Discussão dos resultados das reações imunoistoquímicas para os anticorpos

De acordo com Alenzi et al (2005), uma das maiores características da cascata de apoptose é a aliança entre o Fas e FasL. O Fas é geralmente expresso em um grande número de tecidos, entre os quais o cardíaco; em contrapartida, a expressão do FasL demonstra ser mais restrita às células NK e linfócitos T.

Segundo Jeremias et al (2000) e Zhao et al (2007), o sistema Fas/FasL apresenta um importante papel como regulador da homeostasia do sistema imunológico, bem como está envolvido em vários tipos de apoptose induzida por estresse. A utilização destes anticorpos nesta pesquisa pode ser justificada por Song et al (2000), que descreve o importante papel desse sistema no controle da proliferação celular e diferenciação tecidual.

No que se refere a estes dois anticorpos não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os três grupos das amostras. Vale ressaltar que em relação ao Fas, foi observado um grande percentual de negatividade nas amostras do

estudo. Este comportamento não foi observado em relação ao FasL; entretanto apresentou uma expressão fraca nos três grupos. Esta resposta pode ser explicada pelas dificuldades técnicas encontradas e já descrita anteriormente.

5.2.4 Discussão dos resultados das reações imunoistoquímicas para os anticorpos de investigação da adesão celular (E-caderina e Beta-catenina)

Conforme Abe & Takeichi (2008), a junção célula-célula é constituída pela caderina, catenina e outras proteínas associadas. A região citoplasmática da E-caderina se liga a Beta-catenina, formando, assim, o complexo caderina-catenina. Estes anticorpos foram utilizados nesta pesquisa, tendo em vista o seu papel crucial na manutenção da arquitetura dos tecidos. Além disto, Goyal et al (2008) descrevem que poucos estudos têm investigado simultaneamente a expressão da E-caderina e Beta- catenina em miocárdio e, quando isto ocorre, os grupos das amostras são geralmente muito pequenos.

No que tange estes dois anticorpos, não foi encontrada diferença estatisticamente relevante entre os três grupos das amostras. Apresentaram, ainda, uma expressão fraca em todos os grupos, que pode ser explicada pelas dificuldades técnicas nesta pesquisa, corroborando com Goyal et al (2008), que apontam a análise imunoistoquímica como método de estudo que possibilita informações vitais na localização de proteínas nas células, sendo importante quando se estuda moléculas de adesão. Entretanto, este método tem limitações na análise da verdadeira quantidade de proteínas nas células ou tecidos.

5.2.5 Discussão dos resultados das reações imunoistoquímicas para os anticorpos de investigação do ciclo celular (Ki67, PCNA, PTEN e Bcl2)

Para o estudo do ciclo celular, tem-se utilizado o PCNA e Ki67 como importantes marcadores proliferativos, sendo empregados em estudos sobre o crescimento celular

dos cardiomiócitos, tendo em vista que o crescimento cardíaco durante a vida fetal é caracterizado pela multiplicação dos mesmos.

De acordo com McGill & Brooks (1995), no embrião de mamíferos a proliferação e diferenciação dos cardiomiócitos ocorrem rapidamente no desenvolvimento cardíaco. Ambos eventos acontecem concomitantemente e continuam a ocorrer até poucos dias após o nascimento. Segundo Li et al (1996), em ratos os cardiomiócitos normalmente param de se dividir com aproximadamente 17 dias de desenvolvimento pós-natal. A expressão do PCNA revela que 6% dos cardiomiócitos poderiam sintetizar DNA no nascimento, mas apenas 1,5%, aproximadamente, das células poderiam fazer isto com 11 dias de vida e apenas 0,5% dos cardiomiócitos adultos poderiam sintetizar DNA.

Conforme Tang et al (2004), a incapacidade dos cardiomiócitos adultos se regenerarem através do aumento de divisões celulares era apresentado como o maior problema para o tratamento clínico das doenças cardíacas. Entretanto, estudos recentes da expressão do marcador proliferativo Ki67 em corações humanos infartados revelaram que 4% dos cardiomiócitos apresentavam Ki67 positivo nas regiões infartadas do miocárdio.

