ÓLEOS ESSENCIAIS NO CONTROLE DE DOENÇAS DE PLANTAS

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Óleos Essenciais no Controle de Doenças de Plantas - 2 5 7

ÓLEOS ESSENCIAIS NO CONTROLE DE

DOENÇAS DE PLANTAS

Lilia Aparecida Salgado de Morais, Gabriela Granglielli Gonçalves & Wagner Bettiol*

Em brapa Meio Ambiente, CP 69, 13820-000 Jaguariúna, SP. E-mails: lilia@ cnpma. embrapa. br, gg.goncalves@uol. com. br, bettiol@cnpma. embrapa. br.

*Bolsista do CNPq.

RESUMO

Os óleos essenciais são provenientes do metabolismo secundário de plantas medicinais, aromáticas e/ou condimentares. Esses possuem numero sos com postos biossintetizados podendo ser utilizados no controle de doen ças de plantas em substituição aos fungicidas. Os óleos essenciais apresentam im portantes características como: fácil obtenção, baixo custo e não possuem toxidez residual. Dessa forma, são uma alternativa para o controle de doenças de plantas, principalmente para os produtores de base ecológica. Nesta revisão são relatados resultados obtidos com óleos essenciais para o controle de fito- patógenos.

SUM MARY

E S S E N T I A L O IL S FOR TH E C O N T R O L O F PLA N T DISE ASE S

Essential oils are derived from secondary metabolism in medicinal plants, aromatic and/or condiments. These essential oils have many compoun- ds that can be used to replace fungicide. Essential oils are easily accessible, low cost and have no residual toxicity. Then, they could be an altemative protection o f crops against plant diseases, mainly for ecological basis growers. This re- view reports the results with essential oils for the control o f plant diseases.

INTRODUÇÃO

Os produtos naturais foram muito utilizados até a metade do século XIX para o controle de pragas e doenças de plantas, bem corno para fins me dicinais e de saúde animal. Preparados à base de plantas, como os de Chry- santem um cinerariaefoliunt, C. roseum e C. coccineum (fonte de piretro) e R A P P - Volume 17, 2009

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espécies dos gêneros Derris e Lonchocarpus (fontes de rotenona) e Nicotianc (fonte de nicotina) foram amplamente utilizados como inseticidas e fungicidas por diversos anos. Além das plantas, também eram utilizados preparados a base de enxofre, sabão, óleo de baleia, boro e arsênico (Boyce, 1974), sendo que no início do século XX, produtos com maior toxidez começaram a se: utilizados na agricultura. Nesta época iniciaram os estímulos à substituição de alguns produtos por outros de menor toxicidade ao homem, principalmente os arsenicais, porém, não havia ainda a preocupação sobre o uso contínuo destes produtos no ambiente. Notava-se um incentivo ao uso de preparados a base de plantas (Decker, 1942). Durante a Segunda Guerra Mundial, grandes áreas de cultivo de plantas usadas como defensivos naturais foram dizimadas ou tiveram seu fornecimento suspenso, o que ocasionou uma busca por produ tos sintéticos que pudessem substituir os naturais, até então utilizados. Assim, teve início a fase dos produtos sintéticos para controle fitossanitário, o que aparentava ser a solução para a agricultura mundial, substituindo completa m ente os defensivos naturais. O uso dos produtos sintéticos contribuiu para que ocorressem grandes mudanças, como o aumento das áreas de cultivo e na produtividade e a redução do número de trabalhadores nas lavouras. Práticas agrícolas até então muito utilizadas, como a rotação e o consórcio de culturas, uso de matéria orgânica, bem como outras mais recentes para a época, como o controle biológico, passaram a ser pouco ou não utilizadas, principalmente em áreas de cultivo extensivo (Saito & Lucchini, 1998).

Nos anos subsequentes, alguns problemas começaram a surgir. Os produtores notaram que a utilização dos defensivos químicos não podia garan tir o controle de pragas e fitopatógenos por um longo tempo. Isto ocorreu devi do ao desmatamento intensivo, monocultivo, ou seja, ausência de diversifica ção e desequilíbrio biológico. Estes também apresentavam um largo espectro de ação, exterminando, além dos organismos-alvo, inimigos naturais, insetos e microrganismos benéficos ao ambiente e ao homem. Além disso, esses produ tos selecionavam organismos-alvo com resistência, necessitando aumentar as quantidades de produtos aplicados, o que gerava maior dano ecológico e polui ção ambiental. Quando esses princípios ativos não eram mais eficazes, fazia-se a substituição por novos agroquímicos, o que, consequentemente, dava início a um novo ciclo (Mariconi, 1981).

Na década de 1970, surgiram movimentos de proteção ambiental con tra a contaminação pelos agrotóxicos. Os produtos sintéticos produzidos a par tir de então, passaram a ser mais seletivos, apresentando um menor espectro de ação e persistência, reduzindo o acúmulo de substâncias tóxicas no ambiente. Iniciava-se o processo de conscientização: era melhor reduzir a população de pragas e patógenos-alvo no período de maior incidência, que a tentativa de total erradicação e conseqüente contaminação do ambiente e dos alimentos

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(Saito & Lucchini, 1998; Vieira & Fernandes, 1999). Desde então, há uma ten dência mundial cm pesquisar novos métodos de controle, dando-se prioridade ao resgate da utilização de substâncias naturais, biologicamente ativas, contra as diferentes pragas e patógenos, bem como da utilização de controle biológico e produtos biocompatíveis.

Outro fator importante que contribuiu para o interesse pela utilização de substâncias naturais foi o avanço da agricultura orgânica e a exigência da sociedade por alimentos livres de agrotóxicos. Com isso, aumentou a neces sidade de se buscar novas práticas agrícolas de baixo impacto ambiental, que substituíssem os métodos convencionais de controle de pragas e doenças de plantas cultivadas.

Algumas plantas produzem numerosos compostos provenientes do m etabolismo secundário que podem ser utilizados no controle fitossanitário. Esses compostos secundários podem ser a matéria-prima para o desenvolvi mento de novos defensivos naturais ou serem precursores de semi-síntese quí mica, no desenvolvimento de novos produtos. Neste capítulo, será abordada a aplicabilidade dos óleos essenciais no controle fitossanitário.

SUB STÂ N CIA S PROVENIENTES DO METABOLISMO

SECUNDÁRIO

M etabolismo é o conjunto de reações químicas que ocorrem continu amente nas células, direcionadas pela ação de enzimas. A este direcionamento conferido pelas enzimas, dá-se o nome de rotas metabólicas. Estas reações visam, inicialmente, biossintetizar compostos como açúcares, aminoácidos, nucleotídeos e alguns polímeros derivados, dentre outros, que vão garantir a sobrevivência dos organismos. Por ser a biossíntese destes compostos comuns aos seres vivos e diretamente relacionadas à manutenção da vida, estes são considerados integrantes do metabolismo primário.

O metabolismo secundário difere do primário pelo fato de a produção das substâncias ser limitada a um menor número de espécies. Os metabóli- tos secundários, como são chamados os produtos derivados do metabolismo secundário, não estão diretamente ligados à manutenção da vida do vegetal, porém, conferem vantagens à sua sobrevivência (Santos, 1999), pennitindo ao mesmo adaptar-se às condições impostas pelo ambiente (Gros et a i, 1985). Sabe-se que o metabolismo primário influencia diretamente no secundário, po rém, a interface entre ambos ainda não é muito clara.

Os compostos secundários biossintetizados pelas plantas são prove nientes de três precursores principais: ácido chiquím ico ou chiquimato, que origina compostos aromáticos, ligninas e cumarinas; am inoácidos, de onde

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derivam alguns alcalóides; e o acetato. O acetato pode ser redirecionado em outras três vias: condensação, ácido cítrico e mevalonato. Por meio da con densação são originados os ácidos graxos e as acetogeninas. Pela via do ácido cítrico são biossintetizados outros tipos de alcalóides. A via do mevalonato é a responsável pela biossíntese dos isoprenóides que dão origem aos terpenos, componentes dos óleos essenciais. Há também compostos derivados da liga ção entre o ácido chiquímico e o acetato, gerando uma rota biossintética mista. Estes são os flavonóides, alguns taninos e as antraquinonas (Mann, 1987; Di Stasi, 1996) (Figura 1).

