Português - Español. Este documento destina-se aos usuários dos Ensaios de Proficiência para Laboratórios Clínicos.

Português - Español

Este documento destina-se aos usuários dos

Ensaios de Proficiência para Laboratórios Clínicos.

Este documento se destina a los usuarios de los

Ensayos de Aptitud para Laboratorios Clínicos.

Revisão Setembro 2013/ Versión Septiembre 2013

Instruções de Uso e Critérios Adicionais Instruções de Uso e Critérios Adicionais Este documento complementa o Manual do Participante.

Instrucciones de Uso y Criterios Adicionales Este complementa el Manual del Participante. A seguir, são descritos os itens de ensaio, as instruções de uso, as regras

para reportar os resultados e os Critérios Específicos de Avaliação. Alguns desses itens podem ser suprimidos quando não houver necessidade de instrução de uso ou na ausência de regras e/ou critérios adicionais.

A continuación, son descritos los ítems de ensayo, las instrucciones de uso, las reglas para reportar los resultados y los Criterios Específicos de Evaluación. Algunos de esos ítems pueden ser suprimidos en un área, cuando no hubiera necesidades de instrucción de uso o en ausencia de reglas y/o criterios adicionales.

Segurança e Manipulação dos Itens de Ensaio

Os materiais de controle de qualidade são comumente de origem humana. Por esta razão, devem ser tratados como potencialmente infectantes e patogênicos, capazes de transmitir doenças, e manuseados de acordo com as Boas Práticas de Biossegurança – Padrão OSHA sobre Patógenos Transmitidos por Via Sanguínea.

As medidas de segurança adotadas usualmente na manipulação de amostras de paciente frente a agentes contagiosos, como Hepatite e HIV, devem ser estendidas aos itens de ensaio para proteção do usuário e do ambiente.

Algumas recomendações:

Áreas de risco devem ser identificadas de maneira clara, atendendo aos padrões de segurança definidos na legislação. Os funcionários precisam ser treinados, e, nessas áreas, devem existir instruções de segurança por escrito e procedimentos de emergência.

A utilização de equipamentos de proteção individual (EPI) deve ser considerada essencial, recomendando-se o uso de luvas descartáveis, vestuário de proteção – aventais, protetores de face adequados para olhos/face, colocados antes da abertura da amostra/item e mantidos durante o manuseio.

As mãos devem ser lavadas antes da colocação das luvas, depois de sua retirada e antes de sair da área técnica.

Os itens devem ser abertos em cabine de segurança biológica (EPC), e a pipetagem não deve ser feita com a boca.

Ter um lava-olhos próximo ao local de manuseio da amostra/item. Não se deve comer, beber, fumar, usar cosméticos, lentes de contato nem tomar remédios nas áreas técnicas do laboratório.

Amostras/itens, reagentes ou rejeitos de equipamentos usados para o ensaio devem ser descontaminados para posterior descarte.

No caso de derramamento sobre a bancada, usar hipoclorito de sódio a 1% para limpá-la.

Em caso de contato com a pele e olhos por meio de respingo ou corte, lavar imediatamente e abundantemente com água e sabão. Em seguida consulte um especialista.

Seguridad y Manipulación de los Ítems de Ensayo

Los materiales de control de calidad son comúnmente de origen humano. Por esta razón, deben ser tratados como potencialmente infectantes y patogénicos, capaces de transmitir enfermedades y manipulados de acuerdo con las Buenas Prácticas de Bioseguridad-Patrón OSHA sobre Patógenos Transmitidos por Vía Sanguínea.

Las medidas de seguridad adoptadas usualmente en la manipulación de muestras de paciente frente a agentes contagiosos, como Hepatitis y HIV, deben ser extendidas a los ítems de ensayo para la protección del usuario y del ambiente.

Algunas recomendaciones:

Las áreas de riesgo deben ser identificadas de manera clara, atendiendo a los patrones de seguridad definidos en la legislación. Los funcionarios necesitan estar entrenados, y, en esas áreas, deben existir instrucciones escritas de seguridad y procedimientos de emergencia.

La utilización de equipamientos de protección individual (EPI) debe ser considerada esencial, recomendándose el uso de guantes desechables, vestuario de protección - delantales, protectores faciales adecuados para la cara y los ojos, colocados antes de la apertura de la muestra/ítem y mantenidos durante la manipulación.

Las manos deben ser lavadas antes de colocarse los guantes, después de retirarlos y antes de salir del área técnica.

Los ítems deben ser abiertos en cabina de seguridad biológica (EPC), y el pipeteo no debe ser realizado con la boca.

Se debe tener un dispositivo para el lavado de ojos próximo al local de manipulación de la muestra/ítem.

No se debe comer, beber, fumar, usar cosméticos, lentes de contacto, ni tomar medicamentos en las áreas técnicas del laboratorio.

Las muestras/ítems, reactivos o rechazo de equipamientos usados para ensayos deben ser descontaminados para su posterior desecho. En el caso de ocurrir derramamiento sobre la meseta, usar hipoclorito de sodio al 1% para limpiarla.

En caso de contacto con la piel y los ojos por medio de goteo o herida, lavar inmediatamente con agua y jabón abundante. Enseguida consulte un especialista.

Bibliografia

US Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration, 29 CFR Part 1910. 1030, Occupational Exporue to Bloodborne Pathogens; Final Rule . Federal Register 1991:56 (235): 64175-82

US Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication No. (CDC) 93-8395. Washington, DC: US Government Printing OFFICE, May 1999.

World Health Organization.Laboratory Biosafety Manual.Geneva:World Health Organization, 1993.

National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protection odf Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infectious; Approved Guideline – Second Edition. NCCLS Document M29-A Wayne, PA:NCCLS, 2001

Microscopia por Imagem

A imagem é um bom aliado e viabiliza programas em áreas onde há escassez de matéria prima ou baixa estabilidade de materiais. Possibilita ampliar a variabilidade de casos, permitir a participação de mais laboratórios e padronizar o conteúdo disponibilizado para os usuários. A ferramenta é simples, mas é imprescindível num primeiro momento ler as instruções a seguir para facilitar sua adaptação a este formato do programa.

• O profissional que realiza a análise deve ser cadastrado no sistema

online. Para isto, basta o Administrador do programa entrar no Sistema Online, em Administração/Cadastro do Usuário e incluí-lo.

• O profissional deve utilizar um computador com acesso à internet. O

acesso pode ocorrer a qualquer hora e de qualquer computador. O caso estará disponível desde a liberação da rodada na internet.

• Um computador padrão com um link de acesso à internet de 128kbps

é suficiente para as análises. A região da lâmina disponibilizada é produzida numa qualidade boa para análise, com tamanho padronizado em 2x2mm a 3x3mm, para garantir autonomia de leitura (área de leitura superior a comumente analisada), sem exigir recursos de informática especiais. É recomendado um link de 512 kbps para uma navegação mais rápida.

• Deve-se ter atenção para a configuração e ajustes do monitor. As

configurações usuais de vídeo são resolução, brilho, contraste, calibração da cor e formato (p. ex. widescreen). Todos podem ser ajustados (atalhos no teclado ou via painel de controle) de forma a reproduzir fielmente a imagem.

• A análise é similar a do microscópio: correr a lâmina, ampliar e reduzir

a imagem, escala para medição e grade para contagem. Não é possível apenas manipular o foco (profundidade). Este já é ajustado na preparação da imagem, conforme o caso retratado.

• A análise deve demandar o mesmo tempo da realizada na rotina.

Com o link de acesso à internet adequado e prática de uso da ferramenta o tempo dedicado a análise deve ser similar ao rotineiro.

• Ao realizar a análise é possível reportar o resultado simultaneamente,

pois o caso é disponibilizado no próprio formulário de resposta.

• Usuários offline devem acessar o caso no site, na área de “Clientes

Offline” e reportar os resultados no formulário impresso. Não é possível disponibilizar os casos em meio físico ou exportá-los para download ou em mídia móvel (PenDrive, DVD ou CD).

Microscopia por Imagen

La imagen es un buen aliado y viabiliza programas en áreas donde hay escasez de materia prima o baja estabilidad de materiales. Posibilita ampliar la variabilidad de casos, permitir la participación de más laboratorios y estandarizar el contenido disponible para los usuarios. La herramienta es simple, pero es imprescindible en uno primer momento leer las instrucciones que aparecen a continuación, para facilitar su adaptación en este formato del programa.

