CONCENTRAÇÕES DO CRIOPROTETOR
5.4 Avaliação da Taxa de Fertilização
Ao analisar a porcentagem da taxa de fertilização em pintado Pseudoplatystoma corruscans, não foi encontrada diferença estatística entre os tratamentos DMSO e DMA (P>0,05). Para validar os resultados encontrados, foi feita uma análise de correção de Pearson (figura 12), correlacionando a taxa de fertilização com a motilidade total, onde foi encontrada uma relação altamente significativa. Este resultado coincide com o encontrado por He e Woods (2004), em Morone saxatilis, entre a relação entre a motilidade espermática e a taxa de fertilização.
A motilidade segue sendo uma boa variável de medição da qualidade espermática, assim como a taxa de fertilização. Ambas variáveis se correlacionam com níveis altamente significativos (p<0.0001). Estes resultados são similares com os reportados por Ramirez et al. (2010), onde a influência de vários fatores sobre a taxa de fertilização em bagres pode afeitar a motilidade. Fatores como a estrutura e funcionalidade da célula espermática tem influência sobre o sucesso da fertilização
dos ovócitos. Em P. corruscans as análises da taxa de fertilização indicaram diferença estatística (p<0,05), onde o tratamento controle diferiu estatisticamente dos demais tratamentos, onde a taxa de fertilização foi de 72.15±18.30%.
Nos tratamentos utilizando DMSO 10% e DMA 8% foram observadas baixas taxas de fertilização espermática devido aos efeitos da criopreservação sobre as células espermáticas. Possivelmente estes baixos valores encontrados foram ocasionados pelos danos na membrana, sendo de grande importância à membrana espermática e sua função durante a ativação da motilidade do espermatozoide (BOBBE e LABBÉ, 2010). Por sua vez, esta pode detectar trocas iônicas, responsáveis pela ativação e capacitação espermática espontânea. Além disso, pode apresentar outros danos pela formação de cristais de gelo ou pela despolarização da membrana (LAHNSTEINER et al., 2000). Onde diversos danos podem ocorrer na estrutura e funcionalidade do espermatozoide, os quais podem levar a uma morte celular. Sendo assim que diversos fatores têm influencia sobre a estrutura espermática (HOLT, 2000).
Outro fator a ter em conta é a relação sêmen- ovócito em P. corruscans, onde possivelmente esta relação foi baixa e por tal motivo a taxa de fertilização nos tratamentos utilizados foram baixos, o que diminuiu as probabilidades de ter uma alta taxa de fertilização nos tratamentos. Resultados similares foram reportados por Lahnsteiner et al. (2004), que, apesar de obter porcentagens aceitáveis de motilidade e velocidade após criopreservação de espermatozoides de (Acipenser ruthenus L.), eles não alcançam taxas de fertilização que refletem estas porcentagens, tanto com o sêmen do tratamento (10% DMSO + NaCl), quanto com o sêmen fresco (6,9% e 33,9%, respectivamente). A este dado foi atribuída uma distribuição incorreta da proporção de espermatozoides-ovos, que, em quantidades adequadas, pode compensar a baixa motilidade gerada pelos processos de criopreservação.
São muitos os fatores que exercem grande influência sobre a taxa de fertilização em pintado, que foi baixa nos tratamentos utilizando DMSO e DMA. Em outras espécies, Bombardelli et al. (2006) encontrou que, para Rhamdia Quelen, a melhor taxa de fertilização foi de 89.497 espermatozoide.ovócito-1, o qual permitiu alcançar uma taxa de fertilização máxima teórica de 86,68%. Em catfish Ictalurus
punctatus e catfish azul I.furcatus as maiores taxas de fertilização (67 a 87%) (BART; DUNHAM, 1996).
Em P. corruscans os tratamentos DMSO 8% e DMA 10% foram os tratamentos que apresentaram uma maior taxa de fertilização. Em bagre africano o uso do crioprotetor DMSO obteve boas taxas de eclosão de (53±28.9%), em relação ao tratamento controle (59,1±25,8%) (MISKOLCZIA et al. 2005). Em Prochilodus magdalenae, DMSO 10% foi o crioprotetor que proporcionou maiores porcentagens de fertilização (MARTÍNEZ e PARDO 2010). Ninhaus et al. (2006), em estudo feito com matrinxã (Brycon amazonicus) e utilizando o crioprotetor DMSO, conseguiu obter boas taxas de fertilidade e eclosão pós-congelamento, onde este tratamento conservou as características espermáticas com poucas alterações em sua estrutura.
Em outro trabalho realizado por Viveiros e Komen (2001), feito com Clarias garieninus, o crioprotetor DMSO proporcionou baixas taxas de fertilização, possivelmente porque o DMSO requer um maior tempo de equilíbrio antes da congelação para aumentar sua eficiência protetora. Durante o experimento, só foi utilizado um tempo de equilíbrio de 2 minutos. Em nosso experimento, o tempo de estabilização foi de 10 minutos para DMSO e DMA, e não foram encontradas altas taxas de fertilização. Tiersch, Goudie e Carmichael (1994) em bagre de canal, encontraram taxas de fertilização de 24% a 97% utilizando vários crioprotetores com concentrações de 5%, 10% e 15%, entre os quais foi utilizado do DMSO, e não foi encontrada diferença estatística entre os tratamentos e crioprotetores utilizados. Em truta a utilização do crioprotetor DMSO 10% e 12% não proporcionou os resultados esperados, onde a taxa de fertilização foi baixa (MCNIVEM; GALLANT E RICHARDSON, 1993).
6 CONCLUSÕES
Os resultados encontrados com a utilização dos crioprotetores DMSO e DMA (8% e 10%) indicaram que estes crioprotetores proporcionaram uma boa motilidade e velocidade espermática, nas quatro concentrações utilizadas durante o protocolo de criopreservação para pintado.
Ambos crioprotetores e as concentrações utilizadas neste trabalho podem ser utilizados para a proteção celular dos espermatozoides, apresentando uma alternativa confiável para esta espécie de bagre.
O crioprotetor DMA pode atingir resultados de qualidade espermática pós-descongelamento tão significantes quanto o tradicionalmente usado em peixes de água doce, o crioprotetorDMSO, tornando-se uma nova alternativa para a criopreservação da espécie.
É necessário realizar outras pesquisas que permitam melhorar as taxas de fertilização de P. corruscans.
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