4 CONSIDERAÇÕES FINAIS

A participação de mediadores da inflamação em algumas doenças culmina em reabsorção óssea por interferir no processo de remodelação deste tecido através da estimulação excessiva de osteoclastos ou da inibição de osteoblastos (Taubman

et al., 2005; Mundy, 2007; Hardy; Cooper, 2009; Nanjundaiah et al., 2013; Yucel-

Lindberg et al., 2013). Dentre as patologias caracterizadas por reabsorção óssea de causa inflamatória, destaca-se a periodontite (Cochran, 2008), uma doença de alta prevalência e principal causa de perdas dentárias em adultos (Shaju et al, 2011; Al- harthi et al., 2013). Nesta doença, a exacerbação da resposta do hospedeiro frente ao estímulo bacteriano é caracterizada por ativação de células leucocitárias e concomitante liberação de mediadores da inflamação, responsáveis por perpetuar este processo (Araya et al., 2003; Madianos et al., 2005; Taubman et al., 2005, 2007; Cochran, 2008; Deo; Bhongade, 2010; Shaju et al, 2011). Dentro do contexto atual em que se buscam terapias adjuvantes para esta doença, ganham destaques diversas abordagens para as quais ainda não existe consenso de utilização na prática clínica, tais como uso de fármacos fitoterápicos com atividade anti- inflamatória.

A Matricaria recutita (MTR) é uma herbácea natural da Europa e da Ásia Ocidental, popularmente conhecida como camomila (McKay; Blumberg, 2006; Srisvastava et al., 2010). A literatura relata uma grande variedade de constituintes presentes em tal planta, tais como o chamazuleno; o terpenoide alfa bisabolol e seus óxidos A e B; a matricina, que se converte em chamazuleno, sendo assim denominado por estar presente na Matricaria chamomilla; os flavonoides, considerados compostos fenólicos, dentre os quais se destaca o flavonoide apigenina; além de outros componentes, como cumarinas, espatulenol e furfural (McKay; Blumberg, 2006). Acredita-se que essa rica constituição esteja relacionada aos inúmeros efeitos, como antimicrobiano (Cwikla et al, 2010), antioxidante (Cemek

et al., 2010), ansiolítico (Amsterdam et al., 2009), cicatrizante (Shivananda et al.,

2007; Martins et al., 2009), imunomodulador e imunoregulatório (Shivananda et al., 2007; Lee et al., 2010), anticancerígeno (Srivastava et al., 2007) e, sobretudo anti- inflamatório (Smolinski; Pestka, 2003; Mazokopakis et al., 2005; Presibella et al., 2006; Bandyopadhyay et al., 2006; Shivananda et al., 2007; Martins et al., 2009;

Siddiqui et al., 2010; Duarte et al., 2011), demonstrados por esta planta ou por seus constituintes isolados em diversos estudos.

Para a realização do presente estudo, inicialmente produzimos um extrato seco de camomila, o qual foi administrado durante 11 dias experimentais em animais submetidos previamente à periodontite induzida por ligadura. Considerando que dentre os inúmeros componentes presentes na camomila, a apigenina destaca-se por ser o flavonoide mais estudado e mais promissor quanto à propriedade anti- inflamatória desta planta em vários modelos experimentais, incluindo modelos de reabsorção óssea, verificou-se a importância de quantificar este flavonoide no referido extrato, a fim de qualificá-lo e validá-lo. Quanto à escolha do modelo experimental de perda óssea induzida por ligadura, este foi escolhido por reproduzir as principais características da periodontite humana, obtendo-se um pico de perda óssea ao 11° dia (Lima et al., 2000; 2004).

Observou-se que a colocação da ligadura ao redor do segundo molar superior esquerdo de cada animal durante 11 dias proporcionou intensa reabsorção óssea e maiores lesões de furca, destruição de osso alveolar interproximal, de cemento radicular e de ligamento periodontal, bem como reduziu os níveis séricos de Fosfatase Alcalina Óssea (FAO). Além da infiltração de leucócitos acentuada no periodonto destes animais, verificou-se atividade de mieloperoxidase (MPO) aumentada e elavação dos níveis de TNF-_{ e de IL-1 no tecido gengival inflamado,} proporcionando imunomarcação elevada para RANKL e TRAP, e reduzida para OPG em comparação aos periodontos de hemimaxilas não desafiadas.