Apresentando, ainda, como referência os estudos de MacLellan & Schneider (2000), Field et al (2004) e Cortius et al (2005) que descrevem as mudanças fenotípicas dos cardiomiócitos, passando de um fenótipo proliferativo intra-útero para um de crescimento extra-útero, acreditava-se que seria encontrada uma diminuição gradativa da expressão do PCNA e do Ki67 entre os grupos do estudo. Na pesquisa não foi observada diferença estatisticamente significativa entre os três grupos das amostras. Porém, se utilizando a mediana que, numa distribuição assimétrica, é o dado mais representativo da população, percebe-se que tanto o PCNA como o Ki67 apresentaram um comportamento semelhante. Isto é, houve um decréscimo na expressão destes dois anticorpos entre o grupo de até 2 dias de vida com o de mais de dois dias, corroborando com a idéia de diminuição da característica proliferativa dos cardiomiócitos neste período, que coincide com o fechamento do canal arterial e aumento da força de contração do miocárdio. Entretanto, não foi observada uma diminuição de expressão quando utilizado o grupo de natimortos, o que pode ser explicado pelas características destes tecidos para a técnica adotada na pesquisa, como já foi explicado, que as amostras teciduais provenientes dos natimortos têm um certo grau de autólise, o que prejudica as reações imunoistoquímicas, dificultando análises posteriores.

Outro anticorpo que tem importante papel no ciclo celular é o PTEN, que segundo Simpson & Parsons (2001), está envolvido na regulação de muitas funções celulares importantes como, por exemplo, a progressão do ciclo celular, a migração e crescimento celular, bem como a apoptose. Porém, neste trabalho, vale ressaltar a sua característica de reguladora da proliferação celular, impedindo que a célula passe da fase G1 para a fase S. Na amostra deste estudo não foi observada diferença estatisticamente significativa entre os três grupos no que concerne a expressão do PTEN. Entretanto, quando analisamos os valores medianos de contagem de núcleos celulares positivos para esta proteína, percebemos uma tendência de aumento da sua expressão de acordo com a evolução temporal dos grupos das amostras. Isto poderia ser uma evidência de bloqueio do ciclo proliferativo destas células através da inibição da ativação das ciclinas e, consequentemente, da passagem das células da fase G1 para a fase S. Este fenômeno estaria de acordo com alguns estudos que relatam a diminuição das características proliferativas dos cardiomiócitos coincidindo, com a passagem da vida intra para vida extra-uterina.

No presente estudo foi utilizado um anticorpo que expressa a resistência à apoptose do tecido, que é o Bcl2. A análise estatística demonstrou diferença significativa referente ao Bcl2 entre os grupos de natimortos, neomortos até dois dias e neomortos entre 3 e 10 dias, com uma forte tendência a aumento de expressão seguindo a linha temporal dos grupos das amostras. Este fato nos levaria à interpretação da presença de um aumento da resistência à apoptose e, consequentemente, a evidência de uma possível tendência a maior grau de diferenciação celular e regulação proliferativa.

Outros dados interessantes e correlatos, mas que não apresentam diferenças estatisticamente significativas, são a diminuição de expressão do PCNA e Ki67, que pode estar relacionada a uma diminuição da produção de novas células. Por outro lado, ocorre um aumento da expressão do PTEN, o que leva os cardiomiócitos à diminuição da sua capacidade de entrar na fase S. Além disso, o aumento da expressão do Bcl2, interpretado como um aumento da resistência a apoptose, quando analisado juntamente com os dados acima referidos, permite sugerir que possa haver, no início da vida fetal, um padrão hiperplásico de crescimento dos cardiomiócitos, o qual se torna hipertrófico com os passar do tempo na vida neonatal, conforme relataram os estudos de Pasumarthi & Field (2002) e Cortius et al (2005).

Analisando o Bcl2 em grupos das amostras dois a dois não se observou diferença estatisticamente relevante entre os grupos natimortos e neomortos até dois dias de vida

e entre os neomortos até dois dias e os natimortos com mais de dois dias, demonstrando que a linha que separa estes grupos é muito tênue no que tange a expressão do Bcl2. Entretanto quando se comparou os natimortos com os neomortos com mais de dois dias verificou-se uma diferença estatisticamente significante, demonstrando que esta resistência à apoptose cresce de maneira significativa após as 48 horas do nascimento.

