GUIA DOS MÉTODOS DE REFERÊNCIA

(1)

GUIA DOS MÉTODOS DE

REFERÊNCIA

MICROBIOLOGIA PARA ÁGUA

(2)

SUMÁRIO:

Coliformes e coliformes termorresistentes Pesquisa e Contagem Página 3

(Semeadura em meio líquido – NPP)

Enterococcus intestinais Pesquisa e Contagem Página 4

(Filtração por membrana)

Escherichia coli e coliformes Pesquisa e Contagem Página 5

(Filtração por membrana)

Escherichia coli e coliformes Pesquisa e Contagem Página 6

Legionella spp. e Legionella pneumophila Pesquisa e Contagem Página 7

(Semeadura direta depois de concentração por centrifugação ou filtração por membrana)

Legionella Pesquisa e Contagem Página 8

(Filtração direta por membrana)

Microrganismos viáveis Contagem Página 8

Pseudomonas aeruginosa Pesquisa e Contagem Página 9

“BIOKAR Diagnóstico coloca o seu conhecimento à sua disposição para fornecer

soluções simples e rápidas para atender suas necessidades.

Os laboratórios de microbiologia devem obedecer os critérios regulamentares que estão

em constante evolução, e é por isso que nós oferecemos este guia de métodos de

referência para ajudá-lo diariamente na aplicação das normas às suas atividades.”

C:

E:

L:

M:

(3)

Salmonella spp. Pesquisa Página 10-11

Esporos de bactérias anaeróbicas

sulfito-redutase e Clostridium sulfito-sulfito-redutase Pesquisa e Contagem Página 12

Esporos de microrganimos anaeróbicos

sulfito-redutase (Clostridia) (Enriquecimento Pesquisa e Contagem Página 13

em meio líquido)

Esporos de microrganimos anaeróbicos

sulfito-redutase (Clostridia) (Filtração por Pesquisa e Contagem Página 13

membrana)

Staphylococcus patogênico Pesquisa e Contagem Página 14-15

(Filtração direta por membrana)

ANEXOS:

Anexo A: Outras normas de microbiologia para água.

Anexo B: Testes para água.

Anexo C: Métodos alternativos rápidos para a microbiologia da água.

Para maiores informações, entre em contato com a gente.

S:

(4)

Princípios: - Semeadura da amostra para ensaio recolhida em

tubos de meio presuntivo.

- Incubação à 30,0 ± 1ºC por 24 à 48 horas.

- Repique dos tubos que apresentam um aspecto turvo e presença de gás nos

tubos de confirmação.

- Incubação à 37,0 ± 1ºC por 48 horas para coliformes e 44,0 ± 0,5ºC para

coliformes termorresistentes.

Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade

Diluente

Solução de Ringer Água destilada

Solução de RINGER à 1/4

BR00108 – 100 tablets

Água destilada estéril

BM11508 – 50 tubos de 18 mL Total Total

Meios

presuntivos

(1)

Caldo Lactose

Caldo Lauril Sulfato de Sódio

Caldo Lactose ou BCP

BK119HA – frasco 500g

Caldo Lauril-Sulfato Triptose

BM09708 – 50 tubos 10 mL, com Duhran (concentração simples) BM09808 – 50 tubos 10 mL, com Duhran (concentração dupla)

Total (2)

Total

Meios de

confirmação

(1)

Caldo Bile Lactose ou Verde Brilhante

Meio de Schubert (modificado por Fennel) (3)

Caldo Bile Lactose ou Verde Brilhante (BLBVB) BK002HA – frasco 500g BM01108 – 50 tubos 10 mL, com Duhran -Total -(1) Ou à escolha do microbiologista.

(2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (3) Para a pesquisa dos coliformes termorresistentes.

NF T 90-413

T90-413 Pesquisa e Contagem de Coliformes e Coliformes Termorresistentes

Métodos gerais para semeadura em meio líquido

(Outubro 1985)

(5)

Princípios: - Semeadura da amostra diluída em microplaca contendo o meio de cultura

desidratado.

