PRÁTICAS DO LABORATÓRIO DE IMUNOLOGIA BÁSICA E CLÍNICA
3. PROCEDIMENTO 1. Confecção do estiraço
3.2. Prova quantitativa (semi-quantitativa)
a) Preparar uma série de diluições do soro entre 1:2 e 1:128 (podendo ir além deste título), numerando 7 tubos (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 e 1:128), acrescentando a seguir 40 uL de tampão glicina pH 8,2 em cada um deles, e 40 uL da amostra no primeiro tubo, homogeneizando e transferindo 40 uL desta diluição para o próximo tubo, e assim por diante desprezando a última alíquota;
b) Testar as diluições conforme o disposto na técnica qualitativa, substituindo as amostras pelas diluições;
c) Resultado: o título é considerado como a recíproca da maior diluição que apresentar reação positiva (aglutinação visível a olho nu).
4. RESPONSABILIDADES RESPONSÁVEL ATIVIDADE
Tutor Levantamento de insumos para aula
Apresentação do roteiro da aula prática aos estudantes Estudantes Realização do protocolo
Discussão dos resultados
Laboratorista Separação de vidraria, insumos e equipamentos Limpeza de laboratório e de vidrarias
AULA AVALIAÇÃO DE ANTÍGENOS ERITROCITÁRIOS PÁG: 065/02
ELABORADO POR: VERIFICADO POR: APROVADO POR:
Adriene Melo Janaína Melo Flávia Morais
Avenida Mal. Mascarenhas de Morais, 4861, Imbiribeira, Recife -PE, CEP: 51.150-000 (81) 3035-7777/3212-7777 – contato@fps.edu.br
1. OBJETIVOS
• Conceituar Antígeno, Antigenicidade e Imunogenicidade;
• Conhecer as Funções das Imunoglobulinas;
• Executar a Técnica de Tipagem Sanguínea ABO e Rh.
2. MATERIAIS
- Anti-A monoclonal humano (Frezenius)
- Anti-B monoclonal humano (Frezenius)
- Anti-AB monoclonal humano (Frezenius)
- Anti-D monoclonal humano (Frezenius)
- Lancetas estéreis descartáveis
- Sangue à fresco a ser testado
- Lâminas de vidro para microscopia
- Palitos de dente
- Álcool 70%
- Algodão
- Luvas de procedimento ambidestras
3. PROCEDIMENTO
d) Separar duas lâminas de microscopia.
e) Lavar as mãos com sabão.
f) Massagear a ponta dos dedos indicador ou médio e pressioná-la, a fim de reter o fluxo sanguíneo.
g) Esterilizar o dedo com álcool 70%.
h) Utilizando uma lanceta estéril, coletar uma gota de sangue para cada anticorpo que será utilizado, colocando, na lâmina, três gotas para a tipagem de ABO e uma gotinha para a determinação do fator Rh.
AULA AVALIAÇÃO DE ANTÍGENOS ERITROCITÁRIOS PÁG: 066/02
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i) Utilizando o próprio conta-gotas dos anticorpos comerciais (e tomando o cuidado para não contaminar estes conta-gotas com o sangue da lâmina), colocar uma gota de anticorpo monoclonal anti-A em uma das gotas de sangue, uma gota de anticorpo monoclonal anti-B na segunda gota de sangue, uma gota de anticorpo monoclonal anti-AB na terceira gota de sangue e uma gota do anticorpo anti-D na quarta gota de sangue.
j) Utilizando um palito de dente, homogeneizar o sangue com o anticorpo adicionado.
k) Após alguns minutos (2 min), verificar se ocorreu aglutinação (formação de grumos de hemácias).
4. RESPONSABILIDADES
RESPONSÁVEL ATIVIDADE
Tutor Levantamento de insumos para aula
Apresentação do roteiro da aula prática aos estudantes Estudantes Realização do protocolo
Discussão dos resultados
Laboratorista Separação de vidraria, insumos e equipamentos Limpeza de laboratório e de vidrarias
AULA VALIDAÇÃO DE ENSAIO IMUNOLÓGICO-I PÁG: 067/03
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1. OBJETIVO
• Entender a Importância dos Parâmetros de Avaliação de um Teste Imunológico
• Conhecer os Parâmetros de Avaliação Dependente e Independentes da Prevalência de uma Doença
• Executar os Cálculos Para Determinação dos Valores Desses Parâmetros
2. MATERIAIS
- Folha de papel em branco (ofício, pautado ou caderno)
- Caneta esferográfica azul ou preta
- Calculadora
- Material de consulta (protocolo de aula, anotações, livro texto) 3. PROCEDIMENTO
a) Caso prático:
• Em uma unidade de saúde da família foram avaliados 300 pacientes, destes 190 não mostravam sinais de tuberculose e dos 180 pacientes que foram reagentes à prova de tuberculina, apenas 60 estavam com sinais característicos da doença.
