7.2 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΕΠΙΚΥΡΩΣΗΣ
7.2.8 Ανθεκτικότητα (Robustness)
Οι βέλτιστες τιμές των κρίσιμων παραμέτρων είναι: α) ρυθμιστικό διάλυμα οξεικών pH = 6,00, β) ρυθμιστικό διάλυμα οξεικών 10 mΜ, γ) Dabsyl-Cl 2,3 mg/mL, δ) ρυθμιστικό διάλυμα ανθρακικών pH = 10,00.
Συμπέρασμα: Από τα αποτελέσματα της μελέτης προκύπτει πως η μέθοδος είναι κατάλληλη για τον έλεγχο των αμινοξέων στο σκεύασμα.
Συνθήκες φύλαξης/
Χρονική στιγμή ένεσης Εμβαδόν
Αποθήκευση στον δειγματολήπτη (t=0 min)
Εμβαδό μεθειον.=82168 Εμβαδό άγν. κορυφής =2595
Εμβαδό άγν. κορυφής =2909 Νέα παραγωγοποίηση της
μεθειονίνης μετά από φύλαξη της στους 2-8 ⁰C
για 72 ώρες
Εμβαδό μεθειον.=72164 Εμβαδό άγν. κορυφής =8826 Εμβαδό άγν. κορυφής =9870
126
ΠΙΝΑΚΑΣ ΟΡΟΛΟΓΙΑΣ
Πίνακας 36: Πίνακας ορολογίας με τις αντιστοιχίσεις των ελληνικών και ξενόγλωσσων όρων
Ξενόγλωσσος όρος Ελληνικός Όρος
Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography
υγροχρωματογραφία υψηλής απόδοσης αντίστροφης φάσης 4-dimethylaminoazobenzene-4’-
sulfonylchloride
4-διμεθυλαμινοαζωβενζολο-4’- σουλφονυλοχλωρίδιο 1-dimethylaminonaphthalene-5-
sulfonylchloride
1-διμεθυλαμινοναφθαλινο-5- σουλφονυλοχλωρίδιο
Derivatization παραγωγοποίηση
Post-column derivatization παραγωγοποίηση μετά τη στήλη Pre-column derivatization παραγωγοποίηση πριν τη στήλη On-column derivatization πραγωγοποίηση πάνω στη στήλη
Gas Chromatography αεριοχρωματογραφία
Capillary Electrophoresis τριχοειδής ηλεκτροφόρηση Ion-pair chromatography χρωματογραφία ζεύγους ιόντων Ion-exchange chromatography χρωματογραφία ιονανταλλαγής Cation exchange chromatography χρωματογραφία κατιονανταλλαγής
Thin Layer Chromatography χρωματογραφία λεπτής στιβάδας
Ultraviolet υπεριώδες
Fluorescence φθορισμός
Chemiluminescence χημειοφωταύγεια
Mass spectrometry φασματομετρία μαζών Normal Phase, HPLC υγροχρωματογραφία κανονικής
φάσης 2,2-dihydroxyindane-1,3-dione νινυδρίνη
Fluorescamine φλουορεσκαμίνη
127
ο-phthaldialdehyde Φθαλική διαλδεΰδη 6-aminoquinolyl-N- hydroxysuccinimidyl
carbamate
καρβαμικό-6-αμινοκινολυλ-Ν- υδροξυηλεκτριμίδιο 9-fluorenylmethylchloroformate χλωρομυρμηκικός 9-
φλουορενυλομεθυλεστέρας 7-fluoro-4-nitro-2,1,3-benzoxadiazole 7-φθορο-4-νιτρο-2,1,3-
βενζοξαδιαζόλιο
Phenylisothiocyanate ισοθειοκυανικός φαινυλεστέρας 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene 1-φθορο-2,4-δινιτροβενζόλιο Diethyl ethoxymethylene malonate μηλονικό διαιθυλαιθοξυμεθυλένιο
1-dimethylaminonaphthalene-5- sulfonylchloride
1-διμεθυλαμινοναφθαλινο-5- σουλφονυλοχλωρίδιο Sodium lauryl sulfate λαουρυλοθειικό νάτριο Pentadecafluoro-octanoic acid υπερφθορο-οκτανοϊκό οξύ