- Incubação à 44,0 ± 0,5ºC por 36 à 72 horas.

- Análise sob radiação UV em 366 ηm.

Diluente

Diluente especial (DS)

Água destilada

Sal marinho sintético

BR00308 – frasco 100g BM08808 – 50 tubos 18 mL

Meio de

cultura

(MUD/SF)

Solução A Solução B Solução C Solução D Microplaca MUG/SF

BT00308 – 25 placas opacas Total

Princípios: - Filtração da amostra por membrana e transferência desta membrana para o

meio seletivo.

- Incubação à 36,0 ± 2ºC por 44 ± 4 horas.

- Confirmação das colônias características por transferência da membrana

para um ágar pré-aquecido à 44ºC e incubação à 44,0 ± 0,5ºC por 2 horas.

Diluente

Água destilada Água destilada estéril

BM11508 – 50 tubos de 18 mL Total

Meio seletivo

Meio de base – Meio de Slanetz e Bartley

Solução TTC

Meio completo

Ágar de SLANETZ e BARTLEY (base) BK129HA – frasco 500g Suplemento TTC 12,5 mg BS02608 – 10 flaconetes Suplemento TTC 50 mg BS02708 – 10 flaconetes

Ágar de SLANETZ e BARTLEY

BK037HA – frasco 500g BM14608 – 20 placas de Ø 55 mm BM09408 – 120 placas de Ø 55 mm Total Total Total

Meio de

confirmação

Ágar bile esculina e azida Ágar BEA

BM10408 – 10 flaconetes 100 mL

Total

NF EN ISO 7899-1

T90-432 Pesquisa e Contagem de Enterococcus Intestinais das águas de

superfície e residuais

Parte 1: Método resumido (NPP) para semeadura em meio líquido

(Março 1999)

NF EN ISO 7899-1

T90-416 Pesquisa e Contagem de Enterococcus Intestinais

Parte 2: Método de filtração por membrana

(Agosto 2000)

(6)

Princípios: - Filtração da amostra por membrana.

- Para a amostra padrão, transferir a membrana para o ágar lactose ou TTC

com heptadecil sulfato de sódio

- Incubação à 36,0 ± 2ºC por 21 ± 3 horas.

- Para o ensaio rápido, transferir a membrana para o ágar caseína de soja e

incubar à 36,0 ± 2ºC por 4 à 5 horas, em seguida transferir a membrana para o meio TSA

e incubar à 44,0 ± 0,5ºC por 19 à 20 horas.

- Confirmação das colônias características por pesquisa de oxidase e produção

de indol.

(1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

NF EN ISO 9308-1

T90-414 Pesquisa e Contagem de Escherichia coli e coliformes

Parte 1: Método de filtração por membrana

(Setembro 2000)

(7)

Princípios: - Semeadura da amostra diluída em microplaca contendo o meio de cultura

desidratado.

- Incubação à 44,0 ± 0,5ºC por 36 à 72 horas.

- Análise sob radiação UV em 366 ηm.

Diluente

Diluente especial (DS)

Água destilada

Sal marinho sintético

BR00308 – frasco 100g BM08808 – 50 tubos 18 mL

Meio de

cultura

(MUD/EC)

Meio MUG/EC Microplaca MUG/EC

BT00108 – 25 placas opacas Total

NF EN ISO 9308-3

T90-433 Pesquisa e Contagem de Escherichia coli e de coliformes das águas de

superfície e residuais

Parte 2: Método resumido (NPP) para semeadura em meio líquido

(Março 1999)

(8)

Princípios: - Semeadura da amostra direta em meio seletivo.

- Em paralelo, preparação de um concentrado por filtração por membrana

com ressuspensão por raspagem ou por ultrassom, ou por centrifugação com a

recuperação do

pelete

num volume pequeno.

- Descontaminação do concentrado, uma parte por tratamento térmico e a

outra por tratamento ácido (1).

- Semeadura e depois descontaminação do concentrado por meio seletivo.

- Incubação por 8 à 10 dias à 36,0 ± 2ºC.

- Realçar a Legionella por repique para pesquisa de bactérias que requerem

L-cisteína.

