Y.‘FRAMBESIA EN CONEJOS SOMETIDOS A TRATAMIENTO (PARTE 1)” 2
CHARLOTTE P. McLEOD, A.B., SC.D.,3 Y HAROLD J. MAGNUSON, A.B., M.D., M.P.H.,4 con la colaboración de DOROTHY C. HUFFMAN6
Los puntos de semejanza entre la sífilis y la frambesia, y las relaciones inmunológicas entre sus respectivos agentes causales,
Treponema palliclum y T. pertenue, han sido
estudiados por varios investigadores. Si bien las observaciones epidemiológicas parecen indicar que la frambesia protege contra la sífilis, es muy escaso el número de estudios de inmunización cruzada con resultados satisfactorios (1, 2, 12). Los trabajos de experimentaciónrealizadostantoenelhombre
como en monos (10) indican que, en la frambesia, la inmunidad se produce más lentamente y es quizás menos fuerte que en la síí?lis. Los estudios realizados en el hombre demuestran que la infección por sífilis produce una mayor resistencia a la frambesia (ll) , y los experimentos en monos han demostrado que la frambesia propor- ciona protección contra la sífilis (10). Recientemente se demostró la existencia de protección cruzada entre el T. pallidum y el
T. pertenue en conejos (13) y más tarde se demostró que había actividad de inmoviliza- ción cruzada entre estas dos especies de espi- roquetas (3).
1 Documento WHO/VDT/139 (Agosto 8, 1955) presentado a la Conferencia Internacional del Control de la Frambesia celebrada en Nigeria, Africa, del 10 al 23 de noviembre de 1955, y publi- cado originalmente en inglés en el Jour. Ven. Dis. Inf., %:305-309, 1951.
z Del Laboratorio de Experimentación de En- fermedades Venéreas, Servicio de Salud Pública, Departamento de Sanidad, Educación y Bienestar de los Estados Unidos, Escuela de Salud Pública, Universidad de Carolina del Norte, Chape1 Hill, N. C., E. U. A.
3 Bacteriólogo; Profesor Adjunto, Departa- mento de Medicina Experimental.
4 Director Médico; Profesor de Investigaciones, Departamento de Medicina Experimental.
5 Experto en técnica m6dica.
En el experimento que nos ocupa se estu- dió la inmunización cruzada entre sítilis y frambesia en conejos, en los que las infec- ciones originales se habían eliminado por medio de la penicilinoterapia. Como se verá, contrariamente a los resultados de investigaciones anteriores en animales no sometidos a tratamiento, no se observó un grado importante de protección cruzada en los conejos tratados.
METODOS
Se produjeron infecciones inmunizantes con sífilis y frambesia en conejos holandeses de una estirpe de apareamiento consanguí- neo.6 Se trataba de conejos machos adultos, jóvenes, de aproximadamente la misma edad
e igual peso al ser infectados. Los animales normales utilizados como testigos en las inoculaciones de prueba eran también cone-
jos holandeses machos, jóvenes.? Los conejos
fueron alojados en cuartos apropiados en que la temperatura se mantuvo en todo momento a menos de 70” F. (21,1° C.). Las cepas de espiroquetas empleadas fueron la cepa Nichols de T. pallidum, y la cepa YC
de T. pertenue. La cepa YC de frambesia ha sido ampliamente estudiada en conejos (4,5, 13) y el Dr. Thomas B. Turner tuvo la bondad de proporcionar un trasplante.
Los microorganismos utilizados para pro- ducir las infecciones inmunizadoras con sífilis se obtuvieron de conejos que habían sido infectados de 12 a 21 días antes y
mostraban lesiones testiculares entre mode-
radas y bien desarrolladas. La suspensión de T. pallidum usada como prueba se preparó de testículos de conejos con orquitis sifilítica
6 Adquiridos de Rockland Farms, New City, N.Y..E.U.A.
7 Adquiridos de un solo vendedor en North Carolina, E. U. A.
CUADRO No. l.-Inmunidad cruzada entre sijilis CUADRO No. 2.-Resultados de las pruebas de ?J jrambesia en conejos sometidos a tratamiento. inmovilización contra Treponema pallidum en (En el cuadro se indica el número de conejos suero de conejos ron si$lis 2/ conejos con frambesia que tuvieron reinfección sintomática al someterlos sometidos a prueba con T. pallidum.
