LIVRO
DE
NA0001 - PRODUÇÃO DE FENÓLICOS TOTAIS EM FRUTOS DE LIBIDIBIA FERREA MICORRIZADA E CULTIVADA POR 20 MESES
Autores: Matheus Paiva Emidio Cavalcanti - 1ºAutor (UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO); Fabio Sergio Barbosa Silva - Orientador (UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: Libidibia ferrea, também conhecida como pau-ferro, é uma leguminosa encontrada na Caatinga e utilizada popularmente para fins medicinais devido às propriedades terapêuticas, como: antibacteriana, antifúngica, anticancerígena e antitumoral. Tais benefícios são atribuídos à presença de fenólicos na fitomassa, com destaque para os frutos. É conhecido que os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) promovem incremento nos teores de fenóis, fato não definido para os frutos desta leguminosa. O estudo teve objetivo de avaliar a produção de fenóis totais em frutos de L. ferrea, estabelecida em campo por 20 meses, inoculada ou não com FMA. Frutos foram coletados de plantas inoculadas ou não com Gigaspora albida, Acaulospora longula e Claroideoglomus etunicatum, que estavam mantidas em um campo experimental em Petrolina-PE. Posteriormente, foi preparado extrato a partir de 2 g de fruto macerados em metanol (80 %) por 10 dias a 20 ºC. Logo após, foi realizada a quantificação espectrofotométrica de fenóis totais pelo método oxidação e complexação com fosfomolibotugnstato. A inoculação com A. longula promoveu o aumento de 26,44 % na produção de fenóis totais em comparação ao controle sem inoculação. Os outros tratamentos de inoculação com FMA não trouxeram benefícios adicionais no acúmulo de fenólicos totais. Conclui-se que a tecnologia micorrízica, empregando A. longula, é uma ferramenta para produzir frutos de L. ferrea mais atrativos à indústria fitoterápica. Keywords: : Pau-ferro; Compostos fenólicos; Tecnologia micorrízica
NA0002 - TEORES DE PROANTOCIANIDINAS TOTAIS EM FRUTOS DE LIBIDIBIA FERREA MICORRIZADA
Autores: Brena Coutinho Muniz - 1ºAutor (UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO); Francineyde Alves Da Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO); Fabio Sergio Barbosa Da Silva - Orientador (UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO); Emanuela Lima Dos Santos - Orientador (UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: O pau-ferro (Libidibia ferrea), planta comum na região da caatinga, produz compostos bioativos e por isso é comumente utilizado na medicina popular nordestina. Uma parte dos benefícios terapêuticos é atribuída às proantocianidinas. Uma das formas de aumentar a produção dessas moléculas é pela inoculação de fungos micorrízicos arbusculares (FMA). O objetivo deste estudo foi selecionar FMA eficientes em aumentar a produção proantocianidinas em frutos de L. ferrea. Foram utilizados os tratamentos: Acaulospora longula, Claroideoglomus etunicatum, Gigaspora albida e controle sem inoculação. Após 20 meses em campo experimental, os frutos foram coletados, limpos, secos em estufa (45 ºC) e triturados. Utilizou-se 2 g do fruto em 20 mL de metanol 80 % por 10 dias, para a maceração. As proantocianidinas totais foram doseadas em espectrofotômetro, após reação pelo método de vanilina ácida. Os dados foram submetidos à ANOVA e as médias comparadas pelo teste de Tukey (5 %). As concentrações de proantocianidinas totais nos extratos de frutos de L. ferrea micorrizadas não diferiram do controle não inoculado. Provavelmente, os precursores destas biomoléculas estão sendo utilizados em outras reações anabólicas. Conclui-se que a inoculação com FMA não é alternativa para incrementar os teores de proantocianidinas totais em frutos obtidos de L. ferrea estabelecida em campo por 20 meses e que estudos com frutos desta leguminosa, cultivada por mais tempo em campo, devem ser delineados. Keywords: FMA; Compostos bioativos; pau-ferro
NA0003 - EFICIÊNCIA DE TÉCNICAS BIOTECNOLÓGICAS NA DETECÇÃO DE PANTOEA STEWARTII EM SEMENTES DE MILHO.
Autores: Fabiana Rodrigues Da Silva - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO, SYNGENTA PROTECAO DE CULTIVO LTDA.); Norton Chagas Rodrigues Filho - Co-Autor (SYNGENTA LTDA); Zacarias Ribeiro Junior CoAutor (SYNGENTA LTDA); Rui Sales Junior -Orientador (UFERSA) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:
Resumo: Pantoea stewartii (Syn.Erwinia stewartii) é o agente causal da murcha bacteriana e crestamento foliar em milho (Zea mays), sendo sua transmissão realizada por insetos ou vía sementes. Esta bactéria pertence a Classe Gammaproteobacteri, ordem Enterobacteriales, família Enterobacteriaceae, gênero Pantoea. Desde o ano 2008 que o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA) a incluiu comoPraga Quarentenária (A1). onde Sendo sua presença no país considerada de alto risco, tendo em vista o potencial dano econômico que a mesma é capaz de causar. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência e especificidade do teste sorológico Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) do tipo Double Antibody Sandwich ELISA (DAS-ELISA) e da Polimerase Chain Reaction (PCR) na indexação de sementes de milho recebidas pela Estação Quarentenária da Syngenta, nível II, situada em Aracati-CE frente a Pantoea stewartti. Foram avaliadas 33 quarentenas por meio do teste sorológico DAS-ELISA comercializado pela empresa Agdia®. O protocolo seguido foi indicado pelo fabricante. Não obstante, por se tratar de sementes, primeiramente realizou-se o processo de trituração das mesmas, em seguida prosseguiu-se o protocolo do fabricante. Em todos os testes foram utilizados um controle positivo e um controle negativo. Na fase final das análises realizou-se as leituras das placas em um aparelho da marca BioTek®-Elx800, utilizando-se o comprimento de onda de 405 nm. Foram consideradas positivas as amostras cujos valores de absorbância correspondiam a duas vezes e meia as médias dos valores registrados no controle negativo, seguindo o critério indicado por Almeida; Lima, 2001. Para avaliar a especificidade, 10% das quarentenas analisadas foram submetidas a Extração total de DNA utilizando de kit Promega® e protocolo indicado pelo fabricante. Em seguida realizou-se a PCR utilizando os seguintes pares de primers específicos: P.stewartti F (5-?CCT GTC AGT CTC GAA CC-3?) e P. stewartti R (5? ATC TCG AAC CGG TAA CC 3?) a temperatura de anelamento para os primers foi de 52º C. Os produtos obtidos na PCR foram analisados em gel de agarose 1%, preparado em tampão de corrida TBE 1X (40 mM Tris base, 2mM de EDTA) e 0,01% SYBR Safe para visualizar as bandas. A eletroforese foi conduzida a 90 V por aproximadamente 45 min. Após a corrida, o perfil eletroforético foi visualizado em luz ultravioleta e fotodocumentado. Os resultados do teste ELISA e da PCR mostram a ausência da bactérias em todas as quarentenas analisadas, com base nesses resultados conclui-se que tanto ELISA como PCR são eficientes para detectar Pantoea stewartii em sementes de milho. No entanto, devido a disponibilidade de controle positivo e negativo, resultado quantitativo, elevada quantidade de amostra por teste, praticidade e economia o teste ELISA é o mais adequado nesse caso.
NA0004 - IMPLICAÇÕES DA NUTRIÇÃO COM AMÔNIO NOS MECANISMOS ANTIOXIDANTES DE PLANTAS DE SORGO SUBMETIDAS AO ESTRESSE SALINO
Autores: Stelamaris De Oliveira Paula - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA); Eneas Gomes Filho - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:Não
Resumo: O estresse salino é um dos fatores ambientais que mais limita o crescimento e a produtividade das culturas. Além dos efeitos osmótico e iônico do acúmulo de sais no meio, o estresse oxidativo, de efeito secundário, é responsável por danos aos componentes celulares e a processos celulares importantes para o desenvolvimento do indivíduo. Recentes estudos reportam a influência da fonte de nitrogênio (N) na tolerância a salinidade, incluindo a capacidade do íon amônio em induzir respostas de resistência ao estresse. Contudo, os mecanismos antioxidantes acionados em condições de estresse por plantas de sorgo crescidas em diferentes fontes de nitrogênio ainda permanecem desconhecidos. Dessa forma, pretende-se verificar a influência das fontes de nitrogênio no desempenho do sistema antioxidante em plantas de sorgo sob salinidade. Após serem crescidas em soluções nutritivas contendo três diferentes proporções de NO3-:NH4+ (100:0; 50:50 e 0:100), sendo a concentração de nitrogênio de 5 mM, as plantas serão submetidas ao estresse salino com NaCl a 75 mM. Serão analisadas as trocas gasosas, fluorescência da clorofila, conteúdo de H2O2, radical superóxido (?O2-) e radical hidroxila (OH?), bem como o vazamento de eletrólitos, peroxidação de lipídeos de membrana e teores de proteínas oxidadas nos diferentes órgãos da planta. Também serão mensurados os componentes enzimáticos (atividades das enzimas CAT, SOD, APX, G-POD e GR) e não enzimáticos (glutationa e ascorbato) do sistema antioxidantes em folhas e raízes de plantas de sorgo. Keywords: Salinidade; estresse oxidativo, Sorghum bicolor, catalase.