- Realização de testes imunológicos para pesquisa de Legionella pneumophila.

(1) para água suja, a combinação dos dois tratamentos.

(2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

NF T 90-431

T90-431 Pesquisa e Contagem de Legionella spp. e de Legionella pneumophila

Método para semeadura direta e depois concentração por

filtração por membrana ou centrifugação

(Setembro 2003)

(9)

Princípios: - Filtração da amostra por membrana e tratamento do filtro com tampão ácido.

- Transferência do filtro para meio seletivo e incubação à 36,0 ± 2ºC por pelo

menos 10 dias.

- Confirmação por repique para a pesquisa de bactérias exigentes de L-cisteína

e ferro.

Reativo

Tampão ácido -

-Meio GVPC

Meio completo Ágar seletivo GVPC para

Legionella

BM07108 – 20 placas de Ø 90 mm

Total

Meios

BCYE α

Meio BCYE α sem L-cisteína Meio BCYE α sem antibiótico

Ágar BCYE α sem L-cisteína

Ágar BCYE α com L-cisteína

Total Total

Princípios: - Semeadura em profundidade em meio não seletivo.

- Incubação à 36,0ºC por 44 horas e paralelamente à 22,0ºC por 68 horas.

Diluente

Se refere à norma NF EN ISO 8199

Meio de

cultura

Ágar com extrato de levedura Ágar Contagem de Placa (PCA) sem glicose

BM06808 – 10 flaconetes 200 mL

Total

NF EN ISO 11731-2

T90-430 Pesquisa e Contagem de Legionella

Parte 2: Método de filtração direta por membrana para águas

com baixa carga bacteriana

(Julho 2008)

NF EN ISO 6222

T90-401 Contagem de microrganismos viáveis

Contagem de colônias por semeadura em ágar nutritivo

(Julho 1999)

(10)

Princípios: - Filtração da amostra por membrana ou de uma diluição da amostra.

- Transferência da membrana para meio seletivo e i ncubação à 36,0 ± 2ºC e

leitura em 22 ± 2 horas e 44 ± 4 horas

- Confirmação das colônias suspeitas por pesquisa de oxidase e teste de

fluorescência.

Meio

de

cultura

Ágar base para Pseudomonas (Ágar CN)

Ágar CN para Pseudomonas

BK165HA – frasco 500g (1) BM14508 – 20 placas de Ø 55 mm Total

Meios e

reagente de

confirmação

Meio de King B Caldo de Acetamida Ágar Nutritivo

Reagente para a pesquisa de oxidade Reagente de Nessler Ágar KING B BM10508 – 7 tubos 7 mL Caldo de Acetamida BM09508 – 7 tubos 5 mL Ágar Nutritivo à 2,5% BM12508 – 50 tubos 18 mL - -Total Total Total (2)

-(1) O meio desidratado necessita da adição de 10 mL de glicerol por litro de meio ágar base. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

NF EN ISO 16266

T90-419 Detecção e Contagem de Pseudomonas aeruginosa

Método de filtração por membrana

(Agosto 2008)

(11)

Princípios: - Pré-enriquecimento à 36,0 ± 2ºC por 18 ± 2 horas. (1)

- Enriquecimento em caldo Rappaport-Vassiliadis com soja à 41,5 ± 1ºC e

caldo Müller-Kauffmann tetrationato-novobiocina à 37,0 ± 1ºC por 24 ± 3 horas.

- Para a detecção de Salmonella com crescimento lento, incubação do caldo

Rappaport-Vassiliadis com soja por 24 ± 3 horas adicionais.

- Isolamento em meio XLD à 36,0 ± 2ºC por 24 ± 3 horas e em um segundo

meio à escolha do laboratório.

- Confirmação por testes bioquímicos e sorológicos apropriados.

