CHROMABOND. QuEChERS MACHEREY-NAGEL. Soluções convenientes para sua análise de pesticidas SPE. Cromatografia

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Cromatografia

Be the early bird – Catch them with the right mix!

O consagrado CHROMABOND

®

_Diamino

(PSA) – preparado no mix para

QuEChERS

SPE

CHROMABOND

®

QuEChERS

Soluções convenientes para

sua análise de pesticidas

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QuEChERS metodologia

“Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe“ – estas são as demandas para a preparação da análise moderna de alimentos. O QuEChERS (pronounciado como “catchers”) método,

desenvolvido por Anastassiades et al. em 2003,[1] e o subsequente desenvolvimento de misturas prontas para o uso atendem a estas demandas. QuEChERS tornou-se ométodo da escolha na preparação de amostraspara a análise de pesticidas e drogas em frutas,vegetais e outros produtos alimentícios.

Vantagens do QuEChERS em comparação com métodos clássicos de purificação:

• Fácil manipulação e economia de tempo • Dispensável a utilização de vidrarias • Baixo consumo de solventes

• Sem a necessidade de solventes clorados • Grande quantidade de pesticidas podem ser

analisados

• Rigoroso método com elevada proporção de recuperação

Melhora na

produtividade

laboratorial

H

₃

C

O

S

P

N

H

CH

₃

CH

₃

(3)

Ready! Set! Go!

Seus benefícios

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QuEChERS procedimento*

É simples e consiste em dois passos: Passo 1 – Extração e salting-out

1. A amostra é homogeneizada, e.x., com gelo seco em um liquidificador.

2. Pese 10 g da amostra em um tubo para centrífuga.

3. Adicione 10 mL de acetonitrila e padrão interno.

4. Agite vagarosamente por 1 min.

5. Adicione a mistura de extração ao tubo para centrífuga. Opcional: verifique e ajuste o pH entre 5.0–5.5 com 5 mol/L de solução de NaOH.

6. Agite vagarosamente por 1 min.

7. Centrifuge por 5 min a > 3000 g. Para a deter-minação de pesticidas com grupos ácidos, o extrato bruto deve ser analisado diretamente (preferível por LC/MS ESI neg.).

*Procedimento descrito de acordo com o método EN 15662:2008

IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII_{IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII}IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII

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Passo 2 – Clean-up dSPE

1.Transfira uma alíquota do sobrenadante em um tubo para centrífuga contendo o mix de purificação. Esta fase sólida dispersiva do mix de extração(dSPE) remove componentes da matriz comoóleos, esteróides e pigmentos.

2. Agite por 30 s.

3. Centrifugue por 5 min a > 3000 g.

4.Transfira o sobrenadante para um vial acidificado com 5% de ácido fórmico em acetonitrila

(10 µL/mL extrato) e analise a amostra por LC/MS ou CG/MS.

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Selecione o correto produto QuEChERS para sua amostra!

Para cada um dos passos, nós provemos as misturas

CHROMABOND® _{apropriadas. Os conteúdos são pré-pesados} e misturados de acordo com método padronizado:

Passo 1 – Extração esalting-out

Método Peso da amostra Solvente Conteúdo da mistura Mist. No.

EN 15662:2008

Citrato tamponado[2]

10 g 10 mL acetonitrila 4 g MgSO4, 1 g NaCl,

0.5 g Na2H citrato · 1.5 H2O, 1 g Na3 citrato · 2 H2O Mix I AOAC 2007.01 Acetato tamponado[3] 15 g 15 mL 1 % ácido acético em acetonitrila

6 g MgSO4, 1.5 g Na acetato Mix II Original

Não tamponado[1]

10 g 10 mL acetonitrila 4 g MgSO4, 1 g NaCl Mix XII

Amostras com menos de 80% de conteúdo de água requerem a adição de água fria suficiente. A quantidade de água necessária é listada na tabela abaixo [2].

Tipo de amostra Peso da amostra Adição de água Nota

Frutas e vegetais

> 80 % conteúdo de água

10 g –

Frutas e vegetais

25–80 % conteúdo de água

10 g x g x = 10 g menos a quantidade de água

na amostra

Cereais 5 g 10 g

Frutas secas 5 g 7.5 g Água pode ser adicionada durante

o passo de fragmentação

Mel 5 g 10 g

Condimentos 2 g 10 g

Referências

[1] M. Anastassiades, S. J. Lehotay, D. Stajnbaher, F. J. Schenck, J. AOAC Int. 86 (2003), 412–431.

