poços 0.2 mL Usado para estabelecer a pureza espectral dos fluoróforos
TAMRA, NED e Cy5.
Nota: Para as diretrizes de segurança e de risco biológico, consulte o apêndice “Segurança” na QuantStudio ™ 5 Guia de Dx Real-Time PCR Manutenção de instrumentos e Administração de Usuários ( Bar. No. 100042186). Leia as Fichas de Dados de Segurança (FDS) e siga as instruções de manuseio. Desgaste apropriadas de proteção óculos, roupas e luvas.
Importado e Distribuído por:
Life Technologies do Brasil Com. Ind. Prod. Biotec. Ltda Rua Breno Ferraz do Amaral, 408
Vila Firmiano Pinto – São Paulo – SP CNPJ: 63.067.904/0001-54
Calibradores para QuantStudio™ 5 DX Placa III MS:10358940104
Uso exclusivo para Diagnóstico “in vitro” Farm. Resp: Aline de Carvalho
Descrição
Use as placas de calibração espectral para normalização espectral do QuantStudio ™ 5 Dx Real-Time PCR. Executar a calibração de fluoróforo como parte da manutenção de rotina do instrumento como descrito no manual do equipamento e Guia de Administração de Usuário.
O instrumento pode ser utilizado para executar ensaios desenhados com fluoróforos (fluoróforos não fabricados personalizados pela Thermo Fisher Scientific ou fluoróforos não pré-calibrados com o instrumento). Fluoróforos personalizados devem:
• Excitar entre 455-672 nm, e emitem entre 505-723 nm.
• Ser ligado a uma sequência de DNA curta sem um quencher. Uma sequência oligo consistindo nas primeiras 3 a 6 bases na extremidade 5 'da sonda sequência deve ser suficiente.
Fluxo de Trabalho: calibração fluoróforo personalizado
Para cada fluoróforo costume, determinar a concentração de fluoróforo ideal. Utilizar esta concentração para preparar todas as chapas de calibração fluoróforo subsequentes.
Utilizar uma série de diluições para determinar uma concentração óptima fluoróforo costume Prepara-se uma placa de diluição fluoróforo
▼
Executar a placa de diluição como uma um ensaio ▼
Determinar a concentração de fluoróforo ideal ▼
Calibra-se o fluoróforo personalizado usando a concentração ótima Criar placa de calibragem personalizada de um fluoróforo
▼
Adicionar um fluoróforo personalizado para o instrumento ▼
Faça uma calibração de fluoróforo personalizado
Preparar uma série de diluição para cada fluoróforo personalizado.
• Alvo, várias concentrações de fluoróforos dentro de uma gama de 100-2,000 nM. • Escolha uma diferença de 2 ou 3 vezes nos pontos de diluição.
• Dispensar 10-20 uL por poço de placas de 96 poços.
• Diluir o fluoróforo em tampão compatível com a sua mistura principal.
• (Intercalantes única fluoróforos) Adicionar a quantidade adequada de produto amplificado por PCR para gerar fluorescência.
Prepare um costume fluoróforo placa de diluição IMPORTANTE! Use luvas sem pódurante todo o procedimento. 1. Prepara-se uma série de diluições de 2 ou 3 vezes maior do fluoróforo original.
2. Dispensar alíquotas de cada diluição para o centro de uma placa de reação, em seguida, selar o placa. Um prato cheio não é necessário. Veja a figura a seguir para repetições sugeridas.
3. Vortex a placa por 5 segundos, em seguida, centrifugar a 750 a 1.000 × g durante 2 minutos. 4. Confirmar se o líquido em cada poço está na parte inferior do poço e livre de bolhas. Se não, centrifugar a placa novamente.
IMPORTANTE! Manter o fundo do prato limpo. Fluidos e outros contaminantes sobre o fundo da placa pode contaminar o bloco de amostras e provocar um sinal de ruído anormal elevado de fundo.