Meio de pré-

enriqueci-mento

Água peptonada tamponada (EPT)

EPT (20g/L) (2) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25,5g/L) (3) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 5 L Total

Primeiro

meio de

enriqueci-mento

Meio base – Caldo Rappaport-Vassiliadis de soja (RVS) Solução B Solução C Meio completo -Caldo RAPPAPORT-VASSILIADIS Soja (RVS) BK148HA – frasco 500g BM07408 – 50 tubos 10 mL -Total (4)

Segundo

meio de

enriqueci-mento

Caldo Muller-Kauffamann tetrationato novobiocina (MKTTn) (base) Solução iodo-iodeto Solução de novobiocina Caldo MULLER-KAUFFMANN tetrationato novobiocina (base MKTTn sem iodo, novobiocina)

Caldo MULLER-KAUFFMANN tetrationato novobiocina (base MKTTn sem iodo) BK208HA – frasco 500g -Suplemento Seletivo Novobiocina 10 mg BS03308 – 10 flaconetes qsp 250 mL Suplemento Seletivo Novobiocina 40 mg BS05608 – 8 flaconetes qsp 1 L Total (5) -Total

NF ISO 19250

T90-435 Pesquisa de Salmonella spp.

(Outubro 2010)

(12)

Meio completo Caldo MULLER-KAUFFMANN tetrationato novobiocina (pronto para uso)

BM07808 – 50 tubos 10 mL

Total

Meio de

isolamento

Ágar Xilose Lisina Desoxicolato (Ágar XLD) (6) Ágar XLD (ISO 6579) BK168HA – frasco 500g BM08708 – 20 placas de Ø 90 mm Total

Reagente de

confirmação

Ágar Nutritivo

Ágar férrico com três açúcares (TSI)

Meio base – Ágar com uréia (Christensen)

Solução de uréia

Meio de descarboxilação da L-lisina

Caldo Selenito Cistina

Ágar Nutritivo à 2% BK185HA – frasco 500g BM11808 – 50 tubos 18 mL Ágar Nutritivo à 2,5% BM12508 – 50 tubos 18 mL Ágar TSI BK059HA – frasco 500g -Equivalente Total (5) (7)

-(1) volumes maiores podem ser concentrados através de filtração por membrana, depois esta membrana é transferida para a água peptonada tamponada.

(2) fórmula incluindo 90,0 g/L de fosfato dissódico (dodecaidratado) (massa molar 358,14) (3) fórmula incluindo 3,56 g/L de fosfato dissódico anidro (massa molar 141,96)

(4) fórmula incluindo cloreto de magnésio anidro em vez da forma hexaidratada descrita. (5) a triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

(6) suas qualidades intrínsecas serão complementares às do ágar XLD e permitirem a detecção de Salmonella lactose + (que compreende typhi e paratyphi).

(7) taxa de triptona de 14,0 g/L, ao invés de peptona (20) descrita.

(13)

Princípios: - Destruição das formas vegetativas por aquecimento adequado da amostra.

- Semeadura em meio seletivo e incubação sob anaerobiose à 37,0 ± 1ºC por

24 e/ou 48 horas.

- Caracterização do Clostridium a partir das colônias isoladas.

Diluente

Solução de Ringer Água destilada

Solução de RINGER à 1/4

BR00108 – 100 tablets

Meios e

reagentes

para a

detecção de

esporos de

bactérias

anaeróbicas

sulfito-redutase

Ágar glicose carne de fígado Sulfito de sódio

Sais de ferro

Ágar glicose carne de fígado

BK157HA – frasco 500g Total

Meios e

reagentes

para a

identificação

dos esporos

de

Clostridium

sulfito-redutase

Meio base – Ágar Triptose-Sulfito D-cicloserina

Solução de D-cicloserina

Caldo glicose carne de fígado Peróxido de hidrogênio Ágar TSC (base) BK031HA – frasco 500g BM03908 – 50 tubos 20 mL BM07708 – 10 frascos 200 mL Suplemento Seletivo D-cicloserina 200 mg BS00608 – 10 flaconetes qsp 500 mL -Total (1) Total

-(1) o texto normativo contem um erro de composição (ausência de ágar): presença de triptona no lugar da Triptose preconizada.

