Aspectos históricos Pasteur bacilo que após s contacto com o ar cessava o movimento. 1ª Guerra Mundial ( ) 18) gangrena / tétanot

(1)

Aspectos históricos

•

• 1690

1690

–

Van

Leuwenhoek

:

“

anim

á

culos

”

existindo na ausência de ar

•

• 1861

1861

–

Pasteur

–

bacilo que ap

ó

s contacto com o ar cessava o movimento

•

• 1908

1908

–

Von

Hibler

:

Bacillus

oedema

maligni

•

1

1 ª

ª

Guerra Mundial (1914

-

18)

–

“

gangrena / t

é

tano

”

•

• 1916

1916

–

Mclntosh

e

Field

:

“

jarra de anaerobiose

”

•

• Altmeier

Altmeier

(1938): importância dos anaer

ó

bios não

Clostridia

•

• at

at

é

anos 60: bact

é

rias do G

é

nero

Clostridium

são a principal preocupa

ç

ão

•

• ap

ap

ó

s anos 60: anaer

ó

bios não

Clostridia

–

agentes

“

terr

í

ficos

”

•

• T

T

é

tano:

Areteu

da Capad

ó

cia; Hip

ó

crates

•

• Gangrena gasosa: Hip

Gangrena gasosa: Hip

ó

crates

•

(2)

ANAERÓBIO: definição

•

• Bact

Bact

é

rias que exigem O2 como aceitador terminal de electrões: aer

ó

bio

obrigat

ó

rio

•

• Bact

Bact

é

rias que crescem em

aerobiose

e são capazes de obter energia

pela fermenta

ç

ão de compostos orgânicos:

aer

ó

bio facultativo

•

• Bact

Bact

é

rias incapazes de usar O2 e que são por ele inibidas:

anaer

ó

bio

obrigat

ó

rio/estrito

Anaer

ó

bio obrigat

ó

rio/estrito

a)

extremamente sens

í

vel: não tolera concentra

ç

ão O2 > 0.5%

b)

moderadamente sens

í

vel: tolera concentra

ç

ão O2 at

é

2

2 -

-

8%

a)

são tipicamente membros de popula

ç

ões microbianas aut

ó

ctones

humanas

b)

(3)

Porque motivo o O2

é

t

ó

xico para estas bact

é

rias ?

•

• Do normal metabolismo bacteriano, na presenDo normal metabolismo bacteriano, na presençça de O2a de O2

-- perperóóxido de hidrogxido de hidrogéénionio

-- radiciasradicias hidroxilohidroxilo

-- radicais livres de O2radicais livres de O2

-- O2O2

-- O2O222-- _(anião_(anião_super_super_-_-_ó_ó_xido_xido₎₎

•

• Anião Anião supersuper--óóxidoxido –– agressivo para a cagressivo para a céélula bacteriana:lula bacteriana:

-- oxida oxida liplipíídeosdeos intraintra--celularescelulares e da paredee da parede

-- provoca provoca ““quebraquebra”” DNADNA

-- inactiva enzimas bacterianasinactiva enzimas bacterianas •

• BactBactéérias aerrias aeróóbias e aerbias e aeróóbias facultativas bias facultativas –– produproduçção de enzimas:ão de enzimas:

-- dismutasedismutase do do supersuper--óóxidoxido

-- catcatáálaselase

-- peroxperoxíídasedase Conceito cl

Conceito cláássicossico::toxicidade do O2 para os anaertoxicidade do O2 para os anaeróóbios por falta destas enzimasbios por falta destas enzimas McCord

McCord (1971): bact(1971): bactéérias anaerrias anaeróóbias estritas geralmente não produzem bias estritas geralmente não produzem catcatáálaselase e nunca produzem

(4)

Conhecimento actual

Catalase Catalase •

• demonstrada a produdemonstrada a produçção de ão de catcatáálaselase em espem espéécies de cies de BacterBacteróóidesides, , Peptoestreptococcus

Peptoestreptococcus e e PropionibacteriumPropionibacterium; não se correlaciona com a tolerância ao O; não se correlaciona com a tolerância ao O₂₂ Peroxidase

Peroxidase •

• não foi definitivamente demonstrada a produnão foi definitivamente demonstrada a produçção de ão de peroxidaseperoxidase em bactem bactéérias rias anaer

anaeróóbias estritasbias estritas Dismutase

Dismutase supersuper-ó-óxidoxido •

• produproduçção induzida por exposião induzida por exposiçção ao Oão ao O₂₂ (ex. (ex. BacteroidesBacteroides)) •

• EubacteriumEubacterium limosumlimosum e e ClostridiumClostridium oroticumoroticum -- quantidades significativas desta quantidades significativas desta enzima; incapazes de sobreviverem em

enzima; incapazes de sobreviverem em aerobioseaerobiose

de um modo geral, o teor da enzima de um modo geral, o teor da enzima éé maior em bactmaior em bactéérias rias gramgram negativo que negativo que gramgram positivo

positivo

correlacorrelaçção com o grau de tolerância ao O2 nas anaerão com o grau de tolerância ao O2 nas anaeróóbias obrigatbias obrigatóórias moderadasrias moderadas Potencial de