Executar a placa de diluição como ensaio
1. Selecionar ensaio de genotipagem no QuantStudio ™ Software 5 Dx TD: a. Clique Criar novo ensaio na aba propriedades:
• Escolha genotipagem na lista de tipo de ensaio.
• ( Opcional) Introduzir ou editar outras propriedades experimentais. b. Na aba Método:
• Digite o volume de reação apropriada.
• Definir o patamar de temperatura para 60 ° C, com uma retenção de 2 minutos. • deselecionar leitura Pré-PCR e Amplificação.
• Escolha ação de configurações de filtros ópticos, em seguida, garantir o filtro correto para o fluoróforo personalizado seja selecionado. Se você não sabe as configurações de filtro corretas, selecione todos as 21 combinações de filtro.
2. Coloque a placa no instrumento.
IMPORTANTE! O instrumento deve ser usado por operadores treinados, que foram advertidos do perigo das partes móveis.
3. Na aba Corrida, clique COMECE A CORRER.
4. Quando a corrida termina, o arquivo EDS transfere as informações automaticamente para o software 5. Descarregar a placa do instrumento.
CUIDADO! PERIGO ferimento físico. Durante o funcionamento do aparelho, a temperatura da placa pode atingir 100 ° C. Deixar arrefecer à temperatura ambiente antes de utilizar.
Nota: Se o instrumento não ejetar a placa, contate o Suporte.
Determinar a concentração de fluoróforo ideal
Reveja os dados de sinal de fluoróforo e selecione a diluição a ser usado para calibrar fluoróforo. 1. No Resultados guia do software de desktop, selecione Raw Plot dados.
Este dado mostra o sinal de fluorescência bruto de cada filtro óptico, para poços individuais.
2. Para cada replicada de diluições preenchidas, selecionar Disposição dos poços na placa para os dados plotados 3. Analisar os dados brutos para identificar os poços com sinais entre 800000 e 3.200.000 para o filtro óptico, onde o fluoróforo é mais brilhante.
4. ( Opcional) Exportar os dados brutos, em seguida, calcular o valor médio de fluorescência para cada concentração.
5. Selecionar o sinal mais baixo (ideal) para a concentração de fluoróforo que cai dentro do limite aceitável de sinal.
Criar uma placa de fluoróforo customizados:
Crie uma placa cheia do fluoróforo personalizado diluído e com concentração ideal 1. Dilua o fluoróforo customizado com tampão em uma concentração ideal.
Preparar um volume adequado, utilizando um intervalo de volume de 10-20 mL / poço. 2. Pipete o volume apropriado do fluoróforo customizado diluído para os poços da placa. 3. Selar a placa.
4. Vortex a placa por 5 segundos, em seguida, centrifugar a 750 a 1.000 × g durante 2 minutos. 5. Confirmar se o líquido em cada poço está na parte inferior do poço e livre de bolhas. Se não, centrifugar a placa novamente.
IMPORTANTE! Manter o fundo do prato limpo. Fluidos e outros contaminantes sobre o fundo da placa pode contaminar o bloco de amostras e provocar um sinal anormalmente elevado ruído de fundo.
Adicionar um fluoróforo personalizado no instrumento
1. Na tela inicial do instrumento, tocar Definições > Manutenção e Serviço > calibrações > personalizadas > fluoróforo personalizado.
2. Tocar Adicionar Fuoróforo personalizado. 3. Insira as informações de fluoróforo:
Campo / opção Ação
Nome do Digite um nome para o fluoróforo personalizado. Fuoróforo
IMPORTANTE!
· Não use um nome de fluoróforo do sistema para um nome de fluoróforo personalizado.
· Nomes de fluoróforos são sensíveis ao espaçamento e não pode conter caracteres especiais.
Tipo Selecione:
• Repórter -O fluoróforo funciona em c onjunto c om um fluoróforo extintor para relatar um aumento de produto de PCR. • quencher -O fluoróforo suprime a fluorescência de um fluoróforo repórter até que a amplificação de produto de PCR • A mbos -O fluoróforo pode s er utilizada como um repórter ou quencher fluoróforo.