NF T90-415

T90-415 Pesquisa e Contagem dos esporos de bactérias anaeróbicas

redutase e de Clostridium sulfito-redutase

Método geral para incorporação em ágar em tubos profundos

(Outubro 1985)

(14)

Princípios: - Inoculação em meio líquido de enriquecimento.

- Incubação sob anaerobiose à 37,0 ± 1ºC por 44 ± 4 horas.

Diluente

Se refere à norma NF EN ISO 8199

Meio

reforçado

especial para

clostridia

(DRCM)

Meio de base concentração simples

Meio de base concentração dupla Sulfito de sódio, solução à 4% (m/m)

Citrato e ferro III, solução à 7% (m/m)

-Princípios: - Filtração da amostra por membrana e transferência para meio seletivo.

- Incubação à 37,0 ± 1ºC e por 20 ± 2 horas e 44 ± 4 horas.

Ágar ferro

sulfito (1)

Meio base – Ágar Nutritivo

Sulfito de sódio, solução Sulfito de ferro III, solução

Ágar Nutritivo à 2% BK185HA – frasco 500g BM11808 – 50 tubos 18 mL Ágar Nutritivo à 2,5% BM12508 – 50 tubos 18 mL - -Equivalente

Outro meio

seletivo (1)

Ágar Sulfito-triptose Ágar TSC (base)

BK031HA – frasco 500g BM03908 – 50 tubos 20 mL BM07708 – 10 frascos 200 mL

Total (2)

(1) à escolha do laboratório

(2) o texto normativo contém um erro de composição (ausência de ágar): presença de triptona no lugar da Triptose preconizada.

NF EN 26461-1/

ISO 6461-1

T90-434 Pesquisa e Contagem dos esporos de microorganismos

anaeróbicos sulfito- redutase (Clostridia)

Parte 1: Método para enriquecimento em meio líquido

(Julho 1993)

NF EN 26461-2/

ISO 6461-2

T90-417 Pesquisa e Contagem dos esporos de microorganismos

anaeróbicos sulfito- redutase (Clostridia)

Parte 1: Método por filtração por membrana

(Julho 1993)

(15)

Princípios: - Filtração da amostra por membrana e transferência da mesma para meio

seletivo.

- Incubação à 36,0 ± 2ºC e por 44 ± 4 horas.

- Confirmação pelo teste da coagulase ou pelo teste da aglutinação em latex

ou por exame microbiológico.

Meio

de

cultura

Meio de Chapman com manitol

Meio base – Ágar Baird Parker

Solução de telurito de potássio Emulsão de gema de ovo Meio completo

Solução de sulfametazina (2)

Ágar CHAPMAN com manitol

BK030HA -frasco 500g

Ágar BAIRD-PARKER (base)

BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg

Emulsão de gema de ovo e telurito de potássio

BS06008 – 10 fraconetes 50 mL

Ágar BAIRD-PARKER gema de ovo telurito BM01808 – 20 placas de Ø 90 mm BM09108 – 120 placas de Ø 90 mm Suplemento Seletivo Sulfametazina 25 mg BS02808 – 10 flaconetes qsp 500 mL Total (1) Total (1) Total Total (1) Total

Meio de

cultura e/ou

confirmação

(3)

Meio base – Ágar com plasma de coelho e fibrinogênio (RPF) Solução de telurito de potássio Solução de fibrinogênio bovino Solução de plasma de coelho e inibidor de tripsina

Meio completo

Ágar BAIRD-PARKER (base)

BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg

Suplemento Seletivo Coelho Fibrinogênio BS03408 – 8 flaconetes qsp 100 mL BS03808 – flaconete qsp 500 mL Ágar BAIRD-PARKER BM06708 - 20 placas de Ø 90 mm BM15908 - 20 placas de Ø 55 mm

Ágar BAIRD-PARKER (KIT)

BT00508 – 6 flaconetes 90 mL base + 6 flaconetes adicionais BT01008 – 6 flaconetes 190 mL base + 6 flaconetes adicionais

Total (2) Total Total Total

Meio de

confirmação

Caldo cérebro coração (BCC)

Plasma de coelho

Caldo Cérebro Coração

Plasma de coelho liofilizado

BR00208 – 10 flaconetes para 20 reações

Total

XP T 90-412

T90-412 Pesquisa e Contagem de Staphylococcus patogênicos

Método de filtração por membrana

(16)

Reagente de

confirmação

Reagente para teste de

aglutinação com latex -

-(1) a triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) adição facultativa, justificada pela suspeita da presença de Proteus.