• El profesional que realiza el análisis debe estar registrado en el

sistema online. Para esto, basta que el Administrador del programa entre en el Sistema Online, en Administración/Registro del usuario e incluir los usuarios que sean necesarios

• El profesional debe utilizar un ordenador con acceso a internet. El

acceso puede ser a cualquier hora y de cualquier ordenador. El caso estará disponible desde la liberación del envío.

• Un ordenador patrón con un link de acceso a internet de 128 kbps es

suficiente para los análisis. La región del a lámina disponible es producida con una buena calidad para analizar, con tamaño estándar en 2 x 2mm a 3 x 3mm, para garantizar autonomía de lectura (área de lectura superior a la comúnmente analizada), sin exigir recursos de informática especiales. Es recomendado un link de 512 kbps para una navegación más rápida.

• Debe prestar atención a la configuración y ajustes del monitor. Las

configuraciones usuales de video son resolución, brillo, contraste, calibración del color y formato (por ej. widescreen). Todos pueden ser ajustados (a través del teclado o por el panel de control), de forma que se reproduzca la imagen tal y como es.

• El análisis es similar al del microscopio: correr la lámina, ampliar y

reducir la imagen, la escala para medición y grado para el conteo. No es posible solo manipular el foco (profundidad). Esto ya es ajustado en la preparación de la imagen, de acuerdo al caso retratado.

• El análisis debe demandar el mismo tiempo de realización que en la

rutina. Con el link de acceso a internet adecuado y práctica de uso de la herramienta el tiempo dedicado para el análisis, debe ser similar al rutinario.

• Al realizar el análisis es posible reportar el resultado simultáneamente,

pues el caso está disponible en el propio formulario de respuesta.

•

“Clientes Offline” y reportar los resultados en el formulario impreso. No es posible tener disponible los casos en medio físicos o exportarlo para download o en memoria móvil (PenDrive, DVD o CD).

Instruções de Uso e Critérios Adicionais

Ampliação atual da imagem maior. Apresenta o aumento aplicado pelo usuário. Ampliación actual de la imagen mayor. Presenta el aumento aplicado por el usuario. Barra de zoom. Apresenta a ampliação atual da imagem maior (inicialmente no menor zoom) e possui os comandos para ampliar (+) e reduzir (-) a imagem. O aumento pode variar de 16x a 1000x, de acordo com o material a ser analisado. Barra de Zoom. Presenta la ampliación actual de la imagen mayor (inicialmente en el menor zoom) y posee los comandos para ampliar (+) y reducir (-) la imagen. El aumento puede variar de 16x a 1000x, de acuerdo con el material analizado.

Escala para medição. Régua para medição de achados. Ela está disponível para medição horizontal e pode ser arrastada para próximo do achado. A régua deve ser ativada na barra de ferramentas.

Escala para medición. Regla para medición de hallazgos. Está disponible para medición horizontal y puede ser arrastrada para el próximo hallazgo. La regla debe ser activada en la barra de herramientas.

Imagens disponíveis. Quando um caso tem mais de uma área da lâmina disponibilizada, estas são enumeradas para seleção. As imagens disponibilizadas são descritas junto do caso clínico, quando aplicável. Imágenes disponibles. Cuando un caso tiene más de un área de la lámina disponible, estas son enumeradas para selección. Las imágenes disponibles están descritas junto con el caso clínico, cuando es aplicable.

Miniatura da imagem a ser analisada. Quando a imagem maior é ampliada, a região que está sendo exibida é demarcada para simples orientação. A exibição desta miniatura pode ser ativada na barra de ferramentas.

Miniatura de la imagen a ser analizada. Cuando la imagen mayor es ampliada, la región que está siendo exhibida es demarcada para simple orientación. La exhibición de esta miniatura puede ser activada en la barra de herramientas.

Barra de ferramentas para ativar a exibição de (1) miniatura da imagem, (2) escala para medição e (3) grade para contagem. Existem duas opções de grades para facilitar a contagem na imagem maior: 3x3 (9 quadrantes) ou 5x5 (25 quadrantes) e (4) brilho/ contraste.

- La barra de herramientas para activar la exhibición de (1) miniatura de imagen, (2) escala para medición y (3) grado de conteo. Existen dos opciones de grados para facilitar el conteo en la imagen mayor: 3x3 (9 cuadrantes) o 5x5 (25 cuadrantes) e (4) brillo/ contraste. .

Retorno ao sistema online. Ao clicar fecha o formulário e volta para a área de “Entrada de Resultados”.

Retorno al sistema online. Al hacer clic, cierra el formulario y vuelve para el área de “Entrada de Resultados”.

Imagem a ser analisada, correspondente a um campo do microscópio. A navegação deve ser ativada por um clique sobre a imagem.

Para análise pode-se ampliar a imagem com duplo clique sobre a área que deseja analisar, ampliar e reduzir através da barra de zoom ou botão de rolagem do mouse, arrastar a imagem para andar para os lados ou usar as setas do teclado para esta movimentação. La imagen a ser analizada corresponde con un espacio del microscopio. La navegación debe ser activada con un clic sobre la imagen.

Para el análisis se puede ampliar la imagen con doble clic sobre el área que se desea analizar, ampliar y reducir mediante la barra de zoom o botón de rodaje del mouse, arrastrar la imagen para recorrer por los lados o usar las flechas del teclado para este movimiento. Seta para expansão da imagem para toda a tela do computador (oculta o formulário online) e redução (reexibição do formulário). Não aplicável para Cliente offline e para ensaios com contagem por campo.

Una flecha para expansión de la imagen para toda la pantalla del ordenador (oculta el formulario online) y reducción (re exhibición del formulario). No aplicable para el Cliente Offline y ensayos con conteo por campo

Ícone para exibir/ocultar as barras de zoom e ferramentas. Ao desativá-lo, a régua e miniatura permanecem disponíveis. Para ocultá-las, basta desabilitá-las antes de ocultar as ferramentas. Ícono para mostrar/ocultar las barras de zoom y herramientas. Al desactivarlo, la recta y la barra permanecen disponibles. Para ocultarlas, basta desactivarla antes de ocultar las herramientas.

Novo! Brilho/ contraste. Ferramenta para ajustes de brilho e contraste da imagem. O brilho/ contraste deve ser ativado na barra de ferramentas, clicar em “aplicar” para adequar às definições ajustadas e “reset” para voltar a definição original. Recomendado para os navegadores Firefox e Chrome.

Nuevo! Brillo/contraste. Herramienta para ajustes de brillo y contraste de la imagen. El Brillo/contraste debe ser activado en la barra de herramientas, clic en “aplicar” para adecuar las definicionesajustadas y “reset” para volver a la definición original. Recomendado para los navegadores de Firefox y Chrome.

Anemia, Bioquímica, Coagulação, Dengue, Dímero D, Drogas Terapêuticas, Eletroforese das Proteínas, FAN HEp2, Hormônios Especializados, Imunologia (exceto leptospirose), Imunoproteínas, Marcadores (Cardíacos, Diabetes, Hipertensão, Metabolismo Ósseo/ Crescimento e Tumorais), PCR Cardíaco, Perfil Lipídico, Proteínas Específicas e Toxicologia.

Item de Ensaio – Coagulação I e II: plasma humano liofilizado. Item de ensaio único por módulo (para todos os ensaios do módulo).

Item de Ensaio – Drogas Terapêuticas: soro bovino liofilizado. Item de ensaio único para todos os ensaios do módulo.

Item de Ensaio – Demais Módulos: soro humano liofilizado. Item de ensaio único por módulo (para todos os ensaios do módulo).

O material Bioquímica é utilizado para as dosagens de bioquímica I e II. O material Imunoeletro é utilizado para as dosagens de imunoproteínas e eletroforese das proteínas. O material “Marcadores Cardíacos - CPK e CK MB Atividade” é para a dosagem de CK total e CK-MB atividade, o material “Marcadores Cardíacos - CK MB Massa” para dosagem de CK-MB massa, o material “Marcadores Cardíacos - BNP” para a dosagem de BNP e o material “Marcadores Cardíacos - proBNP” para a dosagem de NT-proBNP e o material “Marcadores Cardíacos - exceto CK” para os demais ensaios. O material “Marcadores Tumorais – Calcitonina” é utilizado exclusivamente para a dosagem de Calcitonina e Marcadores Tumorais para os demais ensaios. O material “Hormônios – PTH” é utilizado exclusivamente para a dosagem de PTH e “Hormônios – exceto PTH”, para os demais ensaios. Os itens para Imunologia ASO e FR são genéricos e os de PCR específicos por módulo (Quali ou Quanti). Os demais módulos possuem materiais próprios e individuais.

