Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR)

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

4.2. Segunda etapa experimental

4.2.1. Técnicas utilizadas para análise da segunda etapa experimental (in vitro)

4.2.1.2. Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR)

As médias e desvios-padrão dos valores da reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) (x105_{) de espiroquetas em meio de cultivo} Barbour-Stoenner-Kelly (BSK), em dez momentos de análise, esta descrito na tabela 15.

Os G1 e G7, que não passaram por inoculação de soro parasitado com

B. anserina, não amplificaram o gene da bactéria em nenhum momento

experimental. Observando os valores obtidos da qPCR na tabela 26, nota-se que os G2 e G3 apresentaram valores de qPCR semelhantes nos momentos 1, 2 e 3, e diferença significativa (P=<0,05) entre os grupos no momento 4, onde ocorreu amplificação apenas no G2.

A não amplificação a partir dos 20 dias após a inoculação, pode ser devido a parada do crescimento em meio de cultivo BSK, por alteração das propriedades estruturais da bactéria ou alteração das propriedades do meio de cultivo devido a irradiação de luz visível e/ou adição de corante ftalocianina de cloro-alumínio

TABELA 2. Médias ± desvios-padrão dos valores da espiroquetemia (x 106_{/mL) de galinhas poedeiras, que receberam soro} parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença), grupo 3 (tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Perda de animais (entre parênteses), mediana e percentis 25 e 75% de espiroquetas. Botucatu -SP, 2015.

Momentos _Tratado _{Luz visível} _Ftalocianina _NanoemulsãoGrupos _Controle _{Imunossupressão} _Doença P 0 0,0 [0-0] 0 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 1 0,0 [0,0-0,0] AB 1,0 [0,6-10,3] AB 4,8 [1,0-11,0] A 2,5 [2,2-10,2] A 0,0 [0,0-0,0] B 0,0 [0,0-0,0] B 3,5 [0,6-10,0] AB <0,001 2 0,0 [0,0-1,7] 0,0 [0,0-0,0] 2,6 [0,0-5,2] 0,0 [0,0-0,0] 0,0 [0,0-0,0] 0,0 [0,0-0,0] 0,0 [0,0-0,0] 0,382 3 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 4 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 5 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] --- 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 6 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] --- 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 7 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] --- 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 00,0 [0-0] 1,00 8 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] --- 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 9 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] --- --- 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 P 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00

* Medianas seguidas pela mesma letra maiúscula na linha não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 3. Avaliação qualitativa da motilidade das espiroquetas (%) de aves poedeiras, que receberam soro parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Classificação de motilidade representada em cruzes

(+): ++++ motilidade intensa, +++ vigorosa, ++ ativa, + pouco ativa. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3 (tratado),

Grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu -SP, 2015. Momentos _Tratado _{Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão}Grupos _Doença

0 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente

1 16,66% + 83,33% +++ 100% +++ 83,33% +++ Ausente Ausente 16,66% +++ 50% ++ 2 16,66% +++ Ausente 16,66% +++ Ausente Ausente Ausente Ausente

3 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente

4 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente

5 Ausente Ausente --- Ausente Ausente Ausente Ausente

6 Ausente Ausente --- Ausente Ausente Ausente Ausente

7 Ausente Ausente --- Ausente Ausente Ausente Ausente

8 Ausente Ausente --- Ausente Ausente Ausente Ausente

9 Ausente Ausente --- --- Ausente Ausente Ausente

TABELA 4. Médias ± desvios-padrão dos valores da reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) (x105_{/mL) de galinhas} poedeiras, que receberam soro parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3 (Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu -SP, 2015.

