Completar o volume com água deionizada.
Fazer outras diluições, dependendo do teor do ferro da amostra.
Fazer leitura em espectrofotômetro de absorção atômica a 248,3nm usando o branco para zerar o aparelho e as soluções padrões para calibração.
CÁLCULO:
Ferro (ug/g ou ppm) = (C) x (V) x FD P ONDE:
C = Concentração do elemento na solução da amostra (ug/ml) V = Volume inicial da solução da amostra em ml
FD = Fator de diluição .
P = Peso da amostra em grama
FD = volume inicial da solução da amostra diluida (ml) volume da alíquota tomada (ml)
% Ferro na amostra = concentração (ppm ou ug/g) 10.000
MÉTODO Nº 41 - MANGANÊS - ABSORÇÃO ATÔMICA
APLICAÇÃO: Ingredientes minerais e suas misturas, produtos ou sub-produtos de origem animal e vegetal, rações e concentrados.
MATERIAL E EQUIPAMENTO:
- Espectrofotômetro de absorção atômica - Forno mufla - Balança analítica - Cadinho de porcelana - Chapa aquecedora - Balões volumétricos - Pipetas graduadas
- Pipetas volumétricas - Proveta
- Funil de vidro
- Papel de filtro qualitativo REAGENTES E SOLUCÕES:
a. Ácido clorídrico P.A. (d = 1,19g/l) b. Solução de ácido clorídrico (1 + 1)
c. Solução padrão estoque de manganês 1000ug/ml:
Dissolver 1g de manganês (ampola) em balão volumétrico de 1000ml e completar o volume com água deionizada.
d. Solução padrão de manganês 50ug/ml:
Pipetar 5,0ml da solução de manganês 1000ug/ml. Transferir para balão volumétrico de 100ml adicionar 1ml de ácido clorídrico e completar o volume com água deionizada. e. Solução padrão de trabalho de manganês 0,5ug/ml:
Pipetar 1,0 ml da solução de manganês 50ug/ml, transferir para balão volumétrico de 100ml adicionar a mesma quantidade de ácido clorídrico utilizada na solução amostra e completar o volume com água deionizada.
f. Solução padrão de trabalho de manganês 1,0ug/ml.
Pipetar 2,0ml da solução de manganês 50ug/ml, transferir para balão volumétrico de 100ml, adicionar a mesma quantidade de ácido clorídrido utilizada na solução amostra e completar o volume com água deionizada.
g. Branco.
Diluir em balão volumétrico de 100ml, a mesma quantidade de ácido clorídrico utilizada na solução amostra. Completar o volume com água deionizada.
PROCEDIMENTO:
1. PARA INGREDIENTES MINERAIS:
Pesar 0,1 a 1,0g de amostra em bequer de 100ml.
Adicionar 20ml de ácido clorídrico concentrado e levar a chapa aquecedora. Seguir conforme o item 3.
2. PARA MISTURAS MINERAIS, PRODUTOS E SUB-PRODUTOS DE ORIGEM ANIMAL E VEGETAL, RAÇÕES E CONCENTRADOS:
Pesar 1,0 a 5,9g de amostra em cadinho de porcelana. Calcinar por 4 horas a 560ºC as amostras que contenham matéria orgânica.
Adicionar 20ml de ácido clorídrico (1 + 1) e levar a chapa aquecedora. Seguir conforme o item 3.
3. PARA TODOS OS TIPOS DE AMOSTRAS, APÓS A DIGESTAO COM ÁCIDO CLORÍDRICO:
Filtrar em balão volumétrico de 250ml. Completar o volume com água deionizada.
Fazer outras diluições, dependendo do teor do manganês da amostra.
Fazer leitura em espectrofotômetro de absorção atômica a 279,5nm usando o branco para zerar o aparelho e as soluções padrões para calibração.
Ferro (ug/g ou ppm) = (C) x (V) x FD P ONDE:
C = Concentração do elemento na solução da amostra (ug/ml) V = Volume inicial da solução da amostra em ml
FD = Fator de diluição
P = Peso da amostra em grama
FD = volume inicial da solução da amostra diluida (ml) volume da alíquota tomada (ml)
% de manganês na amostra = concentração (ppm ou ug/g) 10.000
MÉTODO Nº 42 - MANGANÊS VIA ÚMIDA APLICAÇÃO: Sais de manganês.
