Foram avaliados quatro fragmentos (AD, VD, SIV e VE) do miocárdio de cada animal, totalizando 120 cortes histológicos. As alterações observadas em cada região estudada e as respectivas percentagens encontram-se apresentadas na Tabela 2. Os resultados individuais das intensidades de infiltrado inflamatório, granuloma, necrose de cardiomiócitos e aumento de fibras colágenas observados nas quatro áreas do coração são apresentados nos Apêndices B a E.
a
c
b
VD
VD
VE
VD
VE
Tabela 2 – Intensidades de infiltrado inflamatório, necrose, granuloma e aumento de fibras colágenas observadas na parede livre de átrio direito (AD), parede livre de ventrículo direito (VD), septo interventricular (SIV) e parede livre de ventrículo esquerdo (VE) do miocárdio de 30 cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral. Número absoluto e percentagem de animais. (Araçatuba-SP, 2012)
Variável Categoria N AD % N VD % N SIV % N VE %
Infiltrado Inflamatório 0 4 13,3 8 26,7 7 23,3 8 26,7 1 14 46,7 19 63,3 20 66,7 21 70,0 2 8 26,7 3 10,0 3 10,0 1 3,3 3 4 13,3 0 0,0 0 0,0 0 0,0 Necrose 0 14 46,7 11 36,7 18 60,0 22 73,3 1 7 23,3 13 43,3 11 36,7 7 23,3 2 8 26,7 5 16,7 1 3,3 1 3,3 3 1 3,3 1 3,3 0 0,0 0 0,0 Granuloma 0 27 90,0 28 93,3 27 90,0 27 90,0 1 3 10,0 1 3,3 3 10,0 3 10,0 2 0 0,0 1 3,3 0 0,0 0 0,0 Tecido Conjuntivo 0 9 30,0 19 63,3 20 66,7 22 73,3 1 8 26,7 10 33,3 10 33,3 7 23,3 2 13 43,3 1 3,3 0 0,0 1 3,3
(0) = ausente, (1) = discreta, (2) = moderada, (3) = acentuada.
Reação inflamatória caracterizada por infiltrado do tipo linfoplasmocitário foi observada em 90% (27/30) dos cães, com um perfil celular predominante de linfócitos, seguidos por plasmócitos, e com a presença de poucos macrófagos em algumas das áreas avaliadas (Figura 5). Quando presentes no tecido cardíaco, as células inflamatórias apresentaram-se em intensidade discreta em 61,7% (74/120), moderada em 12,5% (15/120) e acentuada em 3,3% (4/120) dos fragmentos avaliados (Figura 6).
As células inflamatórias foram observadas predominantemente nas regiões subendocárdica e subepicárdica e, de forma menos frequente, dispersas no interstício do miocárdio. A forma de distribuição multifocal foi
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predominante, com raras exceções em áreas nas quais essas células se apresentavam de maneira focal, focalmente extensa ou difusa no tecido cardíaco. A região de AD foi a que apresentou infiltrado inflamatório em maior intensidade, porém essa diferença foi significativa apenas quando comparado ao VE (p=0,031).
Foram observados granulomas com características do tipo lepromatoso (Figura 7) no coração de 23,3% (7/30) dos cães avaliados. Os granulomas eram compostos predominantemente por macrófagos e alguns linfócitos, sem predileção por nenhuma das áreas estudadas (p=0,100), no entanto sua ocorrência estava correlacionada com a presença de células parasitadas por
Leishmania sp no AD (p=0,046) e SIV (p=0,022).
A necrose coagulativa de cardiomiócitos esteve presente em 80% (24/30) dos cães, apresentando distribuição focal a multifocal, não tendo sido verificadas áreas extensas de necrose. Essa alteração foi observada em intensidade discreta em 31,7% (38/120) das áreas avaliadas, moderada em 12,5% (15/120) e acentuada em 1,7% (2/120), estando ausente em 54,2% (65/120) dos cortes histológicos. Os focos de necrose foram encontrados com maior frequência no átrio e ventrículo direitos, porém sem diferença estatisticamente significativa entre as diferentes regiões do miocárdio (p=0,0515). Quando presente, a necrose de cardiomiócitos apresentou-se de dois tipos: coagulativa, em 70,9% (39/55) ou em bandas de contração, em 29,1% (16/55) dos fragmentos (Figura 8). Na presença da necrose coagulativa, os cardiomiócitos apresentavam-se acidófilos, com hipercromasia nuclear e perda das estriações transversais, enquanto a necrose em bandas de contração caracterizou-se pela formação de múltiplas faixas ou bandas de material contrátil fragmentado, intensamente eosinofílicas e orientadas transversalmente. As intensidades de necrose de cardiomiócitos observadas nas diferentes áreas do miocárdio encontram-se apresentadas na forma de representação gráfica na Figura 9.