a prueba.) Conejos sometidos a prueba con 100 T. pallidum
Conejos sometidos a prueba de s’EfL1i.s
Dosis de
Conejos con
jrambesia Tes1igos
Negativo
Conejos con s2filis Conejos conframbesia
Cow;jo Resullado de la puaebo ______
1181 Inmune 1194 “ 1180 “ 1054 “ 1190 “
Resrllado
de la prueba
Lesión “ “ ‘< Inmune
Conejos sometidos a prueba de jrambesia
~ - --
~ - --
100
100 0 0 4 4 106
106 0 0 6 6 104
104 0 0 6 6 103
103 0 0 4 4 102
102 0 0 4 4
temprana. Estos conejos habían sido infecta- dos ll días antes. Las espiroquetas utilizadas para producir las infecciones originales de frambesia se obtuvieron de testículos de conejos con infección de frambesia de 29 a 36 días de duración. Los testículos estaban moderadamente endurecidos y uno o ambos testículos de cada procedencia de conejo mostraban cierto grado de periorquitis. La suspensión de frambesia usada para prueba se preparó de testículos de conejos que mostraban muy temprana periorquitis y que habían sido infectados con T. pertenue 27 días antes. Se comprobó por medio de estu- dios en campo obscuro la especificidad de las lesiones que se presentaron después de las inoculaciones de inmunización y de prueba. Los conejos sometidos a prueba fueron observados durante 4 meses, y, pa- sado este tiempo, se hicieron los trasplantes de nódulos de los conejos que no habían tenido lesiones. De los resultados obtenidos en los animales en que se hizo el traspaso se dará cuenta en otro trabajo posterior. r- La penicilina usada para eliminar las
1:2,000 1072 1:1,280 1224 1:785 1218 1:2,850 1203 1:2,560 1204
1:285 1:680 1:290 1:1,260 1:530
Consejos sometidos a prueba con 1000 T. pallidum
Conejo Resultado TOulo del No. de la prueba suero* ______
1159 Inmune 1:730
1167 “ 1:560
1059 “ 1:560
1170 (‘ 1:420
1187 (( 1:980
-
Conejo Resultado TUulo del No. de le pruebo SWYO
~~
1067 Lesión 1095 “ 1226 “ 1210 “ 1098 “ 1086 Inmune
1:400 1:118 1:250 1:125 1:94 1:137
* Los títulos de suero esth expresados en limi- tes de eficacia de 5Oyo.
infecciones inmunizadoras fue la penicilina procaína G en suspensión de monoestearato de aluminio al 2 7% (peso por volumen). Esta preparaci6n se diluyó en aceite de cacahuate a fin de obtener las dosis deseadas para cada conejo. La terapéutica total para cada ani- mal fue de 64.000 unidades por kilogramo de peso, administradas diariamente en cuatro dosis iguales (4).
.
El suero para el estudio de la actividad inmovilizante se obtuvo por sangría del corazón de los conejos el día antes del trata- miento. Las muestras de suero se conserva- ron a -20” C. hasta hacer el ensayo. La prueba de Nelson y Mayer (9) de inmoviliza- ción del treponema se realizó de conformidad con las modificaciones descritas ya en otro trabajo (8).
Se inocularon en ambos testículos los conejos de tres grupos de 20 conejos cada uno con la cepa Nichols de T. pallidum.
grupos de 30 conejos cada uno con la cepa YC de T. pertenue. La dosis total inyectada a cada animal fue aproximadamente de 5 millones de microorganismos. Más adelante se describirán, en otro informe, las lesiones de sífilis y las de frambesia resultantes de estas inoculaciones. Una vez infectados los tres grupos de conejos de la prueba de sífilis durante 7, 9 y 10 meses, respectivamente, y los dos grupos de conejos de la prueba de frambesia durante 7 y 9 meses, respectiva- mente, se sangraron los animales y se eliminaron las infecciones mediante penicili- noterapia.
Aproximadamente seis semanas después de terminado el tratamiento terapéutico, los conejos supervivientes de los experimentos de sífilis y de frambesia se distribuyeron, al azar, en grupos de 5 ó 6 cada uno. Los ani- males c fueron sometidos después a pruebas por inoculación intracutánea, y la prueba con T. pertenue se hizo dos días antes que la prueba con T. pallidum. Las suspensiones de ambos microorganismos fueron cuidado- samente graduadas (6) para que contuvieran 5 millones de espiroquetas por centímetro cúbico. Se prepararon diluciones decuplica- das de cada suspensión en suero salino al 50%, de manera que se obtuvieron dosis graduales decrecientes para inoculación, que variaron de lo6 a lo2 microorganismos en un volumen de 0,2 ml.