Procedimento de uso: (1) deixar à temperatura ambiente por 20 minutos; (2) retirar a tampa do frasco com muito cuidado, para que o material a ela aderido não seja perdido. Ao retirar a tampa, deve-se colocá-la virada para cima na bancada; (3) reconstituir adicionando água reagente (CLSI/NCCLS) conforme o volume indicado no rótulo, utilizando pipeta calibrada; (4) recolocar a tampa com o mesmo cuidado, para que nenhuma porção do produto liofilizado seja perdida; (5) deixar em repouso por 20 minutos e, em seguida, homogeneizar suavemente até dissolução completa; (6) realizar os ensaios.

Atenção: os materiais de Marcadores de Diabetes devem ser analisados imediatamente após sua reconstituição.

É esperado que alguns itens apresentem resultados superiores à faixa de detecção. Neste caso, é necessário realizar diluições até chegar ao resultado real, exceto se contra-indicado nas instruções (bula) do reagente. Reporte de Resultado – Dímero D: devem ser reportados conforme o tipo de resultado liberado pelo sistema: categóricos (R/NR/I) e/ou valor (ng/mL). O sistema analítico que obtém o valor por titulação deverá reportar apenas os dados categóricos.

Reporte de Resultado – Eletroforese das Proteínas: resultados obtidos em sistemas que permitem um fracionamento da proteína maior que o solicitado no programa (Albumina, Alfa I, Alfa II, Beta e Gama), devem ser somados a fração correspondente para serem reportados.

Este módulo se destina a avaliar a rotina de eletroforese das proteínas, por esta razão não deve-se reportar Albumina obtida por dosagem. Reporte de Resultado FAN HEp2: deve ser reportado um resultado único para cada item de ensaio (pelo qual será definida a avaliação) e incluir os sistemas analíticos usados para definir este resultado.

O campo "resultados" deve ser preenchido e deve ser reportado ao menos um sistema analítico com todos os dados. Mesmo quando adotado apenas um sistema analítico e a "interpretação" já contenha o resultado final, estes dados devem ser transpostos para o campo "resultados", a partir do qual será feita a avaliação.

Reporte de Resultado Imunologia Anticardiolipina, AntiHAV, AntiHBc, Clamídia, CMV, Rubéola, Sífilis, Toxoplasmose e Dengue: deve ser reportado um resultado único de acordo com o tipo de resultado adotado na rotina: categóricos - R/NR/I, título, índice/absorbância/DO ou valor (exemplo: U/mL).

Reporte de Resultado Imunologia Epstein-Barr e Herpes: deve ser reportado um resultado único conforme parágrafo anterior e identificar o formulário correspondente ao kit adotado (genérico ou específico por ensaio).

Reporte de Resultado Imunologia ASO, PCR e Fator Reumatoide: Há um módulo Qualitativo (título, categórico - R/NR/I) e outro Quantitativo (exemplo: mg/L, U/mL). Se o participante participa dos módulos Qualitativo e Quantitativo deve ter atenção para a análise dos itens e reporte de resultado, para evitar troca. No caso de mudança na rotina que demande troca de módulo, deve contatar a ControlLab imediatamente.

Anemia, Bioquímica, Coagulación, Dengue, Dímero D, Drogas Terapéuticas, Electroforesis de Proteínas, FAN HEp2, Hormonas Especializados, Inmunología (excepto Leptospirosis), Marcadores (Cardíacos, Diabetes, Hipertensión, Metabolismo Óseo/ Crecimiento y Tumorales), PCR Cardíaco, Perfil Lipídico, Proteínas Específicas y Toxicologia.

Item de Ensayo - Coagulación I y II: plasma humano liofilizado. Un solo ítem de ensayo por módulo (para todos los ensayos del módulo). Item de Ensayo - Drogas Terapeúticas: suero bovino liofilizado. Un solo Item de ensayo para todos los ensayos del módulo.

Item de Ensayo – Esto de los Módulos: suero humano liofilizado. Un solo Item de ensayo por módulo (para todos los ensayos del módulo). El material Bioquímica I es utilizado para las dosificaciones de bioquímica I y II. El material Inmunoelectro es utilizado para las dosificaciones de inmunoproteínas y electroforesis de las proteínas. Utilizar el material “Marcadores Cardíacos - CPK y CK MB Atividade” es para la dosificacíon de CK total y CK-MB atividade, el material “Marcadores Cardíacos - CK MB Massa” para la dosificacíon de CK-MB massa, el material “Marcadores Cardíacos - BNP” para la dosificacíon de BNP y el material “Marcadores Cardíacos - NT-proBNP” para la dosificacíon de NT-proBNP y el material “Marcadores Cardíacos - exceto CK” para los demais ensayos. Utilizar el material “Marcadores Tumorales-Calcitonina” para la dosificación de Calcitonina y “Marcadores Tumorales” para los demás ensayos. Utilizar el material “Hormonas – PTH” para la dosificación de PTH y “Hormonas – excepto PTH” para los demás ensayos. Los items para Inmunologia ASO y FR son genéricos y los de PCR son específicos por módulo (Cuali ou Cuanti). El resto de los módulos poseen materiales propios e individuales. Procedimiento de uso: (1) dejar a temperatura ambiente por 20 minutos; (2) retirar la tapa del frasco con mucho cuidado para que el material adherido a ella no se pierda. Al retirar la tapa, se debe colocar virada hacia arriba en la meseta; (3) reconstituir adicionando agua calidad reactivo (CLSI/NCCLS), de acuerdo al volumen indicado en el rótulo, utilizando pipeta calibrada; (4) recolocar la tapa con el mismo cuidado para que ninguna partícula del producto liofilizado se pierda; (5) dejar en reposo por 20 minutos y seguidamente homogeneizar suavemente hasta disolución completa;(6) realizar los ensayos.

Atención: Los materiales de Marcadores de Diabetes deben ser analizados inmediatamente después de su reconstitución.

Es esperado que algunos ítems presenten resultados superiores a la faja de detección. En este caso, es necesario realizar diluciones hasta llegar al resultado real, excepto si está contraindicado en las instrucciones (documento) del reactivo.

Reporte de Resultado – Dímero D: debe ser reportado um solo resultado de acuerdo com el tipo de resultado adoptado em la rutina: categóricos (R/NR/I) y/o valor (ng/mL). El sistema analítico que obtiene el valor por titulación deberá reportar exclusivamente los datos categóricos.

Reporte de Resultado – Electroforesis de las Proteínas: resultados obtenidos en sistemas que permiten un fraccionamiento de la proteína mayor que el solicitado en el programa (Albúmina, Alfa I Alfa II, Beta y Gamma), deben ser sumados a la fracción correspondiente para ser reportados. Este módulo se destina a evaluar la rutina de electroforesis de las proteínas, por esta razón no se debe reportar Albúmina obtenida por dosificación.

Reporte de Resultado FAN HEp2: debe ser reportado un solo resultado para cada ítem de ensayo (por el cual será definida la evaluación) y incluir los sistemas analíticos usados para definir este resultado.

El campo “resultados” debe ser llenado y debe ser reportado al menos un sistema analítico con todos los datos. Así cuando solo es adoptado un sistema analítico y la interpretación ya contenía el resultado final, estos datos deben ser transportados para el campo “resultados”, a partir del cual será realizada la evaluación.

Reporte de Resultado Inmunologia Anticardiolipina, AntiHAV, AntiHBc, Clamidia, CMV, Rubeola, Sífilis, Toxoplasmosis y Dengue: debe ser reportado um solo resultado de acuerdo com el tipo de resultado adoptado em la rutina: categóricos - R/NR/I, título, índice/absorbância/DO o valor (ejemplo: U/mL).

Reporte de Resultado Inmunología Epstein-Barr y Herpes: debe ser reportado un resultado único de acuerdo al párrafo anterior e identificar el formulario correspondiente al kit adoptado (genérico o específico por ensayo).

Reporte de Resultado Inmunologia ASO, PCR e Factor Reumatoideo: Hay uno módulo Cualitativo (título, categórico - R/NR/I) y otro Cuantitativo (ejemplo: mg/L, U/mL). Se el participante és dos módulos Cualitativo y Cuantitativo debe ter atención para las análisis de los itens y reporte de resultado, para evitar la trueca. En el caso de mudanza em la rutina que demande trueca de módulo, debe contactar la ControlLab imediatamente.