FIGURA 5- Fotomicrografias de átrio direito de cão naturalmente acometido por LV, mostrando a presença de infiltrado inflamatório de intensidade acentuada, nas objetivas de 10x (a) e 40x (b), com predomínio de linfócitos e macrófagos (detalhe). Observar a presença de infiltração gordurosa (). Hematoxilina e eosina. (Araçatuba-SP, 2012).
a
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FIGURA 6 - Representação gráfica das intensidades de infiltrado inflamatório observadas no átrio direito (AD), ventrículo direito (VD), septo interventricular (SIV) e ventrículo esquerdo (VE) de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral, expressas em percentagem. 0 = ausente, 1 = discreta, 2 = moderada, 3 = acentuada. (Araçatuba-SP, 2012).
A ocorrência de infiltração gordurosa no miocárdio foi observada em 16,7% (5/30) dos cães, apenas em AD ou VD. Verificou-se a presença de necrose fibrinóide em pequenas artérias do coração de 10% (3/30) dos cães (Figura 10). Por meio da avaliação dos prontuários desses três animais que apresentaram esse padrão de necrose na parede vascular, foi possível constatar que todos apresentavam azotemia e síndrome urêmico, e um deles possuía hipertensão arterial sistêmica. A avaliação histopatológica dos rins dos três cães identificou a presença de glomerulonefrite. Por fim, a ocorrência de vasculite esteve presente em apenas 3,3% (1/30).
13,3% 46,7% 26,7% 13,3% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3
Infiltrado inflamatório
AD
26,7% 63,3% 10,0% 0,0% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3Infiltrado inflamatório
VD
23,3% 66,7% 10,0% 0,0% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3Infiltrado inflamatório
SIV
26,7% 70,0% 3,3% 0,0% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3Infiltrado inflamatório
VE
FIGURA 7 - Fotomicrografias de septo interventricular de cão naturalmente acometido por LV, evidenciando a presença de granuloma do tipo lepromatoso (), nas objetivas de 10x (a) e 40x (b), com predomínio de linfócitos e macrófagos (detalhe). Hematoxilina e eosina. (Araçatuba-SP, 2012).
a
b
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FIGURA 8 - Fotomicrografias do miocárdio de cães
naturalmente acometidos por LV. (a) Em ventrículo direito observa-se a ocorrência de necrose coagulativa de cardiomiócitos (setas) caracterizada por eosinofilia, perda
das estriações transversais citoplasmáticas e presença de núcleos
picnóticos. (b) Em átrio direito observa-se a presença de necrose em bandas de contração. Observar a presença de faixas transversais intensamente eosinofílicas no citoplasma (setas). Hematoxilina e eosina. Obj. 40x. (Araçatuba-SP, 2012).
a
FIGURA 9 - Representação gráfica das intensidades de necrose observadas no átrio direito (AD), ventrículo direito (VD), septo interventricular (SIV) e ventrículo esquerdo (VE) de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral, expressas em percentagem. 0 = ausente, 1 = discreta, 2 = moderada, 3 = acentuada. (Araçatuba-SP, 2012).
A ocorrência de aumento de colágeno intersticial (Figura 11), caracterizado por fibras colágenas jovens e maduras, associadas a graus variáveis de fragmentação de fibras musculares cardíacas, foi observada em 73,3% (22/30) dos cães, sendo mais severa em AD quando comparada às demais áreas estudadas (p=0,0008). Entretanto, essa alteração esteve presente apenas em intensidade discreta em 29,2% (35/120) dos fragmentos, e moderada em 12,5% (15/120), enquanto a ocorrência de áreas de intensa substituição por tecido fibroso não foi observada.
47% 23% 27% 3% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3
Necrose - AD
37% 43% 17% 3% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3Necrose - VD
60% 37% 3% 0% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3Necrose - SIV
73% 23% 3% 0% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0 1 2 3Necrose - VE
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FIGURA 10 - Fotomicrografias de átrio direito de cão naturalmente acometido por LV. (a) Presença de necrose fibrinóide () em artéria de pequeno calibre localizada na região subepicárdica. Observar também a presença de infiltração gordurosa (setas). No detalhe, verificar a presença de debris celulares (seta larga). Obj.10x. (b) Notar a presença de hipertrofia da parede arterial, com proliferação da camada íntima (), e presença de alteração granular e eosinofílica (necrose) da parede vascular (seta). Obj. 40x. Hematoxilina e eosina. (Araçatuba-SP, 2012).
a
b
FIGURA 11 - Fotomicrografias de átrio direito de cão naturalmente acometido por LV, evidenciando a ocorrência de aumento do colágeno intersticial (setas) associado à presença de infiltrado () de células inflamatórias (detalhe) e fragmentação de fibras musculares cardíacas, nas objetivas de 10x (a) e 20x (b). Tricrômico de Masson. (Araçatuba – SP, 2012).
a
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