A biossíntese dos metabólitos secundários é regida pelas informações genéticas que compõem o vegetal, porém, esta pode ser redirecionada devido à ação de fatores bióticos (microrganismos, insetos ou plantas) e abióticos (luz, temperatura, estresse hídrico, etc.), que podem gerar situações de estresse ao vegetal, ou mesmo ser divergente nos diferentes estádios de desenvolvimento da planta. Estas alterações na rota biossintética e sua possível interferência nos resultados dos estudos de atividade sobre fitopatógenos serão abordados em outro item da revisão.

FU N ÇÕ ES DOS METABÓLITOS SECUNDÁRIOS NOS

VEGETAIS

Inicialmente, os metabólitos secundários foram considerados produ tos finais do metabolismo primário ou mesmo resíduos, que seriam excretados, sem apresentar utilidade para o vegetal que os produziu. No início do século XX, o uso destes compostos para fins medicinais e industriais já era ampla m ente conhecido, porém, apenas na década de 60, pesquisadores começaram a observar que estes apresentavam funções ecológicas importantes para os ve getais.

Os vegetais se defendem pelo quimismo, já que as plantas não se des locam de um ambiente para outro, com condições ambientais mais favoráveis à sua sobrevivência. Nem todas as funções dos metabólitos secundários na plan ta que o produz foram descobertas. As adaptações vegetais aos diversos tipos de estresse é objeto de estudos de diversos grupos de pesquisa, apresentando resultados promissores. As funções conhecidas dos compostos secundários, que garantem a sobrevivência dos vegetais na natureza são: proteção contra herbivoria (deterrência, repelência e toxidez), atração de polinizadores ou dis- persores de sementes, proteção aos raios ultravioleta, alelopatia e a atração de inimigos naturais.

A produção de fitoalexinas também representa uma estratégia de so brevivência de alguns vegetais. As fitoalexinas são metabólitos secundários, de

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baixo peso molecular, biossintetizados pelos vegetais em resposta a estresses físicos, químicos ou biológicos. E um mecanismo de resistência a fitopató- genos, pois estas substâncias se acumulam ao redor do tecido após infecção ou injúria, apresentando atividade antimicrobiana. A indução de produção de fitoalexinas indica a presença de composto(s) com características eliciadoras. Essas substâncias foram identificadas em mais de 20 famílias botânicas de vegetais superiores, caracterizando-se mais de 300 fitoalexinas de diferentes classes de compostos químicos (cumarinas, flavonóides e sesquiterpenos). Tem-se como exemplo os sesquiterpenos Risitina e Capsidiol produzidos por algumas espécies de Solanaceae (Taiz & Zeiger, 2004).

lignanas e ligninas cumarinas

F ig u ra 1: Rotas biossintéticas dos metabólitos secundários (Simões & Spitzer, 1999).

Geralmente, as fitoalexinas não se encontram presentes nas plantas antes da infecção, sendo biossintetizadas após o ataque do patógeno, em fun ção da ativação de novas rotas biossintéticas. O início do processo é a transcri ção do gene. Isto demonstra que as plantas não armazenam as enzimas respon sáveis pela síntese de fitoalexinas, porém, logo após o contato do tecido com o patógeno, dá-se início à transcrição dos RNA’s mensageiros específicos e a sua tradução em enzimas correspondentes (Taiz & Zeiger, 2004). As fitoalexinas agem sobre o patógeno por meio da granulação citoplasmática, desorganização

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dos conteúdos celulares e inibição de enzimas fúngicas, inibindo a germinação e a elongação do tubo germinativo e reduzindo ou inibindo o crescimento mi- celial (Lo et al., 1996).

Além das fitoalexinas, a indução de resistência pode ser ativada nos vegetais por outras substâncias que evitam ou atrasam a entrada do patógeno ou a sua atividade nos tecidos do hospedeiro, por meio de mecanismos pró prios de defesa. E um fenômeno local ou sistêmico, podendo induzir a produ ção de estímulos no tecido vegetal que virão a desencadear reações protetoras duradouras, sendo efetiva contra uma ampla gama de patógenos (Kessmann et al., 1994; Van Loon et al., 1998). A reação tem seu início quando as molécu las do indutor se ligam às moléculas receptoras, provavelmente localizadas na membrana plasmática da célula do vegetal, desencadeando a ativação de me canismos de defesa (Resende et a l , 2007, Resende et al., 2006). Têm-se dois tipos de resistência induzida: a resistência sistêmica induzida e a resistência sistêmica adquirida. Na resistência sistêmica induzida o estímulo inicial ocor re, muitas vezes, pela ação de rizobactérias, sendo a sinalização mediada pelo ácido jasm ônico e pelo etileno. A resistência sistêmica adquirida é desencade ada pela ação de patógenos que necrosam o tecido, ocasionando lesões, ou por meio da aplicação exógena de ácido salicílico, bem como de compostos sinté ticos (acibenzolar-S-metil) e o ácido 2,6-dicloroisonicotínico. Está associada à produção de proteínas relacionadas à patogênese (PRP’s) por meio da ativação de genes, sendo que muitas dessas possuem atividade antimicrobiana, funcio nando também como importantes marcadores moleculares para a resposta de resistência (Resende et al., 2007, Van Loon et al., 1998).

Em regiões nas quais não se observa interferência humana, as inte rações das plantas com outras espécies vegetais, inicrorganismos, insetos e animais encontram-se em equilíbrio, estando cada espécie em contínua adap tação às condições ambientais para garantir sua sobrevivência. A capacidade de biossintetizar esse arsenal de substâncias químicas contribui significativa mente para que isto ocorra. Ressalta-se que estas substâncias apresentam sele tividade natural e baixa toxicidade, pois atacam os agressores, preservando os organismos úteis e o ambiente. Se as plantas, principalmente as não domesti cadas, conseguem se manter na natureza, defendendo-se dos diversos preda dores, patógenos ou outras espécies vegetais, utilizando-se dos metabólitos secundários, a utilização destes compostos mais seletivos e menos poluentes no controle fitossanitário é de grande relevância na agricultura.

Mazaro et al. (2008) avaliaram o potencial de produtos naturais pro venientes da pitangueira (Eugenia uniflora) e quitosana na indução de fitoale xinas (gliceolina) em cotilédones de soja. A gliceolina (pterocarpanóide) é um importante instrumento natural na interação da soja com os fitopatógenos. Os autores constataram que o óleo essencial de folhas de pitangueira apresentou

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resultados favoráveis. A capacidade indutora do óleo essencial de folhas da pitangueira pode ter ocorrido devido à presença de hidrocarbonetos terpênicos, alcoóis simples e terpênicos, aldeídos, cetonas, compostos fenólicos, ésteres e ácidos orgânicos dentre outros. Para resultados mais conclusivos, ensaios com diferentes concentrações do óleo, bem como uma correlação da ação indutora com a sua composição química é necessário.

A indução de resistência representa uma alternativa promissora para a utilização de genótipos suscetíveis, que possuam características agronômicas desejáveis, sem que haja alteração no genoma da planta.

Ó LEOS ESSENCIAIS

Óleos essenciais são misturas complexas de substâncias voláteis, li- pofílicas, com baixo peso molecular, geralmente odoríferas e líquidas, cons tituídos, na maioria das vezes, por moléculas de natureza terpênica. Frequen temente apresentam odor agradável e marcante. São frequentemente extraídos das partes vegetais por meio de arraste à vapor d ’ água, hidrodestilação ou expressão de pericarpo de frutos cítricos, porém há outros métodos de extração como a enflenrage ou enfloração, extração por C 0 2 supercrítico (muito utili zada na indústria) e por solventes orgânicos apolares (não apresentam valor comercial). Em temperatura ambiente apresentam aspecto oleoso, tendo como principal característica a volatilidade. Isto os diferencia dos óleos fixos que são m isturas de substâncias lípídicas, geralmente provenientes de sementes (e.g óleo de rícino, manteiga de cacau e óleo de linhaça). Apresentam-se geral mente incolores ou levemente amarelados, com sabor ácido e picante, pouco estáveis em presença de luz, calor e ar, além de serem pouco solúveis em água (Simões & Spitzer, 1999; Saito & Scramin, 2000).