5.2.6 Discussão dos resultados das reações imunoistoquímicas para os anticorpos de investigação dos microfilamentos e filamentos intermediários (Actina 1 a 4 e Desmina)

Os anticorpos actina 1 a 4 e a desmina são utilizados para métodos de investigação dos microfilamentos e filamentos intermediários. A actina é a maior proteína estrutural da linha Z, que proporciona uma correta orientação e fixação mecânica dos filamentos de actina contrátil e é também na linha Z que se observa a presença da desmina, que, segundo Sheh et al (2004), é um dos responsáveis pela resistência à força dos músculos. De acordo com Costa et al (2004), a desmina e a actina estão presentes em todos os centros de organização de contração nos três tipos de células musculares. A distribuição de ambas as proteínas é, na maioria das vezes, coincidente, todavia não restritos ao mesmo local.

Na leitura destes anticorpos percebeu-se inicialmente, no que refere à intensidade da reação, uma resposta fraca em todos os casos das amostras dos três grupos. Desta forma, procurou-se utilizar a morfometria para análise quantitativa, não se observando diferença estatisticamente relevante entre os três grupos da amostra.

5.2.7 Discussão dos resultados das reações imunoistoquímicas para os anticorpos de investigação das proteínas contráteis (Actinas Musculares)

Para análise da diferenciação dos cardiomiócitos, foram utilizados os anticorpos HHF35 e a actina sarcomérica. Na pesquisa, os dois anticorpos apresentaram diferença estatisticamente relevante entre os três grupos da amostra. A partir desta informação

foram comparados os grupos dois a dois para buscar uma mais clara compreensão deste processo.

Em relação ao HHF35, além da diferença estatisticamente significativa entre os três grupos foi observada relevância quando comparados dois a dois. Demonstrando claramente que a diferenciação dos cardiomiócitos se dá pelo aumento do volume das células cardíacas.

No que refere a actina sarcomérica, foi observada diferença estatisticamente significativa entre os natimortos e neomortos com até dois dias de vida, e natimortos e neomortos com mais de dois dias; a diferenciação esteve presente, principalmente, antes do nascimento até logo após o nascimento, pois não foi observada diferença significativa entre os neomortos com até dois dias e os neomortos com mais de dois dias de vida.

Estes resultados demonstram que, durante o desenvolvimento cardíaco, ocorrem mudanças na expressão das proteínas sarcoméricas numa relação temporal, o que propicia alterações nas propriedades funcionais dos cardiomiócitos, o que corrobora com o estudo de Siedner et al (2003), que evidencia a necessidade de um acréscimo na capacidade de geração de força pelos músculos cardíacos durante o desenvolvimento pós-natal. Este acréscimo na força dos músculos sugere um acúmulo de proteínas contráteis.

6 CONCLUSÕES

a) Ao se analisar anticorpos que evidenciam a apoptose (Fas e FasL), não foi observada diferença estatisticamente significante entre os grupos das amostras;

b) Ao se analisar anticorpos envolvidos na adesão celular (E-caderina e Beta-catenina), não foi observada diferença estatisticamente significante entre os grupos das amostras;

c) Ao se analisar anticorpos envolvidos na regulação do ciclo celular, o Bcl2 mostrou menor expressão no grupo de natimortos quando comparado ao grupo de neomortos com mais de 2 dias de vida, sugerindo o possível aumento da resistência à apoptose na vida extra-uterina. Observou-se, ainda, a diminuição da expressão do Ki67 e do PCNA, bem como o aumento da expressão do PTEN, em relação à evolução temporal das amostras;

d) Ao se analisar os anticorpos que marcam os microfilamentos e filamentos intermediários (Actina 1 a 4 e Desmina) não foi observada diferença estatisticamente significante entre os grupos das amostras. Ao se analisar os anticorpos que marcam as proteínas contráteis (HHF35 e actina sarcomérica) foi observado um aumento da expressão destas moléculas, seguindo a evolução temporal dos grupos das amostras; sugerindo a diferenciação dos cardiomiócitos com o passar da vida intra para a extra- uterina.

7 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. ABDELWAHID, E; PELLINIEMI, LJ et al. Cellular disorganization and extensive apoptosis in the developing heart of mice that lack cardiac muscle alpha-actin: apparent cause of perinatal death. Pediatr Res, v.55, p.197-204, 2004.

2. ABE, K & TAKEICHI,M. EPLIN mediates linkage of the cadherin-catenin complex to F-actin and stabilizes the circumferential actin belt. PNAS, v. 105, p. 13-9, 2008. 3. ALBERTS, B; BRAY, D; JOHNSON, A et al. Fundamentos da biologia celular:

Uma introdução à biologia molecular da célula. 2ḁ Ed. Porto Alegre: Artmed, 2002.