Momentos _Tratado _{Luz visível} _Ftalocianina _NanoemulsãoGrupos _Controle _{Imunossupressão} _Doença P 0 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 1,000 1 1,12 [0,0-2,34] aB 4,97 [4,88-5,05] aC 4,84 [4,70-5,08] aC 5,01 [4,96-5,32] aC 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 5,06 [4,98-5,17] aC <0,001 2 2,26 [0-2,99] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 2,35 [0,0-4,69] aA 0,0 aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 0,085 3 0,0 [0,0-1,80] aA 2,33 [2,24-2,34] aB 0,0 aA 0,0 aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 0,017 4 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 0,0 aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 1,000 5 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA --- 0,0 aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 1,000 6 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA --- 0,0 aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 1,000 7 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA --- 0,0 aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 1,000 8 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA --- 2,24 aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 0,007 9 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA --- --- 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 aA 1,000 P 0,269 0,035 0,406 0,433 1,000 1,000 0,437

* Medianas seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna e maiúscula na linha, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 5. Médias ± desvios-padrão dos valores do ensaio de imunoadsorção enzimático indireto (ELISA indireto) padronizado

(CDO*100/CUT off) de galinhas poedeiras, que receberam soro parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3 (Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu -SP, 2015.

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 4,0 ± 6,6 cA 10,6 ± 10,6 dA 6,1 ± 6,1 cA 45,4 ± 45,4 dA 25,4 ± 25,4 aA 28,2 ± 28,2aA 21,8 ± 21,8 cA 0,174 1 2,4 ±4,3 cA 8,7 ± 7,3 dA 9,5 ± 25,4 cA 21,1 ± 19,0 dA 31,2 ± 21,4 aA 25,3 ±36,2 aA 10,1 ± 12,1 cA 0,255 2 9,8 ± 4,8 cA 135,1 ± 26,2 cA 87,9 ± 2,5 bA 100,2 ± 0,0 cA 38,1 ± 62,3 aA 40,6 ± 72,8 aA 98,3 ±0,0 bcA 0,046 3 39,6 ± 25,8 bcA 187,7 ± 26,4 abA 132,3 ± 10,7 bA 103,8 ± 0,0 cA 18,7 ± 25,7 aA 12,8 ± 21,9 aA 167,0 ±0,0 abA < 0,001 4 65,5 ± 35,6 bcBC 276,9 ± 58,6 abA 214,1 ± 0,0 aAB 190,4 ± 0,0 bcAB 23,9 ± 40,7 aC 18,6 ± 41,4 aC 151,6 ± 0,0 abcABC <0,001 5 124,8 ± 17,1 abC 271,5 ± 8,8 aA --- 230,3 ± 0,0 bAB 17,5 ± 25,4 aD 13,7 ± 24,4 aD 229,9 ± 0,0 abB <0,001 6 189,2 ± 13,7 aB 288,9 ± 14,3 aA --- 223,8 ± 0,0 bA 46,7 ± 33,6 aB 54,9 ± 55,4 aB 238,2 ± 0,0 abA <0,001 7 203,4 ± 73,0 aB 332,2 ± 9,8 aA --- 257,5 ± 0,0 abAB 23,5 ± 25,3 aC 31,0 ± 34,4 aC 276,2 ± 0,0 abAB <0,001 8 187,6 ± 73,5 aA 317,3 ± 16,1 aA --- 329,0 ± 0,0 aA 44,7 ± 50,3 aB 36,3 ± 51,5 aB 333,1 ± 0,0 aA <0,001 9 206,9 ± 69,8 aA 335,3 ± 0,0 aA --- --- 41,8 ± 24,9 aB 45,6 ± 73,5 aB 311,0 ± 0,0 aA 0,003 P <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 0,013 0,114 <0,001

* Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna e maiúscula na linha, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 6. Médias ± desvios-padrão dos valores de volume globular (VG) (%) de galinhas poedeiras, que receberam soro

parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3 (Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu - SP, 2015.