Os óleos essenciais são principalmente constituídos de terpenos, pro venientes da rota do ácido mevalônico ou mevalonato, porém, há alguns de rivados do fenilpropanóides. Os terpenos são constituídos de duas ou mais unidades isoprênicas, sendo cada molécula de isopreno formada por cinco áto mos de carbono (C 5). De acordo com o tamanho da molécula, os terpenóides recebem denominação diferente: compostos formados por duas unidades iso prênicas (C 10) são classificados como monoterpenos (e.g. mentol, limoneno, linalol e citral); os compostos formados por três unidades isoprênicas (C 15) são classificados como sesquiterpenos (fi-selineno e P-cariofileno); compos tos formados por quatro unidades isoprênicas (C 20) são os diterpenos e os compostos formados por seis unidades isoprênicas (C 30) são classificados como triterpenos. Os monoterpenos e os sesquiterpenos são os compostos de ocorrência mais freqüente na natureza, sendo os primeiros mais facilmente

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264 Lilia Aparecida Salgado de Morais et al

encontrados. Sâo também responsáveis por grande parte das atividades bio lógicas dos óleos essenciais. Os principais componentes dos óleos essenciais, bem como a natureza química dos mesmos são apresentados na Tabela 1. A estrutura química de alguns destes constituintes encontra-se representada na Figura 2.

Tabela 1: Principais constituintes químicos presentes nos óleos essenciais e sua natureza química.

Componentes dos Óleos Essenciais

Natureza Química

Absintina Sesquiterpeno dimérico

Anetol Éter fenólico

Azuleno Diterpeno

Bomeol Álcool bicíclico

Camazuleno Não existe naturalmente nos vegetais,

mas é produzido por ação de enzim as em sesquiterpenos

Canfeno Cetona da série terpênica cíclica, composto

intermediário na produção do bomeol

Cânfora Terpenos monocíclicos

1,8-cineol (eucaliptol) Oxido

Citral Aldeído terpênico insaturado de cadeia aberta

Eugenol Éter fenólico

Geraniol Álcool terpênico primário insaturado

Limoneno Terpeno

Linalol Álcool terpênico (não existe na natureza,

sendo obtido pela isomerização do geraniol)

Mentol (mentona) Álcool secundário saturado, cíclico

Metilchavicol (estragol) Éter fenólico

Mirceno Hidrocarboneto com ligações insaturadas

a e p - Pineno Terpeno

Timol Fenol (3 - hidroxi-p-cimeno)

Tujona Cetona

Vanilina Aldeído aromático

Fonte: Adaptado de Ladeira (2002).

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n

linalol

A

limoneno

1

1 A

terpinoleno mentol a-pineno

V

A

mentona famesol nerolidol í "

J

cânfora N -nepetalactona

òa

_jl

y-bisaboleno

X

1

ácido abscisico

F ig u ra 2. Estruturas de alguns compostos de óleos essenciais.

T

(3-selineno P-cariofileno

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Eugenol

a-selineno

1,8-cineol a-selineno

Cis-ocimeno Óxido de cariofileno

2.

Citroneral Estruturas de

(3-pineno citral

alguns compostos de óleos essenciais. Trans-cariofileno

Continuação Figura

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geraniol cumarina tujona

Z-cariofileno a-humuleno

Continuação Figura 2. Estruturas de alguns compostos de óleos essenciais.

p-cimeno timol óxido de P-cariofileno

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268 - Lilia Aparecida Salgado de Morais et aI

Ó LEO S E SSE NC IAIS NO CONTRO LE DE

FITOPATÓGENOS

Estudos utilizando óleos essenciais provenientes de plantas medici nais, condimentares e aromáticas vêm sendo realizados no controle de fítopa- tógenos, o que representa uma alternativa na proteção das lavouras, principal mente, no intuito de suprir as necessidades dos produtores de base ecológica e o desejo da sociedade em reduzir o uso de agrotóxicos. Resultados promissores são relatados no manejo de doenças em plantas cultivadas, tratamento de se mentes e pós-colheita.

A atividade fungitóxica de óleos essenciais extraídos de folhas de Cymbopogon citratus, A geratum conizoides, Alpinia carinata, Citrus auran- tifolia, Euputorium cannabium , Hyptis suaveloens, Juniperus com m unis, M entha viridis e P inus spp.; talo de Boswellia serrata; casca de C. reticulata e C. sinensis; rizoma de C urcum a longa e raiz de Vetiveria zizanioides, ob tidos por hidrodestilação, sobre o crescimento micelial de Aspergillus fla vu s em meio batata-dextrose-ágar (BDA) foi avaliada por Mishra & Dubey (1994). O óleo essencial de C. citratus (capim limão) inibiu o crescimento do fungo, sendo a Concentração Mínima de Inibição (MIC) 3000 ppm. Os autores veri ficaram que o citral, monoterpeno presente em maior concentração nesse óleo essencial, não interferiu na germinação de sementes e no crescimento das plân- tulas de arroz. A maior atividade antifúngica do citral tem sido encontrada, nas condições do experimento realizado na índia, quando este foi proveniente de óleo essencial extraído de plantas colhidas entre os meses de maio e novembro, seguido dos de janeiro e dezembro, com eficácia intermediária. A extração do óleo essencial de capim limão colhido em fevereiro, março e abril não é indica da, pois mesmo em concentrações altas (hipertóxicas), não apresenta atividade positiva. Mishra & Dubey (1994) verificaram que o citral inibiu totalmente o crescimento de Penicillium , Alternaria, Fusarium , Aspergillus e Botrytis a 1500 ppm. O período de colheita é de grande importância, pois pode ser um dos responsáveis por resultados conflitantes sobre o efeito de óleos essenciais da mesma espécie no controle de pragas e doenças. Entretanto, de forma ge ral, não é considerado nos estudos. Bankole & Joda (2004) verificaram que o óleo essencial do capim limão reduziu a extensão da deterioração de sementes de melão, previamente inoculadas com P. citrinum, A. flavus, A. niger e A. tamarii, reduzindo, parcialmente, a produção de aflatoxina em sementes des cascadas e inoculadas com A. fla v u s, nas concentrações de 0,1 e 0,25% (v/m), e completamente, nas concentrações de 0,5 e 1% (v/m). Também trabalhando com óleo essencial de capim limão, Adegoke & Odesola (1996) verificaram que sementes de feijão e de milho tratadas e armazenadas por dez dias, não

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apresentaram deterioração física, alteração no odor e na coloração. Além disso, não houve crescimento de A .flavu s. Nesse trabalho, os autores também veri ficaram que o potencial fungicida do citral permaneceu inalterado por até 210 dias. Este potencial se manteve inalterado mesmo quando submetido a tem peraturas enire 5 e 100 °C, indicando sua termoestabilidade. O efeito de óleos essenciais de Schinus molle (aroeira), C. citrutus, Anacardium occidentale (cajueiro) e Peum us boldus(boldo) sobre AspergiUus spp. e Penicillium spp.,

isolados de sementes de Vigna unguiculata, Zea tnuyse Arucltis hypogeue, foi estudado por Belém et a i (1996) os quais verificaram que, somente o óleo essencial do capim limão inibiu o crescimento dos fungos.

A atividade antifúngica de óleos essenciais de 22 plantas sobre Rhi zoctonia solani, Alternaria alternata, A. niger, A. fum igatus, A. nidulans, Chaetomium globosum, Cladosporium cladosporioides, Colletotrichum glo- eosporioides, C. deniatium, Curvularia lunata, P. italicum e Rhizopus ur- rhizusfoi testada por Kishore et a i (1983). Dos óleos essenciais estudados, apenas o de Lippia albu (erva cidreira brasileira ou falsa cidreira) inibiu o crescimento micelial dos fungos. Dando continuidade ao trabalho, Kishore et a i (1989) avaliaram a ação do óleo essencial de Chenopodium ambrosioi- desno tratamento de sementes de Phuseollus aureus,visando ao controle do tombamento de mudas causado por R. solani.Com relação à fitotoxicidade, o óleo essencial não interferiu na germinação das sementes e no crescimento das plântulas de feijão.

