PLANO DE TRABALHO DO BOLSISTA/ESTAGIÁRIO

(1)

REITORIA - Av. Sete de Setembro, 1558 - ERECHIM/RS - Fone/Fax: (054) 3522-1255 - CEP 99.700-000 - Cx. Postal 290 CAMPUS DE ERECHIM - Av. Sete de Setembro, 1621 - ERECHIM/RS - Fone/Fax: (054) 3520-9000 - CEP 99.700-000

CAMPUS DE FREDERICO WESTPHALEN - Rua Assis Brasil, 709 - FREDERICO WESTPHALEN/RS - Fone: (055) 3744-9200 - Fax: (055) 3744-9265 - CEP 98.400-000 CAMPUS DE SANTO ÂNGELO - Av. Universidade das Missões, 464 - SANTO ÂNGELO/RS - Fone/Fax: (055) 3313-7900 - CEP 98.802-470

Universidade Regional Integrada do Alto Uruguai e das Missões - URI

Reconhecida pela Portaria Ministerial nº 708 de 19/05/92 - D.O.U. de 21/05/92

Mantida pela Fundação Regional Integrada – FuRI

Pró-Reitoria de Pesquisa, Extensão e Pós-Graduação - PROPEPG

www.reitoria.uri.br pesquisa@reitoria.uri.br

Edital 01/2007

PLANO DE TRABALHO DO BOLSISTA/ESTAGIÁRIO

Análise bioquímica em camundongos prenhes expostos ao Antimoniato

de Meglumina durante a gestação

Orientador

Silvane Souza Roman

Co-orientador

Sandra Manoela Dias Macedo

(2)

1. Introdução

O plano de bolsista anteriormente solicitado (edital 01/2006) terá seu término em julho de 2007 com resultados extremamente relevante para a comunidade científica e a partir dele surgiram novas perspectivas de desdobramento do assunto atual e que neste momento estaremos apresentando um novo plano de bolsista com ênfase nos aspectos bioquímicos em camundongos após a exposição ao antimoniato de meglumina. Este plano de bolsista irá comprovar os dados já apresentados no plano de bolsista anterior em que se tratava de efeito histopatológico renal e hepático e malformações ósseas do antimoniato de meglumina, com a ênfase nos efeitos bioquímicos do medicamento.

Devido ao fato do antimoniato de meglumina ser uma substância usada por profissionais e pessoas leigas no assunto este trabalho contribui para a geração de novos conhecimentos, assim como pelo fato das indústrias pouco ter contribuído para o desenvolvimento de novos medicamentos para o tratamento da leishmaniose, visto que esta é comum em países subdesenvolvidos, ficando restritas as pesquisas de Institutos e Universidades, principalmente na busca de uma alternativa terapêutica viável, eficiente e menos tóxica (BERMAN, 1997), pois não é comercialmente interessante para a indústria farmacêutica, e portanto o antimoniato de meglumina, continua sendo o tratamento de primeira escolha, utilizado há mais de 50 anos.

Trabalhos em nosso laboratório com o uso do Antimoniato de Meglumina durante a gestação em camundongos têm demonstrado a toxicidade da droga nos diferentes períodos gestacionais, e, em especial no período fetal. Devido aos poucos estudos relacionados a toxicologia do fármaco no sangue circulante, principalmente durante o período gestacional deu-se a significativa importância á problemática terapêutica, para definir a segurança e/ou a toxicidade do seu uso estabelecendo assim critérios para monitoramento em pacientes com leishmaniose durante o tratamento como Antimoniato de Meglumina.

O plano de bolsista está inserido ao projeto do orientador pois o mesmo abrange estudos teratogênicos com o antimoniato de meglumina em camundongos.

2. Objetivos

- Analisar os parâmetros bioquímicos em camundongos prenhes expostos Antimoniato

de Meglumina no período de implantação (1º ao 6º dia de gestação – ddg) organogênese (7º ao 12º ddg) e fetal (13º ao 18º ddg).