Instruções de Uso e Critérios Adicionais Bacteriologia Ambulatorial

Item de Ensaio: bactéria liofilizada preparada a partir de cepas puras. Procedimento de uso: (1) Promover a desinfecção na tampa e borda do microtubo com álcool a 70%; (2) retirar a tampa e adicionar lentamente (pela parede interna do frasco) um diluente estéril utilizado na rotina (solução salina, água destilada ou caldo nutritivo do tipo BHI, TSB, tioglicolato) conforme o volume indicado no rótulo, com seringa estéril ou pipetadores com ponteiras estéreis; (3) deixar em repouso para reidratação por 10 minutos; (4) homogeneizar o material suavemente, evitando a formação de bolhas; (5) com uma alça, semear a suspensão em placas com meio de cultura (selecionar o meio conforme o caso clínico); (6) incubar em temperatura, atmosfera e período adequados; (7) proceder a rotina de identificação e teste de sensibilidade (apenas para o item BA-01). NOTA: O restante da suspensão deve ser armazenada a temperatura <0°C.

Cada item de ensaio contém apenas 1 tipo bacteriano. A presença de pleomorfismo colonial pode ocorrer eventualmente devido à estocagem. Sempre que o resultado for negativo ou o participante encontrar mais de uma bactéria, deve ser analisado o restante da suspensão.

Reporte de Resultado: deve-se reportar a bactéria identificada, independente de seu potencial patogênico, assim como a interpretação dos antimicrobianos para o item BA01.

O formulário de resposta contém uma lista de bactérias. Na ausência da bactéria identificada no material, deve-se procurar uma denominação sinônima entre as existentes ou, em último caso, reportar o achado no campo "comentários".

Documentos de Referência: CLSI M2 Padronização dos Testes de Sensibilidade a Antimicrobianos por Disco-difusão; CLSI M100 Normas de Desempenho para Testes de Sensibilidade Antimicrobiana.

Critérios Específicos de Avaliação: como regra geral, se o gênero e a espécie são identificados corretamente, o participante recebe dois adequados (2A); se somente o gênero é identificado corretamente, o participante recebe um adequado e um inadequado (1A/1I); se o microrganismo identificado é diferente, o participante recebe dois inadequados (2I). Exceções podem ser definidas conforme relevância clinica, grau de dificuldade e analise critica dos resultados.

Assim, deve-se ficar atento à estas exceções. Espécies de microrganismos que não são relevantes para o diagnóstico clínico e que são de difícil identificação não serão exigidas. Quando for relevante clinicamente, de fácil identificação ou frequentemente isolada na rotina clínica, a identificação da espécie será exigida na avaliação, assim como quando for baseada em provas básicas, tais como sensibilidade a optoquina, bacitracina, catalase, oxidase, ou mesmo atividade hemolítica.

O laboratório deve ter atenção e evitar reportar apenas o gênero para as situações descritas acima e assim evitar prejuízo a sua avaliação. No teste de sensibilidade a antimicrobianos, para um item de ensaio não respondido, o participante recebe NR (não realizado) em quantidade proporcional ao número de antimicrobianos indicados para serem utilizados.

Bacteriología Ambulatória

Item de Ensayo: bacteria liofilizada preparada a partir de cepas puras. Procedimiento de uso: (1) Promover la desinfección de la tapa y el borde del microtubo con alcohol al 70%; (2) retirar la tapa y adicionar lentamente (por la pared interna del frasco) un diluente estéril utilizado en la rutina (de solución salina, agua destilada o solución nutritiva del tipo BHI, TSB, tioglicolato) de acuerdo al volumen indicado en el rótulo, con jeringuilla estéril o pipetadores con ponteiras estéreis; (3) dejar en reposo para rehidratación por 10 minutos; (4) homogeneizar el material suavemente, evitando la formación de burbujas; (5) con un asa, sembrar la suspensión en placas con medio de cultivo (seleccionar el medio de acuerdo al caso clínico); (6) incubar a temperatura ambiente y periodos adecuados; (7) procede la rutina de identificación y test de sensibilidad (exclusivamente para el item BA-01).

NOTA: El resto de la suspensión debe ser almacenada a temperatura <0°C.

Cada ítem de ensayo contiene solo 1 tipo de bacteria. La presencia de pleomorfismo colonial puede ocurrir eventualmente debido al almacenamiento. Siempre que el resultado fuera negativo o el participante encuentre más de una bacteria, debe ser analizado el resto de la suspensión.

Reporte de Resultado: se debe reportar la bacteria identificada, independientemente de su potencial patogénico, así como la interpretación de los antimicrobianos, para el ítem BA01.

El formulario de respuesta contiene una lista de bacterias. En la ausencia de la bacteria identificada en el material, se debe facilitar una denominación equivalente entre las existentes o, en último caso, reportar el resultado en el espacio de “comentarios”.

Documento de Referencia: CLSI M2 Estandarización de los Test de Sensibilidad a Antimicrobianos por Disco-difusión; CLSI M100 Normas de Desempeño para Test de Sensibilidad Antimicrobiana.

Criterios Específicos de Evaluación: Como regla general, si el género y la especie son identificados correctamente, el participante recibe dos adecuados (2A); si sólo el género es identificado correctamente, el participante recibe uno adecuado y uno inadecuado (1A/1I); si el microorganismo identificado es diferente, el participante recibe dos inadecuados (2I). Las excepciones pueden ser definidas según relevancia clínica, grado de dificultad y análisis crítico de los resultados.

Así, se debe estar atento a estas excepciones. Las especies de microorganismos que no son relevantes para el diagnóstico clínico y que son de difícil identificación no serán exigidas. Cuando fuera relevante clínicamente, de fácil identificación o frecuentemente aislada en la rutina clínica, la identificación de la especie será exigida en la evaluación, así como cuando fuera basada en pruebas básicas, tales como sensibilidad a la optoquina, bacitracina, catalasa, oxidasa o actividad hemolítica. El laboratorio debe prestar atención y evitar reportar sólo el género para las situaciones descritas encima y así evitar perjuicio a su evaluación. En el test de sensibilidad a los antimicrobianos, para un ítem de ensayo no respondido, el participante recibe NR (no respondido) en cantidad proporcional al número de antimicrobianos indicados para ser utilizados.

Bacteriologia Hospitalar

Item de Ensaio: bactéria liofilizada preparada a partir de cepas puras. Procedimento de uso: (1) Promover a desinfecção na tampa e borda do microtubo com álcool a 70%; (2) retirar a tampa e adicionar lentamente (pela parede interna do frasco) um diluente estéril utilizado na rotina (solução salina, água destilada ou caldo nutritivo do tipo BHI, TSB, tioglicolato) conforme o volume indicado no rótulo, com seringa estéril ou pipetadores com ponteiras estéreis; (3) deixar em repouso para reidratação por 10 minutos; (4) homogeneizar o material suavemente, evitando a formação de bolhas; (5) com uma alça, semear a suspensão em placas com meio de cultura (selecionar o meio conforme o caso clínico); (6) incubar em temperatura, atmosfera e período adequados; (7) proceder a rotina de identificação e teste de sensibilidade (apenas para o item BH-01). NOTA: O restante da suspensão deve ser armazenada a temperatura <0°C.

A proposta deste módulo é simular o material clínico da rotina laboratorial, com ênfase em microbiologia hospitalar. Um item de ensaio pode conter até 3 patógenos ou mesmo ser constituído apenas por bactérias da microbiota normal. Assim, é necessária uma análise criteriosa dos diferentes morfotipos, que podem estar presentes na cultura para que sejam identificados todos os microrganismos.

Definidos os patógenos potenciais, é necessário selecionar os antimicrobianos a serem testados para o item BH01, conforme a rotina do laboratório. Deve ser reportado “ausência de potencial patógeno” no campo “1º patógeno” quando for identificada apenas a microbiota normal. Neste caso, o teste de sensibilidade também não deverá ser realizado. É possível reportar até 3 potenciais patógenos para cada item de ensaio. O laboratório deve começar preenchendo o campo “1º patógeno” com o microrganismo encontrado ou com a opção “ausência de potencial patógeno” se nenhum patógeno tiver sido encontrado. Os campos “2º patógeno” e “3º patógeno” devem ser preenchidos quando houver mais microrganismos patógenos, caso contrário, deve-se deixar em branco. O formulário de resposta contém uma lista de bactérias. Na ausência da bactéria identificada no material, deve-se procurar uma denominação sinônima entre as existentes ou, em último caso, reportar o achado no campo "comentários".