Potencial de oxi-oxi-redureduççãoão do meio (Eh):do meio (Eh): factor muito importante, masfactor muito importante, mas…… •

• adiadiçção de agentes redutores não permite crescimento de todas as estião de agentes redutores não permite crescimento de todas as estirpes bacterianas rpes bacterianas anaer

(5)

Distribui

ç

ão de bact

é

rias anaer

ó

bias no corpo humano

3-5:1 108_-109 endocolo 3-5:1 108_-109 vagina

Aparelho genital feminino

1000:1 1011_-1012 colon 1:1 104 _-107 delgado distal 1:1 102 _-104 delgado proximal 1:1 102 _-105 estômago Tubo digestivo 3-5:1 103 _-104 Fossas nasais 1000:1 1011_-1012 suco gengival 1:1 1010 _-1011 superfície dentária 1:1 108 _-109 saliva Boca anaerob/aerob Total (por ml ou g) Local

(6)

Incidência de diferentes estirpes anaer

Incidência de diferentes estirpes anaeróóbias bias nas popula

nas populaçções microbianas autões microbianas autóóctonesctones

0: raro/ não isolado; ±: irregularmente presente;

1: usualmente presente; 2: usualmente presente, em grande número

1 0 ± 1 2 Propionibacterium 2 ± 1 1 0 Lactobacillus ± 0 2 1 0 Eubacterium ± 0 2 1 0 Bifidobacterium ± 0 1 1 0 Actinomyces ± ± 2 ± ± Clostridium 1 ± 2 2 1 Petostreptococcus bactérias gram+ 1 0 1 2 0 Veillonela ± 1 1 2 0 Fusobacterium 1 1 2 2 0 Bacteroides bactérias gram-Vagina Uretra Intestino Ap. respiratório Pele Género

(7)

Anaer

Anaeró

ó

bios e Popula

ç

ão Microbiana Aut

ó

ctone (PMA)

ctone (

PMA)

As bact

é

rias anaer

ó

bias predominam no nosso corpo,

em rela

ç

ão

à

s aer

ó

bias

A maioria das infec

ç

ões por anaer

ó

bios tem ponto de

partida end

ó

geno

a

“

identidade

”

das estirpes envolvidas numa determinada

infec

(8)

Bact

é

rias anaer

ó

bias e doen

ç

a humana

Incidência relativa de bactérias anaeróbias

<1 +++ +++ 100 73 74 92 >55 >50 90-95 76 85 94 85-90 94-100 100 30-60 50 38 rara 10 89 5-20 Incidência (%) Aparelho urinário fasciite necrotizante celulite crepitante gangrena gasosa Tecidos moles abortamento séptico abcesso vulvo-vaginal abcesso tubo-ovárico

salpingite, peritonite pélvica

Aparelho genital feminino

abcesso hepático peritonite/ abcesso Intra-abdominal empiema pneumonia necrotizante abcesso pulmonar pneumonia aspiração Pleuropulmonar

outras infecções orais abcesso periodontal otite média crónica sinusite crónica ocular Cabeça e pescoço meningite empiema subdural abcesso cerebral SNC Bacteriemia Tipo de infecção

(9)

“

Pistas

”

para uma infec

ç

ão por bact

é

rias anaer

ó

bias

•

• odor p

odor p

ú

trido da lesão ou descarga

•

• localiza

localiza

ç

ão foco infeccioso pr

ó

ximo a superf

í

cie mucosa

•

• necrose

necrose

tecidular

•

• forma

forma

ç

ão abcesso

•

• infec

infec

ç

ão secund

á

ria a mordedura humana ou animal

•

• g

g

á

s nos tecidos ou no exsudado

•

• tromboflebite

tromboflebite

s

é

ptica

•

• “

“

quadro cl

á

ssico

”

–

gangrena gasosa

•

• terapêutica com

terapêutica com

aminoglicos

í

deos

/

antimicrobianos

de largo

espectro

•

• fluorescência avermelhada com luz U.V. (

fluorescência avermelhada com luz U.V. (

Bacteroides

ou

Porphyromonas

)

•

• presen

presen

ç

a de

“

grãos de enxofre

”

no exsudado (

Actinomyces

)

•

• culturas negativas em

culturas negativas em

aerobiose

/pr

é

via observa

ç

ão de

microrganismos

(10)