(3)

- Aprender a realizar levantamentos bibliográficos; - Leitura de artigos científicos;

- Manuseio, cuidados e manutenção com animais experimentais; - Conhecer e aplicar as normas éticas para experimentação animal; - Identificar os órgãos internos dos animais experimentais;

- Respaldo Científico para orientar o efeito farmacológico e/ou terapêutico dos compostos orgânicos estudados e seus efeitos;

- Preparação da dosagem do medicamento a ser administrado, importante para aprendizado no preparo de soluções;

- Detecção de prenhez em camundongos;

-Ter conhecimento prático de realizar dosagem dos níveis séricos de creatinina, uréia e ácido úrico dos animais tratados com Antimoniato de Meglumina durante os períodos de implantação, organogênese e fetal contribuindo para o aperfeiçoamento das aulas teóricas;

-Adquirir experiência prática na determinação de glicose, bilirrubina, densidade, sangue, pH, proteína, urobilinogênio, nitrito e leucócitos, através das análises químicas das amostras biológicas de urina;

-Conhecer as possíveis alterações hepáticas através de análises da atividade das transaminases hepáticas Aspartato Amino Transferase (AST), Alanina Amino Transferase (ALT) no soro dos animais dos diferentes grupos de tratamentos;

- Conhecer a embriologia do camundongo e comparar com a embriologia humana; - Estimular o espírito científico e crítico diante dos resultados alcançados;

- Preparação de resumos e pôsteres em Congressos, Jornadas, etc..

- Preparação de manuscrito para publicação e relatórios das atividades realizadas; - Estimular para a pós graduação.

3. Base Teórica

Durante a realização do estudo, o aluno irá aprofundar conhecimentos na área de toxicologia que é a ciência que estuda os efeitos nocivos decorrentes das interações de substâncias químicas com o organismo. A avaliação toxicológica compreende a análise dos dados toxicológicos de uma substância com o objetivo de classificá-los toxicologicamente, assim como medidas preventivas e curativas quanto do uso inadequado (OGA, 1996). Discutir assuntos relacionados ao uso racional de medicamentos durante a gravidez; ler, entender e aprofundar assuntos de bioquímica, essenciais para a área da Farmácia. E ainda, a conscientização no que diz respeito ao

(4)

tratamento de doenças tropicais e a terapêutica disponível, avaliando a relação risco-benefício, principalmente durante a gravidez.

A partir dos dados toxicológicos torna-se possível estabelecer a conduta adequada para a realização de análises, seja para a pesquisa de toxicantes ou de produtos de biotransformação, seja para a avaliação de parâmetros, hematológicos, bioquímicos utilizados como indicadores das alterações que essas substâncias provocam no sistema biológico (MORAES, SZNELWAR, FERNICOLA, 1991). As análises são requeridas sempre que se torna necessário esclarecer, confirmar ou prevenir uma intoxicação (MORAES, SZNELWAR, FERNICOLA, 1991).

4. Metodologia

Acasalamento dos animais experimentais e distinção do plug vaginal, considerando este o 1° dia de gestação. Posteriormente, inicia-se a administração de 100mg/kg do antimoniato de meglumina, via injeção subcutânea, durante 6 dias.

No 18º ddg, os animais serão eutanasiados pela câmera de gás de CO2 e a seguir o

abdômen será incisado e submetido à colheita sanguínea via artéria abdominal, seguido da punção cardíaca, para obter maior volume de sangue. O sangue será armazenado em um tubo de ensaio contendo EDTA, (10µL/ml) com a separação do soro para análises bioquímicas de acordo com a metodologia descrita nos Kits labtest® pelas dosagens das transaminases hepáticas (AST,ALT) e dos parâmetros renais, pelas dosagens de creatinina, ácido úrico e uréia, realizadas no Laboratório de Análises Clínicas da URI – Campus de Erechim.