NA0005 - INFLUÊNCIA DO TEMPO DE MATURAÇÃO IN VITRO EM OÓCITOS DE CATETOS (PECARI TAJACU LINNEAUS, 1758)
Autores: Alexsandra Fernandes Pereira - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alexandre Rodrigues Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Moacir Franco De Oliveira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Luiza Bento De Queiroz Neta - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Lhara Ricarliany Medeiros De Oliveira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Gabriela Pereira De Oliveira Lira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Maria Valeria De Oliveira Santos - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alana Azevedo Borges - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível: STA2:
Resumo: A maturação in vitro (MIV) de oócitos consiste numa etapa essencial para biotecnologias reprodutivas, como a fecundação in vitro, injeção intracitoplasmática de espermatozoides e transferência nuclear de células somáticas. Todas essas biotécnicas podem ser utilizadas como ferramentas para a conservação de mamíferos silvestres, como os catetos. Esses animais se destacam pelo seu potencial zootécnico e econômico, sendo considerados como fonte para pecuária alternativa de pequenos produtores rurais. Nesse sentido, para alcançar o sucesso da MIV é necessário o estabelecimento do tempo de incubação desses oócitos. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência do tempo de MIV (24 h vs. 48 h) sobre o percentual de oócitos maturados de catetos. Para tanto, ovários recuperados de nove fêmeas mantidas do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA) foram aspirados e fatiados para a obtenção de oócitos imaturos. Posteriormente, todos os oócitos foram classificados morfologicamente de acordo com a homogeneidade do citoplasma, número e compactação das camadas de células do cumulus em: Grau 1 (3 ou mais camadas de células do cumulus e citoplasma homogêneo); Grau 2 (1?2 camadas de células do cumulus e citoplasma homogêneo); Grau 3 (oócito parcialmente desnudo e ligeiramente heterogêneo); Grau 4 (oócito desnudo e heterogêneo). Os oócitos 1 e 2 foram selecionados e submetidos à MIV em TCM199 com 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 0,2 mM de piruvato de sódio, 1% de solução de antibiótico-antimicótico e suplementado com 10 µg/mL de FSH, 10% de soro fetal bovino e 100 ?M de cisteamina a 38,5°C, 5% de CO2 e umidade máxima por 24 ou 48 h de incubação. Após cada período, as células do cumulus foram removidas por pipetagens e as estruturas desnudadas foram verificadas quanto à presença do primeiro corpúsculo polar (1CP) sob estereomicroscópio. Assim, os oócitos com 1CP foram considerados maturados. Os dados foram analisados pelo teste exato de Fisher (P < 0,05) e expressos em média percentual ± erro padrão. Um total de quatro repetições (2?3 fêmeas por repetição) foi realizado, resultando em 59 oócitos imaturos e com uma taxa de recuperação de 83,1% (59/71) e 3,3 oócitos por ovário. Destes, 42 estruturas foram classificadas como viáveis (2,3 oócitos viáveis por ovário). Após diferentes períodos de incubação, valores de maturação superiores a 50% foram observados para ambos os grupos. Além disso, diferenças (P < 0,05) foram observadas entre 24 e 48 h para a presença do 1CP (52,4 ± 2,2 (11/21) vs. 90,5 ± 2,0 (19/21). Em conclusão, o tempo de 48 h foi mais adequado para a MIV de oócitos derivados de catetos, quanto à presença do 1CP. Tais resultados evidenciam que a MIV nesta espécie ocorre em período similar aos oócitos de suínos domésticos, espécie filogeneticamente próxima a esta espécie silvestre. Keywords: Mamíferos silvestres, biotécnicas reprodutivas, maturação nuclear.
NA0006 - INFLUÊNCIA DO SORO FETAL BOVINO NO MEIO DE RESFRIAMENTO OVARIANO SOBRE A QUALIDADE DE OÓCITOS BOVINOS
Autores: Alzira Regina Silva De Deus - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alana Azevedo Borges - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Luiza Bento De Queiroz Neta - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Luanna Lorenna Vieira Rodrigues - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Lhara Ricarliany Medeiros De Oliveira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Maria Barbara Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alexsandra Fernandes Pereira - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: A recuperação de oócitos para a produção in vitro de embriões bovinos pode ser realizada usando fêmeas in vivo ou post-mortem. Nesse último caso, os abatedouros possuem grande importância em virtude da disponibilidade de ovários. Contudo, a localização desses abatedouros é algumas vezes distante, necessitando de condições adequadas para o transporte de ovários por longos períodos. Essas condições envolvem o uso de meios e suplementações que precisam ser estabelecidos para manter a qualidade oocitária. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência do soro fetal bovino (SFB) em meio simples [solução tampão fosfato (PBS)] durante o resfriamento de ovários bovinos sobre os parâmetros qualitativos e quantitativos de oócitos. Para tanto, ovários derivados de fêmeas de abatedouro foram divididos aleatoriamente nos grupos: resfriamento em PBS [PBS], resfriamento em PBS suplementado com 10% de SFB [PBS-SFB] e não resfriado [controle]. Para o resfriamento, ovários foram armazenados a 4?6°C por 24 h. Posteriormente, todos os ovários foram submetidos à aspiração folicular (agulha 21G e seringa de 5,0 mL) e os oócitos recuperados foram classificados de acordo com a morfologia em viáveis [uma ou mais camadas de células do cumulus (CCs) e citoplasma homogêneo] e não viáveis [parcialmente ou completamente desnudos com citoplasma homogêneo ou heterogêneo)]. Além disso, a qualidade também foi avaliada pelo ensaio de azul de cresil brilhante (ACB), no qual oócitos apresentando citoplasma azul foram classificados como viáveis (ACB+) e sem coloração foram considerados não viáveis (ACB-). Para a avaliação da viabilidade das CCs, oócitos viáveis foram submetidos à desagregação mecânica, a suspensão celular foi corada com azul de tripan (0,2%) e visualizada em câmara de Neubauer. Assim, células vivas (incolor) e mortas (azul) foram contadas. Para análise estatística (P < 0,05) foi utilizado o teste exato de Fisher e teste de chi-quadrado (viabilidade das CCs). Após cinco repetições, um total de 108 ovários foi recuperado e dividido entre os grupos. Inicialmente, a presença de SFB [PBS-SFB] influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% ± 2,1) quando comparada ao grupo PBS (32,8% ± 3,4), sendo o primeiro similar ao controle (42,0% ± 5,0). Na avaliação morfológica, nenhuma diferença foi observada entre os grupos (controle: 67,5% ± 4,8; PBS-SFB: 68,7% ± 4,9; PBS: 60,0% ± 6,2), assim como na avaliação pelo ensaio de ACB (controle: 40,3% ± 8,1; PBS-SFB: 44,4% ± 4,6; PBS: 42,6% ± 3,7). Já na viabilidade das CCs, embora o resfriamento tenha afetado a viabilidade das CCs dos oócitos recuperados (controle: 49,0% ± 2,8), um maior percentual de células viáveis foi observado nos oócitos derivados de ovários resfriados em PBS-SFB (46,3% ± 3,3) quando comparado ao grupo PBS (41,7% ± 1,4). Em conclusão, a adição de SFB ao meio de resfriamento de ovários bovinos por 24 h proporciona um melhor ambiente para manutenção da qualidade oocitária.
Keywords: Produção in vitro de embriões, recuperação oocitária, ensaios de coloração, suplementação proteica.