4. ALBERTS, B; JOHNSON, D et al. Biologia molecular da célula. 4ḁ Ed. Porto Alegre: Artmed, 2007.

5. ALENZI, FQ; AL-GHAMDI, SM; TAMIMI, WG et al. Apoptosis role of FAS/FAS ligand system in the regulation of myelopoiesis. Yale J Biology Medicine, v. 78, p. 25-36, 2005.

6. AMANN, K; KRONENBERG, G et al. Cardiac remodeling in experimental renal failure – an immunohistochemical study. Nephrol Dial Transplant, v.13, p. 1958- 66, 1998.

7. ANDRADE, VP; CUNHA, IW; SILVA, EM et al. O arranjo em matriz de amostras teciduais (tissue microarray): larga escala e baixo custo ao alcance do patologista.

J Bras Patol Med Lab, v.43, p. 55-60, 2007.

8. ANVERSA, P; LERI, A et al. Myocyte growth and cardiac repair. J. Mol. Cell

Cardiol, v. 34(2), p.91-105, 2002.

9. ANVERSA, P & NADAL-GINARD, B. Myocyte renewal and ventricular remodeling.

Nature, v. 415, p.240-3, 2002.

10. ASHKENAZI, A & DIXIT, VM. Death receptors: signaling and modulation. Science, v. 281, p. 1305-8,1998.

11. BELTRAMI, AP; URBANEK, K; KAJSTURA, J et al. Evidence that human cardiac myocytes divide after myocardial infarction. N Engl J Med, v. 344, p. 1750-7, 2001. 12. BERNSTEIN, D. Capítulo 19: O Sistema Cardiovascular. In: BEHRMAN,RE;

KLIEGMAN,RM; JENSON, HB. Tratado de Pediatria. v.II, 17ḁ Ed. Rio de Janeiro: Elsevier Editora, 2005. p.1571-7.

13. BORISOV,AB. Myofibrillogenesis and reversible disassembly of myofibrils as adaptive reactions of cardiac muscle cells. Acta Physiol Scand Suppl, v.599, p.71- 80,1991.

14. BROCHERIOU, V; HAGEGE, AA; OUBENAISSA, A et al. Cardiac functional improvement by a human Bcl-2 transgene in a mouse model of ischemia/reperfusion injury. J Gene Med, v. 2, p. 326-33, 2000.

15. BROOK,MM. Capítulo 13: O Sistema Cardiovascular. In: BEHRMAN,RE & KLIEGMAN,RM. Princípios de Pediatria. 4ḁ Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2004. p. 508-52.

16. CARRIER,L; BOHELER,KR; CHASSAGNE,C et al. Expression of sarcomeric actin isogenes in the rat heart with development and senescence. Circ Res, v.70, p.999- 1005, 1992.

17. CHEN, Z; CHUA, CC; HO, YS et al. Overexpression of Bcl-2 attenuates apoptosis and protects against myocardial I/R injury in transgenic mice. Am J Physiol Heart

Circ Physiol, v. 280, p. 2313-20, 2001.

18. CHEN, Z; GE, Y; KANG, JX. Down-regulation of the M6P/IGF-II receptor increases cell proliferation and reduces apoptosis in neonatal rat cardiac myocytes. BMC Cell

Biology, v.5(15), p.1-12, 2004.

19. CHEN, HW; YU, SL; CHEN, WJ et al. Dynamic changes of gene expression profiles during postnatal development of the heart in mice. Heart, v. 90, p.927-34, 2004. 20. COOPER, GM. A Célula: Uma abordagem molecular. 2ḁ Ed. Porto Alegre:

Artmed, 2002.

21. CORMACK, DH. Fundamentos de Histologia. 2ḁ Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002.

22. CORSTIUS, HB; ZIMANYI, MA; MAKA, N et al. Effect of intrauterine growth restriction on the number of cardiomyocytes in rat hearts. Pediatric Research, v.57, p.796-800, 2005.

23. COSTA,ML; ESCALEIRA,R; CATALDO,A et al. Desmin: molecular interactions and putative functions of the muscle intermediate filament protein. Braz J Med Biol

Res, v.37, p.1819-30, 2004.

24. CRONIN, M et al. Measurement of gene expression in archival paraffin-embedded tissues: development and performance of a 92-gene reverse transcriptase- polymerase chain reaction assay. Am J Pathol, v. 164, p.35-42, 2004.

