AVALIAÇÃO DOS ISOLADOS EM CASA DE VEGETAÇÃO

O estudo da eficiência na fixação biológica de nitrogênio vem sendo realizado em diversos trabalhos, para selecionar isolados potenciais para o desenvolvimento de inoculantes (Carvalho et al., 2005; Zilli et al., 2006; Melloni et al., 2006). Na Tabela 3 são apresentados os valores de parâmetros de nodulação e de crescimento de feijoeiro-comum avaliados em casa-de-vegetação.

Para número de nódulos (NN) ocorreu diferença significativa pelo teste de Scott-Knott (p < 0,05) entre os tratamentos inoculados. Entre os isolados, 46% apresentaram maiores valores que os demais e o isolado PCG3A3 apresentou maior NN do que as estirpes padrão (SEMIA 4077, SEMIA 4080 e SEMIA 4088). O maior número de nódulos foi observado para o isolado PCG3A3 com 117,6 e o menor para JPrG9A9 com apenas um nódulo. Os tratamentos nitrogenados e o tratamento sem inoculação não apresentaram nódulos. Souza et al. (2003) trabalhando com estirpes para o feijoeiro- comum, em substrato esterilizados em casa-de-vegetação, também verificaram ausência de nodulação para os tratamentos nitrogenado e testemunha absoluta (sem N e sem inoculação), indicando que houve esterilização eficiente e assepsia na condução destes experimentos.

O número e a massa dos nódulos são indicativos de nodulação (Ferreira & Castro, 1995; Araújo et al., 2007). Entretanto, a massa dos nódulos é mais útil na avaliação da nodulação, em virtude da melhor correlação com o desempenho simbiótico (Döbereiner, 1966; Bohrer & Hungria, 1998; Hungria & Bohrer, 2000).

Para massa seca de nódulos (MSN), os isolados PCG2A5; NVSG7A9; JPrG8A7 e JPrG8A6 apresentaram diferença significância (p < 0,05) em relação à estirpe padrão SEMIA 4077. O isolado com maior massa seca de foi o JPrG8A7 com 456 mg planta-1 e a menor para UnPaG8A7 com 3 mg planta-1. Nogueira (2005) observou pequena variação para a matéria seca dos nódulos entre rizóbios de feijoeiro-comum. Quanto a massa específica de nódulos (MEN), os tratamentos JPrG8A7 e JPrG8A6 obtiveram melhor desempenho em relação à estirpe comercial SEMIA 4077.

Tabela 3. Número de nódulos (NN), Massa seca de nódulos (MSN), Massa específica de

nódulos (MEN), Massa seca da parte aérea (MSPA), Massa seca de raíz (MSR), Relação raiz/parte aérea (R/PA), N-Total acumulado na parte aérea (N- Total) e área foliar (AF) de plantas de feijoeiro-comum inoculadas com diferentes isolados obtidos de nódulos de feijoeiro-comum

*Valores seguidos de mesma letra na coluna não diferem entre si pelo teste de Skott-Knott (p < 0,05).

Tratamento NN MSN MEN MSPA MSR R/PA N-TOTAL AF

Nº planta -1 mg planta -1 mg planta -1 mg planta -1 mg planta -1 mg planta -1 g Kg planta -1 m² planta -1