Com objetivo de encontrar produtos alternativos para o controle da antracnose em pós-colheita de frutos de goiaba, Rozwalka et a i (2008) verifi caram que o óleo essencial de cravo-da-índia inibiu em 100% o crescimento de Glomerella cingulata e C. gloeosporioides, sendo este último totalmente ini bido também pelo óleo essencial de capim-limão. Com objetivos semelhantes, mas trabalhando com C. gloeosporioides, agente causai da antracnose de fru tos de mamoeiro, Marques et a i (2003) verificaram que o monoterpeno citral e o óleo essencial de C. citrutusforam eficientes na inibição in vitro e in vivo do crescimento micelial de C. gloeosporioidescausador da antracnose do mamão. Também trabalhando com óleo de capim limão como alternativa para o con trole de doenças em pós-colheita do mamão, Palhano et a i (2003) verificaram que esse óleo tem potencial para uso combinado com alta pressão hidrostática (HHP) para o controle da doença, com chances de eliminar o uso de fungicidas químicos. Além disso, o sinergismo entre o óleo essencial e HHP diminui a quantidade de óleo essencial a ser usada e a intensidade da HHP aplicada.

Zanandrea et a i (2004) verificaram inibição do crescimento mice lial de Alternaria sp., Bipolaris oryzae, Curvularia sp., Gerlacltia oryzae, R. soluni e Sclerotinia sclerotiorum do arroz pelo óleo essencial de orégano

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2 7 0 - Lilia Aparecida Salgado de Morais et a!

{Origanum vulgare).Todos os fungos testados apresentaram sensibilidade ao carvacrol, composto majoritário desse óleo essencial, sendo a maior inibição verificada para B. oryzae,mesmo nas concentrações mais baixas (1 :32). Perei ra et a i (2006) verificaram que o óleo de orégano inibiu o desenvolvimento de A. ochraceus, A flavuse Fusarium sp. nas concentrações de 500, 1000, 1500 e 2000 g/mL, exceto o de A. nigerque foi inibido a partir de 1000 mg/mL. Por outro lado, os óleos essenciais de alecrim, menta, cebola e manjericâo tiveram um efeito pronunciado apenas a partir da concentração de 1500 mg/mL.

A requeima da batata (Phytophthora infestuns) é a doença mais im portante no seu cultivo orgânico e não existem produtos eficientes para o seu controle nesse sistema. Bosenbecker et a i (2006) estudaram a possibilidade do uso do óleo essencial de plantas medicinais e verificaram que o óleo essencial de camomila inibiu a severidade da doença nas cultivares Bintje e Eliza e o de orégano na ‘Eliza’. Entretanto, não foram observados efeitos desses óleos sobre a produção nas diferentes cultivares.

Óleo essencial de Eucalyptus citriodora, E. camaldulensise E. uro- pltyllanas concentrações de 5, 50 e 500 mg/kg inibiram o crescimento micelial de Fusarium oxysporum, Botrytis ciiterea e B. sorokiniana(Salgado et a i, 2003). Além disso, os autores observaram que ocorreu alteração na coloração do micélio de F. oxysporum,sugerindo que pode ter havido oxidação, devido à presença de carbonilas, grupos alcoólicos e duplas ligações nas substâncias que compõem os óleos essenciais. A maior ação fungitóxica foi do óleo essen cial de E. urophylla. Esta atividade foi atribuída ao sesquiterpeno globulol, composto majoritário deste óleo essencial, não detectado nos demais. Estes resultados são semelhantes aos obtidos por Aleu et a i (2001), os quais conclu íram que houve inibição total do crescimento de B. cinereanas concentrações 100 e 200 mg/kg do globulol. O óleo essencial de E. citriodora,incorporado ao meio de cultura BDA, em alíquotas de 40, 100, 500 e 1000 pL, inibiu to talmente o crescimento de Sclerotium rolfsii, Phytophtora sp., R. solani, A. alternatae C. sublineolum.O óleo essencial de E. citriodoratambém inibiu a germinação e a formação de apressórios de C. sublineolumem todas as alíquo tas testadas, porém, não foi observada a indução de síntese de fitoalexinas em mesocótilos de soja e sorgo (Bonaldo et a i , 2007). Também Fiori et a i (2000) observaram inibição de 100% no crescimento micelial de Didymella bryoniae com óleos essenciais de E. citriodora. C. citratuse A. conizoides,nas alíquo tas de 20, 40, 60, 100, 200, 500 e 1000 pL.

O óleo essencial de Salvia officinalise alguns de seus componentes (1,8-cineol, cânfora e a e (i-tujona) foram testados visando identificação de atividade antifúngica sobre B. cinerea,sendo observada atividade apenas para o de cânfora, inclusive com inibição superior a benomyl e iprodione (Carta et a i, 1996).

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Bishop & Thomton (1997) verificaram que os óleos essenciais de Me- laleluca altcrnifolia e Monurda citriodora inibiram o crescimento micelial de A. hrassicolu, A. solani, A. flavus, li. cinerea, F. moniliforme, F. solani, M ycocentrospora acerina, R. solani, R. sexual is, R. stolonifer, S. sclerotio- rum, S. cepivorum, Serpula lucrymans e Pythium ultim um . M. citriodora aparentou maior atividade que M. alternifolia, conferindo, inicialmente, um nível de inibição maior e constante, durante o período de realização do ensaio. O óleo essencial de M. citriodora foi mais ativo na inibição do crescimento de R. sexualis, R. stolonifer e P. ultimum. Os constituintes majoritários do óleo essencial de melaleuca foram o terpinen-4-ol (37,4%), y-terpineno (19,4%) e aterpineno (9%). O óleo essencial de M. citriodora apresentou como marcador o timol (56,9%), seguido de p-cimeno (13%) e y-terpineno (10%).

O óleo essencial de E. citriodora, incorporado ao meio de cultura BDA, em alíquotas de 40, 100, 500 e 1000 )jL, inibiu totalmente o crescimento de S. rolfisii, Phytophtora sp., R. solani, A. alternata e C. sublineolum . A inibição foi de 100% para todos os fungos na alíquota de 20 ^L, exceto para R. solani, para o qual inibição foi de 90%. Esse óleo essencial também inibiu a germinação e formação de apressórios em conídios de C. sublineolum nas alí quotas testadas, porém, não foi observada a indução de síntese de fitoalexinas em mesocótilos de soja e sorgo (Bonaldo et a., 2007).

A ação de dois fungicidas naturais formulados à base de óleos es senciais de L. sidoides, M. arvensis, O cimum gratissimum, E. terenticornis e óleo fixo de soja (Glicine m ax) foi testada para tratamento pós-colheita do pedúnculo de melão. O primeiro fungicida natural foi produzido combinando os óleos essenciais de L. sidoides, M. arvensis e O. gratissim um e o óleo fixo de soja e o segundo pelos óleos essenciais de L. sidoides, M. arvensis, E. te renticornis e o óleo fixo da soja. Os produtos foram aplicados aos frutos nas concentrações de 0; 10; 20; 30 e 40 mL/L de suspensão. A inoculação do F u  sarium sp. foi efetuada 16 h antes e após a aplicação dos produtos. O primeiro produto foi mais eficiente que o segundo, sendo a eficiência inversamente pro porcional à sua concentração, sendo indicado para tratamento preventivo. Para o segundo, a incidência foi proporcional à sua concentração demonstrando que será mais eficiente para tratamento curativo nas concentrações de 40 mL/L. Os autores recomendam o tratamento pós-colheita de pedúnculos de melão com o primeiro produto preventivamente, na concentração 20 mL/L e curativamente com 40 mL/L (Gadelha et a i, 2003). A atividade do primeiro produto pode ser devido à presença do óleo essencial da M. arvensis, que apresenta alta concentração de mentol (70%) e ausência de cineol, composto majoritário do óleo essencial do eucalipto.

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272 - Li lia Aparecida Salgado de Morais et al

Faria et al. (2006) identificaram atividade positiva do óleo essencial de O. gratissimum variedade Eugenol s o b r e i, niger, P. chrysogenume Alter naria spp. (isolados de cenoura e tomate), Rhizoctonia sp. e Botryosphaeria rhodina. O eugenol foi identificado como o composto ativo do óleo essencial, apresentando atividade antifúngica sobre o P. chrysogenum e Alternaria sp.

isolados de tomate.