4. Tocar em salve
Fazendo uma calibração de fluoróforo personalizado
1. Coloque a placa no instrumento.
IMPORTANTE! O instrumento deve ser usado por operadores treinados, que foram advertidos do perigo partes móveis.
2. Na tela inicial do instrumento, tocar Definições > Manutenção > Serviço > Calibrações > Personalizadas > Fuoróforo personalizado.
3. Toque o fluoróforo personalizado para calibrar.
4. Reveja as informações do fluoróforo personalizado, (opcional) fazer alterações, em seguida, toque Atualizar.
5. Insira a temperatura de calibração.
6. ( Opcional) Tocar reagentes, então introduzir informações de reagentes. 7. Tocar em Começar.
8. Quando a corrida estiver completa e a tela exibir Calibração completa, tocar em ver resultados > Detalhes.
9. Reveja o gráfico. Passando os resultados de calibração verificando sinais uniformes com picos alinhados com o comprimento de onda do fluoróforo.
Nota: Exemplo de uma curva de calibração de fluoróforo
Os picos do seu fluoróforos podem estar alinhados com um conjunto de filtros diferente. 10. Selecione uma ação independente se a calibração do fluoróforo passou ou falhou.
Status da Calibração Ação
Aprovado • T ocar aceitar os resultados ou Rejeitar Resultados.
• N ota: Aceitar os resultados salva os dados de c alibração para o ins trumento e s ubstitui os dados existentes.
• ( O pcional) Tocar transferir EDS para transferir os dados de c alibração a um U SB.
Reprovado
• C riar uma outra placa de fluoróforo personalizada usando a s eguinte c oncentração de
• fluoróforo maior do que a c oncentração determinada no “Determinar a c oncentração de
• fluoróforo ideal”, na página 45, em s eguida, executar a c alibragem novamente.
• C onsulte “Solucionar problemas de falha de c alibração” na página 3 6.
11. Retirar a placa do instrumento.
Life Technologies Corporation e / ou suas afiliadas (s) garante seus produtos como estabelecido na Life Technologies' Termos e Condições Gerais de Venda encontrado na Life Technologies' website em
www.thermofisher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions.html. Se você tiver alguma dúvida, entre em contato com a Life Technologies www.thermofisher.com/support.
Pico do Filtro
Comprimento de onda do filtro (nm) [ 1]
Excitação Emissão x1-m1 470 ± 15 520 ± 15 x2-m2 520 ± 10 558 ± 12 x3-m3 550 ± 10 587 ± 10 x4-M4 580 ± 10 623 ± 14 X5-m5 640 ± 10 682 ± 14 X6-m6 662 ± 10 711 ± 12
Símbolos no rótulo do produto:
Fabricante Use até
Número de Catálogo Consulte as instruções de uso
Lote Cuidado, consulte documentos
de acompanhamento Contém suficiente para <n>
testes Limites máximo e mínimos de temperatura Protegem da luz Produto para diagnóstico
GARANTIA
As características do ensaio aqui apresentadas foram obtidas utilizando a técnica indicada. Qualquer alteração ou modificação à técnica não recomendada pelo fabricante pode afetar os resultados, situação em que o fabricante declinará toda a garantia expressa, implícita ou estabelecida por lei, incluindo a garantia implícita de produto adequado para comercialização ou utilização. O fabricante e os seus distribuidores autorizados, em tal situação, não serão responsáveis por danos indiretos ou consequentes.
Representante no Brasil e Assistência
Técnica:
Life Technologies Brasil Comércio e Indústria
de Produtos para Biotecnologia Ltda
Rua Breno Ferraz do Amaral, 408
Vila Firmiano Pinto – São Paulo
04124-020 – SP
CNPJ: 63.067.904/0001-54
MS: XXXXXXXXX
Fabriante legal:
Life Technologies Holdings PTE Ltd
Block 33, Marsiling Industrial Estate, Road #3, #07-06, Singapore