NA0007 - INFLUÊNCIA DE DIFERENTES CRIOPROTETORES SOBRE A VIABILIDADE DE CÉLULAS SOMÁTICAS DE CATETOS (PECARI TAJACU LINNAEUS, 1758)
Autores: Gabriela Pereira De Oliveira Lira - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Alexandre Rodrigues Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Moacir Franco De Oliveira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Luiza Bento De Queiroz Neta - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Maria Valeria De Oliveira Santos - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO (UFERSA)); Lucas Emanuel Nascimento -Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Alana Azevedo Borges - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Alexsandra Fernandes Pereira1 - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA))
Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: A criopreservação de células somáticas é uma técnica interessante para a conservação de material biológico visando o uso na investigação básica, transferência nuclear (clonagem) e formação de bancos genéticos. Para todas essas aplicações, a escolha dos crioprotetores a serem empregados na criopreservação dessas células consiste na primeira etapa a ser estabelecida. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi comparar a influência de diferentes crioprotetores intracelulares (dimetilsulfóxido, DMSO, e etilenoglicol, EG) e extracelular (sacarose, SAC) sobre a viabilidade de células somáticas derivadas de catetos, mamíferos silvestres com importância cientifica, ecológica e econômica. Para tanto, fragmentos teciduais da região auricular periférica de cinco catetos, mantidos no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA), foram cultivados in vitro por 40 dias. Posteriormente, células somáticas recuperadas desses fragmentos foram submetidas à congelação lenta usando a solução de criopreservação constituída por meio essencial mínimo modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 2% de solução de antibiótico-antimicótico,10% de soro fetal bovino e seis combinações de crioprotetores a seguir: 10% de DMSO (DMSO), 10% de DMSO e 0,2 M de sacarose (DMSO-SUC), 10% de EG (EG), 10% EG e 0,2 M de sacarose (EG-SAC), 10% de DMSO e 10% de EG (DMSO-EG), 10% de DMSO, 10% de EG e 0,2 M de sacarose (DMSO-EG). Para todas as congelações, foi empregado o sistema de congelação Mr. Frosty (Mr. Frosty? Freezing Container) numa taxa de resfriamento de 1°C/min e concentração final de 2,0 x 106 células/mL. Além disso, células não criopreservadas foi considerada como grupo controle. Para a avaliação da viabilidade, células descongeladas e não criopreservadas foram submetidas ao ensaio de azul de tripan. Todas as análises foram realizadas em duplicatas. Os dados foram expressos como média ± desvio padrão e analisados usando ANOVA seguida de teste Tukey (P ? 0,05). Após as análises, apenas células somáticas derivadas da congelação lenta usando DMSO-SAC (69,8% ± 9,6) mantiveram a viabilidade similar ao grupo não criopreservado (85,7% ± 3,4; P > 0,05), evidenciando um efeito positivo da presença de sacarose sobre a viabilidade celular. Além disso, embora os demais grupos tenham sido diferentes do controle foram similares entre si (P > 0,05): EG (50,8% ± 19,5), EG-SAC (58,5% ± 7,1), DMSO (55,8% ± 10,1), DMSO-EG (58,7% ± 11,2) e DMSO-EG-SAC (47,9% ± 9,8). Adicionalmente, exceto para o grupo DMSO-SAC, a presença de sacarose não influenciou na manutenção da viabilidade de células somáticas após a congelação lenta. Em conclusão, 10% de DMSO acrescido de 0,2 M de sacarose manteve a viabilidade de células somáticas derivadas de catetos após a descongelação, podendo essa combinação de crioprotetores ser utilizada na conservação de material biológico desta espécie. Keywords: Palavras chaves: Mamíferos silvestres, criopreservação, cultivo in vitro, crioprotetores
NA0008 - USO DA CITOMETRIA DE FLUXO NA AVALIAÇÃO DA MEMBRANA PLASMÁTICA DO ESPERMATOZOIDE CAPRINO
Autores: Marciane Da Silva Maia 1ºAutor (EMBRAPA SEMIARIDO); Claudio Avelino De Oliveira Lucena -Co-Autor (UFRN); Carlos Eduardo Bezerra De Moura - -Co-Autor (UFERSA) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível: STA2:
Resumo: A avaliação rápida e precisa da viabilidade espermática é importante na determinação da qualidade seminal. O método clássico usado, coloração supra vital, é muito demorado e avalia relativamente poucos espermatozoides. A associação de sondas fluorescentes com a citometria de fluxo permite quantificar rapidamente características específicas de um grande número de células individuais. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da citometria de fluxo para analisar a viabilidade espermática em comparação com a técnica de coloração vital, bem como comparar os resultados obtidos no sêmen caprino criopreservado em diferentes diluidores. Os ejaculados, foram divididos em partes iguais e após a remoção do plasma seminal (centrifugação 2 x 600 x g / 10 min) o sêmen foi diluído (400 x 106 sptz/ml) em diluidor à base de leite desnatado-glicosado ou Tris-glicose-gema, envasado em palhetas de 0,25 ml e congelado em sistema automatizado. Após a descongelação (37 ºC/30s) uma amostra era corada com uma solução de sondas contendo Diacetato de carboxifluoresceína (DIC) e Iodeto de propídio (IP) na concentração de 0,002 mg/ml de DIC e 0,01 mg/ml de IP (Peña et al. Theriogenology, v.50, p.1211-1220, 1998) e analisada em Citômetro de Fluxo (FACS Canto II, BD Bioscience) contando-se 20.000 células/amostra. Para a coloração vital uma gota de sêmen era colocada sobre uma lâmina de vidro pré-aquecida (37°C) e misturada com uma gota de corante supra vital (eosina 1 g/100 ml; nigrosina 5g/100 ml; citrato de sódio 2,9 g/100 ml). Em seguida fazia-se um esfregaço e após secagem, 200 células/lâmina eram examinadas com aumento de 1000 x em microscópio de contraste de fase (Leica DM 750). O experimento foi replicado oito vezes utilizando um pool de dois ejaculados de um mesmo bode. A relação entre as populações de espermatozoides quantificadas pela citometria de fluxo e pela coloração vital foi estabelecida pela análise de correlação simples e o efeito do diluidor sobre os parâmetros estudados pela ANOVA com comparação de medias pelo teste de Duncan a P<0,05. A citometria de fluxo permitiu a identificação de três populações de espermatozoides: A= células positivas para IP (fluorescência vermelha); B= células coradas por IP e que também retiveram DIC e C= células que retiveram apenas DIC (fluorescência verde). A porcentagem de espermatozoides viáveis (fluorescência verde) foi maior nas amostras congeladas em Tris-gema (49,1± 14,5%) que no leite (32,8 ± 13,6%). Comportamento semelhante foi observado na coloração vital com 72,3% de viáveis no Tris-gema e 58% no Leite. Diferenças na retenção de viabilidade entre os diluidores foram detectadas mesmo entre amostras de espermatozoides oriundas do mesmo ejaculado sugerindo que o diluidor Tris-gema proporcionou uma melhor proteção à membrana plasmática durante a congelação e descongelação, do que o diluidor à base de leite. A porcentagem de espermatozoides viáveis, determinada pela análise de citometria de fluxo foi altamente correlacionada com a técnica de microscopia com coloração vital (r = 0,69; P<0,01) demonstrando que a combinação de DIC e IP analisados por citometria de fluxo é um método rápido e preciso para avaliar a viabilidade do espermatozoide caprino. Keywords: criopreservação, fluorescência, sêmen, viabilidade espermática
NA0009 - AVALIAÇÃO DA VIABILIDADE DE CÉLULAS RECUPERADAS DE TECIDO SOMÁTICO VITRIFICADO DE CATETOS (PECARI TAJACU LINNAEUS, 1758)
Autores: Matheus Barbosa Do Nascimento - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA); Moacir Franco De Oliveira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA); Alexandre Rodrigues Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA); Luiza Bento De Queiroz Neta - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA); Maria Valeria De Oliveira Santos - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO/UFERSA); Lucas Emanuel Nascimento -Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA); Gabriela Pereira De Oliveira Lira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA); Alana Azevedo Borges - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA); Alexsandra Fernandes Pereira - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO/UFERSA)
Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: Os catetos são mamíferos silvestres de grande importância ecológica, econômica e científica, mas que tem apresentado uma redução populacional em alguns biomas, como a Caatinga. Devido à degradação ambiental e a caça predatória, conservar recursos genéticos tem sido uma estratégia eficiente para a conservação da biodiversidade. Nesse sentido, a formação de criobancos de tecidos visando à obtenção de células tem sido indicada como uma abordagem prática para essa finalidade e o estabelecimento de crioprotetores adequados consiste numa etapa importante para a eficiência final. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da sacarose (SAC, crioprotetor extracelular) em combinação com o etilenoglicol (EG, crioprotetor intracelular) na vitrificação de tecido somático de catetos sobre a viabilidade das células recuperadas após cultivo in vitro. Para tanto, fragmentos auriculares da região periférica coletados de cinco animais foram divididos aleatoriamente nos grupos: vitrificado usando EG, vitrificado usando EG-SAC e não vitrificado (controle). O sistema de vitrificação foi a superfície sólida usando a solução constituída por meio essencial mínimo modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 10% de soro fetal bovino e 3,0 M de EG na ausência ou presença de 0,25 M de SAC. Após duas semanas, fragmentos aquecidos foram cultivados in vitro por até 50 dias com três passagens, nas quais na primeira e terceira passagem foi determinada a viabilidade celular pelo ensaio de azul de tripan. Todas as análises foram realizadas em duplicatas para cada animal de cada grupo experimental. Os dados foram expressos como média percentual ± desvio padrão e analisados usando ANOVA seguida de teste Tukey (P ? 0,05). Na avaliação da viabilidade das células após a primeira (EG-SAC: 86,9% ± 7,7; controle: 96,3% ± 4,5) e terceira passagem (EG-SAC: 88,3% ± 8,5; controle: 97,8% ± 2,8), o grupo EG-SAC foi similar (P > 0,05) ao controle (não vitrificado). Contudo, células resultantes de tecidos vitrificados somente com EG apresentaram uma menor viabilidade após a primeira (84,7% ± 8,1) e a terceira passagem (64,2% ± 20,0) quando comparada as células derivadas dos fragmentos não vitrificados, evidenciando a influência positiva da presença de sacarose na criopreservação tecidual. Em conclusão, a combinação 3,0 M de etilenoglicol com 0,25 M de sacarose foi a mais eficiente na vitrificação de tecidos somáticos vitrificados de catetos, visando à recuperação de células viáveis. Essas células servirão como doadoras de núcleo para biotecnologias, como a clonagem. Keywords: Mamíferos silvestres, criopreservação tecidual, ensaio de azul de tripan.