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 45,0 ± 6,4 aA 48,8 ± 4,3 aA 45,8 ± 5,8 aA 41,2 ± 9,3 aA 40,2 ± 3,8 aA 40,8 ± 4,8 aA 39,5 ± 7,0 aA 0,099 1 24,0 ± 2,8 bcAB 16,8 ± 3,6 cBC 19,2 ± 4,1 bBC 17,2 ± 3,7 aBC 30,7 ± 3,8 bcA 23,2 ± 5,6 bcdBC 15,0 ± 4,1 aC <0,001 2 15,8 ± 3,1 dB 19,3 ± 2,1 cAB 15,5 ± 0,7 bB 21,0 ± 0,0 aAB 24,0 ± 3,2 dA 18,8 ± 3,0 cdAB 24,0 ± 0,0 aAB 0,002 3 18,3 ± 4,0 cdAB 19,0 ± 6,6 cAB 10,0 ± 2,8 bB 18,0 ± 0,0 aAB 27,2 ± 1,7 cdA 16,0 ± 3,9 dAB 15,0 ± 0,0 aAB <0,001 4 17,7 ± 2,1 cdAB 22,0 ± 6,2 bcA 6,0 ± 0,0 bB 16,0 ± 0,0 aAB 26,5 ± 2,8 cdA 16,2 ± 1,9 dAB 20,0 ± 0,0 aAB <0,001 5 19,0 ± 4,6 cdAB 29,0 ± 8,5 bcA --- 24,0 ± 0,0 aAB 27,2 ± 1,7 cdA 15,8 ± 1,0 dB 20,0 ± 0,0 aAB <0,001 6 23,0 ± 5,0 bcdA 26,0 ± 1,4 bcA --- 24,0 ± 0,0 aA 36,0 ± 4,8 abA 33,5 ± 9,5 abA 33,0 ± 0,0 aA 0,053 7 26,7 ± 2,3 bcB 38,0 ± 4,2 abA --- 31,0 ± 0,0 aAB 30,0 ± 2,0 cB 31,2 ± 2,5 abcAB 31,0 ± 0,0 aAB 0,003 8 29,3 ± 4,0 bA 34,5 ± 2,1 bcA --- 36,0 ± 0,0 aA 27,3 ± 1,4 cdA 22,4 ± 12,5 bcdA 28,0 ± 0,0 aA 0,293 9 25,7 ± 1,5 bcA 25,0 ± 0,0 bcA --- --- 38,3 ± 3,9 aA 30,5 ± 5,6 abcA 25,0 ± 0,0 aA 0,004 P <0,001 <0,001 <0,001 0,031 <0,001 <0,001 0,081

*Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna e maiúscula na linha, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 7. Médias ± desvios-padrão dos valores de proteína plasmática total (g/dL) de galinhas poedeiras, que receberam soro

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 6,4 ± 0,7 aAB 5,6 ± 0,6 aAB 5,9 ± 0,5 aAB 5,5 ± 0,4 abAB 6,7 ± 1,3 aA 5,5 ± 0,4 bcAB 5,4 ± 0,5 bB 0,019 1 7,1 ± 1,1 aA 4,7 ± 0,3 aB 5,8 ± 0,4 aAB 4,5 ± 0,5 bB 5,6 ± 1,0 aB 5,4 ± 1,0 bcB 4,8 ± 0,6 bB <0,001 2 5,7 ± 0,3 aA 5,1 ± 0,8 aA 6,3 ± 0,4 aA 5,2 ± 0,0 abA 5,9 ± 0,6 aA 4,8 ± 0,7 bcA 5,6 ± 0,0 abA 0,014 3 6,5 ± 1,7 aA 6,4 ± 1,3 aA 5,3 ± 0,1 aA 6,0 ± 0,0 abA 6,2 ± 1,3 aA 6,0 ± 0,8 abA 9,0 ± 0,0 aA 0,829 4 8,0 ± 3,3 aA 5,9 ± 0,9 aA 5,2 ± 0,0 aA 5,0 ± 0,0 abA 6,2 ± 0,8 aA 8,6 ± 1,8 aA 10,6 ± 0,0 aA 0,107 5 7,3 ± 1,9 aA 5,8 ± 0,8 aA --- 7,2 ± 0,0 aA 6,2 ± 1,3 aA 7,4 ± 2,3 abA 9,6 ± 0,0 aA 0,608 6 6,3 ± 1,2 aA 5,1 ± 0,1 aA --- 5,2 ± 0,0 abA 6,6 ± 0,6 aA 4,9 ± 0,7 bcA 7,4 ± 0,0 abA 0,017 7 4,8 ± 0,6 aA 5,2 ± 1,4 aA --- 5,2 ± 0,0 abA 6,1 ± 0,5 aA 6,4 ± 0,6 abA 6,6 ± 0,0 abA 0,042 8 5,5 ± 0,9 aA 5,2 ± 1,1 aA --- 5,0 ± 0,0 abA 6,3 ± 0,6 aA 3,3 ± 2,0 cA 8,0 ± 0,0 abA 0,019 9 5,5 ± 0,3 aA 4,4 ± 0,0 aA --- --- 6,1 ± 1,1 aA 4,9 ± 1,3 bcA 5,8 ± 0,0 abA 0,274 P 0,182 0,157 0,156 0,048 0,414 <0,001 0,016

*Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna e maiúscula na linha, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 8. Médias ± desvios-padrão dos valores de colesterol (mg/dL) de galinhas poedeiras, que receberam soro parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3

(Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu -SP, 2015.

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 248,7 ± 155,1 bA 204,8 ± 33,8 bA 206,2 ± 56,1 bA 190,2 ± 64,3 bA 166,7 ± 41,9 aA 279,5 ± 210,4 cdA 201,0 ± 47,5 dA 0,616 1 568,2 ± 146,3 aA 203,8 ± 32,7 bB 332,2 ± 127,7 abB 248,5 ± 45,7 abB 156,7 ± 35,3 aB 605,3 ± 198,9 abA 244,5 ± 18,1 dB <0,001 2 346,4 ± 38,1 abA 289,3 ± 52,9 abA 327,0 ± 46,7 abA 389,0 ± 0,0 abA 135,8 ± 30,6 aB 345,3 ± 79,1 bcdA 287,0 ± 0,0 cdAB <0,001 3 414,0 ± 54,1 abA 477,3 ± 176,1 aA 465,5 ± 5,0 aA 406,0 ± 0,0 abAB 161,8 ± 48,1 aB 492,3 ± 126,1 abcA 740,0 ± 0,0 aA <0,001 4 447,7 ± 48,5 abABC 391,3 ± 57,7 abBC 594,0 ± 0,0 aAB 464,0 ± 0,0 aABCb 143,2 ± 67,2 aC 722,2 ± 134,6 aA 780,0 ± 0,0 aA <0,001 5 405,7 ± 108,9 abAB 324,0 ± 181,0 abAB --- 498,0 ± 0,0 aAB 137,8 ± 40,4 aB 597,6 ± 158,2 abA 711,0 ± 0,0 aA <0,001 6 405,0 ± 188,8 abA 288,5 ± 176,1 abA --- 522,0 ± 0,0 aA 180,8 ± 109,8 aA 343,8 ± 100,6 bcdA 472,0 ± 0,0 b 0,132 7 260,0 ± 168,1 abA 248,5 ± 41,7 abA --- 528,0 ± 0,0 aA 139,2 ± 44,8 aA 145,0 ± 27,4 dA 190,0 ± 0,0 d 0,138 8 232,7 ± 91,7 bA 220,0 ± 28,3 bA --- 400,0 ± 0,0 abA 214,8 ± 58,0 aA 127,8 ± 29,2 dA 437,0 ± 0,0 bc 0,107 9 194,0 ± 7,0 bA 103,0 ± 0,0 bA --- --- 192,7 ± 57,1 aA 118,8 ± 33,0 dA 212,0 ± 0,0 d 0,056

P 0,005 0,003 0,024 0,030 0,126 <0,001 <0,001

* Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna e maiúscula na linha, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 9. Médias ± desvios-padrão dos valores de triglicerídeos (mg/dL) de galinhas poedeiras, que receberam soro parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3

(Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão. Botucatu -SP, 2015.