Procedimentos recomendados para a colheita de amostras

Regras gerais

por aspira

ç

ão com agulha e seringa

amostra de tecido por

bi

ó

psia

•

• zaragatoas

zaragatoas

–

devem ser, sempre que poss

í

vel, rejeitadas

•

• são mais suscept

são mais suscept

í

veis de serem contaminadas

•

• ficam mais expostas ao O2 ambiente e

ficam mais expostas ao O2 ambiente e

à

disseca

ç

ão

•

• colhem um pequeno volume de produto para amostra

colhem um pequeno volume de produto para amostra

•

(11)

Amostras

inaceit

á

veis

para cultura em anaerobiose

•

• zaragatoas

zaragatoas

nasais ou da

orofaringe

•

• zaragatoas

zaragatoas

gengivais

•

• expectora

expectora

ç

ão

“

expectorada

”

•

• expectora

expectora

ç

ão colhida por aspira

ç

ão oro ou

nasotraqueal

•

• amostras colhidas por

amostras colhidas por

broncoscopia

, colhidas sem cateter de ponta

protegida

•

• conte

conte

ú

do g

á

strico ou do intestino delgado (excepto

sdrs

. em

“

ansa

cega

”

)

•

• conte

conte

ú

do intestino grosso, de

ileostomias

, de

colostomias

ou fezes

(excepto suspeita de

C.

C. difficile

difficile

ou

C.

C. botulinum

botulinum

)

•

• urina colhida por mic

urina colhida por mic

ç

ão ou por sonda de

Folley

•

• zaragatoas

zaragatoas

vaginais ou cervicais

•

• amostras colhidas da superf

amostras colhidas da superf

í

cie de

ú

lceras de dec

ú

bito, de feridas,

escaras

ou f

í

stulas

•

• amostras colhidas em zonas adjacentes

amostras colhidas em zonas adjacentes

à

pele ou a membranas

mucosas que não tenham sido devidamente descontaminadas

(12)

Transporte da amostra

Regras gerais

as amostras, durante o transporte at

é

ao laborat

ó

rio,

devem ser mantidas a 37

º

C

evitar a refrigera

ç

ão das amostras

>>> diminui

ç

ão do n

º

de microrganismos vi

á

veis

Do r

á

pido e adequado transporte depende

o sucesso do isolamento correcto dos

anaer

(13)

Transporte da amostra

Em condi

Em condiçções ideais, a amostra serões ideais, a amostra seráá enviada ao laboratenviada ao laboratóório numa atmosfera rio numa atmosfera anaer

anaeróóbia, hbia, húúmida e mida e àà temperatura ambientetemperatura ambiente Recorre

Recorre--se a um dispositivo e/ou meio de transporte, quando se prevê um se a um dispositivo e/ou meio de transporte, quando se prevê um atraso atraso superior a 15

superior a 15--20 minutos entre a colheita e o processamento ou quando se utili20 minutos entre a colheita e o processamento ou quando se utilizou zou uma

uma zaragatoazaragatoa Na pr

Na práática ditica diááriaria •

• um volume de 2 ml ou mais, em seringa com agulha um volume de 2 ml ou mais, em seringa com agulha ““ocluidaocluida””, tolera 1 ou 2 horas, , tolera 1 ou 2 horas, mas

mas……

dependendo do agente implicado

dependendo do agente implicado versusversusrisco de picada acidental !!!risco de picada acidental !!! •

• uma uma ““grandegrande”” amostra de tecido mantamostra de tecido mantéém os microrganismos vim os microrganismos viááveis durante veis durante “

“algumas horasalgumas horas””

recorrer a dispositivos e meios de transporterecorrer a dispositivos e meios de transporte * muitos são incompat

* muitos são incompatííveis com certas amostras, principalmente veis com certas amostras, principalmente bibióópsiaspsias * a maioria foi concebido para transporte de

(14)

Exame directo da amostra

1.

1. Exame macrosc

Exame macrosc

ó

pico

Inspec

ç

ão visual:

“

pistas

”

sobre a

natureza

e a

qualidade

da amostra

Sugerem a presen

ç

a de bact

é

rias anaer

ó

bias:

purulência

odor p

ú

trido

tecidos

necrosados

p

ú

s

com

“

grãos de enxofre

”

Exame com luz U.V. (360

nm

): pesquisa de fluorescência

(15)

Exame directo da amostra

2. Exame microsc

ó

pico

Esfrega

ç

o

corado pelo

gram

em conjun

ç

ão com os dados cl

í

nicos,

é

o exame laboratorial mais

ú

til

permite a observa

ç

ão da morfologia t

í

pica de muitas

bact

é

rias,como

:

Bacteroides

: bacilo

gram

-

,

“

p

á

lido

”

,

pleom

ó

rfico

Fusobacterium

: bacilo fino,

gram

-

,

fusiforme

Veillonella

:

diplococo

pequeno,

gram

-

Actinomyces

: bacilo

gram

+, em grupos,

“

ramifica

ç

ões

”

Imunofluorescência

(IF) com

atcs

monoclonais

Apenas em laborat

ó

rios de referência/investiga

ç

ão

Custos elevados

(16)