NA0010 - CARACTERIZAÇÃO HISTOLÓGICA DE TECIDO SOMÁTICO DE ONÇA-PINTADA (PANTHERA ONCA): RESULTADOS PRELIMINARES
Autores: Erika Almeida Praxedes - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Moacir Franco De Oliveira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alexandre Rodrigues Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Leandro Rodrigues Ribeiro - Co-Autor (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARA ); Herlon Victor Rodrigues Silva CoAutor (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARA ); Maria Valeria De Oliveira Santos CoAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO); Alana Azevedo Borges CoAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO); Cibelle Anne Dos Santos Costa CoAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO); Francilane Nascimento Costa -Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Maria Barbara Silva - -Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Luiza Bento De Queiroz Neta - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO); Alexsandra Fernandes Pereira -Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:Não
Resumo: O conhecimento sobre o perfil histológico de mamíferos silvestres, principalmente àqueles em risco de extinção, é fundamental para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas de conservação. Nesse sentido, o uso do tecido somático como fonte biológica tem sido proposto, especialmente para a onça-pintada. Essa espécie, por requerer ambientes saudáveis e com abundância de presas, é útil como indicadora de qualidade ambiental em diferentes áreas rurais. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar a região tegumentar auricular periférica da onça-pintada. Para tanto, biópsias de pele da região auricular periférica foram recuperadas a partir de dois machos com idade de 10 e 15 anos, anestesiados com 0,08 mg/kg de cloridrato de dexmedetomidina e provenientes de zoológicos localizados no Nordeste do Brasil. As amostras foram transportadas por 3 a 5 h em meio essencial mínimo modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 10% de soro fetal bovino e 2% de solução de antibiótico-antimicótico, a 4°C. No laboratório, fragmentos (9,0 mm³) foram fixados em paraformaldeído tamponado em solução fosfato, desidratados por etanol e diafanizados em xilol. Em seguida, os mesmos foram inclusos em parafina, seccionados em cortes de 5,0 ?m e corados com hematoxilina-eosina para quantificação de halos e fibroblastos, bem como a mensuração da proporção volumétrica da derme e epiderme. Todos os dados foram expressos como média ± desvio padrão. Assim, tamanhos de 9,1 ± 2,7 µm e 63,7 ± 5,1 µm foram observados para epiderme e derme, com uma proporção volumétrica de 12,6% ± 3,9 e 87,3% ± 3,9, respectivamente. Além disso, na epiderme foram obtidos valores de 10,5 ± 4,4 para halos perinucleares e a derme apresentou 15,1 ± 4,3 de fibroblastos. Adicionalmente, foi observada uma fina espessura da epiderme apresentando em maior parte apenas uma camada de células. Em toda a derme foi identificada a presença de glândulas sebáceas, sudoríparas e folículos pilosos, sendo a localização das glândulas sebáceas tanto laterais quanto inferiores aos folículos pilosos. Em conclusão, de maneira preliminar, o sistema tegumentar auricular periférico de onça-pintada apresentou uma epiderme notoriamente delgada e derme com número reduzido de fibroblastos presentes. Essas informações auxiliarão no estabelecimento de protocolos de criopreservação tecidual, visando à aplicação em biotecnologias avançadas de conservação. Keywords: Conservação animal, felinos silvestres, histologia clássica.
NA0011 - AVALIAÇÃO DO ÓLEO ESSENCIAL DE CRAVO-DA-ÍNDIA (SYZYGIUM AROMATICUM) NA MATURAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS BOVINOS
Autores: Maria Valeria De Oliveira Santos - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Luciana Medeiros Bertini - Co-Autor (INSTITUTO FEDERAL DE EDUCACAO, CIENCIA E TECNOLOGIA DO RIO GRANDE DO NORTE); Erika Almeida Praxedes - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Luiza Bento De Queiroz Neta - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alana Azevedo Borges - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alzira Regina Silva De Deus - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO); Luanna Lorenna Vieira Rodrigues CoAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMIARIDO); Alexsandra Fernandes Pereira -Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:
Resumo: A produção in vitro de embriões (PIVE) vem sendo amplamente utilizada em programas de produção bovina com eficiência variável. O estresse oxidativo é um dos fatores que influencia nessa eficiência, pois pode causar alterações sobre as características dos gametas. Nesse contexto, o uso de antioxidantes naturais em meios de PIVE, especialmente na etapa da maturação in vitro (MIV), pode ser uma alternativa para minimizar os efeitos negativos do estresse oxidativo e aumentar as taxas de oócitos maturados. Assim, o óleo essencial de Syzygium aromaticum (OESA) apresenta grande potencial para essa finalidade. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi analisar o efeito de OESA em diferentes concentrações (10, 15 e 20 µg/mL) sobre a taxa de maturação de oócitos bovinos avaliada pela presença do primeiro corpúsculo polar (1CP) e placa metafásica. Para tanto, ovários foram obtidos em abatedouro local e transportados até o laboratório (NaCl 0,9% a 35?37ºC por 1 h) onde foram submetidos a aspiração folicular usando agulha (21G) e seringa (5,0 mL). Em seguida, oócitos foram recuperados e apenas àqueles apresentando uma ou mais camadas de células do cumulus compactas e citoplasma homogêneo foram selecionados para a MIV. Os oócitos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos experimentais: controle com antioxidante sintético, a cisteamina (CC), 10 µg/mL de OESA (OESA10), 15 µg/mL de OESA (OESA15) e 20 µg/mL de OESA (OESA20). Para a MIV, oócitos foram incubados por 24 h (5% de CO2 e atmosfera úmida) em meio TCM 199 com 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 0,2 mM de piruvato de sódio, 1% de solução de antibiótico-antimicótico, 20 µg/mL de FSH/LH, 10% de soro fetal bovino e acrescido de antioxidante de acordo com cada grupo. Após a MIV, as células do cumulus foram removidas por sucessivas pipetagens e foi realizada a análise do 1CP nos oócitos em estereomicroscópio. Posteriormente, oócitos foram fixados em paraformaldeído (4%), marcados com Hoechst 33342 (1,0 µg/mL; 15 min) e em microscópio de fluorescência foi identificada a presença ou ausência da placa metafásica. Os dados foram expressos como média percentual ± erro padrão e analisados pelo teste exato de Fisher (P < 0,05). Após três repetições, um total de 82 ovários foi obtido, resultando em 304 oócitos viáveis recuperados e perfazendo uma média de 3,7 oócitos viáveis por ovário. Quanto à taxa de maturação pela avaliação do 1CP, não houve diferença entre os grupos CC (65,6% ± 3,5), OESA10 (69,6% ± 14,0), OESA15 (60,7% ± 6,2) e OESA20 (60,0% ± 15,1). Em relação à presença de placa metafásica com a marcação fluorescente, os grupos também foram estatisticamente semelhantes (CC: 69,4% ± 2,9; OESA10: 78,0% ± 9,8; OESA15: 66,7% ± 3,7; OESA20: 65,6% ± 8,6). Portanto, pode-se concluir que, independente da concentração, o óleo essencial de cravo-da-índia apresentou efeito similar à cisteamina quanto à maturação nuclear de oócitos bovinos. Keywords: Produção in vitro de embriões, antioxidantes naturais, maturação nuclear.