Documentos de referência: CLSI/NCCLS M2 Padronização dos Testes de Sensibilidade a Antimicrobianos por Disco-difusão; CLSI/NCCLS M100 Normas de Desempenho para Testes de Sensibilidade Antimicrobiana; Critérios Específicos de Avaliação: Os microrganismos identificados devem ser classificados quanto ao seu potencial patogênico, de acordo com o material clínico informado. Cada patógeno identificado é avaliado individualmente, frente ao gênero e espécie, conforme descrição prévia para o módulo Bacteriologia Ambulatorial. Para cada microrganismo patógeno identificado incorretamente ou não encontrado, o participante recebe dois inadequados (2I).

Para cada patógeno potencial indicado, é requerida a realização do Teste de Sensibilidade para o item BH01, conforme a sua aplicabilidade. Os critérios adotados são os mesmos descritos para bacteriologia básica.

Bacteriología Hospitalaria

Item de Ensayo: bacteria liofilizada preparada a partir de cepas puras. Procedimiento de uso: (1) Promover la desinfección de la tapa y el borde del microtubo con alcohol al 70%; (2) retirar a tampa e adicionar

lentamente (pela parede interna do frasco)un diluente estéril utilizado en

la rutina (de solución salina, agua destilada o solución nutritiva del tipo BHI, TSB, tioglicolato) de acuerdo al volumen indicado en el rótulo, con jeringuilla estéril o pipetadores con ponteiras estéreis; (3) dejar en reposo para rehidratación por 10 minutos; (4) homogeneizar el material suavemente, evitando la formación de burbujas; (5) con un asa, sembrar la suspensión en placas con medio de cultivo (seleccionar el medio de acuerdo al caso clínico); (6) incubar a temperatura ambiente y periodos adecuados; (7) procede la rutina de identificación y test de sensibilidad (exclusivamente para el item BH-01).

NOTA: El resto de la suspensión debe ser almacenada a temperatura <0°C.

La propuesta de este módulo es similar al material clínico de rutina laboratorial, con énfasis en microbiología de unidades hospitalarias. Un ítem puede contener hasta 3 patógenos o estar constituido por bacterias de la flora normal. Así, es necesario un análisis juicioso de los diferentes morfotipos, que pueden estar presentes en el cultivo para que sean identificados todos los microorganismos.

Definidos los patógenos potenciales, es necesario seleccionar los antimicrobianos a ser testados para BH01, de acuerdo a la rutina del laboratorio. Debe ser reportado “ausencia potencial de agente patógeno” en el campo “1º patógeno” siempre que el análisis fuera de la flora normal. En este caso, el test de sensibilidad no deberá ser realizado.

Es posible reportar 3 patógenos potenciales para cada ítem de ensayo. El laboratorio debe comenzar llenando el campo”1º patógeno” con el microorganismo encontrado o con la opción “ausencia de potencial patógeno” si ninguno hubiera sido encontrado. Los campos “2º patógeno” y “3º patógeno” deben ser llenados cuando hubiera más microorganismos patógenos, en caso contrario, debe dejarse en blanco.

El formulario de respuesta contiene una lista de bacterias. En la ausencia de la bacteria identificada en el material, se debe facilitar una denominación semejante entre las existentes o, en último caso, reportar el resultado en el espacio de “comentarios”.

Documento de referencia: CLSI/NCCLS M2 La Estandarización de los Test de Sensibilidad para Antimicrobianos por Disco-difusión; CLSI/NCCLS M100 Normas de Desempeño para Test de Sensibilidad Antimicrobiana; Criterios Específicos de Evaluación: Los microorganismos identificados deben ser clasificados, según su potencial patogénico, de acuerdo con el material clínico informado. Cada patógeno identificado es evaluado individualmente, frente al género y especie, de acuerdo a la descripción previa para el módulo Bacteriología Ambulatória. Para cada microorganismo patógeno identificado incorrectamente o no encontrado, el participante recibe dos inadecuados (2I).

Para cada patógeno potencial indicado, es requerida una realización del Test de Sensibilidad para el ítem BH01, de acuerdo a su aplicabilidad. Los criterios adoptados son los mismos descritos para la bacteriología básica.

Instruções de Uso e Critérios Adicionais Bacterioscopia BAAR

Item de Ensaio BAAR: esfregaço preparado com suspensão simulando material clínico de escarro. Pode ser fornecido em lâmina (fixada para transporte) ou como imagem (lâmina digitalizada).

Procedimento de uso - lâmina: (1) Marcar a lâmina – identificação do item de ensaio – com lápis dermográfico (lápis grafite), para evitar perder a identificação durante a fixação e coloração (estes processos danificam a etiqueta); (2) fixar levemente o esfregaço no calor; (3) corar a lâmina pelo método Ziehl Neelsen; (4) deixar secar naturalmente, não utilizar papel absorvente para acelerar, para evitar a remoção do material; (5) realizar leitura qualitativa (em Líquor) ou quantitativa de BAAR. Para lâminas recebidas coradas, pular as etapas de 1 a 4.

Procedimento de uso – imagem: ver instruções nas páginas 2 e 3, em “Microscopia por Imagem”. Realizar leitura qualitativa (em Líquor) ou quantitativa de BAAR conforme rotina.

Documento de Referência: Manual de Bacteriologia da Tuberculose - Ministério da Saúde, SVS, CRPHFF – 3ª edição, Rio de Janeiro, 2005.

Bacterioscopía BAAR

Item de Ensayo BAAR: extendido preparado con suspensión simulando material clínico de esputo. Puede ser suministrado en lámina (fijada para el transporte) o como imagen (lámina digitalizada).

Procedimiento de uso - lámina: (1) Marcar lámina – identificación del ítem de ensayo - con lápiz dermográfico (lápiz grafiti) para evitar perder la identificación durante la fijación y coloración (estos procesos dañan la etiqueta); (2) fijar levemente la extensión en el calor; (3)colorear la lámina por el método Ziehl Neelsen; (4) dejar secar naturalmente, no utilizar papel absorbente para acelerar, para evita el movimiento del material; (5) realizar lectura cualitativa (en líquido cefalorraquídeo) o cuantitativa de BAAR. Para las láminas coloreadas recibidas, foliar las etapas de 1 a 4.

Procedimiento de uso – imagen: ver instrucciones em las páginas 2 y 3, en “Microscopia por Imagen”. Realizar lectura cualitativa (en líquido cefalorraquídeo) ou cuantitaiva de BAAR y proceder de acuerdo a la rutina. Documento de Referencia: Manual de Bacteriologia da Tuberculose - Ministério da Saúde, SVS, CRPHFF – 3ª edição, Rio de Janeiro, 2005.

Bacterioscopia Gram

Item de Ensaio Gram: esfregaço preparado a partir de crescimento bacteriano em fase logarítimica. Pode ser fornecido em lâmina (fixada para transporte) ou como imagem (lâmina digitalizada).

Procedimento de uso - lâmina: (1) Marcar a lâmina – identificação do item de ensaio-com lápis dermográfico (lápis grafite), para evitar perder a identificação durante a fixação e coloração (estes processos danificam a etiqueta); (2) fixar as lâminas a quente; (3) corar a lâmina pelo método de Gram; (4) realizar a leitura observando a morfologia bacteriana e a afinidade tintorial. Para lâminas recebidas coradas, pular as etapas 1, 2 e 3.

Procedimento de uso – imagem: ver instruções nas páginas 2 e 3, em “Microscopia por Imagem”.

Interpretação/Reporte de Resultado: (1) as lâminas devem ser interpretadas como sendo provenientes de hemocultura positiva; (2) indicar a afinidade da célula microbiana ao corante de Gram; (3) indicar a forma celular; (4) quando possível, sugerir o arranjo predominante.

O formulário de resposta contém uma lista de opções de resposta. Na ausência da resposta correspondente ao encontrado no material, deve-se procurar uma denominação sinônima entre as existentes e, em último caso, reportar o achado no campo "comentários".

Bacterioscopía Gram

Ítem de Ensayo Gram: extendido preparado a partir de crecimiento bacteriano en fase logarítmica Puede ser suministrado en lámina (fijada para el transporte) o como imagen (lámina digitalizada).