25. EVANS, HJ; SWEET, JK; PRICE,RL et al. Novel 3D culture system for study of cardiac myocyte development. AJP- Heart Circ Physiol, v.285, p. 570-8, 2003. 26. FIELD, LJ. Modulation of the cardiomyocyte cell cycle in genetically altered animals.

In: Ann. N. Y. Acad. Sci, 1015, 2004, p. 160-70.

27. GALLETTA, MA. Capítulo 8: Duração da gravidez e evolução cronológica. In: NEME,B. Obstetrícia Básica, 3ḁ Ed. São Paulo: Sarvier Editora, 2005. p. 63-71. 28. GARTNER, LP & HIATT, JL. Atlas Colorido de Histologia. 4ḁ Ed. Rio de Janeiro:

Guanabara Koogan, 2007.

29. GODT, RE; FOGACA, RT & NOSEK, TM. Changes in force and calcium sensitivity in the developing avian heart. Can J Physiol Pharmacology, v.69, p.1692- 97,1991.

30. GOYAL, A; MARTIN, TA; MANSEL, RE et al. Real time PCR analyses of expression of E-cadherin, alpha-, beta- and gama-catenin in human breast cancer for predicting clinical outcome. World Journal of Surgical Oncology, v.6, p.56-61, 2008.

31. GUYTON, CG & HALL,JE. Tratado de Fisiologia Médica. 10ḁ Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002.

32. IMAHASHI, K; SCHNEIDER, MD; STEENBERGEN, C et al. Transgenic expression of Bcl-2 modulates energy metabolism, prevents cytosolic acidification during ischemia, and reduces ischemia/reperfusion injury. Circ Res, v.95, p.734-41, 2004.

33. ISHIBASHI, Y; TSUTSUI, H; YAMAMOTO, S et al. Role of microtubules in myocyte contractile dysfunction during cardiac hypertrophy in the rat. Am J Physiol Heart

Circ Physiol, v. 271, p. H1978-87, 1996.

34. ISOLA, J et al. Analysis of changes in DNA sequence copy number by comparative genomic hybridization in archival paraffin-embedded tumor samples. Am J Pathol, v.145, p. 1301-8, 1994.

35. ITAHANA, K; DIMRI, G; CAMPISI, J. Regulation of cellular senescence by p53.

Eur. J. Biochem, v.268, p. 2784-91, 2001.

36. JANENAY, CA; TRAVERS,P; WALPORT, M; SHLOMCHIK, M. Imunobiologia: o

sistema imune na saúde e na doença. 5ḁ Ed. Porto Alegre: Editora Artmed, 2002. 37. JEREMIAS, I; KUPATT, C et al. Involvement of CD95/Apo1/Fas in cell death after

myocardial ischemia. Circulation, v. 102, p.915-20, 2000.

38. JOHNATTY, SE; DYCK, JR; MICHAEL, LH. Identification of genes regulated during mechanical load-induced cardiac hypertrophy. J Mol Cell Cardiol, v. 32, p.805-15, 2000.

39. KAJSTURA, J; LERI, A; FINATO, N et al. Myocyte proliferation in end-stage cardiac failure in humans. Proc. Natl. Acad. Sci, v. 95, p. 8801-5, 1998.

40. KALIVENDI, SV; KONOREV, EA; CUNNINGHAM, S et al. Doxorubicin activates nuclear factor of activated T-lymphocytes and Fas ligand transcription: role of mitochondrial reactive oxygen species and calcium. Biochem J, v. 389, p. 527-39, 2005.

41. KANG, PM; HAUNSTETTER, A; AOKI, H et al. Morphological and molecular characterization of adult cardiomyocyte apoptosis during hypoxia and reoxygenation. Circ Res, v.87, p. 118-25, 2000.

42. KLIEGMAN, RM. Capítulo 6: Medicina Fetal e Neomortologia. In: BEHRMAN,RE & KLIEGMAN,RM. Princípios de Pediatria. 4ḁ Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2004. p. 165-230.

43. KUMAR, B; DE SILVA, M; VENTER, DJ; ARMES, JE. Tissue microarrays: a practical guide. Pathology, 36(4), p.295-300, 2004.

44. LAHMERS, S; WU, Y; CALL, DR et al. Developmental control of titin isoform expression and passive stiffness in fetal and neonatal myocardium. Circ Res, v. 94, p.505-13, 2004.