Se inoculó a un grupo de los conejos de la prueba de sífilis y a un grubo de los conejos de la prueba de frambesia con cada una de las dosis de cada suspensión de espiroquetas. Se inyectó a los animales en un solo sitio en el medio del lomo, justamente a la derecha de la línea media. Se inoculó a los conejos testigos en grupos de 6 cada uno. Se inocu- laron cuatro grupos en un solo sitio con lOs ó lo2 microorganismos de la suspensión de frambesia o de sífilis. En otros dos grupos de testigos se inoculó a cada conejo con dosis graduales múltiples (lo6 a 102) de la suspensión de frambesia o de sífilis. Estos conejos fueron inoculados en el lomo, en cinco sitios cada uno, en orden lineal, pre- cisamente a la derecha de la línea media. El sitio de inyección de cada dosis se fue
alternando en el lomo de los animales sucesi- vos, en ambos grupos? a fin de aminorar el efecto de las variaciones de susceptibilidad de las diferentes áreas de la piel.
El cuadro No. 1 muestra el desarrollo de las lesiones en los conejos inmunizados y en los testigos que fueron inoculados en un solo sitio y que sobrevivieron durante un período de observación de 4 meses, Tanto los conejos del experimento de sífilis como los del experi- mento de frambesia mostraron una firme “inmunidad al chancro” después de la reino- culación con la cepa homóloga de espiro- quetas. Los conejos originalmente infectados con frambesia mostraron poca o ninguna inmunidad. a la sífilis y tuvieron lesiones después de la reinoculación con una cantidad tan escasa como 100 espiroquetas de sífilis. Esta falta de inmunidad a la sífilis no se relacionó con la duración de la infección de frambesia antes del tratamiento ni con su actividad en el período del tratamiento. Entre los 28 conejos con frambesia a los que se les hizo la prueba de sífilis, ll de ‘los 14 que tenían infección de 7 meses de duración, y 10 de los 14 conejos con infecciones de 9 meses de duración, tuvieron lesiones sifilíti- cas. Ocho de los ll conejos con frambesia activa y 13 de los 17 conejos con frambesia latente en el momento del tratamiento, tuvieron lesiones sifilíticas.
quetas en dicho sitio. Los otros cinco conejos no presentaron lesiones de frambesia en el mencionado sitio después de inoculados con 106, 104, 103, 102, y lo6 microorganismos, respectivamente.
El período de incubación de las lesiones de sffilis fue de 10 a 28 días en los conejos testigos y de 10 a 31 días en los conejos puestos a prueba. El período de incubación de las lesiones de frambesia fue de 12 a 68 días en los conejos testigos, y de 12 a 124 días en los animales puestos a prueba.
Las pruebas de inmovilización se hicieron contra el T. pallidum en suero tanto de los conejos del experimento de sífilis como del experimento de frambesia que fueron puestos a prueba con T. pallidum. Se recogieron las muestras de suero el día anterior al trata- miento y las reinoculaciones se hicieron 6 semanas después del tratamiento. El cuadro No. 2 presenta los resultados de la prueba de inmovilización y de reinoculación de cada conejo puesto a prueba con 100 o con 1.000 espiroquetas de sífilis. El suero de todos los conejos sometidos al experimento con la misma dosis se probó en el mismo ensayo ; por lo tanto los títulos de los conejos del experimento de sífilis y los del experimento de frambesia son comparables. El suero de los diez conejos del experimento de sífilis tenía títulos elevados de inmovilización y todos los animales fueron inmunes a la rein- fección sintomática con la cepa homóloga. El suero de los 11 conejos del experimento de frambesia mostró un grado considerable de actividad inmovilizante contra el T. palli- dum; sin embargo, 9 conejos tuvieron lesiones sifilíticas después de la reinoculación con 100 0 con 1.000 microorganismos.
CONSIDERACIONES
No se observó ningún grado importante de inmunización cruzada en los conejos cuyas infecciones originales se habían elimi- nado mediante la penicilinoterapia. Esos resultados contrastan notablemente con los de Turner, McLeod y Updyke (13), quienes demostraron un alto grado de inmunización
cruzada en conejos que no habían recibido tratamiento. Los métodos utilizados en
ambos estudios fueron muy parecidos : fueron infectados intratesticularmente conejos ho- landeses y puestos a prueba intracutánea. En ambos estudios se infectaron también los conejos del experimento de frambesia con la misma cepa de T. pertenue (YC) y se some- tieron a prueba con las misma cepa de T. pallidum (Nichols) . Una comparación de los resultados obtenidos en los conejos del ex- perimento de la frambesia que recibieron tratamiento y en los que no lo recibieron, parece indicar claramente que el efecto de la terapéutica curativa fue anular o reducir considerablemente la protección que la infección latente con frambesia proporciona contra la reinfección sintomática con sifilis. En un estudio anterior (13) los conejos del experimento de frambesia que no habían recibido tratamiento, con infecciones de 6 meses de duración, no tuvieron lesiones después de inoculados con 2 millones aproxi- madamente de espiroquetas de sífilis. En este estudio de animales que recibieron tra- tamiento, los conejos del experimento de la frambesia con infecciones de 7 a 9 meses de duración tuvieron lesiones después de inocu- lados con 100 espiroquetas de sífilis.