ethyl carbonochloridate χλωροφορμικός αιθυλεστέρας 2,2-dimethylpropanoyl chloride 2,2-διμεθυλοπροπανοϋλοχλωρίδιο 2,2,3,3,3-pentafluoropropanoate 2,2,3,3,3-πενταφθοροπροπιονικό
Phenylthiohydantoin analogues φαινυλοθειοϋδαντοΐνικά ανάλογα
6-aminoquinoline 6-αμινοκινολίνη
Ν-hydroxysuccinimide N-υδροξυηλεκτριμίδιο Sodium dodecyl sulfate δωδεκυλοθειικό νάτριο
Precision πιστότητα
Linearity γραμμικότητα
Accuracy ακρίβεια
Stability σταθερότητα
Post column reactor αντιδραστήρας μετά τη στήλη 3,3’-thiobis (propanoic acid) θειοδιπροπιονικό οξύ
128
ΣΥΝΤΜΗΣΕΙΣ – ΑΡΚΤΙΚΟΛΕΞΑ – ΑΚΡΩΝΥΜΙΑ
Πίνακας 37: Ακρωνύμια και ανάπτυξή τους
ΕΚΠΑ Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήµιο Αθηνών Dabsyl-Cl 4-dimethylaminoazobenzenesulfonylchloride Dansyl-Cl 1-dimethylaminonaphthalene-5-sulfonylchloride
DEEMM diethyl ethoxymethylene malonate
FDNB 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene
NBD-F 7-fluoro-4-nitro-2,1,3-benzoxadiazole FMOC-Cl 9-fluorenylmethylchloroformate
AQC 6-aminoquinolyl-N- hydroxysuccinimidyl carbamate
OPA ο-phthaldialdehyde
HPLC High Performance Liquid Chromatography
UV Ultraviolet
MS Mass spectrometry
TLC Thin Layer Chromatography
CE Capillary Electrophoresis
GC Gas Chromatography
SFA Saturated fatty acids
MUFA Monunsaturated fatty acids
PUFA Polyunsaturated fatty acids
RP-HPLC Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatography
SLS Sodium lauryl sulfate
PFOA Pentadecafluoro-octanoic acid
PITC Phenylisothiocyanate
PTH Phenylthiohydantoin analogues
NBD-Cl 4-Chloro-7-nitrobenzofurazan
NBD-Br 4-Bromo-7-nitrobenzofurazan
Dansyl-NH2 5-(Dimethylamino)-1-napthalenesulfonamide
SDS Sodium dodecyl sulfate
129
RSD Relative standard deviation
SD Standard deviation
CAN Acetonitrile
MeOH Methanol
TDPA 3,3’-thiobis (propanoic acid)
C Concentration
LOD Limit of detection
LOQ Limit of quantitation
130
ΑΝΑΦΟΡΕΣ
1. John McMurry, Οργανική χημεία, Τόμος ΙΙ, 2008, pp. 1289-1296, πανεπιστημιακές εκδόσεις Κρήτης
2. Κωνσταντίνος Δημόπουλος, Σμαράγδη Αντωνοπούλου, Βασική Βιοχημεία, 2009, pp. 11-13
3. http://academics.keene.edu/rblatchly/Chem220/hand/npaa/aawpka.ht m, 08/04/2018
4. https://en.wikipedia.org/wiki/Amino_acid, 13/06/2016
5. Περιοδική έκδοση της ελληνικής εταιρείας θεραπείας πόνου και παρηγορητική φροντίδας, τεύχος 17, Οκτώβριος 2012
6. Περίληψη των χαρακτηριστικών του σκευάσματος
7. Skoog, Holler, Nieman, Αρχές της Ενόργανης Ανάλυσης, 2005, pp.
844-845, εκδόσεις Κωσταράκης
8. https://eclass.uoa.gr/modules/units/?course=CHEM233&id=12855, 13/05/2018
9. Snyder L. R., Kirkland J.J., Glajch J.L., Practical HPLC Method Development 1997, New York, John Wiley & Sons, Inc. 2nd Ed. pp.