Exame directo da amostra

3. Outros procedimentos

An

á

lise directa

á

c

. gordos cadeia curta por cromatografia

g

á

s

-

l

í

quida

(GLC)

Sangue: com algum valor; não utilizado por rotinaSangue: com algum valor; não utilizado por rotina

Material purulento: pouco sensMaterial purulento: pouco sensíível; pouco especvel; pouco especíífico; dispendiosofico; dispendioso

Sondas DNA/PCR

DisponDisponííveis para um nveis para um nºº limitado de agentes, não comercialmentelimitado de agentes, não comercialmente

Microscopia campo escuro/ contraste fase

DemontraDemontraççãoão de de espiroquetasespiroquetas; pouco interesse pr; pouco interesse prááticotico

Testes serol

ó

gicos

Uso limitado; controverso. ex.: aglutinaUso limitado; controverso. ex.: aglutinaçção ão latexlatex ((C. C. difficiledifficile))

EIA (m

é

todos

imunoenzim

á

ticos

)

(17)

Processamento laboratorial das amostras

1. Selec

ç

ão dos meios de cultura

Maioria das infec

ç

ões são

polimicrobianas

>>>> meios

selectivos

e

não selectivos

“

selec

ç

ão

”

pretendida vai depender de: tipo de amostra

volume da amostra

recursos econ

ó

micos do laborat

ó

rio

Como m

í

nimo:

Meio não selectivo; incubar em Meio não selectivo; incubar em aerobioseaerobiose e anaerobiosee anaerobiose

Meio selectivo para microrganismos como por ex. grupo do Meio selectivo para microrganismos como por ex. grupo do BacteroidesBacteroides fragilisfragilis

Importante

(18)

Processamento laboratorial das amostras

2. Prepara

ç

ão das amostras para a sementeira

Grande volume l

í

quido: concentrar por centrifuga

ç

ão; semear o sedimento

Zaragatoa

: extrac

ç

ão suave, em pequeno volume (0.5 a 1 ml) de caldo

tioglicolato

Tecidos: homogeneiza

ç

ão em 1 ml caldo

tioglicolato

; suave e r

á

pida

(19)

Processamento laboratorial das amostras

3. Incuba

ç

ão em anaerobiose

Pretende

-

se uma incuba

ç

ão em atmosfera sem O

₂₂

livre

Composi

ç

ão habitual: 5% H

₂₂

, 5% CO

₂₂

, 80% N

₂₂

Escolha entre os diferentes sistemas de produ

ç

ão de anaerobiose

condicionada por diversos parâmetros: o principal são os recurso

s

econ

ó

micos

Qualquer um deles

é

satisfat

ó

rio para o isolamento dos anaer

ó

bios

mais frequentemente implicados em doen

ç

a humana

Jarra anaerobioseJarra anaerobiose

Saco anaerobioseSaco anaerobiose

Câmara anaerobioseCâmara anaerobiose

(20)

Jarra de anaerobiose

Custo inicial moderado/ elevado

Custo manuten

ç

ão moderado

--

Sistema GAS PAK

--

Sistema

evacua

ç

ão

-

substitui

ç

ão

: anaerobiose mais r

á

pida

+ catalisador

+ catalisador paladiumpaladium: caro: caro + indicador de anaerobiose

+ indicador de anaerobiose

vantagem

vantagem simples e convenientesimples e conveniente pouco espa

pouco espaççoo permite uso de t

permite uso de téécnicas convencionaiscnicas convencionais desvantagem

desvantagem exposiexposiçção prolongada ao ar durante inspecão prolongada ao ar durante inspecçção/ ão/ subculturassubculturas anaerobiose

(21)

Saco de anaerobiose (

anaerobic

bag

)

Custo inicial baixo

Custo manuten

ç

ão elevado:

disposable

vantagem

vantagem simples; permite uso de tsimples; permite uso de téécnicas convencionaiscnicas convencionais pouco espa

pouco espaççoo permite inspec

permite inspecçção sem quebrar anaerobioseão sem quebrar anaerobiose desvantagem

desvantagem exposiexposiçção prolongada ao ar durante ão prolongada ao ar durante subculturassubculturas anaerobiose

anaerobiose ““lentalenta”” s

(22)

Câmara de anaerobiose

Custo inicial elevado

Custo manuten

ç

ão moderado/ elevado

vantagem

vantagem anaerobiose anaerobiose ““imediataimediata””

processamento de amostras em anaerobiose

inspec

inspecçção sem quebrar anaerobioseão sem quebrar anaerobiose isolamento segundo t

isolamento segundo téécnicas convencionaiscnicas convencionais desvantagem

desvantagem prepreçço muito elevadoo muito elevado ocupa muito espa

ocupa muito espaççoo “

“timetime consumingconsuming”” manuten

(23)