Óleos essenciais de O. vulgare (orégano), Thymus captatus (tomi lho), O. dictamunus, O. manjorana(manjerona), Lavandula angustifolia(la vanda), Rosmarinus officinalis(alecrim), S .fru ticosa(sálvia) e M. pullegium (poejo), coletados em diversos locais da Grécia, foram testados por Daferera et al.(2003) na inibição do crescimento de B. cinerea. F. sola/ti var. coeruleum e crescimento de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, correla cionando a atividade dos mesmos com sua composição química. Os óleos es senciais de tomilho, orégano e dictamunus apresentam p-cimeno, y-terpineno, timol e carvacrol na composição. O composto timol foi encontrado em maior concentração no óleo essencial de orégano (63,7%), seguido de p-cimeno (13%) e y-terpineno, enquanto que o carvacrol foi o marcador do óleo essen cial de tomilho (81,5%) e dictamunus (64,1%), que também apresentou alto teor de p-cimeno (20,3%) na sua composição. O óleo essencial de manjerona apresentou como composto majoritário o carvacrol (45,1%), o óleo essencial de lavanda apresentou o linalol (25,5%) e o acetato de linalila (17,7%). O eucaliptol foi o composto majoritário dos óleos essenciais de alecrim (31,5%) e sálvia (59,5%) e o óleo essencial do poejo apresentou a pulejona (76,5%) e cis-mentona (15%) como marcadores principais. Para os dois fungos, os óleos essenciais de orégano, tomilho e dictamunus apresentaram atividade expressi va (Tabela 2), seguidos dos de manjerona, lavanda e manjerona apresentaram atividade moderada.

Os óleos essenciais de Corymbia citriodora(eucalipto citriodora), C. nardus (citronela) e T. vulgaris(tomilho) nas concentrações de 1%, 0,5% e 0,3% inibiram completamente a germinação de urediniosporos de Phakopsora pachyrltizie reduziram a severidade da ferrugem asiática da soja em casa de vegetação (Médice et al., 2007). Os autores verificaram que todos os óleos essenciais retardaram a evolução da doença quando comparado com a teste munha. As folhas tratadas com óleos essenciais apresentavam-se mais verdes e túrgidas que as não tratadas, as quais se encontravam amareladas, encar- quilhadas e em estádio avançado de senescência. A severidade da doença foi reduzida entre 34 a 60% na cultivar Conquista e 45 a 62% na cultivar Supre ma. Os efeitos dos óleos essenciais foram analisados em MEV e foi verifica do que o de tomilho murchou os urediniosporos. Para os demais tratamentos observou-se apenas redução no tamanho das urédias. Os óleos essenciais de

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Óleos Essenciais no Controle de Doenças cie Plantas - 2 7 3

eucalipto citriodora e citronela não apresentaram alteração na morfologia dos urediniósporos. Entretanto, as urédias apresentavam sempre menores e com menos urediniósporos. O óleo essencial de tomilho apresentou efeito fungicida direto sobre os urediniósporos, enquanto que nos demais o efeito na redução da doença pode estar relacionado a outros fatores, como a indução de resistên cia. A redução da severidade nas plantas tratadas com óleos essenciais pode ser parcialm ente explicada pela presença de urédias de tamanho inferior, que produziram menos urediniósporos, reduzindo a taxa de progresso da doença. Também Borges (2007) verificaram que os óleos essenciais de C citratus, R. officinalis, Piper uduncum, E. citriodorae Caryophilus aromaticusinibiram a germ inação de urediniosporos de P. pachyrhiziem 76, 76, 71, 65 e 78%, respectivamente.

T abela 2: Toxicidade dos óleos essenciais de Origanum vulgare (orégano), Thymus captatus (tomilho), Origanum dictamunus, Origanum manjorana (manjerona), Lavandula angustifolia (lavanda), Rosm arinus officinalis (alecrim), Salvia fruticosa (sálvia) e M entlta pullegium(poejo) a Botrytis cinerea, Fusarium solani var. coeruleum e Clavibacter ntichiganensis subsp. michiganensis.

Óleos essenciais

e d50

Botrytis Fusarium Clavibacter

Origanum vulgare 50 50 67 Thymus captatus 83 71 39 Origanum dictamunus 67 76 88 Origanum manjorana 143 120 119 Lavandula angustifolia 223 520 252 Salvia fruticosa < 1000 > 1000 211 Rosmarinus officinalis 606 668 -\\fentha pullegium 216 400 92)

Fonte: Daferera et al. (2003) (adaptado).

Costa et al. (2008) avaliaram o efeito de óleo essencial de citronela nas concentrações de 0,25; 0,5; 1; 2; 4 e 8% e de tetraciclina, na concentração de 30 |iL/mL, no controle de Erwinia carotovorae verificaram que foi eficien te contra todos os isolados da bactéria com halos de inibição entre 25 e 35 mm, superando o tratamento com tetraciclina com halos entre 18 e 25 mm.

Os óleos essenciais de T. vulgaris. Lavandula R. C. híbrido e M. pi- perita,nas concentrações de 50, 100, 200, 400, 800 e 1.600 ppm, foram testa dos irt vitro por Zambonelli et al. (1996), contra R. solani(isolado de sementes

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274 - Lilia Aparecida Salgado de Morais et a!

de tomilho), P. ultimum var. ultimam(isolado de pinheiro), F. soluni(isolado de aveia) e C. lindemuthiunum (isolado de feijão). Todos os óleos essenciais inibiram o crescimento micelial, destacando-se o de tomilho. Na concentração de 800 ppm este apresentou atividade fungicida contra todos os patógenos. Ao timol foi atribuída a atividade antifúngica do óleo essencial. Os óleos essen ciais de menta e lavanda foram eficazes no controle dos fitopatógenos, porém nas maiores concentrações. O óleo essencial de menta a 1600 ppm demonstrou atividade sobre P. ultimum e li. soluni. O óleo essencial de tomilho apresen tou em sua composição química 50% de timol, bem como seus precursores y-terpineno (21,55%) e p-cimeno (24,28%). Isto indica que a espécie utiliza da é um quimiotipo timol. O óleo essencial de menta apresentou alto teor de mentol (47,18%), mentona (23,65%), compostos mentofurânicos (19,01%) e eucaliptol (9,23%). O óleo essencial de lavanda apresentou alto teor de linalol (66,95% ), cânfora (19,48%) e eucaliptol (12,53%), porém, foi observado teor m uito baixo de acetato de linalila, um composto comum no óleo essencial de lavanda e seus híbridos.

As observações em ME revelaram que C. lindemuthiunum e R. so- lanitratados com o óleo essencial de tomilho apresentaram alterações morfo- lógicas em suas hifas, aparentando colapsadas e pequenas, também foi obser vada redução na produção de conídios, quando comparados ao controle. Com o óleo essencial de menta observaram leves alterações nas hifas e conídios das células de C. lindemuthiunum. P. ultimum tratado com óleo essencial de lavanda apresentou forte redução no diâmetro das hifas ao ser comparado ao controle, e o surgimento de uma formação filamentosa, consistindo em extra- vasam ento do seu conteúdo citoplasmático (Zambonelli et a i , 1996). Esta re dução do tamanho das hifas pode ser explicada pela alteração no metabolismo do fungo, causada por uma ação mutagênica de muitos óleos essenciais (Zani et al, 1991). Os autores discutem que a atividade antifúngica dos óleos essen ciais testados advém, provavelmente, do resultado da penetração de quitina na parede das hifas, prejudicando a lipoproteína da membrana citoplasmática, levando a este extravasamento do citoplasma, bem como ao esvaziamento e m urchamento das hifas, e presença de filamentos (Zambonelli et a i, 1996; Caccioni & Guizzardi, 1994).