101-102
10. H. Lingeman, W.J.M. Underberg, Detection-Oriented Derivatization Techniques in Liquid Chromatography (CRC Press, 1990), p.6
11. Leo M.L. Nollet, Fidel Toldra, Food analysis by HPLC, third edition, 2013, pp. 33-56
12. Jui-Yoa Chang, René Knecht and Dietmar G. Braun, Amino acid analysis in the picomole range by precolumn derivatization and High- Performance-Liquid Chromatography, Methods in Enzymology, volume 91, 1983, pp. 41-48,
13. https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma- Aldrich/Product_Information_Sheet/t3754pis.pdf, 13/05/2015
131
14. http://www.shimadzu.com/an/hplc/support/lib/lctalk/53/53intro.html, 13/05/2016
15. R.M. Callegón, A.M. Troncoso, M.L. Morales, Determination of amino acids in grape-derived products: A review, volume 81, 2010, pp. 1143- 1152
16. Jack Kazes, Encyclopedia of Chromatography, second edition, volume 1, 2005, pp. 68-74
17. Graham J. Hughes, Séverine Frutiger and Christian Fonck, Quantitative high-performance liquid chromatographic analysis of Dabsyl-amino acids within 14 min, Journal of Chromatography, volume 389, 1987, pp. 327-333
18. H. Lingeman, W.J.M. Underberg, Detection-Oriented Derivatization Techniques in Liquid Chromatography (CRC Press, 1990), p.5
19. Snyder L. R., Kirkland J.J., Glajch J.L., Practical HPLC Method Development 1997, New York, John Wiley & Sons, Inc. 2nd Ed. pp.
161-168
20. Jenny M. Armenta, Diego F.Cortes, John M. Pisciotta, Joel L.Shuman, Kenneth Blakeslee, Dominique Rasoloson, Oluwatosin Ogunbiyi, David J. Sullivan, Jr, and Vladimir Shulaev, A sensitive and rapid method for amino acid quantitation in malaria biological samples using AccQ•Tag UPLC-ESI-MS/MS with multiple reaction monitoring, Analytical Chemistry, volume 82(2), 2010, pp. 548-558
21. Salvatore Fanali, Paul Haddad, Colin Poole, Peter Schoenmakers, David Lloyd, Liquid Chromatography: Applications, 2013, pp. 131-145 22. I.N. Papadoyiannis, HPLC in clinical chemistry, Monograph, Marcel
Dekker Inc. Book 1990, pp. 97-137
23. R. M. Kamp, T. Choli-Papadopoulou, B. Wittmann-Liebold, Protein Structure Analysis: Preparation,Characterization and Microsequencing, 1997, pp. 231-248
24. Norlo Kaneda, Michihiko Sato and Kunio Yagi, Analysis of Dansyl Amino Acids by Reverse-Phase High-Performance Liquid
132
Chromatography, Analytical Biochemistry, volume 127, 1982, pp. 49- 54
25. European Pharmacopoeia 5.0, 2.2.56 Amino acid analysis
26. A. Fallon, R.F.G. Booth, L.D. Bell, Laboratory Techniques in biochemistry and molecular biology, volume 17, Applications of HPLC in Biochemistry, 1990, pp. 185-187
27. Eygène H.J.Jansen, Rijk H. Van Den Berg, Reinskje Both-Miedema and Lam-Bert Doorn, Advantages and limitations of pre-column derivatization of amino acids with dabsyl chloride, Journal of Chromatography, volume 553, 1991, pp. 123-133
28. Elena Katz, Roy Eksteen, Peter Schoenmakers, Neil Miller, Handbook of HPLC, 1998, pp. 695-716
29. V.T Wiedmeter, S.P. Porterfield and C.E. Hendrich, Quantitation of Dns-amino acids from body tissues and fluids using high-performance liquid chromatography, Journal Chromatography, volume 231, 1982, pp. 410-417
30. Ibolya Molnar-Perl, Quantitation of amino acids and amines by Chromatography:Methods and protocols, Journal of Chromatography, volume 70, 2005, pp. 229-234
31. Yitzhak Tapuhi, Donald E. Schmidt, Wolfgang Lindner and Barry L.Karger, Dansylation of Amino Acids for High-Performance Liquid Chromatography Analysis, Analytical Biochemistry, volume 115, 1981, pp. 123-129
32. Rakesh Minocha, Stephanie Long, Simultaneous separation and quantitation of amino acids and polyamines of forest tree tissues and cell cultures within a single high-performance liquid chromatography run using dansyl derivatization, Journal of Chromatography A, volume 1053, 2004, pp. 63-73
33. William R. Gray, End-Group Analysis Using Dansyl Chloride, Methods in Enzymology, volume 25, 1972, pp. 121-138
133
34. C. Gros and B. Labouesse, Study of the dansylation reaction of amino acids, peptides and proteins, European Journal Biochemistry, volume 7, 1969, pp. 463-470
35. W.R. Gray, Dansyl Chloride Procedure, Methods in Enzymology, volume XI, 1967, pp. 139-151
36. J.P. Zanetta, G. Vincendon, P.Mandel and G. Gombos, The utilization of I-dimethylaminonaphthalene-5-sulphonylchloride for quantitative determination of free amino acids and partial analysis of primary structure of proteins, Journal of Chromatography, volume 51, 1970, pp.