[2] EN 15662:2008 Foods of plant origin – Determination of pesticide resi-dues using GC-MS and/or LC-MS/MS following acetonitrile extraction/ partitioning and clean-up by dispersive SPE – QuEChERS method. [3] AOAC Official Method 2007.01, Pesticide Residues in Foods by

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Passo 2 – Clean-up por dSPE

Propriedade da amostra Conteúdo da mistura EN 15662 AOAC 2007.01

Baixo conteúdo de gordura MgSO4

Diamino (PSA)

Mix III Mix XX

· maçã · damasco · aspargo · brócolis · pera · abacaxi · morango Conteúdo moderado de clorofila e carotinóides MgSO4 Diamino (PSA) Carbon (GCB)

Mix IV Mix XVII

· cenoura · alface · café · chá Alto conteúdo de clorofila e carotinóides MgSO4 Diamino (PSA) Carbon (GCB) Mix V – · pimenta · espinafre · amora · framboesa

Alto conteúdo de gordura MgSO4

Diamino (PSA) C18 ec

Mix VI Mix XIX

· abacate · cereais · noz · carne vermelha · frango · carne de porco · produtos diários · solo · óleos · papinha

Adsorventes e suas aplicações

MgSO4 Remover excesso de

água

NaCl Separação de fases

CHROMABOND® Diamino (PSA) (Amina primária e secundária) Remover ácidos e gorduras orgânicas, açúcares e pigmentos antocianina CHROMABOND® C18 ec

(sílica modificada fase reversa) Reter compostos não polares e.x., lipídios CHROMABOND® Carbon (GCB) (Carbono Grafilizado Preto) Remover pigmentos e esteróides Nota: pesticidas planares também são removidos

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Aplicações

Maça MN Appl. No. 306040/127410

Nesta aplicação nós descreveremoso uso com sucesso do CHROMABOND®

QuEChERSMisturasI eIII para a análise da classede 25 multiplos pesticidas residuais em maçã* que foram compradas em um armazém local. Subsequente análise por LC/MS/M realizada com a nova NUCLEODUR®_C

18Gravity-SB

(condições veja na próxima página).

2 4 6 8 10 12 14 min 0 Pré-tratamento da amostra:

• Pese 10 g da amostra homogeneizada em um tubo para centrífuga com capacidade para 50 mL (REF 730223)

• Adicione 9,2 mL de acetonitrila, adicione 0,8 mL da solução padrão do pesticida (1 µg/mL de cada composto em acetonitrila)

• Agite a mistura por 1 min

• Agite a amostra com o Mix I e centrifugue (5 min a 4500 rpm, 5 °C) • Transfira 6 mL do sobrenadante em um tubo para centrífuga com

capacidade para 15 mL, o qual é pré-preenchido com CHROMABOND®

QuEChERS Mix III, agite por 1 minuto e centrifugue novamente (5 min a 4500 rpm, 5 °C)

• O sobrenadante é analisado por LC/MS/MS

Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) Acefato 85 2 Ometoato 90 1 Atrazina 92 3 Fosalona 103 4 Azoxistrobina 100 2 Fosmete 92 3 Carbaril 102 2 Tebuconazol 90 4 Clorpirifós 105 2 Tiaclopride 83 6 Coumafós 100 3 Propizamida 101 2 Ciprodinil 96 3 Mevinfós 101 2 Diazinona 102 2 Fenazaquina 110 2 Dimetoato 102 2 Clofentezina 94 3 Ethion 155 4 Tebufenozida 102 5 Etoprofós 102 3 Miclobutanila 88 4 Metamidofós 88 3 Imidacloprida 89 6 Metomil 100 2 Azeite de oliva MN Appl. No. 306030/127400

Esta aplicação descreve o uso das misturas de CHROMABOND®

QuEChERS para a análise da classe de 25 multiplos pesticidas residuais em azeite de oliva*(comprado em um armazém local). A extração e purificação realizadas com sucesso com asMisturas II and XIX. Subsequente análise por LC/MS/MS foi realizada com a nova NUCLEODUR®_C

18Gravity-SB

(condições veja na próxima página).

2

0 4 6 8 10 12 14 min

Pré-tratamento da amostra:

• Pese 3 g de amostra em um tubo para centrífuga vazio com capacidade para 50 mL (REF 730223)

• Adicione 7,0 mL de água, adicione 9,2 mL de acetonitrila (0,25 % em ácido fórmico) e 0,8 mL da solução padrão do pesticida (1 µg/mL de cada composto em acetonitrila)

• Agite a mistura por 1 minuto

• Agite a amostra com o Mix II e centrifugue (5 min a 4500 rpm, 5 °C) • Transfira 6 mL do sobrenadante em um tubo para centrífuga com

• O sobrenadante é analisado por LC/MS/MS

Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) 85 4 99 13 82 3 78 3 100 2 96 3 97 1 86 3 59 5 94 2 81 1 84 1 54 3 96 1 77 3 40 3 102 4 66 3 71 3 88 3 89 2 92 3 103 2 96 2 97 4