PCG3A3 117,6 a* 244 b 2,07 b 1,63 c 0,45 b 0,48 b 12,56 c 0,014 b PCG1A6 75,6 a 55 c 0,72 c 0,53 c 0,38 b 0,73 b 12,09 c 0,007 b PCG4A6 43,6 b 85 c 1,94 b 0,5 c 0,51 b 0,02 b 17,06 b 0,011 b ALSG9A8 81 a 226 b 2,79 b 1,21 b 0,56 b 0,571b 10,92c 0,017 b PCG2A5 95 a 336 a 3,53 b 1,53 b 0,45 b 0,36b 13,28 b 0,023 b ALSG10A8 18,6 b 32 c 1,72 b 0,46 c 0,47b 1,16 a 8,76 c 0,005 b NVSG7A9 98 a 316 a 3,22 b 1,84 b 0,58 b 0,53b 19,56 b 0,025 b NVSG4A5 0 b 0 c 0 c 0,6 c 0,77 b 1,33 a 8,21 c 0,007 b NVSG5A3 31,6 b 27 c 0,85 c 0,39 c 0,49 b 1,48 a 14,79 b 0,004 b UnPaG6A7 94 a 157 b 1,67 b 1,12 b 0,41 b 0,43b 13,19 b 0,015 b UnPaG3A17 56 a 64 c 1,14 c 1,18 b 0,49 b 0,55 b 11,06 c 0,013 b UnPaG8A7 1,6 b 3 c 1,87 c 0,67 c 0,94 b 1,48 a 11,42 c 0,007 b UnPaG8A1 18 b 19 c 1,05 c 0,56 c 0,89 b 1,88ª 11,53 c 0,006 b SEMIA 4077 110 a 260 b 2,36 b 1,58 b 0,47 b 0,39 b 21,61 b 0,026 b UnPaG8A8 25,3 b 9c 0,35 c 0,39 c 0,4 b 1,19 a 6,89 c 0,006 b UnPaG1A1 106,6 a 182 b 1,70 b 1,23 b 0,44 b 0,46 b 9,04 c 0,014 b NVSG2A6 75,3 a 196 b 2,60 b 0,69 c 0,72 b 2,32 a 16,08 b 0,022 b NVSG7A7 81 a 271 b 3,34 b 1,4 b 0,51 b 0,47 b 11,05 c 0,020 b JPRG8A7 98,3 a 456 a 4,63 a 1,55 b 0,63 b 0,41 b 13,05 b 0,026 b JPrG6A2 4,3 b 4c 0,93 c 0,5 c 0,74 b 1,48 a 9,48 c 0,006 b JPrG9A9 1 b 4 c 4 c 0,56 c 0,59 b 1,09 a 11,24 c 0,006 b JPrG8A6 60 a 331 a 5,51 a 0,93 c 0,55 b 0,63 b 9,22 c 0,015 b NVSG6A2 13,3 b 13 c 0,97 c 0,47 c 0,68 b 1,51 a 8,65 c 0,006 b UnPaG2A5 13,3 b 22 c 1,65 c 0,43 c 0,74 b 1,64 a 9,8 c 0,005 b UnPaG3A2 74 a 138 b 1,86 b 0,63 c 0,33 b 0,63 b 11,18 c 0,008 b UbALG8A1 0 b 0 c 0 c 0,48 c 0,66 b 1,53 a 6,91 c 0,007 b UnPaG4A6 0 b 0 c 0 c 0,51 c 0,87 b 2,04 a 10,56 c 0,005 b JPrG1A1 28,6b 30 c 1,04 c 0,64 c 0,67 b 1,09 a 13,68 b 0,010 b UbALG6A3 16,6 b 16 c 0,96 c 0,45 c 0,43 b 0,99 b 9,71 c 0,005b SEMIA4080 52,6 a 96 b 1,82 b 0,58 c 0,31 b 0,77 b 12,31 c 0,008 b SEMIA 4088 96 a 150 b 1,56 c 1,21 b 0,52 b 0,43 b 13,01 c 0,010 b S/inoculação 0 b 0 c 0 c 0,38 c 0,49 b 1,27 a 14,84 b 0,006 b 60 Kg N ha-1 0 b 0 c 0 c 1,63 b 0,65 b 0,4 b 32,95 a 0,024 b 120 Kg N ha-1 0 b 0 c 0 c 3,23 a 1,98 b 0,83 b 37,5 a 0,032 a

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Quando avaliados NN, MSN e MEN em conjunto verifica-se que os isolados JPrG8A7 e JPrG8A6 apresentaram melhor desempenho que as SEMIAs 4077, 4080 e 4088 e devem ser analisadas mais criteriosamente quanto a eficiência simbiótica.

A avaliação da MSPA representa um bom indicativo do estado nutricional das plantas, sendo importante para proporcionar à cultura grande potencial de produção (Xavier et al., 2006; Souza et al., 2008). Essa característica vem sendo utilizada na seleção de estirpes para composição de inoculantes (Zilli et al., 2006; Souza et al., 2008). Os tratamentos nitrogenados demostraram melhores resultados para massa seca da parte aérea (MSPA), o que é explicado pela grande quantidade de nitrogênio prontamente disponível para a planta. A estirpe padrão SEMIA 4077 obteve 1,58 g de MSPA, sendo inferior aos tratamentos PCG3A3, NVSG7A9 e tratamento nitrogenado (60 Kg/ha). O menor valor de MSPA foi para o tratamento sem inoculação. Segundo Antunes (2011) os resultados de MSPA, em condições de vasos de Leonard, podem indicar um crescimento satisfatório das plantas (Tabela 3).

Quanto à massa seca de raiz (MSR) o tratamento que apresentou melhor resultado foi o nitrogenado com 120 Kg ha-1, já para os demais tratamentos não diferiram estatisticamente (Tabela 3). Antunes (2011), trabalhando com feijão-fava em vasos de Leonard e inoculação com diferentes isolados de rizóbio também não encontrou diferença de MSR entre os tratamentos. Sugerindo que os isolados não exercem influência sobre o crescimento radicular do feijoeiro.

