Disciplina de Neurologia Clínica
Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina __________________________________________________________________
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Estudo: A IMPORTÂNCIA DO ÓXIDO NÍTRICO EM DEFEITOS DA CADEIA RESPIRATÓRIA
O estudo do qual você irá participar tem a finalidade de avaliar a importância do óxido nítrico em defeitos da cadeia respiratória. O óxido nítrico é uma molécula presente normalmente na célula e é importante na regulação da função da mitocôndria, uma organela que é responsável pela produção de energia em nosso organismo. Esta energia é produzida por um processo na mitocôndria, que é chamado de cadeia respiratória. Ao mesmo tempo uma produção exagerada de óxido nítrico também pode ter efeitos tóxicos para a célula. Os mecanismos exatos de como o óxido nítrico atua nesta regulação em nosso organismo ainda não é muito claro. O seu papel na mitocôndria, e, portanto na produção de energia em nosso organismo, é muito importante pois defeitos na produção de energia pela mitocôndria podem ocorrer em doenças mitocondriais (doenças genéticas levando a um defeito na cadeia respiratória), no processo de envelhecimento e em diversas doenças neurodegenerativas, como doença de Alzheimer e doença de Parkinson. Resultados deste estudo poderão ser importantes para o conhecimento de como estas doenças acontecem e também poderão ajudar no desenvolvimento de drogas para o tratamento de doenças que têm alterações mitocondriais de causa genética ou doenças neurodegenerativas com comprometimento mitocondrial.
Para este estudo realizaremos o seguinte procedimento:
Realizaremos uma biópsia de pele, ou seja, um pequeno fragmento de pele da região do antebraço ou da região de mais fácil acesso será retirado sob anestesia local.
A biópsia de pele tem o intuito de coletar tecido para a realização de cultura de fibroblastos (células presentes na pele). A biópsia de pele não é realizada rotineiramente em nosso serviço, mas é realizada como método diagnóstico para doenças metabólicas, incluindo as doenças mitocondriais, em instituições do exterior.
Para a biópsia de pele, o participante poderá sentir um leve desconforto no ato da anestesia local, associado à picada da agulha e ao queimor pela injeção do anestésico. Os riscos
deste procedimento são aqueles relacionados à uma pequena cirurgia, como manchas roxas e infecção no local da incisão.
Os fibroblastos em cultura, obtidos da pele, poderão ser utilizados em estudos futuros envolvendo as doenças mitocondriais (doenças genéticas levando a um problema na cadeia respiratória) para esclarecimento dos mecanismos da doença e formas de tratamento.
Todos os participantes deste estudo terão acesso aos profissionais responsáveis pela pesquisa para esclarecimento de eventuais dúvidas. A médica responsável é a Dra. Célia Harumi Tengan, que pode ser encontrada na R. Pedro de Toledo, 781, sétimo andar (UNIFESP-EPM), telefone: 5576-4465. Se você tiver alguma consideração ou dúvida sobre a ética da pesquisa, entre em contato com o Comitê de Ética em Pesquisa (CEP) – Rua Botucatu, 572 – 1º. andar – cj. 14, 5571-1062, FAX: 5539-7162.
É garantida a liberdade da retirada de consentimento a qualquer momento e deixar de participar do estudo, sem qualquer prejuízo à continuidade de seu tratamento na instituição.
As informações obtidas serão analisadas em conjunto com outros pacientes e a identificação do paciente não será divulgada.
Você tem o direito de receber resultados parciais que sejam de conhecimento dos pesquisadores.
Não há despesas pessoais para o participante em qualquer fase do estudo, incluindo exames e consultas. Também não há compensação financeira relacionada à sua participação. Se existir qualquer despesa adicional, ela será absorvida pelo orçamento da pesquisa.
Em caso de dano pessoal, diretamente causado pelos procedimentos propostos neste estudo (nexo causal comprovado), o participante tem dieito a tratamento médico na Instituição, bem como às indenizações legalmente estabelecidas.
Disciplina de Neurologia Clínica
Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina
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Acredito ter sido suficientemente informado a respeito das informações que li ou que foram lidas para mim, descrevendo o estudo “A IMPORTÂNCIA DO ÓXIDO NÍTRICO EM DEFEITOS DA CADEIA RESPIRATÓRIA”.
E discuti com o Dr. ________________________________, sobre a minha decisão em participar desse estudo. Ficaram claros para mim quais são os propósitos do estudo, os procedimentos a serem realizados, seus desconfortos e riscos, as garantias de confidencialidade e de esclarecimentos permanentes. Ficou claro também que minha participação é isenta de despesas e que tenho garantia do acesso a tratamento hospitalar quando necessário. Concordo voluntariamente em participar deste estudo e poderei retirar o meu consentimento a qualquer momento, antes ou durante o mesmo, sem penalidades ou prejuízo ou perda de qualquer benefício que eu possa ter adquirido, ou no meu atendimento neste Serviço.
--- Nome do paciente (legível)
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Assinatura do paciente / representante legal Data ___/___/___
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Assinatura da testemunha Data ___/___/___
Declaro que obtive de forma apropriada e voluntária o Consentimento Livre e Esclarecido deste paciente ou representante legal para a participação neste estudo.
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ABSTRACT
A mitochondrial production of nitric oxide (NO) hás been recently identified. Besides being a free radical, NO also participates in several physiological processes. NO itself is relatively non-reactive and exhibits an inhibitory effect on the respiratory chain, specially, cytochrome c oxidase (COX). NO can also be converted into a number of more reactive derivatives, which can lead to oxidative damage of several mitochondrial components, such as mitochondrial DNA (mtDNA), mitochondrial proteins and membranes. The existence of a mitochondrial nitric oxide synthase suggests that NO has an important regulatory role on mitochondrial function. The aim of this study was to evaluate nitric oxide synthesis in cell lines carrying different respiratory chain defects and to verify if there was protein nitration, which would indicate the presence of oxidative damage by nitrogen radicals. NO synthesis was verified through nitrite quantitation and using a fluorescent NO indicator, DAF-FM diacetate. We analyzed cybrid cell lines carrying mtDNA mutations 3243 A>G, 8344 A>G and mtDNA deletion, and fibroblasts from patients with confirmed and suspected mitochondrial disease. Control samples were: the cell line originated from osteosarcoma 143B and fibroblasts from a normal individual. We observed increased nitrite production in all cybrid cell lines and a decrement in all fibroblasts from patients. All cell lines showed intracellular fluorescence with DAF-FM diacetate. The quantitative analysis showed a significantly increase of the fluorescence obtained for the 8344 A>G cell line and a decrease in most of the fibroblasts. Protein nitration was verified through Western blotting method using the anti-nitrotyrosine antibody, in cybrid cells, fibroblasts and
skeletal muscle. There was no detection of proteins containing nitrotyrosines, suggesting that these samples were not nitrated. Our results suggest a variation of nitric oxide synthesis in certain respiratory chain defects, without indication of oxidative damage as a consequence of nitrogen radicals. This variation can suggest NO involvement on mitochondrial regulatory process of respiratory chain defects. The knowledge of this regulatory process may have implications on treatment strategies of mitochondrial diseases and neurodegenerative diseases with mitochondrial involvement.