Procedimentos da coleta:

Os atletas foram devidamente esclarecidos dos procedimentos de coleta da salivar, bem como do preenchimento dos questionários psicométricos, sobre a utilização do cardiofrequencímetro e estiveram a todo o momento sobre supervisão de um dos membros da equipe, a fim de realizar de maneira adequada todos os procedimentos da pesquisa.

6.7.1 Variáveis antropométricas:

As variáveis antropométricas foram mensuradas segundo a padronização da International Society for Advancement in Kinanthropometry – ISAK (ORTON & OLDS, 2005).

a) Estatura: Para a aferição da estatura foi empregado um estadiômetro vertical, com 210 cm de comprimento e precisão de 0,1 cm.

b) A avaliação da massa corporal foi realizada através de uma balança de plataforma, digital, da marca Welme®, calibrada, graduada de zero a 150 kg e com precisão de 0,1 kg.

6.7.2 Percepção subjetiva de esforço da sessão

Foi apresentada a escala de Borg CR-10 adaptada por Foster et al. (2001) aos atletas. Os extremos da escala foram esclarecidos para obter melhor validade na resposta, onde a ancoragem zero representa “repouso” e a dez que representa “máximo”. Com um período de aproximadamente 30 minutos após o treinamento/competição, os indivíduos foram encorajados a responder “Como foi o seu treino/jogo?”, escolhendo um descritor (ex: fácil, difícil, máximo) e associá-lo a um valor numérico.

6.7.3 Determinação da Carga Externa do Treinamento e Competição

Os dados de aceleração, interpretados como cargas externas foram obtidas a partir de acelerômetros tri-axiais (Actigraph® GT3X, PENSACOLA, FL, EUA) configurado com uma Taxa de amostragem de 100 Hz. O acelerômetro estava localizado no quadril dos jogadores entre a barriga e a crista ilíaca direita e fixada na cintura elástica dos calções esportivos. Este local foi mostrado para fornecer os melhores resultados para o movimento do corpo inteiro, uma vez que está próximo do centro de massa do jogador. Cada atleta usou o mesmo dispositivo durante todo o estudo.

Os dados foram baixados no software (Actigraph®_{, PENSACOLA, FL, EUA) e}

transferidos para uma planilha eletrônica do Microsoft Excel para análise posterior no software Matlab®.

Os dados instantâneos de todos os três eixos (x, y e z) foram integrados em um vetor resultante através da fórmula √ [(xn - xn - 1) 2 + (yn - yn - 1) 2 + (zn - zn-1) 2]. (A adição direta da mudança instantânea das taxas de acelerações resultantes) ao longo do tempo representou a carga de aceleração para uma perfuração ou atividade (AL). Para reduzir o valor para facilidade de uso, o resultado foi multiplicado por um fator de escala de 0,01. Todos os dados foram expressos ao longo do tempo de jogo e a média por minuto de atividade (AL.min-1). A validade e a confiabilidade da medição dos movimentos tridimensionais do esporte de equipe através do acelerômetro tri-axial foram mostradas anteriormente (Barrett et al., 2014).

6.7.4 Inventário do estado de ansiedade competitiva (CSAI-2R)

A versão brasileira do CSAI-2R (Martens, 1990), foi utilizada para avaliar o nível de ansiedade competitiva de atletas. O questionário é composto por dezesseis itens que avaliam o estado de ansiedade do atleta, subdivididos em ansiedade somática, cognitiva e autoconfiança dos atletas avaliados. A pontuação da escala é mensurada através da soma dos valores obtidos em cada resposta, divididos pelo número de itens de cada sub-escala. O CSAI-2R é organizado em uma escala “tipo-Likert”, no qual se observam variações, onde “1” representa nada e “4” representa bastante, quanto maior for a pontuação encontrada, mais elevado é o nível de ansiedade do indivíduo, é importante ressaltar que o instrumento possui três dimensões:

direção, frequência e intensidade, e os participantes da pesquisa foram avaliados na dimensão da intensidade. O questionário se apresenta como uma excelente variável para análise do estado de ansiedade competitiva, além disso, o instrumento apresentou excelentes variáveis psicométricas quando validade em atletas brasileiros (Fernandes, 2013). A análise de consistência interna das sub-escalas do questionário CSAI-2R foi realizada através do Alpha de Cronbach. A ansiedade cognitiva apresentou um valor de α = 0,55 (moderado), a ansiedade somática apresentou um valor de α = 0,76 (substancial) e a autoconfiança apresentou um valor de α = 0,83 (quase perfeito).