PRINCÍPIO: Fundamenta-se na oxidação do manganês em meio ácido. O periodato oxida lentamente os sais de manganês a permanganato que é medido colorimetricamente.
MATERIAL E EQUIPAMENTO:
- Fotocolorímetro com capacidade de 530nm - Chapa aquecedora
- Bureta 25 ml divisão 1/10 - Pipeta volumétrica de 5ml
- Balões volumétricos 100ml e 500ml - Bequer 100ml, 250ml e 600ml - Papel filtro qualitativo
- Almofariz com pistilo REAGENTES:
- Ácido clorídrico P.A. (d = 1,19g/l) - Ácido nítrico P.A. (d = 1,42g/l) - Metaperiodato de Potássjo P.A. - Ácido fosfórico P.A.
- Sulfato de manganês monohidratado P.A. PROCEDIMENTO:
a. Curva padrão:
1) Pipetar volumetricamente alíquotas de 0,5/0,1/2,0/ 3,0ml de MnSO4. H2O (solução padrão 1ml = 1mg Mn).
2) Adicionar em cada alíquota: - 100ml água destilada - 10ml HNO3 P.A. - 10ml H3PO4 P.A. - 0,5g KIO4 P.A.
3) Ferver por 10 minutos até que a solução adquira coloração semelhante a do permanganato.
4) Esfriar e completar a 200ml em balão volumétrico.
5) Efetuar leitura em absorbância ou transmitância (530nm) usando como branco os reagentes mencionados no item 2, elevando a 200ml com água destilada.
b. Preparaçào da amostra:
1) Homogeneizar a amostra em almofariz 2) Pesar 0,5g em bequer de 250ml
3) Adicionar 8ml HCl P.A. aquecer em chapa aquecedora. Evaporar até quase secura. 4) Dissolver em água destilada e transferir quantitativamente para balão volumétrico de 500ml completando o volume. Filtrar desprezando os 10 primeiros ml.
5) Retirar do filtrado uma alíquota de 5ml, transferir para bequer de 600ml. Prosseguir como descrito nos itens a-2, a-3 e a-4.
6) Determinar a absorbância ou transmitância, comparando a leitura obtida com a de um padrão mais próximo a mesma.
CÁLCULOS:
Manganês % = Absorbância amostra x 100
Absorbância padrão x Peso da amostra em g na alíquota OBSERVAÇÃO:
A alíquota a ser tomada da solução estoque, deverá adequar-se de tal forma que a leitura esteja sempre na faixa entre 15 a 60% T ou 0,824 a 0,222 de absorbância. SOLUÇÃO:
a. Solução - Padrão de Manganês 1,0 mg/ml
Dissolver 0,3076g MnSO4. H2O em balão volumétrico de 100ml. Completar o volume e homogeneizar.
MÉTODO Nº 43 - FERRO VIA ÚMIDA APLICAÇÃO: Sais de ferro.
PRINCÍPIO: Fundamenta-se na redução do Fe+++ a Fe++ pelo cloreto estanoso e posterior titulação.
MATERIAL E EQUIPAMENTO: - Chapa aquecedora
- Erlenmeyer de 500ml
- Bureta ambar capacidade 50ml divisão 1/10 REAGENTES:
- Ácido clorídrico P.A. (d =1,19g/l) - Cloreto estanoso P.A.
- Cloreto mercuroso P.A. - Sulfato de manganês P.A. - Ácido fosfórico P.A. (d = 1,7g/l) - Permanganato de Potássio P.A. - Oxalato de sódio P.A.