(3) ambiente favorável às águas susceptíveis a serem contaminadas por uma outra flora que possa mascarar as colônias pesquisadas.

(17)

ANEXO A: outras normas de referência em microbiologia da água

Enterovírus (concentração por lã de vidro e detecção

por cultura celular)

Pesquisa XP T 90-451 T 90-451 Março 1996

Enterovírus humano (cultura celular pelo método das placas)

Pesquisa NF EN 14486 T 90-452 Janeiro 2005 Detecção e contagem de bacteriófagos – Parte 1: Contagem dos bacteriófagos ARN F específicos.

Contagem NF EN ISO 10705-1 T 90-440-1 Outubro 2001

Detecção e contagem de bacteriófagos – Parte 2: Contagem dos colifagos

somáticos.

Contagem NF EN ISO 10705-2 T 90-440-2 Outubro 2001

Pesquisa e contagem dos oocistos de Cryptosporidium e de

cistos de Giardia.

Pesquisa e

Contagem NF T90-455 T 90-455 Julho 2001

Legionella e/ou Legionella

(18)

ANEXO B: testes para água.

Diretrizes gerais para a contagem de

microrganismos por meio de cultura

NF EN ISO 8199 T 90-400 Dezembro 2007 Medida do índice de substâncias ativas

com azul de metileno (SABM) – método para análise em fluxo contínuo (CFA)

NF EN ISO 16265 T 90-410 Maio 2012

Determinação de pH NF EN ISO 10523 T 90-418 Maio 2012 Exames bacteriológicos dos recipientes e

sistemas de armazenamento destinados ao acondicionamento da água

PR NF T 90-425 T 90-425 Fevereiro 1992

Exame bacteriológico das águas de piscina NF T 90-421 T 90-421 Julho 2006 Guia de amostragem para análise da

qualidade da água do meio ambiente – Parte 1: amostragem de águas superficiais.

FD T 90-523-1 T 90-523-1 Fevereiro 2008

Guia de amostragem para análise da qualidade da água do meio ambiente – Parte 2: amostragem de água residual.

FD T 90-523-2 T 90-523-2 Fevereiro 2008

Guia de amostragem para análise da qualidade da água do meio ambiente –

Parte 3: amostragem de águas subterrâneas.

FD T 90-523-3 T 90-523-3 Janeiro 2008

Diretrizes para a validação dos métodos

microbiológicos. FD ENV ISO 13843 T 90-460 Outubro 2001 Controle de qualidade dos meios de cultura

Emenda A1 Emenda A2 NF T 90-461 NF T 90-461/A1 NF T 90-461/A2 T 90-461 T 90-461/A1 T 90-461/A2 Julho 2001 Junho 2005 Maio 2007 Critérios para estabelecer equivalência

entre os métodos microbiológicos. NF EN ISO 17994 T 90-462 Dezembro 2004 Amostragem para análises microbiológicas. NF EN ISO 19458 T 90-480 Outubro 2006

(19)

Princípio: semeadura de um volume comum de amostra de água, em concordância com

o protocolo da metodologia escolhida em função da origem da água e do microrganismo

pesquisado.

Diluente

Solução salina Água peptonada

Solução peptonada salina

Solução de Ringer, ¼ de concentração

Solução tampão fosfato

-Água peptonada BM16408 – 2 embalagens 5 L Sal-triptona BK014HA – frasco 500g BM00808 – 50 tubos 9 mL BM11408 – 10 frascos 90 mL BM13508 – 3 embalagens 3 L Solução de RINGER à 1/4 BR00108 – 100 tablets

BM11508 – 50 tubos 18 mL -Total (1) Total (1) Total Total

-(1) a triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

NF EN ISO 8199

T90-400 Diretrizes gerais para a contagem de microrganismos

por meio de cultura

(Janeiro 2008)

(20)

Princípios: - Enxaguar com um diluente, então cultivar a suspensão obtida após a filtração

por membrana, ou para os recipientes transparentes incorporar diretamente os

microrganismos viáveis.