Procedimiento de uso - lámina: (1) Marcar la lámina - identificación del ítem de ensayo- con lápiz dermográfico (lápiz grafiti), para evitar perder la identificación durante la fijación y coloración (estos procesos dañan la etiqueta); fijar las láminas al calor; (3) colorear la lámina por el método Gram;(4) realizar la lectura observando la morfología bacteriana y la afinidad tintoreal. Para las láminas coloreadas recibidas, foliar las etapas 1, 2 y 3.

Procedimiento de uso – imagen: ver instrucciones em las páginas 2 e 3, en “Microscopia por Imagen”.

Interpretación/Reporte de Resultado: (1) las láminas deben ser interpretadas como provenientes de hemocultivo positivo; (2) indicar la afinidad de la célula microbiana al colorante de Gram; (3) indicar la forma celular; (4) cuando sea posible, sugerir el orden predominante.

El formulario de respuesta contiene una lista de opciones de respuesta. En la ausencia de la respuesta adecuada a la encontrada en el material, se debe facilitar una denominación semejante entre las existentes o, en último caso, reportar el resultado en el espacio de “comentarios”.

Biologia Molecular

Item de Ensaio: plasma humano liofilizado e sangue total em EDTA. Item de ensaio individual por ensaio. Cada ensaio possui um material específico.

Procedimento de uso – plasma humano liofilizado: (1) deixar à temperatura ambiente (15ºC-30ºC) por 20 minutos; (2) reconstituir adicionando água reagente (CLSI/NCCLS) conforme o volume indicado no rótulo, utilizando pipeta calibrada; (3) deixar em repouso por 20 minutos e, em seguida, homogeneizar suavemente até dissolução completa; (4) realizar os ensaios.

Procedimento de uso – sangue total: (1) Deixar o material à temperatura ambiente (15ºC-30ºC) por 15 minutos; (2) homogeneizar em homogeneizador orbital por 2 minutos ou, rolar entre as palmas das mãos 12 vezes ou por 20 segundos, invertendo o frasco e repetindo o rolamento até que todo o conteúdo esteja bem homogeneizado; (3) retirar a tampa e proceder conforme rotina; (4) reportar imediatamente os resultados. O material denominado ''HIV Quali'' destina-se à detecção de cDNA viral. O material constitui-se de sangue total e deve ser analisado apenas pelos laboratórios que possuem a metodologia PCR, possibilitando a estes aplicá-la para análise e detecção do cDNA viral integrado ao genoma da célula. São considerados apenas os resultados correspondentes. A detecção de HIV-RNA deve ser feita para o item “HIV Quanti”.

Reporte de Resultado: em adição aos resultados, deve-se identificar o sistema analítico, com cuidado especial a metodologia PCR (HBV-DNA e HIV-DNA) e Rt-PCR (HCV-RNA e HIV-RNA).

Critérios Específicos de Avaliação: para resultados quantitativos, o resultado do participante é avaliado conforme estatística de grupo, obtida com a transformação dos resultados para logaritmo, exceto para materiais negativos/não-reagentes, cuja avaliação é feita conforme resultado qualitativo reportado.

Biología Molecular

Ítem de Ensayo: plasma humano liofilizado y sangre total con EDTA. Ítem de ensayo individual por ensayo. Cada ensayo posee un material específico.

Procedimiento de uso – plasma humano liofilizado: (1) dejar a la temperatura ambiente (15ºC-30ºC) por 20 minutos; (2) reconstituir adicionando agua con calidad reactivo (CLSI/NCCLS), de acuerdo al volumen indicado en el rótulo, utilizando pipetas calibradas; (3) Dejar en reposo por 20 minutos y, seguidamente, homogeneizar suavemente hasta la disolución completa; (4) realizar los ensayos.

Procedimiento de uso – sangre total:Procedimiento de uso: (1) Dejar el

material a temperatura ambiente (15ºC-30ºC) por 15 minutos; (2) homogeneizar en homogeneizador orbital por 2 minutos o, rodar entre las palmas de las manos 12 veces o por 20 segundos, invirtiendo el frasco y repitiendo el rodamiento hasta que todo el contenido esté bien homogeneizado; (3) retirar la tapa y proceder de acuerdo a la rutina; (4) reportar inmediatamente los resultados.

El material denominado “HIV Quali” está destinado a la detección de cDNA viral. El material está constituido de sangre total y debe ser analizado sólo por los laboratorios que poseen la metodología PCR, posibilitando a estos aplicarlo para análisis y detección del cDNA viral integrado al genoma de la célula. Son considerados sólo los resultados correspondientes. La detección de HIV-RNA debe ser realizada para ítems “HIV Quanti”. Reporte de Resultado: adicionando a los resultados, se debe identificar el sistema analítico, con cuidado especial a la metodología PCR (HBV-DNA y HIV-DNA) y Rt-PCR (HCV-RNA).

Criterios Específicos de Evaluación: para resultados cuantitativos, el resultado del participante es evaluado de acuerdo a las estadísticas de grupo, obtenida con la transformación de los resultados para logaritmo, excepto para materiales negativos/no-reactivos, cuya evaluación es realizada de acuerdo al resultado cualitativo reportado.

CD34+ (Ensaio de Proficiência e Interlaboratorial)

Item de Ensaio: hemoderivado manipulado, com estabilizante e conservante. O material pode apresentar aparência diferente devido a manipulação, mas isto não configura deterioração e não inviabiliza seu uso.

Procedimento de uso: Atenção para os procedimentos de biossegurança, material comumente coletado de doadores infectados (Ex.:HIV+, HCV+,HTLV+). (a) homogeneizar em homogeneizador orbital por 2 minutos ou, rolar entre as palmas das mãos 12 vezes ou por 20 segundos, invertendo o frasco e repetindo o rolamento até que todo o conteúdo esteja bem homogeneizado; (b) retirar a tampa e proceder conforme rotina, adquirindo minimamente 75.000 células totais e 100 células positivas para CD34, independente da estratégia de GATE de rotina.

Reporte de resultados de Plataforma Dupla (no qual valores percentuais são obtidos do citômetro e valores absolutos são calculados a partir da leucometria fornecida por contador hematológico): deve reportar os valores percentuais (%) liberados pelo equipamento e calcular os valores absolutos (células//µL), usando a leucometria fornecida pela ControlLab . Neste dado já foram descontados eritroblastos.

Reporte de resultados de Plataforma Única (no qual valores absolutos são obtidos diretamente do citômetro de fluxo, com a utilização de Beads de quantificação - partículas de látex, independente da contagem de leucócitos de um contador hematológico): reportar os resultados percentuais(%) e os valores absolutos (células/µL) obtidos na análise do citômetro.

Um interlaboratorial é realizado mensalmente para valoração do controle interno deste material. Desta forma, deve-se realizar uma dosagem dos lotes e reportar os resultados imediatamente para a elaboração da bula, que é disponibilizada em seguida. Instruções para o uso como controle interno devem ser obtidas na bula.

CD34+ (Ensayo de Aptitud e Interlaboratorial)

Item de Ensayo: hemoderivado manipulado, con estabilizante y conservante. El material puede presentar apariencia diferente debido a la manipulación, pero esto no representa deterioro y tampoco inutiliza su uso. Procedimiento de uso: Atención para los procedimientos de bioseguridad, material comúnmente procedente de donantes infectados (Ej.: HIV+, HCV+, HTLV+). (a) Homogeneizar en homogeneizador orbital por 2 minutos o, rodar entre las palmas de las manos 12 veces o por 20 segundos, invirtiendo el frasco y repitiendo el rodamiento hasta que todo el contenido esté bien homogeneizado; (b) retirar la tapa y proceder de acuerdo a la rutina, adquiriendo mínimamente 75.000 células totales y 100 células positivas para CD34, independiente de la estrategia de GATE de rutina.

Reporte de resultados de Plataforma Doble (en cuales valores porcentuales son obtenidos del citómetro y valores absolutos son calculados a partir de la leucometría suministrada por contador hematológico): debe reportar los valores porcentuales (%) liberados por el equipamiento y calcular los valores absolutos (células//µL), usando la leucometría suministrada por ControlLab. En este dato ya fueron descontados los eritroblastos.

Reporte de resultados de Plataforma Única (en cuales valores absolutos son obtenidos directamente del citómetro de flujo, con la utilización de Beads de cuantificación - partículas de látex, independientes del conteo de leucocitos de un contador hematológico): reportar los resultados porcentuales (%) y los valores absolutos (células/µL) obtenidos en el análisis del citómetro.