- Ácido sulfúrico P.A. (d = 1,84g/l) PROCEDIMENTO:
1. Homogeneizar a amostra em almofariz.
2. Pesar 0,3g e transferir para erlenemeyer de 500ml. Adicionar 50ml de HCl 20% e digerir até quase secura.
3. Gotejar solução de cloreto estanoso quente até tornar-se incolor. 4. Esfriar em água corrente.
5. Adicionar 10ml de solução cloreto mercuroso, 100ml de água destilada e 25ml de solução Zimmermann-Reinhart.
6. Deixar em repouso por 5 minutos. Adicionar 25ml de água destilada. 7. Titular com KMnO4 0,1N até a coloração levemente rósea persistente. CÁLCULO:
Fe % = V x F x 0,5585 P
ONDE:
V = Volume gasto de KMnO4 0,1N F = Fator de correção do KMnO4 0,1N P = Peso da amostra em grama SOLUÇOES:
a. Solução de ácido clorídrico 1 + 2
Diluir uma parte de ácido clorídrico P.A. em duas partes de água destilada. b. Solução cloreto estanoso 15% (P/V)
Pesar 7,5g de cloreto estanoso P.A, e dissolver em bequer com +/- 20ml de solução de ácido clorídrico 1 + 2. Transferir para balão volumétrico de 50ml, e completar o volume com ácido clorídrico 1+2.
NOTA: Preparar esta solução momentos antes do uso. c. Ácido clorídrico 20% (P/V)
Medir 47,5ml de ácido clorídrico P.A. e transferir para balão volumétrico de 100ml, contendo aproximadamente 40ml de água destilada.
Esfriar e completar o volume.
d. Solução de Zimmermann-Reinhardt
Dissolver 70g de MnSO4. H2O P.A. em 500ml de água destilada. Adicionar 125ml de H2SO4 P.A. e 125ml de H3PO4. Agitar e completar o volume para 1000ml com água destilada.
e. Solução permanganato de potássio 0,1N
Dissolver 3,3g de KMnO4 P.A. em bequer contendo aproximadamente 300/400ml de água destilada a 60/70ºC por duas horas. Esfriar, transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1000ml e completar o volume. Deixar em repouso por 72 horas ao abrigo da luz. Filtrar em cadinho de vidro sinterizado ou amianto e estocar em frasco ambar.
PADRONIZAÇÃO:
Pesar exatamente 3,35g de oxalato de sódio (Na2C2O4) P.A. previamente seco em estufa de 105ºC por 2 horas. Dissolver em bequer contendo aproximadamente 100ml de água destilada. Transferir para balão volumétrico de 1000ml e completar o volume. Transferir 10ml de solução Na2C2O4 para erlenmeyer de 250ml e adicionar 10ml H2SO4 1 + 1. Aquecer a 70/80ºC e titular até coloração levemente rósea persistente por 30 segundos.
CÁLCULO DO FATOR:
P NR
ONDE:
E = Equivalente grama de oxalato de sódio P = Peso do oxalato de sódio em mg na alíquota V = Volume de KMnO4 gasto na titulação
NR = Normalidade real NE = Normalidade esperada F = Fator de correção
MÉTODO Nº 44 - ZINCO VIA ÚMIDA APLICAÇÃO: Sais de zinco,
PRINCÍPIO: Baseia-se na reação do zinco com cloreto de amônia em meio ácido. O excesso do ácido presente é titulado com solução alcalina de título conhecido.
MATERIAL E EQUIPAMENTO: - Forno mufla
- Balança analítica - Chapa aquecedora
- Cápsula .ou cadinho de porcelana - Erlenmeyer de 500ml
- Bureta capacidade 50ml divisão 1/10 - Almofariz com pistilo
REAGENTES:
- Ácido sulfúrico P.A. (d = 1,84g/l) - Hidróxido de sódio P.A.
- Cloreto de amônio P.A. - Vermelho de metila P.A. PROCEOIMENTO:
1. Homogeneizar a amostra em almofariz.
2. Pesar 1,5g da amostra em cadinho ou cápsula de porcelana.
3. Levar à mufla e aumentar gradualmente a temperatura até 550/600ºC. Manter durante 2 horas.
4. Retirar a 250ºC e resfriar em dessecador até temperatura ambiente.
5. Transferir quantitativamente com o auxílio de bastão de vidro e água destilada, para erlenmeyer de 500ml, contendo 2,5g de cloreto de amônia.