441-458
37. Susan Heimbecher, Yung-Chi Lee, S. Esmail Tabibi, Samuel H.
Yalkowsky, Derivatization and high-performance liquid chromatographic analysis of pentaazapentacosane pentahydrochloride, Journal of Chromatography B, volume 691, 1997, pp. 173-178
38. Nicholas Parris and David Gallelli, Dansylation of Amino Acids and Byproduct Formation, Journal of Liquid Chromatography, volume 7(5), 1984, pp. 917-924
39. E. De Mey, G. Drabik-Markiewicz, H. De Maere, M.-C. Peeters, G.
Dedelinckx, H. Paelinck, T. Kowalska, Dabsyl derivatization as an alternative for dansylation in the detection of biogenic amines in fermented meat products by reversed phase high performance liquid chromatography, Food Chemistry, volume 130, 2012, pp. 1017-1023
40. Xuejun Kang, Jing Xiao, Xiao Huang, Zhongze Gu, Optimization of dansyl derivatization and chromatographic conditions in the determination of neuroactive amino acids of biological samples, Clinica Chimica Acta, volume 366, 2006, pp. 352-356
41. Marilyn S. Arnott and Darrell N.Ward, Separation of dansyl amino acids in a single analysis, Analytical Biochemistry, volume 21, 1967, pp. 50-56
134
42. http://www.tutorhelpdesk.com/homeworkhelp/Biochemistry-/Dansyl- Chloride-Reaction-Assignment-Help.html, 13/05/2015
43. Jen-Kun Lin and Jul-Yoa Chang, Chromophoric labelling of amino acids with 4-dimethylaminoazobenzene-4’-sulfonyl chloride, Analytical Chemistry, volume 47, 1975, pp. 1634-1638
44. Jui-Yoa Chang, René Knecht and Dietmar G. Braun, Amino acids analysis at the picomole level, Biochemistry Journal, volume 199, 1981, pp. 547-555
45. René Knecht and Jui-Yoa Chang, Liquid Chromatographic determination of amino acids after gas-phase hydrolysis and derivatization with dimethylamino)azobenzenesulfonyl chloride, Analytical Chemistry, volume 58, 1986, pp. 2375-2379
46. Joseph Vendrell and Francesc X. Avilés, Complete amino acid analysis of proteins by dabsyl derivatization and reversed-phase liquid chromatography, Journal Of Chromatography, volume 358, 1986, pp.
401-413
47. Jui-Yoa Chang, René Knecht and Dietmar G. Braun, A complete separation of dimethylaminoazobenzenesulphonyl-amino acids, Biochemistry Journal, volume 203, 1982, pp. 803-806
48. Ingolf Krause, Annette Bockhardt, Herbert Neckermann, Thomas Henle, Henning Klostermeyer, Simultaneous determination of amino acids and biogenic amines by reversed-phase high-performance liquid chromatography of the dabsyl derivatives, Journal of Chromatography, volume 715, 1995, pp. 67-79
49. Rama Sethuraman, Tat Leang Lee and Shinro Tachibana, Simple quantitative HPLC method for measuring physiologic amino acids in cerebrospinal fluid without pretreatment, Clinical Chemistry, volume 50, No. 3, 2004, pp. 665-669
50. V. Stocchi, F. Palma, G. Piccoli, B. Biagiarelli, M. Magnani, L. Masat and L. Cucchiarini, Analysis of amino acids as DABS-derivatives with a
135
sensitivity to the femtomole level using RP-HPLC narrow-vore columns, Amino acids, volume 3, No. 3, 1992, pp. 303-309
51. http://www.jascoinc.com/uhplc/high-speed-analysis-of-dabsyl-amino- acids-in-stout-beer-using-uhplc, 13/05/2015
52. H. J. Schneider, Amino acid analysis using Dabs-Cl, Chromatographia Vol. 28, No. 1-2, 1989, pp. 45-48
53. http://www.jascoinc.com/hplc/analysis-of-dabsyl-amino-acids-using- hplc, 13/05/2015
54. ISO 5725-2: Aκρίβεια (αληθείς τιµές και επαναληψιµότητα) των αναλυτικών µεθόδων και αποτελεσµάτων. Mέρος 2: Bασικές µέθοδοι για τον προσδιορισµό της επαναληψιµότητας και της αναπαραγωγιµότητας προτύπων αναλυτικών µεθόδων, 1994