Roll

tube

(tubo de

Hungate

; VPI

-

AL)

Tecnicamente

“

bizarro

”

Custo inicial moderado

Custo manuten

ç

ão moderado

vantagem

vantagem permite inspecpermite inspecçção tubos sem quebrar anaerobiose ão tubos sem quebrar anaerobiose desvantagem

desvantagem tecnicamente diftecnicamente difíícil (exige muito treino)cil (exige muito treino) dif

difíícil isolamento estirpes em cultura puracil isolamento estirpes em cultura pura não permite observa

(24)

Control

de anaerobiose

Qu

í

mico:

indicadores

Biol

ó

gico:

anaer

ó

bios estritos

_▫

Fusobacterium

▫

_{Porphyromonas}

aer

(25)

Identifica

ç

ão de bact

é

rias anaer

ó

bias

a.

Presuntiva

Sens

.

antimicrobianos

colistina

vancomicina

kanamicina

metronidazol

Provas bioqu

ímicas

í

micas

catalase

produ

ç

ão

indol

redu

ç

ão nitratos

polianetol

sulfonato

s

ó

dio

crescimento em meio com sais biliares

alanina

peptidase

urease

lecitinase

/

lipase

Testes

cromog

é

nicos

: kits de identifica

ç

ão r

á

pida (4 a 24 h)

ß

glicosidase

ß

galactosidase

alfa

glicosidase

alfa

(26)

Identifica

ç

ão de bact

é

rias anaer

óbias

ó

bias

b. Definitiva

muito demoradamuito demorada

muito trabalhosamuito trabalhosa

muito caramuito cara O

O ““goldgold standardstandard”” resulta da combinaresulta da combinaçção dos vão dos váários mrios méétodostodos

Cromatografia

g

á

s

-

l

í

quida

(GLC)

ananáálise dos produtos finais do metabolismo (lise dos produtos finais do metabolismo (áácc. gordos cadeia curta). gordos cadeia curta)

áácc. . butbutííricorico, , valvalééricorico, , isovalisovalééricorico: marcadores prim: marcadores primááriosrios

áácc. l. lááctico, ctico, succsuccííniconico, , fumfumááricorico, f, fóórmicormico

Sistemas r

á

pidos de identifica

ç

ão

bateria bateria miniaturizadaminiaturizada de provas bioqude provas bioquíímicasmicas

API 20A (API 20A (BioMBioMéérieuxrieux): 16 ): 16 carbohidratoscarbohidratos; ; indolindol, , ureaseurease, , gelatinasegelatinase, , esculinaesculina, , cat

catáálaselase –– leitura visual, leitura visual, ààs 24s 24--48 horas48 horas

ATB 32A (ATB 32A (BioMBioMéérieuxrieux): automatizado; 4): automatizado; 4--12 horas12 horas

MinitekMinitek (BBL)(BBL)

AnAn--IdentIdent ((AnalitabAnalitab))

ANI ANI CardCard ((VitekVitek): computorizado): computorizado

API API ZymZym ((BioMBioMéérieuxrieux): 50 provas): 50 provas

M

é

todos alternativos

Cromatografia Cromatografia áácc. gordos cadeia longa da parede celular. gordos cadeia longa da parede celular

Sondas DNASondas DNA

(27)

Teste de Sensibilidade aos

Antimicrobianos

Até

At

é

h

á

alguns anos:

“

padrões de susceptibilidade das bact

é

rias anaer

ó

bias

são previs

í

veis e est

á

veis

”

Presentemente:

antibimicrobianos

de largo espectro

antibioterapia

mal conduzida

“

novos

”

antibacterianos

O TSA tornou

(28)

Teste de Sensibilidade aos

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos

Antimicrobianos

M

é

todos

Diluiç

Dilui

ção em

ão em agar

agar

-- permite testar a maioria dos agentespermite testar a maioria dos agentes

-- complicado e morosocomplicado e moroso

-- uso em laboratuso em laboratóórios de referênciarios de referência

Microdilui

ç

ão

-- não adequado a estirpes de crescimento lentonão adequado a estirpes de crescimento lento

-- não permite testar não permite testar metronidazolmetronidazol

Macrodilui

ç

ão

-- permite determinar MBCpermite determinar MBC

-- bastante morosobastante moroso

(29)

Teste de Sensibilidade aos

Antimicrobianos

Problemas pr

á

ticos

Variabilidade entre as diferentes t

é

cnicas

O resultado TSA pode ser

“

err

ó

neo

”

(infec

ç

ão

polimicrobiana

)

Deve

obrigatoriamente

ser executado em isolados de:

--

hemoculturas

--

SNC (ex. abcesso)

--

infec

ç

ões graves (ex.

endocardite

)

--

em cultura pura

--

que não responderam a terapêutica

antibacteriana

pr

é

via

--

de infec

ç

ões requerendo terapêutica prolongada

(30)