NA0012 - COMPARAÇÃO ENTRE DIFERENTES MÉTODOS DE VITRIFICAÇÃO PARA O TECIDO OVARIANO DE CATETOS (PECARI TAJACU)
Autores: Samara Sandy Jeronimo Moreira - 1ºAutor (LABORATORIO DE CONSERVACAO GERMOPLASMA ANIMAL, UFERSA, MOSSORO, RN, BRASIL); Carlos Alexandre De Carvalho Apolinario - Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO GERMOPLASMA ANIMAL, UFERSA, MOSSORO, RN, BRASIL.); Luana Graziele Pereira Bezerra - Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO GERMOPLASMA ANIMAL, UFERSA, MOSSORO, RN, BRASIL.); Erica Camila Gurgel Praxedes - Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO GERMOPLASMA ANIMAL, UFERSA, MOSSORO, RN, BRASIL.); Andreia Maria Da Silva - Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO GERMOPLASMA ANIMAL, UFERSA, MOSSORO, RN, BRASIL.); Livia Batista Campos - Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO GERMOPLASMA ANIMAL, UFERSA, MOSSORO, RN, BRASIL.); Alexandre Rodrigues Silva - Orientador (LABORATORIO DE CONSERVACAO GERMOPLASMA ANIMAL, UFERSA, MOSSORO, RN, BRASIL.) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:Não
Resumo: Os catetos desempenham uma importante função ecológica, contribuindo para a manutenção de grandes predadores. Ainda, possuem um grande interesse pela criação em cativeiro, visto a possibilidade da comercialização de sua carne e pele no mercado internacional. Diante disso, faz-se necessário o desenvolvimento de técnicas visando a conservação de gametas femininos dessa espécie. Diversas técnicas de vitrificação vêm sendo empregadas, destacando-se a vitrificação em superfície sólida (VSS), já aplicada com sucesso em catetos. Recentemente, o uso do Ovarian Tissue Cryosystem (OTC) vem demonstrando eficiência em outras espécies. Assim, objetivou-se comparar o método de vitrificação em superfície sólida com o sistema OTC em relação à preservação da morfologia de folículos ovarianos pré-antrais (FOPAs) de catetos. Os ovários de cinco fêmeas (~2 anos) foram coletados após eutanásia, e divididos em fragmentos, destinados à análise a fresco e após vitrificação. Para a VSS, os fragmentos foram expostos a solução contendo Meio essencial mínimo (MEM) com 10 mg/mL de soro fetal bovino (SFB), 0,25 M de sacarose e 3 M de etilenoglicol. Após 5 min, a solução foi removida e, os fragmentos foram transferidos para um cubo de metal parcialmente imerso em nitrogênio líquido, acondicionados em criotubos, e, por fim, armazenados em nitrogênio líquido. Quanto a vitrificação em OTC, os fragmentos foram expostos à mesma solução dentro do dispositivo. Após 5 min, a solução foi removida, o dispositivo foi fechado e armazenado em nitrogênio líquido. Para o aquecimento, o criotubo e o dispositivo foram expostos à temperatura ambiente por 1 min, e mergulhados em banho-maria (37°C/30 s). Os fragmentos de ambos os métodos foram lavados em MEM com 3 mg/mL de SFB e soluções decrescentes de sacarose (0,5 M, 0,25 M e 0 M), onde permaneceram 5 min em cada. Em seguida, os fragmentos foram destinados a analise histológica, na qual foram fixados em Carnoy (12 h), corados em eosina-hematoxilina e classificados como normais ou degenerados. Os dados (média ± erro padrão) foram avaliados por ANOVA seguida do teste Tukey (P<0,05). No tecido a fresco, foram verificados 75,6 ± 8,6% de FOPAs morfologicamente normais, não tendo sido evidenciada diferença estatística em relação aos grupos vitrificados (P>0,05), nos quais obtiveram-se 52,8 ± 5,9% de FOPAS na VSS e 67,8 ± 6,8% de FOPAs no OTC. Comparando-se os métodos de vitrificação, também não houve diferença entre o uso da VSS com o OTC (P>0,05). Conclui-se que a técnica de vitrificação em OTC pode ser utilizada como uma alternativa à VSS para a conservação de tecido ovariano de catetos, contribuindo assim para a formação de bancos de germoplasma da espécie. Keywords: criopreservação, ovário, Tayassu tajacu
NA0013 - AVALIAÇÃO METABÓLICA DE TECIDO SOMÁTICO DE CATETOS (PECARI TAJACU LINNAEUS, 1758) APÓS DIFERENTES PERÍODOS DE RESFRIAMENTO
Autores: Lhara Ricarliany Medeiros De Oliveira - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO - UFERSA); Moacir Franco De Oliveira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Alexandre Rodrigues Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Gabriela Pereira De Oliveira Lira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Maria Barbara Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Maria Valeria De Oliveira Santos - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Alana Azevedo Borges - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Luiza Bento De Queiroz Neta - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)); Alexsandra Fernandes Pereira - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO (UFERSA)) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: O resfriamento pode ser empregado como uma alternativa para a conservação de amostras teciduais de mamíferos silvestres que são coletadas em locais de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados. Nesse contexto, é necessário estabelecer condições ideais de resfriamento para cada tecido/espécie. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar por análise da atividade metabólica o efeito do resfriamento após diferentes períodos de armazenamento de tecido somático de catetos. Para tanto, amostras teciduais da região auricular periférica foram coletadas de seis animais oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestre (CEMAS/UFERSA). Fragmentos teciduais (9,0 mm³) foram armazenados em tubos cônicos a 4?6°C por diferentes períodos (10D vs. 30D vs. 50D dias), totalizando três grupos experimentais e o controle (amostras não resfriadas). Após cada período de resfriamento, para a determinação da atividade metabólica, os fragmentos foram incubados em brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT; 2 mg/mL) por 3 h a 38,5°C. Após esse período foi acrescido dimetilsulfóxido (DMSO) por 4 minutos como solução de solubilização do MTT e a leitura realizada em espectrofotômetro a 595 nm. Todos os dados foram transformados em arc sen e analisados por ANOVA seguido de teste Tukey. O grupo controle foi considerado como 100% da atividade metabólica. Apesar de todos os grupos diferirem do controle, o grupo 10D manteve o melhor padrão de viabilidade das amostras (10D: 41,4% ± 20,7) quando comparado aos demais grupos resfriados (P < 0,05). Não foram observadas diferenças (P > 0,05) entre os grupos de 30D (22,5% ± 7,4) e 50D (22,6% ± 8,2). De acordo com os resultados obtidos, o resfriamento de amostras somáticas de catetos na ausência de meio nutritivo a partir de 30 dias diminuiu bastante a atividade metabólica do tecido. Em conclusão, o resfriamento durante dez dias na ausência de meio nutritivo foi o mais eficiente para armazenar os fragmentos somáticos de catetos, permitindo a conservação das características viáveis teciduais, visando a obtenção de células para biotécnicas reprodutivas com o intuito de conservação da espécie. Keywords: mamíferos silvestres; conservação tecidual; ensaio colorimétrico; MTT.
NA0014 - ISOLAMENTO ENZIMÁTICO DE FOLÍCULOS OVARIANOS PRÉ-ANTRAIS DE CATETOS (PECARI TAJACU)
Autores: Livia Batista Campos - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Erica Camila Gurgel Praxedes - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Caio Sergio Santos - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Samara Sandy Jeronimo Moreira - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Andreia Maria Da Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Alexandre Rodrigues Silva - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:Não
Resumo: Os catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) representam importante papel dentro da cadeia trófica de diferentes biomas, em especial a Caatinga. Além disso, são economicamente importantes, devido ao interesse para sua carne e pele no mercado internacional. Diante disso, a otimização do potencial reprodutivo da espécie faz-se necessário, para tanto o desenvolvimento de protocolo de isolamento de folículos ovarianos pré-antrais (FOPAs) é de fundamental importância para obtenção de um grande número de FOPAs, os quais poderão ser aplicados em outras biotécnicas, visando a conservação e a multiplicação da espécie. Assim, objetivou-se avaliar a eficiência do isolamento enzimático sobre os aspectos quantitativos e qualitativos dos folículos pré-antrais de catetos. Seis fêmeas com idade média de 42 meses e peso de 22 kg, pertencentes ao Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS) da Universidade Federal Rural do Semi-Árido, foram utilizadas. Após a eutanásia, os ovários foram lavados em álcool a 70% e TCM-Hepes. Para a realização do isolamento enzimático, o córtex dos ovários foi dividido em pequenos fragmentos (1 x 1 x 1 mm) e foram suspensos em 5 mL de TCM-HEPES com a colagenase Tipo IV (Sigma, St. Louis, MO, EUA), durante 20 min a 37?C no banho-maria. A cada 5 min de incubação, as suspensões eram homogenizadas suavemente com a pipeta de Pasteur (40 vezes). Após os 20 min, procedeu-se o bloqueio da colagenase, adicionando-se 10% de Soro Fetal Bovino e TCM-HEPES com 1% de BSA por 10 min. Por fim, as suspensões foram filtradas em filtros de malhas de 500 µm e 200 µm e submetidas à centrifugação (1.600g / 5 minutos). O número de FOPAs contidos nas suspensões foram quantificados e classificados de acordo com suas características morfológicas, utilizando o microscópio invertido (400X). Também, os oócitos desnudos foram contados quando presentes nas suspensões. Para a avaliação da viabilidade foram examinados em azul de Tripan (90 µl da suspensão folicular com 10 µl do corante), e avaliados em microscópio invertido (x400). Todos os folículos pré-antrais encontrados foram contados e classificados como viáveis (não corados) ou não viáveis (corados em azul). Os dados foram expressos como média ± erro padrão. O método enzimático possibilitou um rendimento médio de 961,7 ± 132,9 folículos isolados por ovário. De acordo com as categorias foliculares, foram classificados como 80,5 ± 26,6 folículos primordiais, 702,7 ± 137,7 primários e 14,2 ± 8,9 secundários, e ainda 3,2 ± 3,2 oócitos desnudos. Quanto à viabilidade dos FOPAs isolados, o método enzimático proporcionou uma média de 98,7 ± 0,6% de folículos viáveis após o isolamento. Diante do exposto, conclui-se que o método enzimático é eficiente para o isolamento de folículos ovarianos pré-antrais de catetos, proporcionando a recuperação de um quantitativo de folículos viáveis para utilização em outros procedimentos biotecnológicos. Keywords: Tayassu tajacu, ovário, reprodução assistida.