6. Adicionar 50ml de H2SO4 1N. Aquecer até dissolução.
7. Adicionar 5 a 10 gotas de vermelho de metila a 0,1 % e titular com NaOH 1N, até viragem de vermelho para amarelo.
CÁLCULO:
Zinco % = (V1 )( F1) - (V2 x F2) x 0,032685 x 100 P
ONDE:
V1 = Volume de H2SO4 1N empregado F1 = Fator de correção de H2SO4 1N
V2 = Volume de NaOH 1N gasto na titulação F2 = Fator de correção de NaOH 1N
SOLUÇOES REAGENTES E VOLUMÉTRICAS: a. Solução volumétrica de ácido sulfúrico 1N
Medir 27,5ml de H2SO4 P.A. e transferir para balão volumétrico de 1000ml, contendo aproximadamente 700ml de água destilada. Esfriar e completar o volume.
PADRONIZAÇÃO:
Pesar com exatidão 1,0g de Carbonato de sódio anidro (Na2CO3) previamente seco. Adicionar 20ml da solução H2SO4 1N a ser padronizada e 4 gotas de vermelho metila. Titular gotejando a solução H2SO4 até o aparecimento da coloração rósea. Aquecer até a ebulição. Esfriar. Havendo permanência da cor rósea, considerar terminada.
CÁLCULO DO FATOR:
P NR
N = V x E F = NE
ONDE:
P = Peso do Na2CO3 em mg NR = Normalidade real da solução V = Volume gasto na titulação em ml E = Equivalente grama de Na2CO3 NE = Normalidade esperada
b. Solução volumétrica de hidróxido de sódio 1N
Dissolver aproximadamente 45g de NaOH P.A. em água destilada.
Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 1.000ml e completar o volume. PADRONIZAÇÃO:
Pesar com exatidão 1,5g de Biftalato de Potássio previamente seco em estufa por duas horas. Dissolver em erlenmeyer com aproximadamente 75ml de água destilada. Adicionar 4 gotas de solução alcoólica de fenolftaleína 1%; titular com a solução de NaOH até coloração rósea.
CÁLCULO DO FATOR:
P NR
N = V x E F = NE
ONDE:
P = Peso do biftalato de potássio em mg NR = Normalidade real da solução V = Volume gasto na titulação em ml
E = Equivalente grama de biftalato de potássio NE = Normalidade esperada
c. Solução indicadora de vermelho de metila 0,1N
Dissolver 0,1g de vermelho de metila em 60ml álcool etílico. Transferir para balão volumétrico de 100ml e completar o volume. d. Solução indicadora de fenolftaleína 1%
Dissolver 1,0g fenolftaleína em aproximadamente 60ml.de álcool etílico P.A. Transferir para balão volumétrico de 100ml e completar o volume.
MÉTODO Nº 45- COBRE - VIA ÚMIDA APLICAÇÃO: Sais de çobre.
PRINCÍPIO: Os sais cúpricos, quando tratados çom Iodeto de Potássio liberam iodo. O iodo cuproso formado é insolúvel em ácido acético e solúvel em excesso de Iodeto de Potássio. O iodo liberado pela ação do Acetato Cúprico sobre o Iodeto de Potássio é determinado por titulação com Tiossulfato de Sódio 0,1N.
MATERIAL E EQUIPAMENTO: - Balança analítica
- Erlenmeyer de 250 ml com tampa esmerilhada - Provetas graduadas de 50 e 100ml
- Bureta ambar 50ml çom divisão 1/10 - Almofariz com pistilo
- Chapa aquecedora REAGENTES:
- Ácido nítrico P.A. (d = 1,42g/l) - Hidróxido de amônio P.A. - Ácido acético glacial P.A. - Amido P.A.
- Tiossulfato de sódio P.A. - Bicromato de potássIo P.A. - Iodeto de potássio P.A. PROCEDIMENTO:
1. Homogeneizar a amostra em almofariz.
2. Pesar de 0,1 a 0,3g da amostra, dependendo do teor de cobre esperado. Transferir para erlenmeyer de 250ml.
3. Adicionar 12,5ml de HNO3 1 + 3 e dissolver.
4. Adicionar 12,5ml de água destilada e NHOH 1 + 1 gota a gota, até coloração azul escuro, formando um precipitado de CU(OH)2.
5. Ferver em chapa aquecedora por 3 minutos.
6. Acrescentar 3 a 4ml de ácido acético glacial, para dissolver o precipitado. Esfriar. 7. Adicionar 1,0g de Iodeto de Potássio e titular com solução padronizada de Na2S2O3 0,1N, até que a cor mude de marrom para amarelo.