A atividade antifúngica de 13 óleos essenciais (Tabela 3) na concen tração de 100 ppm sobre Pyriculuria oryzue, Dreschsleru oryzae, R. soluni. C. lindemuthiunum, C. cupsici, Mucrophomina phuseolina, A. alternutu, Phyllostictu sp., Pestulotiu theue, C. lunutu, F. oxysporum, Grunuriu uvicola, S. sclerotiorum. Mycoesphaerellu sp.. B. cinereu, A. niger, A. fluvus, Peni- cillium sp., Rhizopus sp., Botryodiplodiu theohromae, Cercosporu nicotiniunu e Phomu sp foi avaliada por Sridar et a i (2003) sobre o crescimento micelial e

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na zona de inibição 72 h após a incubação. O óleo essencial de C. martiniinibiu totalmente o crescimento micelial de C. lindemuthianum, A. alternata, A. niger e A. flavus. O óleo essencial de sementes de Tachyspermum copticum inibiu em 100% o crescimento de A. nigere A. flavus.Devido ao resultado expressivo obtido pelo óleo essencial de C. m artin i, este foi avaliado sobre os mesmos fun gos nas concentrações de 25, 45, 90 e 135 ppm. P. oryzae, D. oryzae, R. solani, C. capsici, M. pltaseolina. Phyllosticta sp., Pestalotia theae, C. lunata. Gra naria uvicola, S. sclerotiorum, B. cinerea, A. niger. A. flavus, Botryodiplodia theobromaee Cercospora nicotiniana foram inibidos totalmente a 45 ppm. A concentração de 90 ppm inibiu totalmente C. lindemuthianum, A. alternatae F. oxysporum.Estes resultados foram confirmados após a realização da bioauto- grafia, que revelou a ação dos monoterpenos geraniol, timol e carvona, isolados dos óleos essenciais de C. martini, T. copticum e A. graveolens, respectiva mente, na inibição do desenvolvimento de conídios de B. cinerea, sendo que o composto geraniol destacou-se dos demais. Os autores concluíram que estes compostos apresentam potencial para utilização como fungicidas, sugerindo al terações sintéticas na molécula, principalmente do geraniol, visando à obtenção de um fungicida lipofílico e eficaz.

Tabela 3: Óleos essenciais testados sobre diversos fitopatógenos e componen tes majoritários inicialmente identificados nos mesmos.

Nome vulgar Nome científico Parte vegetal utilizada Compostos majoritários _____________________________________________________ identificados

Cenoura Daucus carota Sementes secas Carotol - 40%

Junípero Juniperus virginianu espinhos, frutos, Cedrol - 31,6%

caules

Dill Anethum graveolens Sementes Carvona - 45%

Gengibre Zingiber ofjicinale Rizomas Zingibereno - 25%

Nós-moscada Myristica fragrans Sementes Linalol - 20%

Laranja Citrus sinensis Casca fresca do fruto d-limoneno - 80%

Tagetes Tagetes patula Erva Tagetona - 50%

Saussurea lappa Raízes Linalol - 15%

Acorus calamus Raízes a,P - tujona - 50%

Vetiveria zizanioides Raízes Vetiverona - 60%

Ajowan Tachyspermum copticum Sementes Timol - 40%

Nardostachys jatamansi Flores Acetato de bornila - 40%

Cymbopogon Martini Folhas Geraniol - 80%

Fonte: Sridar et al. (2003) adaptado.

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Com óleo essencial de R. officinalis sobre P. nicotianae, S. sclero- tiorum, S. ceptorum. F. proliferatume F. oxysporum f.sp. dianthi, Pitarokili et al. (2008) verificaram EC,n de 172,9 (iL/L, 248,6 |jL/L, 762,3 f.iL/L, 1122,7 (iL/Le 1641,6 (aL/L, respectivamente. O composto majoritário foi o a-pineno (24,1%), seguido pela cânfora (14,9%), 1,8-cineol (9,3%), canfêno (8,9%), a-terpineol (8,8%) e bom eol (8,0%). Os monoterpenos constituíram a maioria dos compostos (89%), enquanto que os sesquiterpenos constituíram 11% da composição do óleo essencial. Os autores avaliaram o efeito do a-p in en o co mercial sobre o crescimento de F. oxysporum f. sp. dianthi, F. proliferatum e S. sclerotiorum.As ECS0 obtidas foram 1197,8 |iL/L, 899,7 |.iL/L e 654,1 |uL/L. Estes resultados demonstram que a atividade do óleo essencial pode estar relacionada não apenas à ação do composto majoritário (a-pineno), mas também aos outros componentes presentes, que podem exercer, se não uma ação direta, ao menos um efeito sinérgico à ação do a-pineno. Em bora a ati vidade antimicrobiana de um óleo essencial seja atribuída principalm ente ao seu composto majoritário, o efeito sinérgico ou antagônico de um composto em menor concentração na composição do mesmo deve ser considerado. Cada componente tem sua própria contribuição na atividade biológica do óleo es sencial (Daferera et al., 2003), devendo ser investigada para a obtenção de resultados mais conclusivos.

A atividade antifúngica de populações de S. fruticosasobre F. oxyspo rum f. sp. dianthi, F. solani f. sp. cucurbitae, F. proliferatum, S. sclerotiorum e R. solanifoi estudada por Pitarokili et al. (2003). Os autores relataram 107 novos compostos nesta espécie, sendo a maioria sesquiterpenos. Os compostos majoritários foram 1,8-cineol, a-tujona, p-tujona, cânfora e E-cariofileno. Dois dos óleos essenciais provenientes de duas populações de sálvia não inibiram o crescimento de F. oxysporum e F. proliferatum. Porém, sobre R. solani, S. sclerotiorume F. solaniesses óleos essenciais foram eficazes, inibindo o cres cimento micelial na concentração de 2000 (iL/L (Tabela 4). O óleo essencial de S. fruticosaproveniente da população quatro foi mais ativo que o da popu lação cinco no controle de F. solani. Pode-se observar com portam ento dife renciado dos óleos essenciais das populações de S. fruticosano controle de F. solani.A expressão deste resultado pode ser devido à diferença na composição química dos óleos essenciais, provenientes de diferentes localidades da Grécia (Tabela 5). A atividade do óleo essencial não pode ser atribuída principalm ente à cânfora, devido ao resultado obtido nos testes realizados com o composto comercial puro na concentração de 500 pL/L (51,65% - 64,86%) para R. solani e S. sclerotiorum, respectivamente, os fungos mais sensíveis (Tabela 6). Estes resultados demonstram que outros componentes do óleo essencial total po dem exercer se não uma ação direta, um efeito sinérgico à ação da cânfora. O resultado da análise química dos óleos essenciais revelou a presença de trinta

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compostos conhecidos e dois outros desconhecidos. O composto majoritário foi o timol (36,9% ), seguido pelo carvacrol (16,7%), pulejona (10,8%), óxido de cariofileno (4,6%) e E-phytol (3,2%). O óleo essencial, bem como o timol foram eficazes no controle dos fungos com halos de inibição de 11,0 mm e 20,5 mm para B. cinerea e 13,5 mm e 14,0 mm para A. niger, respectivamente.

Estudos em Piperáceas revelaram a ocorrência de pironas, lignóides, cromenos, além de amidas, que apresentam atividade antifúngica (Alécio et a l, 1998; Moreira et al., 1998; Mikich et al., 2003). Dentre os gêneros destaca- se Piper com aproximadamente 700 espécies, sendo mais de 170 encontradas no Brasil. Muitas são ricas em óleos essenciais e os estudos com compostos voláteis provenientes da parte aérea revelaram a complexidade de compostos, predominando os monoterpenos e sesquiterpenos, bem como diterpenos e fe- nilpropanóides (Dorman & Deans, 2000).

Tabela 4: Inibição do crescimento micelial (%) pelo óleo essencial de populações de Salvia fruticosa, na concentração 2000 |iL/L, de Fusarium oxysporum f. sp. dianthi, F. solani f. sp. cucurbitae, F. proliferatum, Sclerotinia sclerotiorum e Rhizoctonia solani.

Fungos População 4 População 5

Fusarium oxysporum 45,74 44,44

Fusarium solani 100 52,14

F usarium proliferatum 55,0 50,15

Sclerotinia sclerotiorum 75,95 94,12

Rhizoctonia solani 100 100

Fonte: Pitarokili at al., 2003 (adaptado).