A MTR, por sua vez, reduziu a reabsorção óssea alveolar de forma dose dependente e as lesões de furcas em comparação ao grupo de animais tratados apenas com TW80. Apesar de não ter sido observado efeito anabólico ósseo

produzido por esta planta, uma vez que a mesma não preveniu a redução dos níveis séricos de FAO, verificou-se a presença de seu efeito anti-inflamatório. Deste decorreu a infiltração leucocitária amenizada no periodonto dos animais tratados com a maior dose de MTR utilizada no presente estudo, além de atividade de MPO e níveis de TNF_{ e IL-1 reduzidos no tecido gingival inflamado, o que certamente} reduziu a imunomarcação para RANKL e TRAP, e aumentou para OPG.

O efeito protetor demonstrado pela camomila no presente estudo já era esperado, uma vez que a literatura relata que o extrato aquoso derivado desta planta

foi capaz de estimular a diferenciação e mineralização de células osteoblásticas em cultura celular (Kassi et al., 2004). Além disso, a literatura parece ser unânime quanto a presença do flavonóide apigenina na camomila e, dentre seus muitos outros componentes, a apigenina é considerada o composto mais estudado, sendo ainda considerada o flavonóide mais promissor presente nesta planta quanto às suas propriedades anti-inflamatórias (Srisvastava et al., 2010). De fato, a apigenina parece reduzir a síntese de mediadores inflamatórios, como TNF-_{, IL-6, PGE2 e} Óxido nítrico, os quais parecem ser importantes no processo de reabsorção óssea (Bandyopadhyay et al., 2005; Siddiqui et al., 2010), e de aumentar o conteúdo mineral e a densidade óssea do osso trabecular em um modelo experimental de ovariectomia (Park et al., 2008). De maneira interessante, a apigenina também tem demonstrado ser capaz de modular a função de células ósseas in vitro: nos osteoblastos, favorecendo a diferenciação destas células ao mesmo tempo que antagoniza as ações de TNF - _{ e de RANKL, enquanto que nos osteoclastos, inibe} a diferenciação daqueles pré-existentes, além de induzir a apoptose daqueles já maduros (Bandyopadhyay et al., 2005). Assim, tais resultados prévios podem indicar a eficácia dessa planta em impedir processos de reabsorção óssea via redução da resposta inflamatória.

Primeiramente, observou-se que MTR não preveniu a redução dos níveis séricos da FAO causada pela periodontite, indicando que o efeito protetor ósseo demonstrado por esta planta no modelo de perda óssea alveolar induzida por ligadura não decorreu de possível atividade anabólica óssea, porém da presença de efeito anti-inflamatório.

Diante deste achado, tornou-se ainda mais importante investigar vias anti- inflamatórias através das quais esta ferramenta farmacológica produz este efeito antireabsortivo. Sabe-se que os neutrófilos constituem as primeiras células a migrarem durante um processo inflamatório e, após este evento, induzem a migração de leucócitos adicionais, como monócitos e linfócitos, que liberam citocinas pró-inflamatórias, dentre elas TNF-_{ e IL-1, capazes de propagar a inflamação e de} induzir, diretamente ou indiretamente, a reabsorção óssea. Neste contexto, a atividade anti-inflamatória da MTR ao reduzir a atividade de MPO e os níveis de TNF-_{ e IL-1 no tecido gengival inflamado está certamente relacionada à sua} capacidade ao diminuir a imunomarcação para RANKL/OPG e TRAP, uma vez que

TNF-_{ induz indiretamente a reabsorção óssea alterando a expressão destas} biomoléculas osteoclastogênicas, possui efeitos antiapoptóticos sobre osteoclastos, estimula diretamente a formação destas células (Lacativa; Farias, 2010; Yarilina et al., 2011; Redlich; Smolen, 2012) e apresenta efeito inibitório sobre osteoblastos (Redlich; Smolen, 2012). Sabe-se, ainda, que IL-1 é coadjuvante aos efeitos de TNF-_{ na regulação da expressão de RANKL e na estimulação da} osteoclastogênese (Lacativa, Farias; 2010; Jules et al., 2012).

Adicionalmente, as análises sistêmicas do presente estudo revelaram que as doses mais baixas de MTR não alteraram a leucocitose observada no TW80 grupo. No entanto, o tratamento com MTR (90 mg/kg) reduziu a leucocitose, reduzindo a neutrofilia e a lifomonocitose observada no grupo TW80. Além disso, a administração

diária por 11 dias de MTR em todas as doses utilizadas neste estudo não alterou os pesos de órgãos ou as dosagens bioquímicas. Em contraste, MTR não impediu a perda de peso corporal inicial, nem alterou o ganho de peso no 11º dia.

5 CONCLUSÃO

A Matricaria recutita foi de prevenir a perda óssea alveolar induzida por ligadura em ratos via redução de citocinas pró-inflamatórias, sem interferir no anabolismo ósseo ou causar alterações sistêmicas.

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