OBSERVAÇÃO: Titular rapidamente para que não ocorra perda por oxidação.
8. Adicionar 1ml de solução de amido 1% e prosseguir a titulação cautelosamente até que a cor azul desapareça.
CÁLCULO:
Cobre % = 0,636 x V x F P ONDE:
V = Volume de Na2S203 0,1N gasto na titulação F = Fator de correção do Na2S2O3 0,1N
P = Peso da amostra em grama
SOLUÇOES REAGENTES E VOLUMÉTRICAS: a. Ácido Nítrico 1 + 3
Transferir 250ml de HNO3 P.A. para balão volumétrico de 1000ml, contendo aproximadamente 500ml de água destilada. Esfriar e completar o volume.
b. Hidróxido de Amônio 1 + 1
Transferir 500ml de hidróxido de amônio P.A. para balão volumétrico de 1000ml e completar o volume com água destilada.
c. Solução de Amido 1%
Pesar 1 grama de amido em bequer de 100ml. Adicionar gotas de água destilada fria até formar uma pasta lisa e fina. Acrescentar 80ml de água fervente, agitando constantemente com um bastão de vidro. Ferver por um minuto. Esfriar e transferir para balão volumétrico de 100ml completando o volume.
OBSERVAÇÃO: Preparar esta solução momentos antes do uso. d. Solução de Ácido Clorídrico 1N
Transferir 83,5ml HCI P.A. para balão volumétrico de 1000ml, contendo aproximadamente 500ml de água destilada. Esfriar e completar o volume.
e. Solução Volumétrica de Tiossulfato de Sódio 0,1N
Pesar 24,9g de Na2S2O3.5H20 e diluir em 1000ml de água destilada. PADRONIZAÇAO:
Pesar 0,20g de K2Cr2O7 seco a 100ºC / 2 horas em erlenmeyer de 250ml, com tampa esmerilhada.
Dissolver com 80ml de água destilada contendo 2 gramas de iodeto de potássio.
Adicionar 20ml de HCI 1N e guardar imediatamente no escuro por exatamente 10minutos.
Titular imediatamente com Na2S2O3.5H2 0,1N até viragem de cor marrom para amarelo.
Adicionar 1 ml de solução de amido 1% e prosseguir a titulação até o desaparecimento da coloração azul.
CÁLCULO DO FATOR:
P NR
N = V x E F = NE
ONDE:
NR = Normalidade real da solução P = Peso de K2Cr2O7 em miligrama V = Volume gasto na titulação em ml E = Equivalente grama de K2Cr2O7 NE = Normalidade esperada
F = Fator de Correção
MÉTODO Nº 46 - COBALTO - VIA ÚMIDA APLICAÇÃO: Sulfato de cobalto.
PRINCÍPIO: Fundamenta-se na titulação complexométrica do cobalto por uma solução de sal sódico do EDTA em presença do indicador.
MATERIAL E EQUIPAMENTO: - Balança analítica
- Bequer 400ml
- Pipeta volumétrica 25ml - Bureta50 ml divisão 1/10 REAGENTES:
- EDTA P.A. sal sódico - Hidróxido de amônio P.A. - Acetato de amônio P.A. - Murexida P.A.
PROCEDIMENTO:
1. Pesar 5,0g da amostra e dissolver em água destilada com leve aquecimento. Esfriar e filtrar se necessário com papel de filtro qualitativo, recolhendo em balão volumétrica de 500mI. Completar o volume com água destilada.
2. Transferir uma alíquota de 25ml para bequer de 400ml. Adicionar 5,0g de acetato de amônio e ajustar o pH com hidróxido de amônia para um valor próximo de 12. 3. Adicionar uma pitada de murexida e titular com EDTA 0,1M padronizado, até viragem de amarelo para lilás, passando pela coloração vinho intermediária.