- Enxaguar com um diluente, então cultivar a suspensão obtida após a filtração

por membrana.

- Incubação: 20,0 ± 2ºC por 5 dias para contagem de microrganismos viáveis.

37,0 ± 1ºC por 24 e 48 horas para contagem de coliformes (1).

44,0 ± 0,5ºC por 24 e 48 horas para contagem de coliformes

termorresistentes (2).

Diluente (3)

Água destilada

Solução de Ringer, ¼ de concentração

BM11508 – 50 tubos 18 mL Solução de RINGER à 1/4 BR00108 – 100 tablets Total Total

Meio

de

Cultura

Ágar para a contagem de microrganismos viáveis (4)

Ágar Lactose BCP

Ágar Contagem de Placa (PCA)

BK144HA – frasco 500g BK144GC – embalagem 5 Kg BM01508 – 10 flaconetes 100 mL BM03308 – 10 flaconetes 200 mL Ágar Lactose BCP BK023HA – frasco 500g Total (5) Total (5) (1) se refere à norma NF T 90-414. (2) se refere à norma NF T 90-413.

(3) no caso de análise frascos lavados, para inibir a influência de desinfetantes halogenados, adicionar 0,16g de tiossulfato de sódio por litro de diluente.

(4) no caso de análise frascos lavados, para inibir a influência de desinfetantes halogenados, adicionar 1g de tiossulfato de sódio por litro de ágar.

(5) a triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

PR NF T 90-425

T90-425 Exames bacteriológicos dos recipientes e sistemas de

armazenamento destinado ao acondicionamento da água

(Fevereiro 1992)

(21)

ANEXO C: Método rápido alternativo em microbiologia da água.

Método de referência: NF EN ISO 9308-1, página 6.

Método de contagem de Escherichia coli e coliformes através de filtração por

membrana das águas de consumo humano.

Princípios: - filtração por membrana de um volume de amostra.

- transferência da membrana para o COMPASS

®

_{Ecc Ágar e incubar à 36 ±}

2ºC por 24 ± 3 horas.

Meio Seletivo

COMPASS

®

_{Ecc Ágar – frasco 500g – BK202HA}

COMPASS

®

_{Ecc Ágar – 20 placas de Ø 90 mm – BM15308}

Método COMPASS

®

_{Ecc Ágar:}

Colônias características: de azul à púrpura que pode ser rodeada por um halo rosa.

Colônias características: cor rosa.

(22)

ANEXO D: Lista dos principais meios de cultura para a microbiologia da água.

PRODUTO

APRESENTAÇÃO

Ágar Seletivo Legionella segundo NEN

BM08108 – 20 placas de Ø 90 mm

Ágar extrato de levedura carvão tamponado

(BCYE) segundo NEN

BM11208 – 20 placas de Ø 90 mm

Ágar extrato de levedura carvão tamponado

sem L-cisteína (BCYE) segundo NEN

BM11308 – 20 placas de Ø 90 mm

Ágar Bismuto Sulfito

BK004HA – frasco 500g

Caldo Selenito-Cistina

BK009HA – frasco 500g

Ágar Púrpura Bromocresol Lactose

BK023HA – frasco 500g

Ágar Triptona Sulfito Cicloserina (TSC)

BM07708 – 10 flaconetes 200 mL

BM03908 – 50 tubos 20 mL

Meio base desidratado (s/ D-cicloserina)

BK031HA – frasco 500g

Suplemento Seletivo D-cicloserina 200 mg

BS00608 – kit com 10 frascos

Emulsão gema de ovo

BS06608 – 10 frascos 50 mL

Ágar SLANETZ e BARTLEY

Meio completo pré-envazado

BM14608 - 20 placas de Ø 55 mm

BM09408 - 120 placas de Ø 55 mm

Meio desidratado (completo)