NA0015 - VITRIFICAÇÃO DO TECIDO OVARIANO DE JUMENTO NORDESTINO (EQUUS ASINUS) UTILIZANDO DIFERENTES CRIOPROTETORES
Autores: Alexandre Rodrigues Silva - 1ºAutor (LABORATORIO DE CONSERVACAO DE GERMOPLASMA ANIMAL - UFERSA); Marcia Viviane A. Saraiva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Marcelo Barbosa Bezerra - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Livia Batista Campos - Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO DE GERMOPLASMA ANIMAL - UFERSA); Erica Camila Gurgel Praxedes - Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO DE GERMOPLASMA ANIMAL UFERSA); Katia Regina Freire Lopes -Co-Autor (LABORATORIO DE CONSERVACAO DE GERMOPLASMA ANIMAL - UFERSA) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível: STA2:
Resumo: Os asininos tiveram um espaço significativo na história humana, mas nos dias atuais estão sendo abandonados devido à modernização das atividades rurais. Várias raças endêmicas estão sofrendo uma redução drástica de sua população, dentre estes a raça Nordestina Brasileira. Para salvaguardar seu valioso material genético, é crucial desenvolver bancos de germoplasma para permitir a conservação da principal fonte de gametas femininas encontradas nos ovários: os folículos pré-antrais. Neste sentido, objetivou-se avaliar um protocolo de vitrificação para o tecido ovariano asinino, com a finalidade de preservar folículos pré-antrais, usando diferentes soluções crioprotetoras contendo diferentes concentrações (3 ou 6 M) de dimetilsulfóxido (DMSO) ou etileno glicol (EG), isoladamente ou em associação (DMSO 3M e EG 3M). Para tanto, fragmentos do córtex de dez pares de ovários obtidos por videolaparoscopia foram submetidos à vitrificação em superfície sólida (SSV) usando cada solução crioprotetora proposta. Após uma semana armazenado em nitrogênio líquido, procedeu-se o reaquecimento e análise das amostras. Os tecidos a fresco e vitrificados foram avaliados quanto à morfologia por meio da histologia clássica, à viabilidade folicular pelo teste com a coloração de azul de Tripan, a apoptose celular utilizando-se um kit TUNEL, e à capacidade de proliferação celular por meio da contagem das regiões organizadoras nucleolares (AgNOR) em células da granulosa. Verificou-se que a vitrificação reduziu significativamente (P < 0,05) a proporção de folículos morfologicamente normais em comparação ao tecido fresco (90.6 ± 5.0%). Comparando-se os tratamentos, o uso de DMSO 3M (81,7 ± 37,5%), EG 3M (83,7 ± 27,4%) e a combinação de DMSO 3M mais EG 3M (81,8 ± 46,8%) permitiram uma maior porcentagem de folículos normais em contraste com DMSO 6M (69,8 ± 16,5%) e EG 6M (72,3 ± 18,0%) (P <0,05). A melhor preservação da viabilidade folicular foi obtida no uso da combinação DMSO 3M + EG 3M (62,5 ± 29,1%) em relação aos outros tratamentos de vitrificação (P <0,05). A análise por meio do TUNEL permitiu identificar que todos os tratamentos testados demonstraram fragmentação do DNA nas células foliculares, exceto no uso da combinação de DMSO 3M e EG 3M. Ao avaliar a presença de NORs, não foram observadas diferenças significativas na quantidade de NORs entre os grupos a fresco e vitrificado utilizando-se a combinação DMSO 3M e EG 3M (P> 0,05). Assim, sugere-se o uso da combinação de DMSO 3M e EG 3M para a vitrificação do tecido ovariano obtido de Equus asinus, permitindo uma preservação adequada da morfologia, viabilidade, integridade do DNA e capacidade proliferativa celular dos folículos pré-antrais. Keywords: Criopreservação, espécies em risco, agentes crioprotetores, dimetil sulfóxido, etileno glicol.
NA0016 - POTENCIAL ANTIMICROBIANO DO GEL À BASE DE CAESALPINIA FERREA NA ANTISSEPSIA DE COTO UMBILICAL EM CAPRINOS.
Autores: Joao Mauricio Ferreira Aguiar - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Fernando Da Costa Fernandes - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Caio Sergio Santos - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Giliane Duarte De Medeiros - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Camila Fernandes Leonez - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Nilza Dutra Alves - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO); Francisco Marlon Carneiro Feijo - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ARIDO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: Introdução: O contínuo aumento da resistência bacteriana aos princípios ativos tradicionais demanda o desenvolvimento de substâncias antissépticas alternativas viáveis ao tratamento do coto umbilical de neonatos de pequenos ruminantes. A espécie leguminosa Jucá (Caesalpinia ferrea), árvore nativa do Brasil, aparece como opção para a formulação de um gel com propriedades antissépticas, confeccionado a partir do extrato obtido de suas folhas. Objetivos: obter dados relativos ao potencial antimicrobiano do gel de jucá na concentração de 1% no tratamento de infecções do coto umbilical de caprinos em análise comparativa com grupos tratados com solução idodada na concentração de 2% e água destilada. Metodologia: No mês de maio de 2017 foram selecionados 15 cabritos neonatos (um dia de vida) de uma propriedade rural familiar no município de Mossoró-RN, sendo estabelecidos três grupos homogêneos de cinco animais. Cada grupo foi submetido a um tipo de tratamento (gel de jucá a 1%, iodo a 2% e água destilada), aplicados em visitas diárias ao longo de três dias. Ao longo do experimento, foram monitorados sinais inflamatórios locais (eritema, edema e presença de exsudato) e ainda foi mensurado o diâmetro do coto umbilical. Nas visitas também foram coletadas amostras do tecido cicatricial da base do coto umbilical, onde as amostras coletadas foram encaminhadas ao Laboratório de Microbiologia Veterinária ? LAMIV, localizado nas instalações da UFERSA, no qual as amostras foram processadas e semeadas em placas de petri com meio de cultura ?Plate Count Agar? (P.C.A.). Após um período de 24 horas de incubação em estufa bacteriológica a 37,5° C foi feita a contagem de colônias bacterianas mesófilas na unidade U.F.C. (Unidades Formadoras de Colônias). Resultados: No tratamento realizado com gel de jucá a 1%, observou-se uma redução na contagem de mesófilas de aproximadamente 81,8% (1035 U.F.C. ? 188 U.F.C.). No tratamento realizado com solução iodada a 2% observou-se uma redução na contagem de mesófilas de aproximadamente 97,4% (131 U.F.C. ? 3,3 U.F.C.). No tratamento realizado com água destilada foi observado um aumento na contagem de mesófilas de aproximadamente 49,2% (345,6 U.F.C. ? 515,6 U.F.C.). No grupo submetido ao tratamento com jucá, o diâmetro da base do coto umbilical foi reduzido em 28,8% após 3 dias de tratamento, em comparação com 33,9% e 15,38% de redução dos grupos tratados com iodo a 2% e água destilada, respectivamente. A análise do aspecto inflamatório externo do coto umbilical não apresentou diferenças significativas dentre os tratamentos realizados no período de três dias. Conclusões: Interpretando os resultados obtidos no experimento, percebe-se que a redução da carga bacteriana do grupo submetido ao tratamento com gel de jucá a 1% se mostrou próxima à redução observada no grupo submetido ao tratamento tradicional com iodo a 2%. A redução do diâmetro da base do coto foi semelhante nos tratamentos com gel de jucá a 1% e iodo a 2%. Tais resultados sugerem uma equivalência aceitável entre a terapia tradicional com iodo e a terapia alternativa com gel de jucá. Keywords: Fitoterapia, caprinocultura, etnoveterinária.