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 2151,7 ± 1717,3 aA 1718,0 ± 740,5 aA 1599,2 ± 718,0 aA 1291,5 ± 1060,6 aA 11127 ± 577,8 aA 2279,0 ± 2140,5 aA 1732,8 ± 462,3 aA 0,633 1 781,2 ± 455,7 aAB 169,6 ± 89,8 aB 272,8 ±315,8 bB 169,8 ± 133,2 aB 10210 ± 391,1 aA 598,7 ± 380,4 aAB 189,3 ± 111,9 bB <0,001 2 252,0 ± 172,3 aA 92,7 ± 28,1 aA 81,5 ± 41,7 bA 50,0 ± 0,0 aA 13288 ± 623,5 aA 192,3 ± 165,8 aA 193,0 ± 0,0 bA <0,001 3 708,0 ± 533,5 aA 1052,0 ± 969,4 aA 42,0 ± 11,3 bA 952,0 ± 0,0 aA 15025 ± 819,7 aA 827,2 ± 521,2 aA 1200,0 ± 0,0 bA 0,150 4 2562,0 ± 2763,0 aA 422,0 ± 506,2 aA 25,0 ± 0,0 bA 516,0 ± 0,0 aA 18390 ± 746,7 aA 2622,8 ± 2080,7 aA 4900,0 ± 0,0 bA 0,328 5 1506,0 ± 2386,2 aA 177,5 ±14,8 aA --- 206,0 ± 0,0 aA 15258 ± 858,3 aA 2304,4 ± 2064,6 aA 1200,0 ± 0,0 bA 0,507 6 1149,3 ± 1376,3 aA 160,0 ± 75,0 aA --- 132,0 ± 0,0 aA 12300 ± 481,8 aA 267,0 ± 126,0 aA 1180,0 ± 0,0 bA 0,113 7 577,7 ± 503,3 aA 557,5 ± 754,5 aA --- 103,0 ± 0,0 aA 12878 ± 630,4 aA 1957,5 ± 712,3 aA 763,0 ± 0,0 bA 0,055 8 737,0 ± 623,8 aA 591,0 ± 804,7 aA --- 25,0 ± 0,0 aA 11805 ± 343,6 aA 520,3 ± 405,0 aA 1200,0 ± 0,0 bA 0,198 9 806,7 ± 660,6 aA 148,0 ± 0,0 aA --- --- 10828 ± 414,0 aA 547,3 ± 172,1 aA 1310,0 ± 0,0 bA 0,197 P 0,338 0,054 0,005 0,648 0,311 0,014 0,010

* Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna e maiúscula na linha, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 10. Médias ± desvios-padrão dos valores de fosfatase alcalina (UI/L) de galinhas poedeiras, que receberam soro

parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3 (Tratado), Grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu - SP, 2015.

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 964,5 ± 717,9 671,7 ± 371,2 a 699,0 ± 394,4 a 711,7 ± 683,5 516,8 ± 270,5 482,0 ± 297,4 abc 1187,8 ± 584,9 0,217 1 367,3 ± 194,1 AB 164,2 ± 92,2 aB 143,0 ± 139,2 aB 100,3 ± 53,2B 876,3 ± 695,2 A 351,5 ± 211,3 abcAB 175,0 ± 76,4 B 0,005 2 198,8 ± 187,4 A 122,0 ± 23,6 aA 80,5 ± 10,6 aA 50,0 ± 0,0 A 682,7 ± 392,1 A 156,5 ± 71,8 cA 565,0 ± 0,0 A 0,004 3 321,7 ± 238,5 133,7 ± 31,1 a 140,5 ± 34,6 a 110,0 ± 0,0 541,8 ± 322,7 279,7 ± 134,5 bc 294,0 ± 0,0 0,093 4 320,7 ± 167,6 140,0 ± 43,7 a 124,0 ± 0,0 a 72,0 ± 0,0 463,2 ± 309,9 214,2 ± 90,6 bc 494,0 ± 0,0 0,154 5 368,3 ± 286,7 183,5 ± 98,3 a --- 62,0 ± 0,0 535,5 ± 372,9 376,6 ± 251,1 abc 644,0 ± 0,0 0,548 6 274,0 ± 77,6 532,0 ± 503,5 a --- 52,0 ± 0,0 613,0 ± 359,6 929,5 ± 458,4 a 843,0 ± 0,0 0,205 7 696,3 ± 424,3 853,0 ± 718,4 a --- 63,0 ± 0,0 488,2 ± 244,7 772,5 ± 170,1 ab 705,0 ± 0,0 0,477 8 672,7 ± 307,9 449,5 ± 311,8 a --- 49,0 ± 0,0 528,8 ± 473,7 388,8 ± 123,8 abc 714,0 ± 0,0 0,775 9 590,0 ± 245,5 312,0 ± 0,0 a --- --- 385,0 ± 290,3 685,8 ± 525,3 ab 416,0 ± 0,0 0,455 P 0,088 0,042 0,040 0,960 0,200 0,002 0,595

* Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 11. Médias ± desvios-padrão dos valores de alanina aminotransferase (UI/L) de galinhas poedeiras, que receberam soro

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 43,8 ± 52,8 34,3 ± 23,7 37,2 ± 14,0 35,7 ± 32,4 22,8 ± 16,5 96,0 ± 147,7 33,7 ±13,7 c 0,504 1 41,0 ± 31,6 19,2 ± 4,8 23,0 ± 16,9 51,5 ± 66,1 23,7 ± 17,2 25,3 ± 15,9 7,5 ± 1,3 c 0,326 2 21,2 ± 8,9 16,7 ± 5,1 15,5 ± 0,7 11,0 ± 0,0 16,3 ± 13,2 27,5 ± 31,4 13,0 ± 0,0 c 0,847 3 67,0 ± 77,5 61,7 ± 37,7 21,5 ± 7,8 98,0 ± 0,0 29,2 ± 26,8 113,7 ± 96,0 132,0 ± 0,0 bc 0,254 4 111,7 ± 89,0 25,7 ± 28,0 11,0 ± 0,0 47,0 ± 0,0 32,2 ± 18,2 124,4 ± 82,3 270,0 ± 0,0 a 0,058 5 126,3 ± 110,9 7,0 ± 1,4 --- 12,0 ± 0,0 33,2 ± 20,4 114,4 ± 86,8 187,0 ± 0,0 ab 0,110 6 100,3 ± 145,9 4,0 ± 0,0 --- 7,0 ± 0,0 28,7 ± 18,8 76,8 ± 129,7 76,0 ± 0,0 bc 0,588 7 12,3 ± 17,9 9,0 ± 9,9 --- 4,0 ± 0,0 45,3 ± 73,2 18,3 ± 8,9 66,0 ± 0,0 bc 0,704 8 8,7 ± 3,5 14,5 ± 13,4 --- 7,0 ± 0,0 22,5 ± 15,5 8,5 ± 5,5 40,0 ± 0,0 c 0,260 9 17,0 ± 8,9 12,0 ± 0,0 --- --- 14,5 ± 12,2 6,5 ± 2,9 26,0 ± 0,0 c 0,332 P 0,184 0,049 0,189 0,900 0,668 0,172 0,003

* Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 12. Médias ± desvios-padrão dos valores de aspartato aminotransferase (UI/L) de galinhas poedeiras, que receberam

soro parasitado com Borrelia anserina, em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3 (Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu -SP, 2015.