* Os alimentos foram fortificados com padrão de pesticida. capacidade para 15 mL, o qual é pré-preenchido com CHROMABOND®

QuEChERS Mix III, agite por 1 minuto e centrifugue novamente (5 min a 4500 rpm, 5 °C) Acefato Atrazina Azoxistrobina Carbaril Mevinfós Propizamida Tiaclopride Tebuconazol Fosmete Fosalona Ometoato Imidacloprida Miclobutanila Tebufenozida Fenazaquina Clofentezina Clorpirifós Coumafós Ciprodinil Diazinona Dimetoato Ethion Etoprofós Metamidofós Metomil

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subsequente realizada com Papinha

MN Appl. No. 306050/127420

Esta aplicação descreve o uso do CHROMABOND® _{QuEChERS Misturas}

para a análise da classe de 25 múltiplos pesticidas resíduais em alimento infantil* o qual foi comprado em um armazém local. A extração e a extração e purificação foi realizada com sucesso com as misturas I e VI. Análise subsequente realizada com LC/MS/MS foi realizado com a nova coluna NUCLEODUR®_C

18Gravity-SB.

2 4 6 8 10 12 14 min

0

Pré-tratamento da amostra: análigo ao procedimento realizado em maçãs Extração: Mix I Purificação: Mix VI

Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) Acefato 78 1 Ometoato 84 2 Atrazina 95 2 Fosalona 75 2 Azoxistrobina 100 2 Fosmete 110 2 Carbaril 103 2 Tebuconazol 85 2 Clorpirifós 58 4 Tiaclopride 99 2 Coumafós 74 2 Propizamida 98 2 Ciprodinil 62 1 Mevinfós 101 2 Diazinona 92 3 Fenazaquina 42 4 Dimetoato 97 2 Clofentezina 73 2 Ethion 77 4 Tebufenozida 99 6 Etoprofós 99 1 Miclobutanila 100 2 Metamidofós 80 8 Imidacloprida 99 2 Metomil 97 1

Pesticida Limite de quantificação (LOQ) µg/kg Limite de detecção(LD) µg/kg extrato bruto após extração após limpeza extrato bruto após extração após limpeza Acefato 0.26 0.18 0.16 0.08 0.05 0.05 Atrazina 0.29 0.21 0.18 0.09 0.06 0.05 Azoxistrobina 0.10 0.08 0.04 0.03 0.02 0.01 Carbaril 0.15 0.13 0.10 0.04 0.04 0.03 Clorpirifós 2.45 4.93 1.96 0.74 1.48 0.59 Coumafós 0.87 0.98 0.65 0.26 0.29 0.19 Ciprodinil 1.89 3.08 1.33 0.57 0.92 0.40 Dimetoato 0.42 0.16 0.16 0.13 0.05 0.05 Ethion 1.45 2.75 1.17 0.44 0.82 0.35 Etoprofós 0.88 0.37 0.27 0.27 0.11 0.08 Metamidofós 0.49 0.33 0.37 0.15 0.10 0.11 Metomil 0.49 0.24 0.18 0.15 0.07 0.05 Ometoato 0.33 0.22 0.21 0.10 0.07 0.06 Fosalona 0.27 0.30 0.20 0.08 0.09 0.06 Fosmete 0.12 0.09 0.06 0.03 0.03 0.02 Tebuconazol 0.29 0.22 0.19 0.09 0.07 0.06 Tiaclopride 0.09 0.06 0.04 0.03 0.02 0.01 Propizamida 0.68 0.41 0.36 0.20 0.12 0.11 Mevinfós 0.33 0.20 0.19 0.10 0.06 0.06 Clofentezina 1.27 0.79 0.54 0.38 0.24 0.16 Tebufenozida 0.30 0.27 0.27 0.09 0.08 0.08 Miclobutanila 0.39 0.23 0.20 0.12 0.07 0.06 Imidacloprida 0.23 0.16 0.14 0.07 0.05 0.04 Espinafre MN Appl. No. 306060/127430

Nesta aplicação descrevemos o uso do CHROMABOND®_{QuEChERS Mis}

-turas I and V para análise da classe de 25 múltiplos pesticidas residuais em espinafre* o qual foi comprado em um armazém local. Análise LC/MS/MS foi realizada com a nova coluna

NUCLEODUR®_C

18 Gravity-SB.

2 4 6 8 10 12 14 min

0

Pré-tratamento da amostra: análigo ao procedimento realizado em maçãs Extração: Mix I Purificação: Mix V

Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) Pesticida % Recuperação % RSD (n=5) 100 4 85 1 94 2 80 2 96 2 87 3 96 2 95 3 74 3 98 2 73 2 95 3 65 4 96 2 96 2 74 3 95 2 62 2 106 3 96 3 97 2 97 2 87 3 102 2 95 2

