ESPECTROMETRIA DE INFRAVERMELHO (IR)

Tradicionalmente a determinação de ácidos gordos trans era levada a cabo por espectrometria de Infravermelho, técnica que requere relativamente grandes quantidades de amostra e que não quantifica os ácidos gordos individualmente.

Vários métodos espectrofotométricos de IR, para determinação da insaturação

trans em lípidos, têm sido sugeridos e usados em rotina nas indústrias, ao longo de

vários anos. , .,

Os espectros de IR, no estado sólido, fornecem informação util em questões estruturais de polimorfismo, de empacotamento de cadeias, conformação, etc.

Os'espectros de soluções têm sido utilizados para o reconhecimento de grupos funcionais na generalidade e duplas ligações trans em particular.

Apenas uma dupla ligação produz uma absorção característica a 968cm-1 (10 3 um) O efeito é fortemente aditivo para ácidos gordos poliémcos nao conjugados, ou 'seja, o ácido linolelaídico (C1 8-2") absorve na mesma posição mas com intensidade

aumentada. Comparativamente com o elaidato de metilo os dienos mono trans absorvem apenas 85% e os dienos trans cerca de 166%, Lanza et ai, 1981

As moléculas de ácidos gordos de cadeia longa, ésteres e gliceridos com duplas ligações trans não conjugadas (isoladas) apresentam uma banda de absorção a 10,3um, devida ao facto dos hidrogénios olefínicos estarem em planos diferentes; por seu lado os compostos e as duplas ligações eis não apresentam esta banda

São também fortemente visíveis as bandas a 1657cm"1 e a 1673cm"1, devidas respectivamente às configurações eis e trans, resultantes da simetria local criada pela vibração da dupla ligação, Gunstone, 1979.

Os ácidos gordos de cadeia longa apresentam ainda uma banda a 10,6um relativa ao grupo carboxílico.

Metodologias Analíticas Os métodos de determinação de insaturação trans são baseados na medição da altura do pico a 965-968 cm-1 a partir da linha de base determinada manualmente ou ajustada a zero. Os valores de absorbâncias obtidos são comparados com o de padrões ou com valores descritos, Lanser et ai, 1988.

Para a determinação de isómeros trans, vários métodos por espectrometria de IR têm sido publicados. Entre eles citam-se :

. O mais antigo, descrito por Allen, 1969, que não determina a linha de base nem faz curva de calibração; para determinar o teor de AG trans utilizava a relação de absorbâncias da ligação éster (1163 cm"1) e da ligação trans (965cm"1).

A ligação éster absorve intensamente a 1163 cm"1 e muito ligeiramente a 965cm-1.

. O método AOCS, 1973, cd 14-61 determina a linha de base entre 10,02 e 10,59um e faz a curva de calibração com diferentes concentrações de elaidato de metilo

• O método AO AC, 1975, utiliza as condições do método AOCS e usa factores de correcção para ácidos gordos de cadeia longa, curta e média.

. Hirayama et ai, 1978, descreveram também um método em que determinavam a linha de base entre 9,5 e 10,6um e utilizavam uma curva de calibração com elaidato de metilo.

. O quinto método referido, por ordem cronológica, é o método 2.207 da IUPAC em que a linha de base é determinada entre 10,0-10,8um e a curva de calibração feita com uma mistura de elaidato e estearato de metilo, Deman et ai, 1983.

. Em 1982, Madison et ai. descreveram uma técnica de determinação de isómeros trans usando uma mistura padrão de calibração constituída por 2 componentes,

elaidato e linoleato de metilo. Com esta técnica eliminavam os cálculos para correcção do método AO AC e corrigiam os valores no caso do método AOCS.

Segundo os referidos autores, os métodos descritos enfermam de alguns

inconvenientes, tais como : , . Os resultados da análise de trigliceridos tal qual e após metilaçao dos ácidos

gordos são diferentes e superiores no primeiro caso. Esta diferença é tanto maior quanto menor fôr o teor de isómeros trans presentes (inferior a 15%).

Para anular esta situação prevê-se a conversão dos triglicendos em esteres metílicos para amostras com teores de isómeros trans inferiores a 15%. A explicação para o descrito parece estar no facto de os trigliceridos com configuração as absorverem

em que se adicionou trielaídina.

. A análise das amostras na forma de ésteres metílicos origina níveis de isómeros

trans 1,5 a 3% inferiores nos casos de teores compreendidos entre 1 e 15/o,

comparativamente com amostras a que se adicionou elaidato de metilo.

. As duplas ligações conjugadas absorvem muito próximo das isoladas (não conjugadas) e podem interferir com a sua quantificação. São preferidos os esteres metílicos porque não são conhecidas interferências na absorção dos isómeros trans.

Na própria descrição do método AOAC se refere a sua não aplicação nos

seguintes casos : . .produtos contendo mais de 5% de duplas ligações conjugadas

. produtos com grupos funcionais que modificam a absorção nas proximidades das duolas ligações trans , . .

. produtos com gliceridos mistos contendo ácidos gordos de cadeia curta e longa . produtos com grupos específicos que absorvam próximo de I0,3um, Firestone, 1984.

Deman et ai 1983, descreveram também um método para determinação de insaturação trans em gordura de leite; os autores usavam ésteres metílicos e utilizavam uma curla de calibração com elaidato de metilo e ésteres metílicos de óleo de coco, dada a sua semelhança com a composição das amostras estudadas, pois este óleo contem ácidos gordos de cadeia curta, média e longa.

A espectroscopia de IR continua a ser utilizada actualmente na determinação de insaturação trans e ainda como método comparativo de outras metodologias que se oretendem afinar para esta determinação. Como exemplo do referido citamos

pretendem o n a r p ^ ^ ^ _ d e t e r m i n a r a m a p e r c e n t a g e m de compostos insaturados

trans em óleo de soja hidrogenado; utilizaram ésteres metílicos obtidos por metanohse,

leitura da banda a 965 cm"1 e curva de calibração feita com elaidato de metilo.

. Draguez de Hault et ai, 1984 - compararam vários catalisadores para hidrogenação parcial de óleos de soja, colza ou linhaça. As condições descritas eram

semelhantes às do autor anteriormente refendo.

. Hernandez et ai, 1988 - Num trabalho efectuado em margarinas, rninarinas e preparados gordos utilizaram a espectroscopia de IR para determinação do teor de

Metodologias Analíticas

compostos trans presentes e fizeram a comparação dos valores obtidos com outra técnica (GLC capilar).

• Younes et ai, 1988 - utilizaram o método AOCS de IR para determinar o teor de isómeros trans da gordura de leite e simultaneamente tentar detectar a sua adulteração com gordura vegetal hidrogenada. Faziam o espectro entre 2000cm" e 650cm_1 e consideraram a banda dos isómeros trans a 967cm_1.

• Mallet et ai, 1989 - em óleos de soja e colza hidrogenados determinaram a insaturação trans pelo método IUPAC de espectrometria de IR.

Em 1988 foi descrita por Lanser et ai. uma técnica de determinação de insaturação trans em ésteres metílicos de ácidos gordos baseada igualmente na integração da área do pico de absorbància característica dos isómeros trans. Utilizaram um aparelho FTIR (Fourier Transform Infrared) nas condições descritas no método AOCS. A técnica aplicava-se a gorduras parcialmente hidrogenadas. Os valores obtidos foram comparados com outras metodologias e obtiveram valores concordantes.

De acordo com os autores o FTIR é um método rápido e simples mas requere uma grande quantidade de amostra e não fornece informação acerca das percentagens dos outros ácidos gordos.