Sintese

(1)

são as bact

é

rias que mais frequentemente colonizam o corpo

humano

muitos dos agentes implicados em infec

ç

ão fazem parte das

popula

ç

ões microbianas aut

ó

ctones

o laborat

ó

rio ser

á

incapaz de conseguir o seu isolamento a menos

que:

colheita da amostra seja adequada

transporte da amostra nas condi

ç

ões

ó

ptimas

maioria das infec

ç

ões são

polimicrobianas

, envolvendo estirpes

aer

ó

bias e anaer

ó

bias >>>> dificulta o isolamento laboratorial e a

sua valoriza

(31)

Sintese

Sintese (2)(2)

o isolamento e identificao isolamento e identificaçção dos anaerão dos anaeróóbios bios éé um processo lento, trabalhoso e um processo lento, trabalhoso e dispendioso

dispendioso

o microbiologista deve fornecer informao microbiologista deve fornecer informaçções dentro de um tempo ões dentro de um tempo úútiltil O processamento de anaer

O processamento de anaeróóbios oscila entre uma bios oscila entre uma ““bacteriologia exaustivabacteriologia exaustiva”” e um e um “

“relato presuntivorelato presuntivo””

a escolha ta escolha téécnica deve resultar de uma discussão scnica deve resultar de uma discussão sééria e aturada entre ria e aturada entre microbiologistas e cl

microbiologistas e clíínicos, fortemente condicionada pelos recursos financeiros nicos, fortemente condicionada pelos recursos financeiros dispon

disponííveisveis

os laboratos laboratóórios devem ser escalonados em nrios devem ser escalonados em nííveis (I, II, III), em funveis (I, II, III), em funçção do não do níível de vel de identifica

identificaçção que são capazes de atingirão que são capazes de atingir

NNíível Ivel I •• morfologia colmorfologia colóóniasnias •

• morfologia ao morfologia ao gramgram dos isolados em cultura purados isolados em cultura pura

NNíível IIvel II •• susceptibilidade a susceptibilidade a antimicrobianosantimicrobianos (discos)(discos) •

• provas bioquprovas bioquíímicas simplesmicas simples

NNíível IIIvel III •• provas bioquprovas bioquíímicasmicas •

• cromatografia cromatografia ggááss--llííquidaquida •

(32)

Bacilos anaer

ó

bios

gram

positivo,

esporulados

G

Géénero nero ClostridiumClostridium

habitathabitat •• solosolo •

• vegetaisvegetais •

• tubo digestivo (Homem e animais)tubo digestivo (Homem e animais) •

• nascentes nascentes ááguagua •

• sedimento marinho sedimento marinho

a grande maioria das espa grande maioria das espéécies são cies são mesmesóófilasfilas; ; psicrpsicróófilasfilas; ; termtermóófilasfilas

a maioria são comensais, não provocando doena maioria são comensais, não provocando doenççaa

principal mecanismo de principal mecanismo de patogenicidadepatogenicidade: toxinas (: toxinas (exotoxinasexotoxinas; natureza proteica), ; natureza proteica), transform

transformááveis em veis em anatoxinasanatoxinas (vacinas)(vacinas)

tradicionalmente provocam infectradicionalmente provocam infecçções exões exóógenasgenas •

• botulismobotulismo •

• gangrena gasosa, gangrena gasosa, ppóóss--traumtraumááticatica •

• ttéétanotano •

• toxitoxi--infecinfecççõesões alimentaresalimentares

actualmente as infecactualmente as infecçções endões endóógenas são muito mais comunsgenas são muito mais comuns

(33)

Clostridium

perfringens

(e outros das gangrenas gasosas)

a maioria das espa maioria das espéécies de cies de ClostridiumClostridium pode ser causa de gangrenapode ser causa de gangrena

habitantes intestino humano e de animaishabitantes intestino humano e de animais

5 tipos (A a E)5 tipos (A a E) •• tipo A: principal agente de doentipo A: principal agente de doençça humanaa humana •

• tipo C: agente da enterite tipo C: agente da enterite necrotizantenecrotizante

produz vproduz váários tipos de toxinasrios tipos de toxinas •

•toxinatoxina responsresponsáável pela vel pela liselise de de hemhemááciascias •

•enterotoxinaenterotoxina -- toxitoxi--infecinfecççãoão alimentaralimentar •

•toxinatoxina activa contra PMN, plaquetas, cactiva contra PMN, plaquetas, céélula muscularlula muscular •

•colagenasecolagenase, , hialuronidasehialuronidase, , ……

as estirpes que causam doenas estirpes que causam doençça humana são as que existem no solo ou tubo a humana são as que existem no solo ou tubo digestivo

digestivo

a infeca infecçção ocorre geralmente por contaminaão ocorre geralmente por contaminaçção traumão traumáática ou cirtica ou cirúúrgicargica

pode ainda ser pode ainda ser reponsreponsáávelvel porpor •

• infecinfecçções intra abdominaisões intra abdominais •

• abortamento sabortamento séépticoptico •

• septicemia psepticemia póós abortamentos abortamento •

(34)