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 236,7 ± 44,8 bcA 239,5 ± 22,1 bcA 234,2 ± 27,9 cA 244,0 ± 27,7 aA 207,7 ± 87,2 aA 233,7 ± 61,7 bcA 279,3 ± 146,2 aA 0,795 1 468,3 ± 156,3 abA 380,6 ± 92,8 bcAB 383,4 ± 39,4 bAB 297,5 ± 222,1 aAB 204,0 ± 92,7 aB 453,5 ± 69,4 abcA 405,8 ± 87,3 aAB 0,010 2 573,6 ± 170,4 aA 789,7 ± 22,5 aA 565,0 ± 14,1 aAB 820,0 ± 0,0 aA 236,2 ± 22,7 aB 425,7 ± 169,8 abcAB 500,0 ± 0,0 aAB <0,001 3 453,0 ± 83,2 abcAB 530,0 ± 65,6 bA 573,0 ± 75,0 aA 325,0 ± 0,0 aAB 241,8 ± 33,2 aB 455,7 ± 173,4 abAB 260,0 ± 0,0 aAB 0,005 4 318,7 ± 74,1 abcAB 458,7 ± 114,7 bcA 562,0 ± 0,0 aA 536,0 ± 0,0 aA 216,8 ± 23,3 aB 498,6 ± 55,2 abA 350,0 ± 0,0 aAB <0,001 5 409,0 ± 166,2 abcAB 383,5 ± 170,4 bcAB --- 410,0 ± 0,0 aAB 224,7 ± 46,9 aB 534,4 ± 205,9 aA 238,0 ± 0,0 aAB 0,034 6 361,0 ± 134,0 abcA 279,5 ± 111,0 bcA --- 531,0 ± 0,0 aA 237,7 ± 30,2 aA 435,8 ± 168,5 abcA 539,0 ± 0,0 a 0,095 7 254,3 ± 35,0 bcA 296,5 ± 57,3 bcA --- 353,0 ± 0,0 aA 227,2 ± 17,8 aA 150,5 ± 103,1 cA 575,0 ± 0,0 aA 0,063 8 206,7 ± 33,5 cA 234,0 ± 70,7 cA --- 268,0 ± 0,0 aA 241,7 ± 39,4 aA 316,3 ± 136,9 abcA 590,0 ± 0,0 aA 0,344 9 171,0 ± 38,3 cA 192,0 ± 0,0 bcA --- --- 246,3 ± 67,1 aA 324,3 ± 132,4 abcA 443,0 ± 0,0 aA 0,122

P <0,001 <0,001 <0,001 0,437 0,849 0,003 0,331

* Médias seguidas pela mesma letra, minúscula na coluna e maiúscula na linha, não diferiram estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (P>0,05).

TABELA 13. Médias ± desvios-padrão dos valores da espiroquetemia (x 105_{/mL) em meio de cultivo Barbour-Stoenner-Kelly} (BSK), em dez momentos de análise, com intervalo de cinco dias. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença), grupo 3 (tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Entre parênteses mediana e percentis 25 e 75% de espiroquetas. Botucatu -SP, 2015.

Momento 0 Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

Espiroquetas 1,5 [1-3] AB 2,5 [1-5] AB 2,5 [2-3] AB 4,0 [3-4] A 0,0 [0-0] B 0,0 [0-0] B 2,5 [2-4] AB <0,001 Agrupamentos P 0,5 [0-1] A 1,0 [1-1] A 1,0 [0-1] A 0,5 [0-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,002 Agrupamentos M 1,0 [1-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-1] A 1,0 [1-2] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,5 [0-1] A <0,001 Agrupamentos G 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-1] 0,336 Momento 1 Espiroquetas 0,5 [0-1] A 0,5 [0-2] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-2] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 2,5 [1-3] A 0,007 Agrupamentos P 0,0 [0-1] A 0,5 [0-1] A 0,5 [0-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 2,0 [1-2] A 0,013 Agrupamentos M 0,0 [0-1] A 0,0 [0-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,613 Agrupamentos G 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,181 Momento 2 Espiroquetas 0,0 [0-1] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-1] 0,427 Agrupamentos P 0,5 [0-2] 2,0 [0-3] 0,5 [0-2] 0,5 [0-1] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-1] 0,085 Agrupamentos M 0,0 [0-1] 0,0 [0-1] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,585 Agrupamentos G 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,649 Momento 3 Espiroquetas 0,0 [0-0] 0,5 [0-1] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,073 Agrupamentos P 0,0 [0-0] 0,5 [0-1] 0,0 [0-1] 0,0 [0-1] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,0 [0-1] 0,051 Agrupamentos M 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,5 [0-1] 0,067 Agrupamentos G 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,528