NA0017 - EFICIÊNCIA DE UM ISOLADO DE ASPERGILLUS SP. SOBRE TENEBRIO MOLITOR L. (COLEOPTERA: TENEBRIONIDAE) EM CONDIÇÕES LABORATORIAIS
Autores: Nathalia Souza Bezerra - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAIBA); Ian Porto Gurgel Do Amaral - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAIBA); Laisa Macedo Tavares - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAIBA); Adna Cristina Barbosa De Sousa - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAIBA) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:Não
Resumo: Tenebrio molitor L. (Coleoptera: Tenebrionidae) é uma espécie que apresenta grande importância no que se refere aos produtos armazenados. São insetos holometábolos, ou seja, ao longo de seu desenvolvimento passam pelos estágios de ovo, larva, pupa e adulto. Considerados uma praga de grãos e outros produtos armazenados, tanto as larvas quanto os adultos podem causar perdas econômicas expressivas. O controle biológico baseia-se na utilização racional de predadores, parasitóides ou patógenos para controlar populações de pragas agrícolas, insetos vetores de doenças, etc., constituindo uma alternativa ao controle químico existente. Sabe-se, atualmente, que o gênero Aspergillus inclui algumas espécies de fungo que são patógenos de insetos. Baseado nisto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o processo de infecção do fungo Aspergillus sp. em pupas de T. molitor após isolado de formigas cortadeiras (Hymenoptera: Formicidae). Para isso, foi realizado um bioensaio com 90 pupas, correspondendo a três repetições de 10 pupas para cada tratamento (T1testemunha= água destilada autoclavada + Tween; T2= 1x104 conídios.mL-1 + Tween; T3= 1x108 conídios.mL-1 + Tween). As pupas foram imersas por alguns segundos nas diferentes suspensões de conídios e, posteriormente, transferidas para placas de Petri contendo papel de filtro umedecido. Os experimentos foram conduzidos a uma temperatura de 25±1°C e umidade relativa de 60-75%. As placas foram avaliadas a cada 24 horas, para observação da extrusão do fungo e confirmação da morte pelo patógeno. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA), com o auxílio de um software Estatístico, e as médias dos tratamentos foram comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5% de probabilidade. A partir dos dados obtidos, foi possível observar que as duas concentrações de conídios (1x104 e 1x108 conídios.mL-1) do isolado de Aspergillus sp., causaram mortalidade de 100% das pupas de T. molitor no período de 8 a 9 dias. A ação patogênica do fungo foi observada a partir das 48 horas após infecção e a completa mumificação do inseto ocorreu, em alguns casos, às 120 horas após infecção. A análise estatística revelou que não houve uma diferença significativa entre as médias dos tratamentos 2 e 3. Contudo, houve uma diferença significativa das médias desses tratamentos em relação ao tratamento testemunha. Conclui-se, portanto, que o isolado de Aspergillus sp., nas concentrações utilizadas, mostrou-se patogênico ao inseto T. molitor no estágio de pupa e apresenta grande potencial para ser utilizado no controle biológico do mesmo. Keywords: Biocontrole, fungos entomopatogênicos, tenébrios.
NA0018 - CONSTRUÇÃO DE PLASMÍDEO COM GENE L2 DE PAPILOMAVÍRUS BOVINO TIPO 2 COMO CANDIDATO VACINAL
Autores: Isabela Silva Ribeiro - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Thiago Fernandes Benevides - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Gabriel Henrique De Arruda Cardozo - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Analuiza Cristina Da Silva CoAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Larissa Silva De Macedo CoAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Anita Bezerra Pedroza De Melo CoAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Andre Luiz Santos De Jesus -Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Anna Jessica Duarte Silva - -Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Ana Paula Ferreira Campos - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Antonio Carlos De Freitas - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: A Papilomatose bovina é uma doença infectocontagiosa causada pelo Papilomavírus Bovino, um vírus de DNA circular e dupla fita, não envelopado e de conformação icosaédrica. Tal agente infeccioso provoca lesões de pele e mucosa no animal conhecido como papilomas. Esta doença nos bovinos leva a maior susceptibilidade a perda de peso, redução da produção de carne e leite e desvalorização do couro. Uma possível ferramenta ao auxílio a prevenção são as vacinas de DNA pois tem sido documentadas como estáveis e de baixo custo. Além disso, o gene L2 codifica uma proteína imunogênica de resposta cruzada a diferentes subtipos de papilomavírus. Visando os possíveis impactos econômicos decorrentes da papilomatose bovina e ainda ausência de estratégias profiláticas disponíveis no mercado, foi proposta a construção de um vetor de expressão com o gene L2 como candidato vacinal que induza a proteção cruzada e humoral. Para tanto, amplificamos por PCR convencional o gene L2 a partir do genoma do BPV2. Na primeira etapa, o gene L2 foi inserido ao vetor de clonagem pGEM T easy, sendo então ligado ao vetor de expressão pCI-neo, por meio de digestão dupla. Deste modo, até o presente momento foi comprovada a clonagem do gene L2 ao vetor pGEM T easy e sua subclonagem ao pCI-neo, através de sequenciamento automático. Os resultados preliminares a respeito da construção pCIL2 visam contribuir com ensaios vacinais em bovinos. Ademais como perspectiva de tornar esta estratégia vacinal também terapêutica, pretende-se posteriormente fusionar o gene E5 selvagem ou otimizado a construção pCIL2. Keywords: Vacina de DNA, BPV, Papilomatose, L2
NA0019 - EFEITO DO FATOR DE NECROSE TUMORAL ALFA (TNF-?) E DA INTERLEUCINA-1 BETA (IL-1?) SOBRE O DESENVOLVIMENTO DE FOLÍCULOS SECUNDÁRIOS BOVINOS CULTIVADOS IN VITRO
Autores: Anderson Weiny Barbalho Silva - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA, NUCLEO DE BIOTECNOLOGIA DE SOBRAL- NUBIS); Francisco Edilcarlos De Oliveira Lima - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA); Ellen De Vasconcelos Da Cunha - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA); Lais Raiane Feitosa Melo Paulino - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA ); Francisco Taia Gomes Bezerra - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA); Jose Roberto Viana Silva - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível: STA2:
Resumo: O crescimento folicular ovariano é regulado por diversas substâncias, tais como hormônios, fatores de crescimento e citocinas. O fator de necrose tumoral-? (TNF-?) e a interleucina-1? (IL-1?) são citocinas pró-inflamatórias que apresentam vários locais de síntese no ovário. Nesse contexto, o estudo do efeito destas citocinas durante o crescimento in vitro de folículos pré-antrais é de grande importância para a compreensão dos mecanismos que controlam o desenvolvimento folicular in vitro. O objetivo do presente estudo foi determinar o efeito do TNF-? e IL-1? sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos secundários bovinos após 18 dias de cultivo in vitro. Folículos secundários (~ 0,2 mm) foram isolados do córtex ovariano de vacas e cultivados individualmente de modo bidimensional. Os folículos secundários foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: (I) TCM-199+ sozinho (controle) ou suplementado com (II) IL-1? (10 ng/mL), (III) TNF-? (10 ng/mL) e (IV) e ambos TNF-? e IL-1?. Os folículos foram cultivados a 38,5 °C, com 5% de CO2, durante 18 dias. A cada dois dias, 60 µL de meio de cultivo foram substituídos por meio fresco. Em seguida, avaliou-se o efeito destes tratamentos sobre crescimento, sobrevivência folicular, formação do antro, viabilidade, ultraestrutura e níveis de RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina B1. No final de 18 dias de cultivo in vitro, os resultados mostraram que a adição de TNF-? aumentou o diâmetro folicular e a taxa de formação de antro, enquanto que a IL-1? sozinha ou em associação ao TNF-? não tiverem efeito. Todos os tratamentos mantiveram viabilidade após o cultivo entre 74.32 e 92.00%. A análise da ultraestrutura mostrou que os folículos cultivados na presença do TNF-? e IL-1? mantiveram a ultraestrutura do citoplasma do oócito e das células da granulosa. Os folículos cultivados expressaram RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina B1, mas não houve diferença significativa entre os tratamentos. Em conclusão, o TNF-? contribui para o crescimento folicular e a manutenção da ultra-estrutura de folículos secundários bovinos cultivados in vitro. Keywords: ovário; folículo pré-antral; bovino; cultivo in vitro
NA0020 - INFLUÊNCIA DE INTERLEUCINA-1? (IL-1 ?) E FATOR DE NECROSE TUMORAL ALFA (TNF-?) NO CRESCIMENTO E MATURAÇÃO DE OÓCITOS BOVINOS PROVENIENTES DE FOLÍCULOS ANTRAIS PEQUENOS
Autores: Francisco Edilcarlos De Oliveira Lima - 1ºAutor (UFC); Lais Raiane Feitosa Melo Paulino - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA - UFC); Francisco Taia Gomes Bezerra - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA - UFC); Anderson Weiny Barbalho Silva - Co-Autor (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA - UFC); Jose Roberto Viana Silva - Orientador (UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARA - UFC) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:Não
Resumo: O objetivo desse estudo foi verificar o efeito da Interleucina 1 beta (IL-1?) e do fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) no crescimento e maturação de oócitos provenientes de folículos pequenos (1-3 mm) durante o cultivo in vitro. Para o cultivo in vitro, os COCs foram cultivados em TCM-199 sozinho e suplementados com IL-1? (10 ng/mL), TNF-? (10 ng/mL) e ambos IL-1? e TNF-?. Após 48 horas, o diâmetro dos oócitos foi mensurado e, em seguida, os COCs foram destinados a um período de pré-maturação (pré-MIV) por 20 horas, em meio TCM-199 suplementado com 10µM cilostamida. Após o fim do período de pré-maturação, metade dos COCs foi destinada a maturação in vitro (MIV) por 22 horas e a outra metade destinada à verificação da progressão meiótica por coloração de Hoechst 33342. Além disso, foi feito a verificação da distribuição mitocondrial e a análise da expressão de genes, como GDF-9, c-Mos, Ciclina-1? e H1foo. Foi utilizado o t-test pareado para avaliar média do diâmetro, ANOVA one way para avaliar média do crescimento, teste Kruskal-Wallis para avaliar expressão gênica e o teste Chi-Square para avaliar a preogressão meiótica do oócito. Os resultados demonstraram que houve um aumento significativo do diâmetro oocitário em todos os tratamentos, após 48 horas. No entanto, os oócitos cultivados na presença de TNF-? ou ambos, IL-1? e TNF-?, apresentaram maior diâmetro quando comparado àqueles cultivados no meio controle. Com relação à distribuição mitocondrial, verificou-se uma distribuição heterogênea (pericortical) nos oóctios frescos provenientes de folículos > 5 mm, bem como após o período de pré-MIV no tratamento TCM-199 e TNF-?. No entanto, após a MIV, as mitocôndrias apresentavam uma distribuição heterogênea apenas no TCM-199. A respeito da expressão gênica, a presença de TNF-?, IL-1? e ambos TNF-? eIL-1? no meio de cultivo não influenciou a expressão de GDF-9, c-Mos, Ciclina-1? e H1foo. Em conclusão, TNF-? e ambos TNF-? e IL-1? proporcionam um crescimento significativo dos oócitos durante o período que antecede a pré-maturação. No entanto, estas substâncias não exercem efeitos significativos durante a maturação de oócitos provenientes de folículos antrais pequenos. Keywords: maturação, folículos antrais, Sistema TNF-?, Sistema IL-1?