6.7.5. Daily Analysis of Life Demands in Athletes – DALDA

O questionário para análise dos sintomas de estresse foi preenchido durante a semana de treinamento (Sexta-feira) e imediatamente antes das três partidas competitivas. O questionário DALDA é dividido em duas partes - parte A que representa as fontes de estresse e parte B que representa sintomas de estresse. Este instrumento requer que o atleta assinale cada variável, em cada parte do questionário (A e B), como sendo “pior do que o normal”, “normal”, ou “melhor do que o normal” em função da sua percepção das fontes e sintomas de estresse (RUSHALL, 1990). Os indivíduos foram familiarizados previamente com a utilização do instrumento devidamente traduzido e validado (MOREIRA e CAVAZZONI, 2009). A análise de consistência interna das subescalas do DALDA foi avaliada através do Alpha de Cronbach, apresentando um valor de α = 0,303 para a subescala “sinais” e um valor de α = 0,77 para a subescala “sintomas”.

6.7.6 Variabilidade de frequência cardíaca

A análise de variabilidade de frequência cardíaca foi realizada uma hora antes das partidas e da sessão de treinamento. Os intervalos R-R foram obtidos através da utilização de um monitor de frequência cardíaca com sinal de telemetria (Polar® H10 com Bluetooh, KEMPELE, Finlândia) e do acelerômetro (Actigraph® GT3X, PENSACOLA, FL, EUA) com amostragem de 100hz, a mesma foi registrada durante cinco minutos, com o atleta sentado, em repouso, numa sala isenta de ruídos externos, os parâmetros recomendados pelo Task Force (1996), foram utilizados durante a coleta de VFC.

Os valores R-R foram transferidos para o software Actilife (Actigraph® GT3X, PENSACOLA, FL, EUA) e posteriormente exportados para o software Kubios V2 (Polaer

Kubios V2, kuppo, Finlândia), no qual foram analisados os dois minutos finais dos 5 minutos registrados durante a coleta de dados. Foram realizadas as análises da variável: (RMSSD) diferença média entre os quadrados dos intervalos normais sucessivos e sua função logarítimica (LNrmssd) para evitar outliers e simplificar as análises.

6.7.7 Coleta da saliva

Para a coleta da saliva foi informado anteriormente aos sujeitos para não consumirem alimento com cafeína, por um período de 2 horas antes. No momento da coleta os participantes foram solicitados a lavar a boca com água, para diminuir a presença de partículas que possam estar nos dentes e boca.

A amostra de saliva foi obtida de forma padronizada onde os participantes estavam sentados de forma confortável com os cotovelos apoiados nos joelhos com a cabeça abaixada e projetada para frente. Em seguida, durante os 5 minutos seguintes eles deixaram a saliva escorrer em recipiente plástico adequado (tubo plástico para centrífuga, graduado, estéril, com tampa). Depois de coletadas as amostras, os recipientes plásticos foram armazenados em gelo seco (aproximadamente -78º), permanecendo neste durante todo o transporte para o laboratório onde foram transferidos ao congelador (-80oC).

Após pesagem dos tubos contendo a saliva, esta será centrifugada a 4oC, por 24 min, a 5.200 giros/min para separar muco e células. O sobrenadante foi utilizado na análise. A quantificação do cortisol salivar será realizada pelo método de ELISA (enzyma-linked immunosorbent assay; ELX 800VV – Universal Microplate Reader, Bio-TeK instruments, USA). Todas as amostras serão avaliadas em duplicata e a média da absorbância dos dois valores será utilizada como o valor representativo.

6.7.8 Determinação de cortisol salivar:

A quantificação de cortisol salivar foi realizada pelo método de ELISA (enzyma- linked immunosorbent assay; ELX 800VV – Universal Microplate Reader, Bio-TeK instruments, USA). Todas as amostras serão avaliadas em duplicata e a média da absorbância dos dois valores será utilizada como o valor representativo. Para as análises das concentrações

de cortisol, após a preparação dos reagentes (solução de lavagem e solução conjugada enzimática e seleção do número de cavidades de microtitulação), passa-se ao procedimento de ensaio, conforme instrução do fabricante. Após o cálculo das médias das leituras de absorbância para cada padrão, controle e amostra, foram plotados os logs das médias das leituras de absorbância para cada padrão (eixo y) versus os logs das concentrações do hormônio de interesse (eixo x), usando formato linear. As concentrações das amostras e controles serão determinadas bem uma curva padrão pela combinação da média de suas leituras de absorbância com as correspondentes concentrações.