BK037HA – frasco 500g

Meio desidratado (base, s/ TTC)

BK129HA – frasco 500g

Suplemento Seletivo TTC 50 mg

BS02708 – 10 frascos qsp 500 mL

Ágar EMB (Levine)

BK056HA – frasco 500g

Ágar XLD (Xilose Lisina Desoxicolato)

BK058HA – frasco 500g

Ágar Hektoen Entérico

BK067HA – frasco 500g

BM02708 – 20 unidades Ø 90 mm

Caldo Lactose

BK082HA – frasco 500g

Ágar Verde Brilhante

BK091HA – frasco 500g

Ágar Tergitol 7

Meio completo pré-envazado

BM14708 - 20 placas de Ø 55 mm

BM09308 - 120 placas de Ø 55 mm

Meio base desidratado (s/ TTC)

BK123HA – frasco 500g

Suplemento Seletivo TTC 12,5 mg

BS02608 – embalagem com 10 frascos

Caldo Peptona tamponada com NaCl pH

7,0

(23)

Caldo Müller-Kauffmann

Meio pronto para uso (completo, c/ iodo e

novobiocina

BM10608 – 50 tubos 10 mL

Meio base desidratado (s/iodo nem

novobiocina)

BK10608 – frasco 500g

Suplemento Seletivo Novobiocina 10 mg

BS03308 – embalagem com 10 frascos

Suplemento Seletivo Novobiocina 40 mg

BS05608 – embalagem com 8 frascos

Caldo Rappaport-VASSILIADIS

BK136HA – frasco 500g

Ágar Rose-Gal BCIG

BK142HM – frasco 100g

BK142HA – frasco 500g

Caldo Rappaport-VASSILIADIS Soja (RVS) Meio pronto para uso

BM07408 – 50 tubos 10 mL

Meio desidratado

BK148HA – frasco 500g

Ágar Bile Vermelho Violeta (VRBL)

Meio pronto para uso

BM03408 – 10 flaconetes 100 mL

BM03508 – 10 flaconetes 200 mL

Meio desidratado

BK152HA – frasco 500g

Suplemento Seletivo MUG 50 mg

BS02408 – embalagem com 10 frascos

Caldo CN para Pseudomonas

Meio completo pré-envazado

BM0708 - 10 placas de Ø 55 mm

Meio base desidratado (s/ glicerina)

BK165HA – frasco 500g

Ágar BAIRD-PARKER RPF – pronto para

uso

BM06708 - 20 placas de Ø 90 mm

Caldo Acetamida

BM09508 – 7 tubos 5 mL

Ágar King B

BM10508 – 7 tubos 7 mL

(24)

Apresentações

A) Ágar:

PRONTO:

Placas de Petri

(ainda não

disponíveis no Brasil):

- Pacote com 120 unidades de

Ø 55 e 90 mm;

- Pacote com 20 unidades de

Ø 55 e 90 mm;

- Pacote com 10 unidades de

Ø 55 e 90 mm.

PRONTO PARA SOLUBILIZAR:

Flaconetes

(ainda não

disponíveis no Brasil):

:

- 10 flaconetes de 100 mL;

- 10 flaconetes de 200 mL;

- 10 flaconetes de 500 mL;

DESIDRATADO:

Frascos:

- Embalagem de 500g;

- Embalagem de 5 Kg.

(25)

Apresentações

B) Caldos:

PRONTO PARA USO:

Frascos

(ainda não

disponíveis no Brasil):

- 10 frascos de 90 mL;

- 10 frascos de 100 mL;

- 10 frascos de 200 mL.

Tubos

(ainda não

disponíveis no Brasil):

- 50 tubos de 9 mL;

- 50 tubos de 10 mL;

- 5 tubos de 5 e 7 mL.

Embalagens flexíveis

(ainda não disponíveis no

Brasil):

- 3 embalagens de 3L;

- 2 embalagens de 5L.

DESIDRATADO:

Frascos:

- Embalagem de 500g;

- Embalagem de 5 Kg.

(26)