45. LEMLER, MS; BIES, RD; FRID, MG et al. Myocyte cytoskeletal disorganization and right heart failure in hypoxia-induced neonatal pulmonary hypertension. Am J

Physiol Heart Circ Physiol, v. 279, p. H1365-76, 2000.

46. LI, F; WANG, X et al. Rapid transition of cardiac myocytes from hyperplasia to hypertrophy during postnatal development. J Mol Cell Cardiol, v.28, p.1737-46, 1996.

47. MACGILL, CJ & BROOKS G. Cell cycle control mechanisms and their role in cardiac growth (review). Cardiovasc Res, v.30, p.557-69, 1995.

48. MACLELLAN, RW & SCHNEIDER, MD. Genetic dissection of cardiac growth control pathways. Annu Rev Physiol, 62, p. 289-319, 2000.

49. MARIANI NETO, C. Capítulo 3: Prioridades obstétricas: Considerações sobre o sofrimento fetal. In: SEGRE, CAM. Perinatologia: Fundamentos e Prática. 1ḁ Ed. São Paulo: Sarvier Editora, 2002. p. 76-8.

50. MASUDA et al. Analysis of chemical modification of RNA from formalin-fixed samples and optimization of molecular biology applications for such samples.

Nucleic Acids Res, v. 27, p. 4436-43, 1999.

51. MAYO, LD; DIXON, JE et al. Pten protects p53 from Mdm2 and sensitizes cancer cells to chemotherapy. J Biol Chem, v.277, p.5484-9, 2002.

52. MAZZIERI, R; EBAID, M. Capítulo 1: Embriologia Cardiovascular. In: RAMIRES, JAF. Cardiologia em Pediatria: Temas Fundamentais. 1ḁ Ed. São Paulo: Ed. Roca, 2000. p.1-25.

53. MOORE, KL & DALLEY, AF. Anatomia orientada para a clínica. 4ḁ Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001.

54. NAKAJIMA, H; NAKAJIMA, HO et al. Expression of mutant p193 and p53 permits cardiomyocyte cell cycle reentry after myocardial infarction in transgenic mice. Circ.

Res, v. 94, p. 1606-14, 2004.

55. PASUMARTHI, KBS; FIELD, LJ. Cardiomyocyte cell cycle regulation. Circ Res, v.90, p.1044-54, 2002.

56. PERRIARD, JC; HIRSCHY, A; EHLER, E. Dilated cardiomyopathy. A disease of the intercalated disc? Trends Cardiovasc. Med, v.13, p.30-8, 2003.

57. RAPPAPORT, L; OLIVIERO, P; SAMUEL, JL. Cytoskeleton and mitochondrial morphology and function. Mol Cell Biol, v. 184, p. 101-5, 1998.

58. SAPINO, A; MARCHIO, C; SENETTA, R et al. Routine assessment of prognostic factors in breast cancer using a multicore tissue microarray procedure. Virchows

Arch, v. 449, p. 288-96, 2006.

59. SCHMITT, E; PAQUET, C et al. DNA-damage response network at the crossroads of cell-cycle checkpoints, cellular senescence and apoptosis. J Zhejiang Univ Sci

B, v.8(6), p.377-97, 2007.

60. SEDMERA, D. Form follows function: developmental and physiological view on ventricular myocardial architecture. Eur J Cardiothorac Surg, v.28(4), p. 526-8, 2005.

61. SHEH,SB; DAVIS,J; WEISLEDER,N et al. Structural and functional roles of desmin in mouse skeletal muscle during passive deformation. Biophysical Journal, v.86, p.2993-3008, 2004.

62. SIEDNER, S; KRUGER, M et al. Developmental changes in contractility and sarcomeric proteins from the early embryonic to the adult stage in the mouse heart.

J Physiol, v.548, p.493-505, 2003.

63. SIMONATO, LE; GARCIA, JF et al. Avaliação de dois métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação em PCR. J Bras Patol Med Lab, v.43, p. 121-7, 2007.

64. SIMPSON, L & PARSONS, R. Pten: life as a tumor suppressor. Exp. Cell Res, v.264, p.29-41, 2001.

65. SONG, J; SAPI, E et al. Roles of Fas and Fas ligand during mammary gland remodeling. J Clin Invest, v.106, p.1209-20, 2000.

66. SOOPAAN, MH; KIM, MM et al. Cardiomyocyte DNA synthesis and binucleation