Gangrena gasosa

Factores predisponentes Factores predisponentes anaerobioseanaerobiose isquemiaisquemia pH pH áácidocido

favorecem a proliferafavorecem a proliferaçção de microrganismosão de microrganismos

toxinas e enzimas >>> libertatoxinas e enzimas >>> libertaçção de gão de gáás s -- crepitacrepitaçção tão tíípicapica

Diagn

Diagnóstico microbiolóstico microbiolóógicogico

sangue: sangue: hemoculturashemoculturas

ppúúss

fragmentos tecidosfragmentos tecidos

gramgram: numerosos bacilos : numerosos bacilos gramgram+, em +, em ppúúss com fraca reaccom fraca reacççãoão leucocit

leucocitááriaria >>> >>> desbridamentodesbridamento circirúúrgico imediatorgico imediato

Preven

ç

ão

evitar contaminaevitar contaminaçção de feridas com terraão de feridas com terra

(35)

Clostridium

tetani

agente do t

é

tano

isolado a

aprtir

intestino equ

í

deos e bovinos

capacidade de

esporular

no solo, permanecendo vi

á

vel por muito tempo

produz

exotoxina

proteica

-

tetanospasmina

-

antig

é

nica

transform

á

vel em

anatoxina

(vacina)

(36)

T

é

tano

quadro clquadro clíínico surge habitualmente apnico surge habitualmente apóós contaminas contaminaçção feridaão ferida

úúlceras varicosaslceras varicosas

cordão umbilicalcordão umbilical

focos dentfocos dentááriosrios

““traumatismostraumatismos”” puerppuerpéériorio ou pou póós abortamentos abortamento

importância dos factores profissionaisimportância dos factores profissionais

agricultoresagricultores

jardineirosjardineiros

penetrapenetraçção e multiplicaão e multiplicaçção no local >>> libertaão no local >>> libertaçção toxinaão toxina

difusão difusão retroretro--axonalaxonal atatéé sinapses medularessinapses medulares

inibe os neurinibe os neuróónios inibitnios inibitóórios >>> rios >>> paralisia paralisia espespáásticastica Quadro

Quadro ““ttíípicopico”” incuba

incubaçção 6 a 15 diasão 6 a 15 dias 1

1ºº sintoma: sintoma: trismustrismus ((mmúúscsc. mastiga. mastigaçção)ão) outras

outras contracturascontracturas morte r

morte ráápida: espasmo da laringepida: espasmo da laringe Imunidade

(37)

Clostridium

botulinum

habitat: intestino animais; contamina terrenos >>> contamina habitat: intestino animais; contamina terrenos >>> contamina áágua, vegetais gua, vegetais ……

agente do agente do botulismobotulismo: : toxitoxi--infecinfecççãoão alimentar, de halimentar, de háá longa data conhecidalonga data conhecida

actualmente consideramactualmente consideram--se 4 tipos de se 4 tipos de botulismobotulismo

alimentaralimentar

feridas (muito raro)feridas (muito raro)

recrecéémm--nascidonascido

indind. >12 meses, sem outras causas. >12 meses, sem outras causas

7 tipos de toxinas (7 tipos de toxinas (antigantigéénicasnicas): A a G): A a G

tipo A, B, E e F: as mais frequentemente implicadas em doentipo A, B, E e F: as mais frequentemente implicadas em doençça humanaa humana

a toxina a toxina éé produzida na fase de crescimento exponencial >>> libertadaproduzida na fase de crescimento exponencial >>> libertada

(38)

Botulismo

Quadro

“

t

í

pico

”

(em Portugal) (em Portugal)

alimento: presunto caseiroalimento: presunto caseiro

anaerobiose, temperatura estanaerobiose, temperatura estáávelvel

abate porco durante perabate porco durante perííodo digestivoodo digestivo

toxina

é

absorvida pelo tubo digestivo

incubaincubaçção: 24 a 36 horasão: 24 a 36 horas

invasão: vinvasão: vóómitos; sinais mitos; sinais inespecinespecííficosficos

estado: paralisias; cestado: paralisias; cóólicas; licas; altalt. secre. secreççõesões

outros alimentos implicados

enlatadosenlatados mariscos mariscos vegetaisvegetais peixepeixe

Diagn

(39)