Un interlaboratorial es realizado mensualmente para valoración del control interno de este material. De esta forma, se debe realizar una dosificación de los lotes y reportar los resultados inmediatamente para la elaboración del documento, que está disponible enseguida. Instrucciones para el uso como control interno deben ser obtenidas en el documento.

Citologia Ginecológica

Item de Ensaio Citologia Ginecológica: Esfregaço fixado e corado pelo Papanicolaou obtido a partir de secreção vaginal/ ectocervical/endocervical

e preparado pelos métodos convencional e líquido (SurePath®_,

Liqui-Prep® e ThinPrep®). Cada item corresponde a um caso clínico diferente.

Fornecido em imagem (lâmina digitalizada).

Procedimento de uso: ver instruções nas páginas 2 e 3, em “Microscopia por Imagem”. Realizar leitura da imagem correspondente ao método utilizado na rotina do seu laboratório. Todas as áreas digitalizadas correspondentes ao mesmo item de ensaio devem ser integralmente analisadas para reporte do resultado. A análise de somente uma das imagens pode comprometer o resultado final do laboratório.

Reporte de Resultado: O critério de adequabilidade da amostra não é contemplado no programa em função das imagens disponibilizadas serem previamente analisadas por profissionais da área, sendo satisfatórias para análise. Dados clínicos com informações importantes para cada imagem são fornecidos de forma a contribuir para o correto diagnóstico.

Epitélios Representativos: reportar até três opções

Microbiologia: reportar até quatro opções. No caso de não encontrar nenhum microrganismo na imagem analisada, reportar como "Flora inaparente".

Alterações Celulares Benignas Reativas ou Reparativas: reportar até quatro opções. Quando o Diagnóstico Descritivo for "Dentro dos limites de normalidade", a opção Ausência de Alterações Celulares Benignas Reativas ou Reparativas deverá ser selecionada.

Alterações Celulares Atípicas/ Neoplásicas: reportar até duas opções. Quando o Diagnóstico Descritivo for "Dentro dos limites de normalidade", a opção "Ausência de alterações suspeitas de malignidade ou malignas" deverá ser selecionada.

Critérios Específicos de Avaliação: Dos ensaios solicitados, serão avaliados apenas os considerados relevantes para a definição da conduta clínica do paciente (Diagnóstico Descritivo, Alt. Cels. Benignas Reativas ou Reparativas, Alt. Cels. Atípicas/ Neoplásicas, Outras Neoplasias malignas). "Diagnóstico Descritivo"sempre será avaliado a cada rodada, e os demais ensaios, podem ou não ser avaliados dependendo do caso clínico enviado.

Citologia Ginecológica

Item de Ensayo Citología Ginecológica: Extensión fijada y coloreada por

Papanicolaou obtenido a partir de secreción vaginal/

ectocervical/endocervical y preparado por los métodos convencionales y líquido (SurePath®, Liqui-Prep® e ThinPrep®). Cada ítem corresponde a un caso clínico diferente. Proporcionado en imagen (lámina digitalizada). Procedimiento de uso: ver instrucciones en las páginas 2 y 3, en “Microscopía por Imagen”. Realizar la lectura de la imagen correspondiente al método utilizado en la rutina de su laboratorio. Todas las áreas digitalizadas correspondientes al mismo ítem de ensayo deben ser integralmente analizadas para el reporte del resultado. El análisis de solo una de las imágenes puede comprometer el resultado final del laboratorio. Reporte de Resultados: El criterio de adecuación de la muestra no es contemplado en el programa en función de las imágenes disponibles que están previamente analizadas por profesionales del área, siendo satisfactorias para el análisis. Datos clínicos con informaciones importantes para cada imagen son suministrados de forma tal que contribuyen al correcto diagnóstico.

Epitelios representados: reportar hasta tres opciones.

Microbiología: reportar hasta cuatro opciones. En el caso de no encontrar ningún microorganismo en la imagen analizada, reportar como “Flora inaparente”.

Alteraciones Celulares Benignas o Regenerativas: reportar hasta cuatro opciones. Cuando el diagnóstico descrito fuera “Dentro de los límites normales”, la opción Ausencia de alteraciones Celulares Benignas Reactivas o Regenerativas, deberá ser seleccionada.

Alteraciones Celulares Atípicas/Neoplásicas: reportar, hasta dos opciones. Cuando el diagnóstico descrito fuera “Dentro de los límites normales”, la opción “Ausencia de alteraciones sospechosas de malignidad o malignas”, deberá ser seleccionada.

Criterios específicos de Evaluación: De los ensayos solicitados, serán evaluados exclusivamente los considerados relevantes para definición de la conducta clínica del paciente (Diagnóstico Descriptivo, Alt. Cels. Benignas Reactivas o Reparativas, Alt. Cels. Atípicas/Neoplásicas, Otras Neoplasias malignas).

El “Diagnóstico descriptivo” siempre será evaluado en cada envío y los demás ensayos, pueden o no ser evaluados dependiendo del caso clínico enviado.

Instruções de Uso e Critérios Adicionais Citometria de Fluxo

Item de Ensaio: sangue humano fresco, colhido em EDTA. Item de ensaio único para todos os ensaios.

Procedimento de uso: O material deve ser analisado imediatamente após o recebimento. Atenção para os procedimentos de biossegurança, material comumente coletado de doadores HIV (1) homogeneizar em homogeneizador orbital por 2 minutos ou, rolar entre as palmas das mãos 12 vezes ou por 20 segundos, invertendo o frasco e repetindo o rolamento até que todo o conteúdo esteja bem homogeneizado; (2) retirar a tampa e proceder conforme rotina; (3) Adquirir no mínimo, 10.000 células no GATE para os marcadores disponíveis no laboratório; (4) usar o histograma principal SS x FS ou SS x CD45.

Caso haja presença de autoaglutinação in-vitro, é necessário incubar por 20 minutos em banho-maria a 37ºC antes de marcar para diminuir o fenômeno e facilitar a lise.

Reporte de Resultado: O citômetro de fluxo pode operar como plataforma única ou dupla. Para os analitos CD45+; CD3+; CD4+; CD3+CD4+; CD3+CD8+ e CD8+, deve-se informar a plataforma utilizada:

1. Plataforma única: os resultados em valores absolutos (células/µL) são obtidos diretamente do citômetro de fluxo, com a utilização de Beads de quantificação (partículas de látex) e sem depender da contagem de linfócitos de um contador hematológico. O participante que escolher esta plataforma, deve reportar os resultados em valores absolutos (células/µL) e percentuais (%). O equipamento FACSCount opera somente em plataforma única.

2. Plataforma dupla: utiliza o citômetro de fluxo para determinar os valores percentuais de cada marcador, em conjunto com um contador hematológico para determinar o valor absoluto da população linfocitária (células/µL). Neste caso o participante deve reportar seus resultados apenas em valores % (percentuais).

Para os ensaios CD14+; CD45+CD14-; CD19+; CD2+; CD56+ e CD3-CD56/16+ o participante deve reportar os resultados apenas em valores % (percentual).

NOTA 1: Os valores em percentual devem ser obtidos da população de linfócitos e não do CD3+ (Linfócitos T) ou de CD45+ (Pan leucócito). NOTA 2: Usuários do equipamento FACSCount devem reportar somente resultados para CD3+, CD3+CD4+ e CD3+CD8+ e em valores absolutos (células/µL) e percentuais (%). Alguns destes equipamentos liberam o resultado de CD3+CD4+ como sendo CD4+, neste caso deve-se preencher o resultado no campo CD3+CD4+. O mesmo ocorre para CD3+CD8+, quando é liberado pelo equipamento como CD8+.

Citometría de Flujo

Item de Ensayo: sangre humana fresca, con EDTA. Item de ensayo único para todos los ensayos.

Procedimiento de uso: Realizar el análisis inmediatamente después de

recibir las muestras. Atención para los procedimientos de bioseguridad, material comúnmente colectado por los donantes HIV (1) homogeneizar en homogeneizador orbital por 2 minutos o, rodar entre las palmas de las manos 12 veces o por 20 segundos, invirtiendo el frasco y repitiendo el rodamiento hasta que todo el contenido este bien homogeneizado; (2) retire la tapa y proceda de acuerdo a la rutina. (3) Adquirir un mínimo, 10.000 células en el GATE para los marcadores disponibles en el laboratorio; (4) Usar el histograma principal SS x FS o SS x CD45. En caso de existir presencia de autoaglutinación in-vitro, es necesario, antes de marcar, incubar por 20 minutos en baño de maría a 37ºC, para disminuir el fenómeno y facilitar la lisis.