CÁLCULO:
Cobaldo % = V x F x 0,5893 P ONDE:
V = Volume de EDTA 0,1M gasto na titulação F = Fator de correção de EDTA 0,1M
P = Peso da amostra em grama OBSERVAÇAO:
Se alguma amostra for insolúvel em água, recomeçar a análise, procedendo a uma digestão com +/- 30ml de HCI 1 + 1. Ferver em bequer de 250ml, provido de vidro de relógio, até perto da secura.
SOLUÇOES REAGENTES E VOLUMÉTRICAS: a. Solução volumétrica de EDTA 0,1 M
Pesar com exatidão 37,22g de EDTA, dissolver e transferir para balão volumétrico de 1000ml. Completar o volume com água destilada.
NOTA: Guardar esta solução em frasco de polietileno PADRONIZAÇÃO:
Pesar 2,5275g de Carbonato de cálcio P.A. previamente seco e transferir para erlenmeyer de 250ml. Adicionar ácido clorídrico 10% em quantidade suficiente para dissolver o sal. Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 250ml com água destilada, completando o volume. Pipetar uma alíquota de 25ml e adicionar 5ml de trietanolamina 20% e 3 ml NaOH4N. Adicionar uma pitada de calcon e titular com EDTA 0 1M.
CALCULO DOFATOR:
P NR
N = V x E F = NE
P = Peso do CaCO3 em miligramas NR = Normalidade real da solução V = Volume gasto na titulação em ml E = Equivalente grama de CaCO3 N~ = Normalidade esperada
MÉTODO Nº 47 - IODO - VIA ÚMIDA APLICAÇÃO: Iodatos de cálcio e potássio.
PRINCÍPIO: Os sais iodatados, quando tratados com Iodeto de potássio em meio ácido, liberam o iodo. O iodo liberado pela ação do iodeto de potássio e ácido sulfúrico é determinado por titulação com tiossulfato de sódio 0,1N.
MATERIAL E EQUIPAMENTO:
- Erlenmeyer 300 ml com tampa esmerilhada - Proveta 100ml
- pipeta de 10ml
- Bureta ambar de 50ml, divisão 1/10 REAGENTES:
- Iodeto de potássio P.A.
- Acido sulfúrico P.A. (d = 1,84g/l) - Tiossulfato de sódio P.A..
- Amido P.A.
- Bicromato de potássio P.A. PROCEDIMENTO:
1. Pesar de 0,1g da amostra em erlenmeyer de 300ml com tampa esmerilhada. 2. Adicionar 100ml de KI 10%.
3. Adicionar 10ml H2SO4 10%.
4. Agitar até dissolução e deixar em repouso por 10 minutos ao abrigo da luz. 5. Titular com Na2S203 0,1 N até cDIDral;ãD amarelo pálido.
6. Adicionar 1ml de solução de amido e titular até descoloração total do azuI. CÁLCULO:
Iodo = V x F x 0,2116 P ONDE:
V = Volume de Na2S2O3 0,1N gasto F = Fator de correção do Na252O3 0,1N P = Peso da amostra em grama
SOLUÇÕES REAGENTES E VOLUMÉTRICAS: a. Solução de iodeto de potássio 10%
Pesar 50g de KI P.A. e dissolver em bequer com +/-200 ml de água destilada. Transferir para balão volumétrico de 500ml e completar o volume.
NOTA: Preparar esta solução, momentos antes do uso. b. Solução de ácido sulfúrico 10%
Medir 5,6ml de H25O4 P.A. (d = 1,84g/l) e transferir para balão volumétrico de 100ml, contendo +/- 70ml de água destilada. Esfriar e completar o volume.
c. Solução de Amido 1%
Pesar 1 grama de amido P.A. e transferir para bequer de 250ml. Adicionar +/- 50ml de água destilada e aquecer até ebulição. Esfriar.
Transferir para balão volumétrico de 100ml e completar o volume. d. Solução volumétrica de Na2S2O3 0,1N
Pesar 24,9g de Na2S2O3. 5H2O P.A. e 0,2g de Na2CO3 P.A. anidro.
Transferir para balão volumétrico de 1.000ml e dissolver com água destilada completando o volume.
PADRONIZAÇÃO:
Pesar 0,2g de K2Cr2O7 seco em erlenmeyer de boca esmerilhada. Dissolver com 80ml de água destilada. Adicionar 2g de KI P.A. e 20ml de HCl 1N. Tampar e guardar no escuro por 10 minutos. Efetuar uma pré-titulação com solução de Tiossulfato de Sódio 0,1N até coloração amarela. Adicionar 1ml de solução de amido 1% e prosseguir a titulação até a descoloração total do azul.