Clostridium

difficille

habitat no intestino humano e de animaishabitat no intestino humano e de animais

isolado a partir do solo, feno, areiaisolado a partir do solo, feno, areia

isolado a partir do intestino de recisolado a partir do intestino de recéémm--nascidos, em 50% dos casosnascidos, em 50% dos casos

em crianem criançças com mais de 2 anos: 4%as com mais de 2 anos: 4%

adultos que receberam adultos que receberam antibioterapiaantibioterapia: at: atéé 46%46%

causa principal de:causa principal de: diarreia diarreia ppóóss--antibioterapiaantibioterapia colite

colite pseudomembranosapseudomembranosa

mais frequente com mais frequente com clindamicinaclindamicina, , ampicilinaampicilina, , cefalosporinascefalosporinas

tratadacomtratadacom vancomicinavancomicina

factores virulênciafactores virulência:: toxina A (toxina A (enterotoxinaenterotoxina)) toxina B (

toxina B (citopcitopááticatica)) inibidor da

inibidor da motilidademotilidade intestinalintestinal

DiagnDiagnóósticostico:: isolamento do agenteisolamento do agente teste de aglutina

teste de aglutinaçção pelo ão pelo latexlatex detec

(40)

Bacilos anaer

ó

bios

gram

positivo, não

esporulados

grupo que inclui os ggrupo que inclui os géénerosneros

BifidobacteriumBifidobacterium EubacteriumEubacterium PropionibacteriumPropionibacterium ActinomycesActinomyces ArachniaArachnia RothiaRothia LactobacillusLactobacillus

membros PMA pele e superfmembros PMA pele e superfíícies mucosas (boca, intestino, genitais) cies mucosas (boca, intestino, genitais) do Homem e animais

do Homem e animais

muitas espmuitas espéécies são consideradas oportunistascies são consideradas oportunistas

podem causar infecpodem causar infecçções graves, com risco de vidaões graves, com risco de vida

(41)

Actinomyces

GGéénero que inclui innero que inclui inúúmeras espmeras espééciescies

membros de PMA da boca e mucosas do Homem e outros animaismembros de PMA da boca e mucosas do Homem e outros animais Actinomyces

Actinomyces israelliisraelli

o mais o mais ““importanteimportante””

agente da agente da actinomicoseactinomicose

ActinomicoseActinomicose

60% 60% cervicofacialcervicofacial

15% tor15% toráácicacica

20% abdominal20% abdominal

5% outros tipos ex. DIU5% outros tipos ex. DIU

tipicamente tipicamente polimicrobianapolimicrobiana

raramente o raramente o ActinomycesActinomyces éé isolado em cultura puraisolado em cultura pura

crescimento muito lentocrescimento muito lento

morfologia tmorfologia tíípica semelhante fungos (filamentos pica semelhante fungos (filamentos ““ramificadosramificados””))

ttíípicos picos ““grãos de enxofregrãos de enxofre”” na descarga da lesão: na descarga da lesão: ““colcolóóniasnias”” macroscmacroscóópicaspicas

(42)

Propionibacterium

acnes

habitante da pele

implicado em quadros de

endocardite

(

proteses

valvulares)

septicemias

papel importante, talvez não como

patog

(43)

Bifidobacterium

B.

B. denticum

denticum

(

A.eriksonii

, B.

eriksonii

)

parece ser o

ú

nico com potencial patog

é

nico

isolado de:

c

á

rie dent

á

ria

fezes

exsudado vaginal

pneumonias

caracter

í

stica a produ

ç

ão de

á

c

. ac

é

tico/

á

c

. l

á

ctico na razão 3:2

B.

B. longum

longum

B. breve

(44)

Eubacterium

habitante cavidade oral Homem e animais

isolado frequentemente a partir das fezes e solo

isolado em cultura mista:

abcessos e feridas (cabe

ç

a, osso, pele, pelve)

bacteriemias

,

endocardites

(+ raramente)

E.

E. lentum

lentum

: esp

é

cie mais frequente

B. breve (

spp

.

nov.

), E.

timidum

, E.

brachy

:

infec

ç

ão

periodontal

Diagn

ó

stico microbiol

ó

gico

cromatografia

g

á

s

-

l

í

quida

(45)

Arachnia

A.

A. propionica

propionica

:

semelhan

ç

as com

Propionibacterium

Actualmente

Propionibacterium

propionicus

(

spp

nov

.)

(46)

Bacilos anaer

ó

bios

gram

negativo

Inclui membros dos GInclui membros dos Géénerosneros

BacteroidesBacteroides ((PorphyromonasPorphyromonas e e PrevotellaPrevotella))

FusobacteriumFusobacterium WolinellaWolinella LeptotrichiaLeptotrichia DesulfomonasDesulfomonas ButyrivibrioButyrivibrio succinivibriosuccinivibrio AnaerovibrioAnaerovibrio AnaerobiospirillumAnaerobiospirillum SelenomonasSelenomonas

membros de PMA de animais e humanosmembros de PMA de animais e humanos

bocaboca

tracto respirattracto respiratóório superiorrio superior

intestinointestino

aparelho genitalaparelho genital

encontrados em mais de 50% das amostras clencontrados em mais de 50% das amostras clíínicas que contêm anaernicas que contêm anaeróóbiosbios