Reporte de Resultado: El citómetro de flujo puede operar como plataforma única o doble. Para los analitos, CD45+, CD3+, CD4+, Cd3+CD4+, CD3+CD8+ y CD8+, se debe informar la plataforma:

1. Plataforma única: los resultados en valores absolutos (células/ µL) son obtenidos directamente del citómetro de flujo, con la utilización de Beads de cuantificación (partículas de latex) y sin depender del conteo de linfocitos de un contador hematológico. El participante que escoja esta plataforma, debe reportar los resultados en valores absolutos (células/ µL) e percentuales (%), El equipo FACSCount, opera con una única plataforma.

2. Plataforma doble: utiliza el citómetro de flujo para determinar los valores porcentuales de cada marcador, en conjunto con un contador hematológico para determinar el valor absoluto de la población linfocitaria (células/µL). En este caso el participante debe reportar sus resultados solo en valores porcentuales (%).

Para los ensayos CD14+; CD45+CD14-; CD19+; CD2+; CD56+ y CD3-CD56/16+, el participante debe reportar los resultados solo en valores % (porcentuales).

NOTA 1: Los valores en por cientos, deben ser obtenidos de la población de linfocitos y no de CD3+ (Linfocitos T) o de CD45+ (Pan leucocito). NOTA 2: Los usuarios del equipo FACSCount, deben reportar solamente resultados para CD3+, CD3+CD4+ y CD3+CD8+ y en valores absolutos (células/ µL) e percentuales (%). Algunos de estos equipo liberan el resultado de CD3+CD4+ como si fuera CD4+, en este caso, se debe llenar el resultado en la casilla CD3+CD4+. Lo mismo ocurre para CD3+CD8+, cuando es liberado por el equipo como CD8+.

Espectrofotômetro

Item de Ensaio: solução sintética. Item único para a leitura em todos os comprimentos de onda.

Procedimento de uso: (1) homogeneizar, sem agitar; (2) estabilizar o equipamento por 30 minutos; (3) utilizar cubetas limpas e íntegras: uma com água reagente e outra com o material para a leitura das absorbâncias. Reporte de Resultado: Os participantes devem reportar apenas os comprimentos de onda usados na rotina, nos campos correspondentes ao exato comprimento de onda disponível no formulário. Alguns comprimentos de onda próximos (por exemplo 500 e 505, 578 e 580) existem para atender a equipamentos com seleção fixa.

Espectrofotómetro

Ítem de Ensayo: solución sintética. Ítem único para la lectura de todas las longitudes de onda.

Procedimiento de uso: (1) homogeneizar, sin agitar; (2) estabilizar el equipamiento por 30 minutos; (3) utilizar cubetas limpias e íntegras: una con agua calidad reactivo y otra con el material para la lectura de las absorbancias.

Reporte de Resultado: Los participantes deben reportar solo las longitudes de onda usados en la rutina, en los campos correspondientes a la longitud de onda exacta disponible en el formulario. Algunas longitudes de onda próximos (por ejemplo 500 y 505, 578 y 580) existen para atender a equipamientos con selección fija.

Esperma Contagem Celular e Vitalidade

Item de Ensaio: (1) esperma humano líquido estabilizado com conservante. (2) esfregaço preparado a partir de esperma humano, corado com eosina-nigrosina. Pode ser fornecido em lâmina (montado com entelan e protegido por lamínula) ou como imagem (lâmina digitalizada).

Procedimento de uso – Esperma líquido: (1) Deixar o material à temperatura ambiente (15º a 30ºC) por 30 minutos; (2) Para deslocar o sedimento formado no fundo do tubo e desfazer os grumos, passar o material no vórtex, em baixa velocidade, por 5-10 segundos, até que o líquido claro se torne turvo; (3) homogeneizar o material em homogeneizador orbital por 2 minutos ou, rolar entre as palmas das mãos 12 vezes ou por 20 segundos, invertendo o frasco e repetindo o rolamento até que todo o conteúdo esteja bem homogeneizado; (4) antes da abertura, bater o frasco levemente na bancada para que o líquido residual que esteja na tampa não seja perdido; (5) abrir o tubo e pipetar o material utilizando pipeta calibrada; (6) se necessária diluição, pipetar o volume limpando a ponteira pela parte externa. Rinsar várias vezes a ponteira com o próprio líquido diluidor; É recomendado o uso de solução salina 0,9% ou Tampão fosfato-salino 0,1M (PBS) para a diluição do material. Na ausência destes, diluir com o anti-aglutinante que utiliza em sua rotina. (7) realizar análise conforme metodologia de contagem adotada na rotina. Pequenos grumos podem ser observados e devem ser desprezados na contagem.

Este material não é próprio para contagem por automação, apenas para contagem em câmara (Neubauer, Makler etc.)

Procedimento de uso - Lâmina: realizar a contagem em microscópio, conforme padrão de leitura de coloração por eosina-nigrosina, considerando a posição do esfregaço em quase toda a área da lâmina, a partir do lado oposto ao da etiqueta.

Procedimento de uso – imagem: ver instruções nas páginas 2 e 3, em “Microscopia por Imagem”.

Reporte de Resultado – Esperma líquido: O resultado deve ser reportado em milhões/mL.

Orientações complementares: consulte o documento "Orientações para Esperma Contagem" disponível no link ‘Educação’ do Sistema Online. Documento de referência para leitura de lâmina corada eosina-nigrosina: (1) World Healthy Organization. “WHO Laboratory Manual for the examination and processing of human semen.” 5ª ed., 2010. Link: whqlibdoc.who.int/publications/2010/9789241547789_eng.pdf

Esperma: Conteo Celular y Vitalidad

Item de Ensayo: (1) esperma humano líquido estabilizado con preservo. (2) láminas con extensión preparada a partir de esperma humano, coloreado con eosina-nigrosina Puede ser suministrado en lámina (montado con entelan y protegido por una laminilla) o como imagen (lámina digitalizada). Procedimento de uso – Esperma líquido: (1) Dejar el material a temperatura ambiente (15º a 30ºC) por 30 minutos; (2) Para arrastrar el sedimento formado en el fondo del tubo y dsolver los grumos, pasar el material por el vórtex, a baja velocidad, por 5-10 segundos, hasta que el líquido claro se torne turbio; (3) homogeneizar el material en homogeneizador orbital por 2 minutos o, rodar entre las palmas de las manos 12 veces o por 20 segundos, invirtiendo el frasco y repitiendo el rodamiento hasta que todo el contenido esté bien homogeneizado; (4) antes de la apertura, golpear el frasco suavemente en la meseta para que el líquido residual que esté en la tapa no se pierda; (5) abrir el tubo y pipetear el material utilizando pipeta calibrada; (6) es necesario diluir, pipetear el volumen limpiando la punta por la parte externa. Enjuagar varias veces la punta con el propio líquido diluente; Se recomienda el uso de solución salina al 0,9% o Tampon fosfato-salino 0,1 M (PBS) para la dilución del material: En ausencia de estos, diluir con el anti-aglutinante que utiliza en la rutina. (7) realizar análisis de acuerdo a la metodología de conteo adoptada a la rutina. Pequeños grumos pueden ser observados y deben ser despreciados en el conteo.

Este material no es propio para conteo por automatización, sólo para conteo en cámara (Neubauer, Makler etc.).

Procedimiento de uso - Lámina: realizar el conteo en microscopio, según patrón de lectura de coloración por eosina-nigrosina considerando la posición de la extensión en casi toda el área de la lámina, a partir del lado opuesto de la etiqueta.

Procedimiento de uso – imagen: ver instrucciones em las páginas 2 y 3, en “Microscopia por Imagen”.

Reporte de Resultado - Esperma líquido: El resultado debe ser reportado en millones/mL.

Orientaciones complementares: consulte el documento "Orientações para Esperma Conteo Celular”, disponible en el link ‘Educación’ del Sistema Online.

Documento de referencia para la lectura de la lámina coloreada eosina-nigrosina: (1) World Healthy Organization. “WHO Laboratory Manual for the examination and processing of human semen.” 5ª ed., 2010. Link: whqlibdoc.who.int/publications/2010/9789241547789_eng.pdf