CÁLCULO DO FATOR:
P NR
N = V x E F = NE
ONDE:
NR = Normalidade real da solução P = Peso de K2Cr2O7 em miligrama V = Volume gasto na titulação E = Equivalente grama de K2Cr2O7 NE = Normalidade esperada
F = Fator de Correção
MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS MÉTODO Nº 01 - CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS
APLICAÇÃO: Produtos ou sub-produtos de origem animal, rações e concentrados. MEIOS DE CULTURA:
- Agar oxitetraciclina glicose extrato de levedura - Água peptonada a 1%, tamponada.
PROCEDIMENTO:
1. Pesar assepticamente 25g da amostra homogeneizada, adicionar 225ml de água peptonada a 1%, tamponada. Homogeneizar. Preparar as diluições necessárias.
2. Transferir, de cada diluição 1ml para placas de Petri, em duplicata.
3. Adicionar em cada placa 15ml de agar oxitetraciclina glicose extrato de levedura, previamente fundida e mantida a 45ºC. Homogeneizar e deixar solidificar.
4. Incubar a 22/25ºC por 5 a 7 dias.
5. Selecionar placas com 10 - 100 colônias.
6. Contar as colônias e expressar o resultados como número de bolores e leveduras viáveis por grama do produto.
PREPARO DO MEIO DE CULTURA
A. Agar Oxitetraciclina Glicose Extrato de Levedura
Extrato de Levedura 5,0g
D (+) glicose 10,0g
Ágar 15,0g
Suspender os componentes em um litro de água destilada ou deionizada, ferver até a completa dissolução. Distribuir em frascos e esterilizara 121ºC por 15 minutos. Antes da utilização adicionar 0,1g de oxitetraciclina por 1 litro do meio. Preparar solução aquosa do antibiótico.
pH final: 6,5 +/-0,2
B. Agua Peptonada a 1% Tamponada
Peptona de carne 10,0g
Cloreto de sódio 5,0g
Hidrogeno fostato de sódio (NaHPO4) 9,0g
Dihidrogenofosfato de potássio (KH2P)4) 5,0g
Dissolver os componentes em 1 litro de água destilada ou deionizada.
Distribuir em frascos volumes de 225ml. Autoclavar a 121ºC por 15 minutos. pH final: 7,2 +/- 0,2
MÉTODO Nº 02 - CONTAGEM DE E. COLI I
APLICAÇÃO: Produtos ou sub-produtos de origem animal, rações e concentrados. MEIOS DE CULTURA:
- Água peptonada a 1%, tamponada. - Ágar cristal violeta vermelho neutro bile - Caldo triptona
- Caldo VM - VP
- Ágar citrato de Simmons - Ágar nutritivo
PROCEDIMENTO:
1. Pesar assepticamente 25g da amostra homogeneizada e adicionar 225ml de água peptonada a 1%. Homogeneizar. Manter à temperatura ambiente P9r 2 horas para revitalizar as células debilitadas. Preparar as diluições necessárias.
2. Pipetar alíquotas de 1ml de cada diluição e transferir para placas de Petri, em duplicata, acrescentar 15ml de agar cristal violeta vermelho neutro bile, previamente fundido e mantido a 45ºC. Homogeneizar e deixar solidificar. Acrescentar uma segunda camada do mesmo agar (aproximadamente 10ml) e deixar solidificar.
3. Incubar a 44ºC por 24 horas.
4. Selecionar placas que apresentem entre 15 - 150 colônias de cor roxo avermelhada (fucsia) rodeadas por um halo de precipitação da mesma cor.
5. Contar as colônias típicas. Confirmar realizando as provas de vermelho de metila, Voges-Proskauer, indol e citrato.
6. Repicar em agar nutritivo inclinado, 5 colônias ou um numero igual à raiz quadrada das colônias contadas na placa. Incubar a 35ºC por 24 horas.
7. Transferir a cultura do agar inclinado para os seguintes meios: caldo triptona, caldo