Análise subsequente por HPLC

250 µL QuEChERS extrato é avolumado para 1 mL com Eluente A, a mistura é filtrada com o filtro para seringa CHROMAFIL ®_{Xtra PET-20/13 (REF 729222)}

antes da realização da injeção Condições HPLC

Coluna: 100x3 mm NUCLEODUR®_C

18Gravity-SB, 3 µm,

(REF 760606.30)

Eluente: A) 5 mmol/L formato de amônio em água B)5 mmol/L formato de amônio em metanol

(dissolva o formato de amônio em 5 mL de água e avolume para 1L com metanol)

Gradiente: 25–90% B em 10 min, 90% B por 5 min Vazão: 0.5 mL/min Temperatura: 30 °C Injeção: 10 µL Deteção: MS Acefato Atrazina Azoxistrobina Carbaril Clorpirifós Coumafós Ciprodinil Diazinona Dimetoato Ethion Etoprofós Metamidofós Metomil Ometoato Propizamida Tiaclopride Tebuconazol Fosmete Fosalona Mevinfós Fenazaquina Clofentezina Tebufenozida Miclobutanila Imidacloprida

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Informações para compra

Misturas para extração

• Tubo para centrífuga com capacidade para 15 mL com tampa rosca

Método Mist. No. Conteúdo da mistura Volume Quantidade REF

EN 15662 Mix I 4 g MgSO4, 1 g NaCl,

0.5 g Na2H citrate · 1.5 H2O, 1 g Na3 citrate · 2 H2O

15 mL 50 730970

AOAC 2007.01 Mix II 6 g MgSO4, 1.5 g NaOAc 15 mL 50 730971

Original Mix XII 4 g MgSO4, 1 g NaCl 15 mL 50 730648

Misturas para purificação

• 15 mL tubo para centrífuga com tampa rosca • 2 mL tubo para centrífuga com tampa

Método Mist. No. Conteúdo da mistura Volume Quantidade REF

EN 15662 Mix III 0.90 g MgSO4,

0.15 g CHROMABOND®_Diamino 15 mL 50 730972 EN 15662 Mix IV 0.90 g MgSO4, 0.15 g CHROMABOND®_Diamino, 15 mg CHROMABOND®_Carbon 15 mL 50 730973 EN 15662 Mix V 0.90 g MgSO4, 0.15 g CHROMABOND®_Diamino, 45 mg CHROMABOND®_Carbon 15 mL 50 730975 EN 15662 Mix VI 0.90 g MgSO4, 0.15 g CHROMABOND®_Diamino, 150 mg CHROMABOND®_C 18 ec 15 mL 50 730974

AOAC 2007.01 Mix XVII 0.15 g MgSO4,

50 mg CHROMABOND®_Diamino, 50 mg CHROMABOND®_Carbon

2 mL 50 730996.2

AOAC 2007.01 Mix XIX 0.15 g MgSO4,

50 mg CHROMABOND®_Diamino,

50 mg CHROMABOND®_C

18 ec

15 mL 50 730657

AOAC 2007.01 Mix XX 1.20 g MgSO4,

0.40 g CHROMABOND®_Diamino

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Serviços especiais para necessidades especiais

Misturas customizadas estão disponíveis sob demanda.

Misturas de adsorventes para extração: • MgSO4 • NaCl • Na2H citrato · 1.5 H2O • Na3 citrato · 2 H2O • Na acetato • outros

Tamanhos (da esquerda para a direita): • 2 mL

• 15 mL • 50 mL

• Embalagens de alumínio

Misturas de adsorventes para purificação: • MgSO4

• CHROMABOND®_{Diamino (PSA)} • CHROMABOND®_C 18 ec • CHROMABOND®_{Carbon (GCB)} • NaCl • Alox N • Florisil® • CaCl2 • NaHCO3 • outros

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USA:

MACHEREY-NAGEL Inc. Tel.: +1 484 821 0984 Fax: +1 484 821 1272 MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG · Neumann-Neander-Str. 6–8 · 52355 Düren · Germany

Germany and international: Tel.: +49 24 21 969-0 Fax: +49 24 21 969-199 Switzerland: MACHEREY-NAGEL AG Tel.: +41 62 388 55 00 Fax: +41 62 388 55 05 France: MACHEREY-NAGEL EURL Tel.: +33 388 68 22 68 Fax: +33 388 51 76 88 one source for your competitive advantage.

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Traduzido por: Carvalhaes rev.00

Carvalhaes Produtos para Laboratório Ltda. Av. Presidente Getúlio Vargas, 8806 Distrito Industrial CEP: 94836-000 - Alvorada - RS Tel.: +55 51 3044-8800 Fax: +55 51 3044-8839 e-mail: vendas@carvalhaes.net www.carvalhaes.net