NA0021 - IDENTIFICAÇÃO DE PARASITAS EM CAPRINOS NA PRODUÇÃO DE SUBSISTÊNCIA DA AGRICULTURA FAMILIAR
Autores: Isadora De Menezes Brasil Camara - 1ºAutor (UFERSA); Valesca Barreto Luz - Co-Autor (CESMAC); Ana Carla Diogenes Suassuana Bezerra - Co-Autor (UFERSA); Sthenia Santos Albano Amora - Orientador (UFERSA) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Pós-graduação STA2:
Resumo: A agricultura familiar se desenvolve através da mão-de-obra relativa à família empregada no campo e à diversidade de produtos oferecidos, muitos desses de origem animal, que servem para seu sustento e atender demandas do mercado consumidor (Finatto e Salamone, 2008). Nesse contexto, a caprinocultura se destaca como atividade econômica de forte identificação social e cultural, adquirida e consolidada por sua população através da exploração e da valorização de seus produtos (Almeida et al., 2011). Em razão de sua importância econômica e social, de modo particular para os estados do Nordeste, a caprinocultura possui desafios de diversas ordens que necessitam ser superados (Maciel, 2006) como é o caso das doenças parasitárias que ocupam lugar de destaque entre os fatores que limitam a produção caprina, sendo responsabilizadas por elevadas perdas econômicas (Vieira e Cavalcante, 1999). Desta forma, diagnosticar o perfil sanitário dos rebanhos caprinos, no tocante a presença de parasitas é indispensável para a formulação de programas eficientes de controle, evitando transtornos e prejuízos ao homem do campo. Objetivo - este trabalho visou identificar a presença de endo e ectoparasitas em rebanho caprino dos pequenos produtores da região do município de Mossoró. Metodologia - foram visitadas 30 propriedades rurais selecionadas aleatoriamente, onde foi realizado um diagnóstico parasitário da região com coleta de amostras fecais e ectoparasitas em 10% dos animais de cada rebanho. Nas amostras fecais foi realizado o teste de contagem do número de ovos por grama de fezes (OPG) pela técnica de Gordon e Whitlock (1939) bem como o teste qualitativo com a utilização das amostras em pool através da coprocultura, na qual a identificação das larvas foi realizada com base nas características morfológicas de pelo menos 100 larvas de terceiro estágio por cultura de fezes (Ueno e Gonçalves, 1998). Para pesquisa de ectoparasitos estabeleceu-se inicialmente inspeção visual, e posterior remoção dos ectoparasitas. Com a identificação realizada através da utilização de chaves para classificação (Aragão e Fonseca, 1961). Resultados ? foi observada a presença de parasitas gastrointestinais no rebanho de todas as propriedades visitadas. No OPG, os ovos do tipo Strongyloidea estiveram presentes em 100% das amostras coletadas, o que mostra uma ampla carga parasitária existente nesses animais. Além do diagnóstico de oocistos de Eimeria (23%) e ovos de Moniezia sp (73%). A coprocultura nas amostras fecais revelou a presença dos nematoides gastrintestinais dos gêneros Haemonchus sp (90%), Trichostrongylus sp (87%), Oesophagostomum sp (20%)e Strongyloides sp (33%), Trichuris sp (3%). Quanto aos ectoparasitos foram identificados os piolhos das espécies Damalinia caprae (47%) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (10%). Conclusão ? este trabalho revelou a presença de endo e ectoparasitos nos rebanhos caprinos dos agricultores familiares do município de Mossoró ? RN. Keywords: Desenvolvimento sustentável. Caprinocultura. Parasitoses. Manejo Sanitário.
NA0022 - MARCADORES MOLECULARES MICROSSATÉLITES E GÊNICOS COM POTENCIAL USO PARA O MELHORAMENTO DO FEIJÃO-CAUPI
Autores: Wilson Dias De Oliveira - 1ºAutor (UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Thialisson Caaci Do Vale Amorim - Co-Autor (UFPE - UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Mitalle Karen Da Silva Matos - Co-Autor (UFPE - UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO.); Flavia Tadeu De Araujo - Co-Autor (UFPE - UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO); Ana Maria Benko-iseppon - Orientador (UFPE - UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO) Área: Agropecuária Tipo:Pesquisa Nível:Graduação STA2:Não
Resumo: O déficit hídrico figura como um dos principais fatores que afetam negativamente a cultura feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], uma vez que influencia seu crescimento e produtividade. Durante a evolução, as plantas desenvolveram mecanismos de respostas a estresses, os quais podem ser potencializados por meio do melhoramento genético. Neste âmbito, os marcadores moleculares auxiliam na construção dos mapas gênicos.Assim, objetivou-se desenvolver marcadoresgênicos e microssatélites para o feijão-caupi, visando sua aplicação no mapa gênico da espécie.Para isso, foram minerados microssatélites do genoma do feijão-caupi, usando o programa MISA. Em paralelo, foram selecionadas, do transcriptoma da espécie,tags de SuperSAGEpertencentes a duas famílias gênicas [Fatores de Transcrição (FT) MYB e Gene de Resistência (GR) NBS-LRR], as quais foram analisadas quanto à sua expressão e selecionadas para o desenho dos primers.Foram minerados73.406 sequências do genoma de feijão-caupi, sendo eliminadas da análise aquelas que continham um único nucleotídeo, perfazendo, assim, um universo de 30.496 sequências microssatélites. Deste total, os motivos di- e trinucleotídeos foram os mais abundantes com 15.712 (51,5%) e 6.711 (22%) respectivamente, enquanto os tetra-, penta- e hexanucleotídeos foram menos frequentes. Os motivos dedinucleotídeos,apresentarammaior variação no número de repetição dos microssatélites (de 9 a 61 repetições). O destaque aos dinucleotídeos também foievidenciado em estudo realizado com Zeamays (L.), onde representaram 60% das 2019602 sequências analisadasconfirmando sua prevalência em plantas superiores, previamente reportada. As sequências mineradas seguirão para a etapa de desenho dos iniciadores. Na análise de expressão, 466 tags foram selecionadas referentes às famílias gênicas analisadas.Destas, 179corresponderam aosFT MYB e 287aos GR NBS-LRR. Das sequências selecionadas inicialmente, 91 e 147 tags apresentaram expressão diferencial para os TF MYB e os GR NBS-LRR, respectivamente, em pelo menos um dos tratamentos (bulk dos seis tempos de 25? a 150?). As tags superexpressas constituíram um universo de 163 sequências disponíveis para o desenho dos primers, dentre as quais 17 foram usadas para a confecção de iniciadores com potencial para validação via RT-qPCR.Além destes, outros 23 pares de iniciadores foram desenvolvidos para identificar polimorfismos entre os acessos contrastantes do feijão-caupi. Até o momento, 17 marcadores foram testados e apenas um mostrou-se polimórfico entre os acessos. As tags superexpressas aqui identificadas, indicam uma provável atividade das famílias de genes de FT e GR estudadas na resposta ao déficit hídrico. Os marcadores moleculares continuam sendo testados quanto ao seu polimorfismo e serão aplicados na população segregante do mapa genético da espécie. Além disso, tais marcadores poderão ser utilizados em estudos de diversidade genética. Keywords: Estresses bióticos e abióticos, Transcriptoma, Marcadores gênicos