Los conejos del experimento de sífilis de este estudio fueron infectados con la cepa Nichols durante un período de 7 a 10 meses antes del tratamiento y la protección contra la frambesia resultó sorprendentemente escasa, a pesar dz la baja virulencia relativa de la cepa de prueba. Por otra parte, tanto los animales del experimento de sífilis como los de frambesia fueron firmemente inmunes a la reinfección sintomática con microor- ganismos hom6logos.
Aunque las cepas de espiroquetas de sífilis y de frambesia empleadas en estos experimentos no parecen estar estrechamente relacionadas en un sentido de protección, se demostró una relación inmunológica por medio de las pruebas de inmovilización cruzada. El suero de los conejos del experi- mento de frambesia, así como el de los conejos de síf?lis, contenía un grado consi- derable de anticuerpos inmovilizantes contra el T. pallidum. La presencia de anticuerpos en el suero de los conejos del experimento de frambesia inmediatamante antes del tra.ta- miento, no guardaba relación con la inmuni- dad a la reinfección cuando se puso a prueba con pequeñas dosis de T. pallidum 6 semanas después del tratamiento. La función de los anticuerpos inmovilizantes en la inmunidad a la treponematosis no está todavía clara. Parece ser un grupo de anticuerpos, no rela- cionados con la reagina (7, 9), que es más activo contra la cepa homóloga y es produ- cido por un antígeno común a diferentes cepas y especies de treponemas (3, 8).
RESUMEN
Es un estudio de inmunidad cruzada entre conejos con sífilis y conejos con frambesia, con infecciones de 7 a 10 meses de duración antes del tratamiento, se obtuvieron los siguientes resultados:
1. Ni los conejos con síf% ni los conejos con frambesia tuvieron lesiones al ser reino- culadas con la cepa homóloga de espiro- quetas.
2. Los conejos originalmente infectados con sí& mostraron un bajo grado de inmunidad a la reinoculación con espiroque- tas de frambesia.
3. Los conejos originalmente infectados con frambesia mostraron poca o ninguna inmunidad a la reinoculación con una canti- dad tan escasa como 100 espiroquetas de mis.
4. El suero de los conejos del experimento de frambesia que no fueron inmunes a la sífilis, poseía un grado considerable de actividad inmovilizante contra el T. palli- dum.
REFERENCIAS
(1) Chesney, A. M.: Immunity in syphilis, Medi- Treponema1 immobilization test of nor- cine monograph No. 12, Johns Hopkins mal and syphilitic serums. Jour. Ven. Dis. Med. School (1927), Baltimore. Inf., 1949, 30:309.
(2) Hudson, E. H.: Treponematosis (1946), (8) Magnuson, H. J.; Thompson, F. A., jr., y
Londres. McLeod, C. P.: Relationship between trep-
(3) Kahn, A. S.; Nelson, R. A., jr., y Turner, onemal immobilization antibodies and T. B. : Immunological relationships among acquired immunity in experimental syphi- species and strains of virulent treponemes lis. Jour. Immunol., 1951, 67:41.
as determined with the treponema1 im- (9) Nelson, R. A., jr., y Mayer, M. M. : Immobili- mobilization test. Am. Jour. Hyg., 1951, zation of Treponema pallidum in vitro by 53 296.
(4) McLeod, C. P., y Magnuson, H. J.: Penicil-
antibody produced in syphilitic infection.
lin treatment of experimental yaws in Jour. Exp. Med., 1949, 89:369.
rabbits with special referente to criteria of (10) Schobl, O., y Miyao, 1.: Immunologic rela- infection and cure. Am. Jour. Syph., 1952, Jour. Sci., 1929,40:91. tion between yaws and syphilis. Philipp. 36545.
(5) McLeod, C., y Turner, T. B.: Studies on the (11) Turner, T. B.: The resistance of yaws and biological relationships between the causa- syphilis patients to reinoculation with yaws tive agents of syphilis, yaws, and venereal spirochetes. Am. Jour. Hyg., 1936, 23:431. spirochetosis of rabbits. II. Comparison (12) Turner, T. B.: The interrelationship between of the experimental disease produced in Spirochaeta pallida, Spirochaeta pertenuis rabbits. Am. Jour. Syph., 1946, 30:455. and Spirochaeta cuniculi. Publicaciones de (6) Magnuson, H.; Eagle, H., y Fleischman, R.: The American Association for Advance-
