O teste de hemólise em ágar sangue foi realizado a fim de se verificar a presença ou não de atividade hemolítica nos isolados de EPEC, tendo sido observado que 21 isolados (17,9%) apresentaram atividade hemolítica e 96 (82,1%) não apresentaram. Dos 21 isolados que demonstraram um perfil de hemólise, 18 (15,4%) foram alfa-hemolíticos e 3 (2,6%) beta- hemolíticos (Tabela 10 e Figura 22).
Nas cepas de tEPEC 02 isolados (13,3%) apresentaram atividade hemolítica (alfa hemólise) e 13 (86,3%) não apresentaram hemólise (gama hemólise). Em aEPEC 16 (15,7%) foram alfa-hemolíticos, 3 (2,9%) foram beta-hemolíticos e 96 (82,1%) gama-hemolíticos (Tabela 10). Não houve diferença estatisticamente significante entre a frequência de isolados que apresentaram atividade hemolítica e os que não apresentaram entre as categorias de EPEC (p=1).
Tabela 10- Resultado do teste de hemólise dos isolados de EPEC oriundos de criança com gastroenterite em Porto Velho/RO.
EPEC
Resultado do teste de hemólise
Alfa hemólise Beta hemólise Gama hemólise
Típica (n=15) 2 (13,3%) 0 (0%) 13 (86,3%)
Atípica (n=102) 16 (15,7%) 3 (2,9%) 83 (81,4%)
Total (n=117) 18 (15,4%) 3 (2,6%) 96 (82,1%)
Figura 22 - Teste de atividade hemolítica em ágar sangue de carneiro 5% em isolados de EPEC oriundos de crianças com gastroenterite em Porto Velho/RO.
Na placa a esquerda, observa-se que os 3 isolados de EPEC apresentaram α-hemólise, devido a presença de um halo esverdeado ao redor das colônias (indica hemólise parcial do eritrócitos). Na placa a direita, observou-se que os 3 isolados apresentaram β-hemólise, devido a presença de um halo transparente ao redor das colônias (indica hemólise total dos eritrócitos).
Neste estudo verificou-se a presença de cepas de EPEC apresentando atividade hemolítica, fato que é de suma importância pois indica que estes isolados estão apresentando um fator de virulência adicional aos descritos para E. coli enteropatogênica pois a atividade hemolítica não é uma característica do mecanismo de patogenicidade desse tipo de bactéria.
A presença de atividade hemolítica tem sido descrita em vários patógenos e em E. coli muitas hemolisinas tem sido identificadas, porém a mais estudada é a α-hemolisina (HlyA) produzida por algumas cepas de E. coli uropatogênicas (UPEC) e em E. coli enterohemorrágica (EHEC), a hemolisina Ehx. Em alguns isolados de EPEC tem sido relatado a presença de uma enterohemolisina (Ehly). No estudo realizado por Magalhães et al., (2011)
sobre a capacidade de hemólise expressada por aEPEC, foi demonstrado que esses isolados apresentam atividade hemolítica devido a expressão de enterohemolisinas (Ehlys) e/ou ClyA (citolisina A).
Neste estudo verifica-se a necessidade de melhor avaliar o papel da presença de atividade hemolítica nos isolados de EPEC, estabelecendo quais os genes envolvidos nesse processo.
CONCLUSÃO
Os resultados apresentados neste trabalho permitiram realizar a caracterização dos isolados de Escherichia coli enteropatogênica, sendo possível determinar diferentes padrões citoaderência (AL, ALL e AA) nesses isolados. Além disso, foi possível verificar que as cepas de EPEC estão apresentando fatores de virulência adicionais, tais como a capacidade de formação de biofilme e a presença de atividade hemolítica, que favorecem a persistência bacteriana e que causam sérios prejuízos ao hospedeiro.
O perfil de resistência aos antibióticos, bem como a detecção de ESBL por testes fenotípicos e moleculares também foi estabelecido neste estudo, e esses resultados poderão contribuir para o conhecimento acerca da resistência bacteriana em isolados de EPEC, visto que poucos estudos desta natureza são realizados nessa região, e também para uma futura orientação terapêutica.
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