A atividade enzimática das transaminases (ALT e AST) serão determinada pela metodologia Liquiforme®, na qual as transaminases catalisam a transferência do grupamento amino de um α-aminoácido para um α-catoácido. A concentração de ácido úrico na amostra será determinada com uma reação de ponto final, de acordo com a metodologia Liquiforme®, na qual o ácido úrico é oxidado pela uricase à alantoína e peróxido de hidrogênio.

A dosagem de creatinina será feita através do método colorimétrico de ponto final, de

acordo com a metodologia Liquiforme®, na qual a creatinina reage com a solução de

picrato em meio alcalino, formando um complexo de cor vermelha que é medido colorimetricamente.

A dosagem de uréia UV Liquiform será determinada através da hidrólise pela urease produzindo amônia e dióxido de carbono. A urina será coletada e a análise química

(5)

semi-quantitativa será determinada pela presença de glicose, bilirrubina, densidade, sangue, pH, proteína, urobilinogênio, nitrito e leucócitos.

5. Cronograma de trabalho

Mês 01 e 02 (agosto e setembro)/2007 - Encontro com orientador;

- Revisão Bibliográfica;

- Acasalamento das fêmeas virgens; - Análise do plug vaginal;

Mês 03 e 04 (outubro e novembro)/2007 - Encontro com orientador;

- Administração do antimoniato de meglumina nos animais experimentais prenhes; - Coleta de sangue e análise bioquímica

Mês 05 e 06 (dezembro e janeiro)/2007-2008 - Encontro com orientador;

- Administração do antimoniato de meglumina nos animais experimentais prenhes; - Coleta de sangue e realização de dosagens bioquímica;

- Análise e discussão dos dados com orientadores e escrever relatório parcial. Mês 07 e 08 (fevereiro e março)/2008

- Encontro com orientador; - Revisão Bibliográfica;

- Administração do antimoniato de meglumina nos animais experimentais prenhes; - Coleta de sangue e realização de dosagens bioquímica;

(6)

Mês 09 e 10 (abril e maio)/2008 - Encontro com orientador; - Revisão Bibliográfica;

- Coleta de sangue e realização de dosagens bioquímica; - Análise e discussão dos dados com orientadores;

- Elaboração de resumo para Jornadas, Seminários, Congressos etc. Mês 11 e 12 (junho a julho)/2008

- Encontro com orientadores; - Revisão Bibliográfica;

- Organização de pôster para apresentação em Encontros, Jornadas e Congressos; - Divulgação em Congressos, Jornadas e Seminário de Iniciação Científica;

- Discussão dos resultados e elaboração do relatório final; - Elaboração de artigo para a publicação.

6. Bibliografia

BERMAN J. D. Human leishmaniasis: clinical, diagnostic, and chemotherapeutic developments the 10 years. Clinical Infections Diseasis, p. (684-703), 1997.

MOORE K. L and PERSAUD T.V.N. Embriologia Clínica. 6ª ed. Guanabara Koogan: Rio de Janeiro, 2000.

MORAES, F. C. E. SZNELWAR, B. R. FERNICOLA, A G. N. Manual de toxicologia

analítica. São Paulo: Ed Roca, 1991.

MOTTA, V. T. Bioquímica clínica – princípios e interpretações. 4° ed. Porto Alegre: Médica Missau, 2003.

MOTTA, V. T. Bioquímica clínica : princípios e interpretações. 3ª ed. Editora Médica Missau: Porto Alegre, 2000.

NAVA, A., ROMAN, S. S. Efeito do Antimoniato de Meglumina sobre a performance

reprodutiva de camundongos prenhes; Vivências, Erechim. v.1, Ano 2, n° 3, p.201-12,

(7)

OGA, S. Fundamentos de Toxicologia. São Paulo: Atheneu Editora, 1996.

PAUMGARTTEN, F. J. R.; CHAHOUD, I. Embryotoxicity of meglumine antimoniate in the rat. Reproductive Toxicology, USA, v. 15, p. 327-331, 2001.

RAVEL, R. Laboratório clínico – Aplicações clínicas dos dados laboratoriais. 6° ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1995.