Dentre as piperáceas da Amazônia encontram-se P. aduncum (pimen ta de macaco), que apresenta alto teor de óleo essencial (2,5 a 4%) (Lobato et a l, 2007) rico em dilapiol (Maia et a l, 1998), bem como P. hispidinervum, popularmente conhecida como pimenta longa, que apresenta como composto majoritário o safrol, indicado como uma nova fonte para a síntese de heliotro- pina, um importante fixador de fragrâncias e de butóxido de piperonila, agente sinergístico de inseticidas (Pimentel et a l, 1998).

Silva e Bastos (2007) avaliaram a atividade do óleo essencial de 10 es pécies de Piper (P. dilatatum, P. hostm annianum , P. calosum, P. cyrtopodon, P. tuberculutum . P. divaricatum. P. nigrispicum, P. hispidum, P. murginatum var. anisunt e P. enkea), coletadas na Amazônia, sobre o crescimento micelial e a germinação de basidiósporos de Crinipellis perniciosa, agente causai da vassoura de bruxa, e sobre o crescimento micelial de P. pahnivoru e P. capsici, causadores de podridão parda em frutos de cacaueiro. Os autores verificaram R A P P -V olum e 17. 2009

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inibição de 100% do crescimento micelial de C. perniciosaa partir de 0,75 \xLI m L do óleo essencial de P. callosum e na concentração de 1 ^L/mL do de P. marginatum var. anisatum. O óleo essencial de P. callosum apresenta como composto majoritário o safrol (64%), além do a-pineno (6,9%) e metil-eugenol em menor concentração (2,69%). A atividade antifúngica dos óleos essenciais pode estar associada à presença de um destes compostos ou da ação sinérgica de dois ou mais compostos presentes. O óleo essencial de P. dilatatum foi mais eficiente em imbir a germinação dos basidiósporos, seguido pelos de P. callosum e P. marginatum var. anisatum. Os resultados comprovaram maior sensibilidade dos basidiósporos aos óleos essenciais quando comparados ao micélio, o que é interessante, pois são as principais unidades infectivas do patógeno (Silva & Bastos, 2007).

Tabela 5: Composição dos óleos essenciais de Salvia fruticosa provenientes de MT Pames (População 4) e Sifnos (População 5), na Grécia.

Componente População 4% População 5%

a-pineno 3,1 6,2 Canfeno 3,2 6,4 p-pineno 1,9 6,4 Mirceno 2,1 3,4 a-terpineno . . . . _0,5 1,8-cineol 16,9 34,7 Linalol 0,5 1,3 a-tujona 1,3 2,3 P-tujona 0,9 3,0 Cânfora 15,5 15,9 Trans-pinocanfona 0,8 0,1 Bomeol 8,0 3,4 Terpin - 4 - ol 1,2 0,9 a-terpineol 5,2 1,7

Acetato de bom ila 4,4 2,2

a-acetato de terpenila 0,7 1,8 E- cariofileno 10,4 2,8 Aromadendreno 1,7 0,1 a-hum uleno 2,8 0,8 Oxido de cariofileno 2,1 0,1 Guaiol 4,0 —

--- = ausência. Fonte: Pitarokili at al. (2003) (adaptado)

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R A P P - V ol um e 17 , 2 0 0 9

Tabela 6: Inibição do crescimento micelial (%) de Fusarium oxyspom m f. sp. dianthi F. solani f. sp. cucurbitae F. proliferatum Sclerotinia

_____________sclerotiorum e Rhizoctonia solani por cânfora e 1 8-cineol.________________________________________________________________________ 20 (iL/L 5 0 ^ b l 100 pb'L 200 mL/L 500 mL'L

Fungos Cânfora 1.8-cineol Cânfora 1.8-cineol Cânfora 1.8-cineol Cânfora 1.8-cineol Cânfora 1.8-cineol i ‘. sclerotiorum 0 0 5.93 1,57 5 9J 2,01 16.48 3,82 51,65 15,73

R. solani 0 0 0 0 0 0 9.72 0 64.86 4,41

F. solani 1.16 0 1.94 1.96 5,81 1.96 11,63 3 92 31,01 9.80

F. proliferatum 0 0.96 3.05 6.39 7,01 7,90 12.20 9.58 35,06 19,17

F. oxysporum 0 0 0 0 0 0 4.84 0 37.10 21,02

Fonte: Pitarokili ef ai., 2003 (adaptado).

Ò le o s Esse nci ai s no C o n tr o le de D o enç as de Plan tas -2 7 9

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280 - LU ia Aparecida Salgado de Morais et al

Bastos & Albuquerque (2004) verificaram o efeito fungitóxico do óleo essencial de folhas de P. aduncum in vitro e in vivo sobre C. m usae,agente da antracnose em frutos de banana e verificaram 100% de inibição do crescimento micelial e germinação de conídios nas concentrações de 150 )-ig/mL e 100 fag/ m L do óleo essencial das folhas, respectivamente. In vivo, todos os tratamentos reduziram a incidência e a severidade da doença. O resultado mais expressivo foi observado com o óleo essencial a 1%, o qual reduziu a incidência e a se veridade em 100%, assim como o benomil. Os autores concluíram que o óleo essencial de folhas de P. aduncum apresenta potencial para uso no controle de C. musae,sendo necessária a realização de testes em condições comerciais (Bastos & Albuquerque, 2004).

O óleo essencial de folhas, caules e frutos de P. aduncum, P. arbo- reum e P. tuberculatum,extraídos por hidrodestilação, inibiram o crescimen to de C. sphaerospermurn e C. cladosporioides (Navickiene et al., 2006), ao serem comparados com nistatina. O óleo essencial do fruto de P. aduncum apresentou MIC de 10 f-ig e 50 pg, respectivamente para C. cladosporioides e C. sphaerospermurn. O inverso foi observado com o óleo essencial de fru tos de P. tuberculatum, que apresentou MIC de 10 pg e 50 |_ig para C. spha- erospermum e C. cladosporioides, respectivamente. Os óleos essenciais de folhas de P. aduncum e caules de P. tuberculatum inibiram o crescimento de C. sphaerospermurn (MIC de 50 pg), não sendo eficazes no controle de C. cladosporioides.Os óleos essenciais de P. arboreum testados não inibiram o crescimento micelial dos fungos ensaiados. A identificação química dos com postos dos óleos essenciais apontou a presença de grande quantidade de mono- terpenos em frutos e caules de P. aduncum(85,1% e 66,9%) e P. tuberculatum (82,3% e 62,1%), enquanto que no óleo essencial de P. arboreum ,notou-se presença muito pequena (22,6% e 25,6%) destes compostos. Os m onoterpenos a-pineno, mirceno, limoneno, cis-octmeno, trans-ocimeno e linalol, bem como os sesquiterpenos P-cariofileno, a-hum uleno, gennacreno-D e nerolidol, ocor reram nas três espécies. Os compostos majoritários dos óleos essenciais dos frutos foram linalol (41,2%), germacreno-D (49,3%) e P-pineno (38,2%) para P. aduncum, P. arboreum e P. tuberculatum,respectivamente (Navickiene et al., 2006).

Lobato et al. (2007) avaliaram o efeito do óleo essencial de pimenta- de-macaco (P. aduncum), nas concentrações de 0,5%, 1,0%, 2,0%, 4,0% e 8,0%, na germinação e sanidade de sementes de feijão caupi ( V. unguiculata). O óleo essencial de P. aduncum reduziu a incidência de A .fla vu s, Penicillium

spp., M. phaseolina, R. soluni e Fusarium spp., das sementes. A m aior in cidência foi de M. phaseolina, um dos fungos mais prejudiciais ao caupi. As sementes tratadas com o óleo essencial de P. aduncum, na concentração 0,5% apresentaram redução de 84% da infestação de M. phaseolinapara 16%,

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quando comparado à testemunha. Não houve diferença entre os tratamentos testados, o que sugere que a concentração 0,5% do óleo essencial seja a mais indicada para o tratam ento de sementes, por apresentar a maior relação custo/ beneficio. Na m edida em que se aumentou a concentração do óleo essencial houve redução no percentual de germinação das sementes, porém, não houve diferença significativa. Isto não permitiu aos autores afirmar a ação fitotóxica do óleo essencial sobre o crescimento inicial do embrião ou de intoxicação dos tecidos da semente. Dessa forma, conclui-se que óleo essencial de P. aduncum apresenta potencial para utilização em tratamento de sementes de feijão caupi, para controle de patógenos, porém, para resultados mais conclusivos, novos testes devem ser realizados com vários lotes de sementes, para identificar a ação fitotóxica do mesmo, visando a não interferência na qualidade fisiológica das sementes de feijão caupi.