Momento 4 Espiroquetas 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Agrupamentos P 4,0 [3-7] A 0,5 [0-2] AB 0,5 [0-1] AB 1,0 [0-1] AB 0,0 [0-0] B 0,0 [0-0] B 0,5 [0-2] AB 0,001 Agrupamentos M 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-1] 0,056 Agrupamentos G 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Momento 5 Espiroquetas 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Agrupamentos P 0,5 [0-1] 0,5 [0-5] 2,5 [0-3] 0,0 [0-2] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-1] 0,111 Agrupamentos M 1,0 [0-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 0,016 Agrupamentos G 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,423 Momento 6 Espiroquetas 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Agrupamentos P 1,0 [1-1] A 0,5 [0-2] A 1,0 [0-2] A 0,5 [0-1] A 0,0 [0-0] A 0,0 [0-0] A 3,0 [1-4] A 0,010 Agrupamentos M 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-1] 0,0 [0-1] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-1] 0,515 Agrupamentos G 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Momento 7 Espiroquetas 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Agrupamentos P 0,5 [0-1] 2,5 [0-3] 0,5 [0-3] 1,5 [0-2] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,5 [0-2] 0,055 Agrupamentos M 0,0 [0-0] 0,0 [0-2] 0,0 [0-0] 0,5 [0-1] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,166 Agrupamentos G 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Momento 8 Espiroquetas 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00 Agrupamentos P 0,0 [0-1] 0,5 [0-1] 2,5 [1-3] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,0 [1-4] <0,001 Agrupamentos M 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,649 Agrupamentos G 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 0,0 [0-0] 1,00

TABELA 14. Avaliação qualitativa da motilidade das espiroquetas (%) de placas de 12 poços, contendo meio de cultivo Barbour-

Stoenner-Kelly (BSK), avaliados em nove momentos de análise, com intervalo de cinco dias entre cada análise. Classificação de motilidade representada em cruzes (+): ++++ motilidade intensa, +++ vigorosa, ++ ativa, + pouco ativa. Grupo 1 (Controle), grupo 2

(Doença) e grupo 3 (Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu -SP, 2015.

Momentos Grupos

Tratado _{visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão}Luz Doença

0 100% + 100% + 100% + 100% + Ausente Ausente 83,33% +

1 16,66% + 33,33% + Ausente 16,66% + Ausente Ausente 83,33% + 2 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente _Ausente 3 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente 4 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente 16,66% ++++ 5 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente 6 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente 7 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente 8 Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente

TABELA 15. Médias ± desvios-padrão dos valores da reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) (x105_{/mL) de placas de} 12 poços, contendo meio de cultivo Barbour-Stoenner-Kelly (BSK), avaliados em nove momentos de análise, com intervalo de cinco dias entre cada análise. Grupo 1 (controle), grupo 2 (Doença) e grupo 3 (Tratado), grupo 4 (Luz visível), grupo 5 (Nanoemulsão), grupo 6 (Ftalocianina) e grupo 7 (Imunossupressão). Botucatu -SP, 2015.

Momentos Grupos P

Tratado Luz visível Ftalocianina Nanoemulsão Controle Imunossupressão Doença

0 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 1,000 1 4,17 [3,88-4,22] cB 4,02 [3,74-4,23] bB 4,44 [4,13-4,55] bC 4,24 [3,92-4,55] cC 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 4,14 [4,06-4,17] cB <0,001 2 3,54 [3,13-3,66] bcB 3,77 [3,74-3,85] bC 3,50 [3,31-3,55] bB 3,56 [3,37-3,70] bB 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 3,83 [3,54-4,10] cC <0,001 3 2,74 [2,53-2,96] bB 3,42 [2,44-4,19] bC 3,19 [2,41-3,72] bB 2,63 [0,0-3,98] abB 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 2,38 [2,23-3,20] bB 0,002 4 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 1,28 [0,0-2,91] abA 0,125 5 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,648 6 0,0 [0-2,42] bA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,287 7 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 1,000 8 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 1,000 9 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,0 [0,0-0,0] aA 0,423 P <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 1,000 1,000 <0,001

5. CONCLUSÃO

O tratamento do soro parasitado com Borrelia anserina utilizando luz visível associada à ftalocianina de cloro-alumínio propiciou efeito favorável no controle da enfermidade, pois promoveu redução da carga bacteriana e consequentemente redução da taxa de mortalidade, com elevação na concentração da imunoglobulina Y, caracterizando resposta imune das galinhas poedeiras frente a infecção. A terapia fotodinâmica aplicada in vitro provocou alterações no meio de cultivo Barbour-Stoenner-Kelly, dificultando o crescimento da Borrelia anserina.

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