Considerar que: VP- Verdadeiro Positivo, VN- Verdadeiro Negativo, FP- Falso Positivo, FN- Falso Negativo.
Fórmulas: Sensibilidade (S) = VP/(VP+FN), Especificidade (E) = VN/(VN+FP), Eficiência (EF) = VP+VN/VP+VN+FP+FN, Prevalência (P) = VP+FN/(VP+FN+FP+VN); Valor Preditivo Positivo (VPP) = VP/(VP+FP); Valo r Preditivo Negativo (VPN) = VN/(VN+FN)
AULA VALIDAÇÃO DE ENSAIO IMUNOLÓGICO-I PÁG: 068/03
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b) Em duplas, após exposição e análise do caso prático e a partir das fórmulas apresentadas, devem ser determinados os valores dos seguintes parâmetros do teste em questão:
1. Sensibilidade do teste;
2. Especificidade do teste;
3. Eficiência do teste;
4. Prevalência sorológica;
5. Valor preditivo negativo;
6. Valor preditivo positito.
c) Realizar uma breve discussão para avaliar se os valores encontrados estão adequados, qual a finalidade e importância de cada parâmetro e se os resultados obtidos por este teste seriam confiáveis.
4. CÁLCULOS (exemplo)
Para calcular os parâmetros de um teste deve-se elaborar uma tabela 2x2 para plotar os valores encontrados:
Onde:
Doença/Diagnóstico Verdadeiro
Resultados do Teste Doente Não doente
Positivo Verdadeiro-Positivo (VP) Falso-Positivo (FP) Negativo Falso-Negativo (FN) Verdadeiro Negativo (VN)
Total VP+FN FP+VN
Desta forma:
Tuberculose/Diagnóstico Clínico Total
Prova
Tuberculínica Doente Não doente
Positivo 60 (VP) 120 (FP) 180
Negativo 50 (FN) 70 (VN) 120
Total 110 (VP+FN) 190 (FP+VN) 300
AULA VALIDAÇÃO DE ENSAIO IMUNOLÓGICO-I PÁG: 069/03
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Assim:
Sensibilidade (S) = VP/(VP+FN) → 60/110 = 0,54 ou 54%
Especificidade (E) = VN/(VN+FP) → 70/190 = 0,37 ou 37%
Eficiência (EF) = VP+VN/VP+VN+FP+FN → 130/300 = 0,43 ou 43%
P = VP+FN/(VP+FN+FP+VN) → 110/300 = 0,36 ou 36%
VPP = VP/(VP+FN) → 60/180 = 0,33 ou 33%
VPN = VN/(VN+FP) → 70/120 = 0,58 ou 58%
5. RESPONSABILIDADES RESPONSÁVEL ATIVIDADE
Tutor Levantamento de insumos para aula
Apresentação do roteiro da aula prática aos estudantes Estudantes Realização de cálculos
Discussão dos resultados
Laboratorista Separação de vidraria, insumos e equipamentos Limpeza de laboratório e de vidrarias
AULA DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO DE INFECÇÕES VIRAIS PÁG: 070/04
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1. OBJETIVO
• Entender o Mecanismo de Resposta Imune aos Vírus;
• Entender como é Realizado um ELISA Indireto;
• Executar o Ensaio de Elisa Indireto Para o Diagnóstico da Infecção pelo HBV.
2. MATERIAIS
• Kit Imuno-ELISA Anti-HBsAg quantitativo (Wama Diagnóstica)
- Microplaca com cavidades cobertas com antígeno recombinante HBsAg (12 tiras removíveis com 8 cavidades cada)
- Solução de lavagem - 20 x concentrada (1 x 30 ml)
- Soro (+) para anti-HBsAg a ser testado (armazenado em geladeira) e suporte
- PBS pH 7,4
- Água destilada
- Béquer 50 mL
- Microtubos tipo eppendorf (1,5mL)
- Suporte para tubos
AULA DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO DE INFECÇÕES VIRAIS PÁG: 071/04
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- Ponteiras (200μL)
- Micropipetas automáticas (capacidade para 200μl)
- Micropipetas automáticas Multicanais (capacidade 50-100μl)
- Dispensador (recipiente) para pipeta multicanal
- Papel alumínio e papel toalha
- Caixa plástica (tipo pote de sorvete) para desprezar líquidos
- Cronômetro
- Luvas de procedimento ambidestras
- Caneta marcadora permanente (ponta fina)
- Descarte contendo NaClO (0,5%)
- Agitador de microplaca.
- Estufa com temperatura de 37 ºC.
- Leitora de microplaca com filtro de 450 nm.
3. PROCEDIMENTO