A ação antifúngica de Caesulia axilaris no controle de A. flavus, A. fum igatus, A. niger, A. terreus, Epidermophyton floccosum, P. italicum e P. notatum foi avaliada por Varma et a i (2002). Também foi avaliada a fungi- toxicidade do com posto y-Asarona isolado do óleo essencial de C. axilaris a 300, 500 e 800 m g/L sobre A. flavus. Os resultados indicaram que o óleo es sencial de C. axilarisapresenta ação fungistática na concentração 1300 mg/L, tomando-se fungicida a partir da concentração 1900 mg/L. Este manteve sua atividade após 530 dias de armazenamento, permanecendo estável após expo sição a temperaturas que variaram de 5 à 100°C. Os autores também relatam a ação fungitóxica do composto y-Asarona, na concentração de 500 mg/L. Este estudo demonstra que o óleo essencial de C. axilarisapresenta características desejáveis em fungicidas, indicando potencial para uso no controle de patóge nos.

Óleo essencial de frutos secos de Zanthoxylum bungeanum foi ava liado por Gong et al. (2009) no controle de A. solani, Boiryodiplodia tlteo- bromae, C. gloeosporioides, F. grantinearum, F. oxysporum f. sp. vasinfec- tum, F. oxysporum f. sp. cucumerinum, F. oxysporum f. sp. lycopersici, F. oxysporum f. sp. niverum, B. maydis, Leptosphueria maculans, Magnupor- the griseu, R. cerealis, R. solani, Venturia pirina e Verticillium dahliae.). Os autores encontraram 35 compostos, sendo os majoritários terpinen -4 —ol (19,7%), 1,8-cineol (16%), p-cimeno (7,9%), y-terpineno (7,3%) e a-terpineol (7,2%). Este resultado difere dos relatos da literatura, que citam o limoneno (27%), mirceno (16,6% ) e o P-ocimeno (9,7%) como os compostos majoritá rios do óleo essencial do fruto seco de Z. bungeanum. A literatura descreve o P-pineno (25,3%), limoneno (20,5%), P-felandreno (14,1%) e Z-p-ocimeno (12,2%) corno os com postos majoritários. Estas diferenças podem ser devidas ao estádio de maturação das plantas, localização geográfica, sazonalidade, bem como aos métodos de extração. O óleo essencial do fruto de Z. bungeanum R A P P -V olum e 17, 2009

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apresentou expressiva atividade fungitóxica sobre os 15 fungos testados, apre sentando valores de IC50 inferiores a 1,0 mg/mL (Tabela 7). Os autores conclu íram que o óleo essencial apresenta amplo espectro de ação antifúngica, o que indica que pode se tom ar um importante agente no controle de patógenos em frutas, hortaliças e plantas.

Tabela 7: Atividade fungitóxica do óleo essencial do fruto seco de Zantho-

xylum bungeanum sobre fungos fitopatogênicos in vitro.

Fungos testados IC<„ (mg/mL)

Alternaria solani 0,44 Botryodiplodia theohroniae 0,48 Colletotrichum gloeosporioides 0,84 Fusa ri um graminearu m 0,70 F. oxysporum f. sp. cucumerinum 0,43 F. oxysporum f. sp. lycopersici 0,92 F. oxysporum f. sp. niveum 0,48 F. oxysporum f. sp. vasinfectum 0,71 Bipolaris maydis 0,24 Leptosphaeria maeulans 0,13 M agnaporthe grisea 0,28 Rhizoctonia cerealis 0,27 Rhizoctonia solani 0,24 Venturia pirina 0,41 Verticillium dahliae 0,32

Fonte: Gong et al. ( 2009) (adaptado).

O óleo essencial de L. rugosa, que tem o geraniol, neral e geranial como os componentes majoritários, nas concentrações de 51,5%, 18,6% e 10,4%, respectivamente, foi testado para avaliar sua atividade em inibir o cres cimento micelial de A .flavu snas concentrações de: 200, 400, 600, 800 e 1000 mg/ L. Também foi avaliado o seu efeito na síntese de aflatoxina B , obtendo- se redução total da biossíntese na concentração 1000 mg/ L, a partir do segun do dia de avaliação (Tatsadjieu et al., 2009).

Trabalhos desenvolvidos com produtos naturais a partir de espécies medicinais têm indicado o seu potencial no controle de fitopatógenos, tanto por sua ação fungitóxica direta, inibindo o crescimento micelial e a germinação de esporos, quanto pela indução de produção de fitoalexinas. O fracionamen- to dos metabólitos secundários dessas plantas, bem como a determinação da atividade biológica das moléculas com respeito à atividade eliciadora ou antimicrobiana pode contribuir para a aquisição de maiores conhecimentos que

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reforcem sua possível utilização como novos métodos de controle de doença de plantas (Schwan-Estrada & Stangarlin, 2001).

A utilização de óleos essenciais de espécies aromáticas, isolados ou em combinação com outros métodos, poderá vir a ter um importante papel no controle de fitopatógenos, contribuindo para redução do uso de fungicidas e, consequentemente, um menor impacto ao ambiente (Mota & Pessoa, 2003).

Em meio a tantos benefícios, se deve considerar que todos estes prin cípios ativos, mesmo sendo naturais, não deixam de ser substâncias químicas, devendo ser usados com moderação. Defensivos, sejam estes naturais ou sin téticos, conseguem manter a produção, mas não conseguem curar as plantas. Elas permanecem, na maioria das vezes, doentes, sendo assim, difícil assegu rar a saúde humana. Esta prática toma-se economicamente interessante, pois se consegue salvar a produção. O correto, neste caso, é controlar a praga ou o fitopatógeno para que não se tenha dano econômico, e identificar no solo, a causa da infestação da praga ou do patógeno. O controle não deve ser utilizado com frequência, mas sim nutrir a planta para tomá-la resistente a estes ataques (Primavesi, 1998). Pode-se considerar, portanto, que um melhor entendimento dos processos naturais de controle de organismos prejudiciais à produção agrí cola, incluindo o conhecimento e preservação da diversidade dos microrganismos envolvidos nestes processos, constitui-se em um importante passo, rumo à sustentabilidade da agricultura.

Aspergillus, Penicillium e Fusarium, por produzirem importantes micotoxinas, são muito estudados na busca de óleos essências com capacidade de inibi-los. Dentre eles, possivelmente, A. flavus apresenta o maior número de estudos demonstrando o potencial de óleos essenciais na sua inibição. Vie- gas et al. (2005) verificaram que os óleos essenciais de canela e alho se des tacaram em relação aos de sálvia, capim limão, gengibre, pimenta da Jamaica e pimenta do reino na sua inibição. Assim, esses óleos foram testados contra 37 isolados do fungo e foi verificado que existe variabilidade na população do fungo quanto à sensibilidade aos óleos.

Benkeblia (2004) verificou a atividade antimicrobiana de óleo essen cial extraído de cebola verde, amarela e vermelha e de alho contra A. niger, P. cyclopium e F. oxysporum. Os óleos essenciais dessas plantas apresenta ram acentuada atividade antimicrobiana, sendo o de alho com alta ativida de inibitória e cebola verde com a mais baixa. A. niger foi menos inibido nas concentrações baixas (50 e 100 mL/L) de óleo essencial de cebola verde e amarela. No entanto, as altas concentrações exibiram acentuada inibição. Por outro lado, todas as concentrações de óleo essencial de cebola vermelha e alho apresentaram forte efeito inibitório contra A. niger. A sensibilidade de P. cyclopium aos óleos essenciais de cebola e alho foram próximas aos de A. niger. No entanto, o óleo essencial de cebola vermelha mostrou menor efeito RAPP Volume 17, 2009