Para relação raiz/parte aérea (R/PA) foi encontrada diferença significativa entre os tratamentos, sendo 50% dos isolados superiores às estirpes padrão (Tabela 3).

Os valores de área foliar (AF) apresentaram diferenças significativas (p < 0,05) entre os tratamentos avaliados, sendo que o tratamento nitrogenado apresentou uma maior área foliar (Tabela 3). Isso pode ser explicado pela fase em que se deu a coleta aos 35 DAE onde os nódulos ainda estavam começando a fornecer nitrogênio para a planta, estando as plantas ainda pouco desenvolvidas, com isso não apresentaram desenvolvimento considerável para haver diferença entre os tratamentos.

Os valores de N-Total foram maiores para os tratamentos nitrogenados, e a estirpe padrão foi melhor que alguns tratamentos (Tabela 3).

A MSN apresentou correlação positiva com massa seca da parte aérea (MSPA), nitrogênio total (N) e área foliar (AF) (Figura 9). Pode-se observar que 35,25% dos isolados apresentaram maior MSPA e MSN, podendo ser considerados isolados

competitivos, fazendo parte do grupo da SEMIA 4088 e SEMIA 4077. Já o isolado que apresentou melhor eficiência foi o UnPaG3A17 (seta), pois este apresentou maior valor de MSPA com menor MSN, demonstrando-se superior à melhor estirpe padrão, a SEMIA 4077. Já a SEMIA 4080 apresentou baixa eficiência nesse ensaio, uma vez que resultou em baixa MSPA e MSN, agrupando-se com 50% dos isolados.

Figura 9. Análise de correlação correlação de Pearson entre a MSPA e MSN de feijoeiro

comum inoculado com novos isolados e com as estirpes padrão. Barra pontilhada representa a tendência da correlação e as barras vermelhas as médias de cada parâmetro avaliado. ** significativo (p < 0,01)

As estirpes padrão SEMIA 4077 e SEMIA 4088 agruparam com 21,87% dos isolados apresentaram alto teor de nitrogênio e MSN. Já a SEMIA 4080 agrupou-se com 12,5% dos isolados que apresentaram alto teor de nitrogênio e baixa MSN demostrando serem isolados eficientes, já que apresentam boa eficiência simbiótica, com uma pequena MSN produziu um aumento no N-Total (Figura 10).

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Figura 10. Análise de correlação de Pearson entre a N-Total e massa seca de nódulos

(MSN de feijoeiro-comum inoculado com novos isolados e com as estirpes padrões. Barra pontilhada representa a tendência da correlação e as barras vermelhas as médias de cada parâmetro avaliado. ** significativo (p < 0,01) De acordo com a Figura 11, 37,5% dos isolados agruparam-se com a SEMIA 4077 apresentando MSN e AF acima da média sendo considerados isolados competitivos e eficientes. O grupo da SEMIA 4088 apresentou boa MSN e pouca AF. O isolado UnPaG3A17 (seta) proporcionou que a planta desenvolvesse maior AF com menor MSN, sendo considerado um isolado mais eficiente.

Figura 11. Análise de correlação correlação de Pearson entre a AF e MSN de feijoeiro-

comum inoculado com novos isolados e com as estirpes padrão. Barra pontilhada representa a tendência da correlação e as barras vermelhas as médias de cada parâmetro avaliado. ** significativo (p < 0,01)

Conforme Figura 9, 10 e 11 o isolado UnPaG3A17 apresentou maior eficiencia, já que com pouca MSN produziu uma maior MSPA e AF, para salinidade e temperatura apresentou resultado melhor que a estirpe padrão. Os isolados JPrG8A7; PCG2A5; NVSG7A9; PCG3A3; NVSG2A6; UnPaG4A9 e UnPaG6A7 foram competitivos e eficientes em relação aos demais, fazendo parte do grupo da SEMIA 4077. Estes isolados apresentaram para salinidade e temperatura resultados iguais ou inferiores à estirpe padrão SEMIA 4077. A SEMIA 4080 apresentou resultados inferiores às demais estirpes-padrão para todos os parâmetros avaliados, mas dentre as estirpes padrão apresentou melhores resultados para salinidade e temperatura crescendo em condições mais restritivas que as demais estirpe padrão. O isolado UnPaG3A2 apresentou uma MSN considerável com uma baixa AF e para salinidade e temperatura apresentou bons resultados, superior às estirpes padrão.