BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8596 R02 06.2015 por
BIO-FLASH
®HSV-1 IgG
3000-8596 50 testes
BIO-FLASH HSV-1 IgG é um ensaio imunológico quimiluminescente de dois passos totalmente automatizado, para a determinação qualitativa de anticorpos IgG contra o vírus Herpes Simplex tipo 1 em plasma ou soro humano com o instrumento BIO-FLASH.
Sumário
O vírus Herpes Simplex (HSV) é um patógeno humano de ampla propagação. Uma infecção por HSV normalmente causa manifestações subclínicas.1 Porém, pode causar infecção generalizada e fatal em recém-nascidos e pessoas imunocomprometidas. Dois tipos de HSV são sorologicamente distinguíveis: HSV-1 e HSV-2.2 Ambos apresentam diferenças biológicas e epidemiológicas. Embora ambos os vírus infectem células epiteliais, o HSV-1 é normalmente associado com infecções orais e lesões acima da cintura, e o HSV-2 é associado com infecções genitais e lesões abaixo da cintura. Porém, uma proporção reconhecida, mas variável de infecção genital é atribuível ao HSV-1, e a distinção do tipo de vírus é importante, uma vez que as infecções genitais por HSV-1 não são clinicamente tão graves e são menos suscetíveis de recorrência. Devido à forte reatividade cruzada sorológica entre HSV-1 e HSV-2, o diagnóstico sorológico tipo-específico tem sido tecnicamente muito difícil. Porém, o uso da glicoproteína G (gG1) recombinante do HSV-1 permite a determinação de anticorpos específicos somente ao HSV-1.2,3,4,5,6
O pronto reconhecimento da infecção por herpes simplex e o início precoce da terapia são de extrema importância no tratamento da doença.7
Princípio
Quando as micropartículas paramagnéticas de BIO-FLASH HSV-1 IgG são misturadas e incubadas com a amostra, se esta apresenta anticorpos específicos anti-herpes tipo 1, estes se combinam com o antígeno gG1 recombinante específico do HSV-1 que recobre as micropartículas. Depois de uma separação magnética e lavagem para eliminar resíduos da amostra, se adiciona um traçador que consiste em um anticorpo monoclonal anti-IgG humana marcado com isoluminol, que se une aos anticorpos IgG anti-herpes tipo 1 capturados pelas micropartículas. Depois de uma segunda incubação, separação magnética e lavagem, se adicionam os reagentes que ativam a reação quimiluminescente. A luz emitida é medida como unidades relativas de luz (URL) pelo luminômetro do BIO-FLASH. As URLs são diretamente proporcionais à quantidade de anticorpos IgG anti-HSV-1 na amostra.
OBSERVAÇÃO: A gG1 é uma proteína recombinante produzida pela tecnologia IBES® que usa insetos vivos como biorreatores. Esta tecnologia de Algenex foi licenciada para Biokit.
O BIO-FLASH utiliza um método de redução de dados com ajuste a uma curva logística de 4 parâmetros (4PLC) para gerar uma Curva de Calibração Mestre (CCM). Esta curva vem predefinida, depende do lote e é guardada no instrumento através do código de barras do cartucho. Com a leitura dos calibradores (que se fornecem em um kit separado), a CCM predefinida se transforma em uma Curva de Calibração de Trabalho (CCT) nova e específica para o instrumento. As concentrações dos calibradores estão incluídas nos códigos de barras dos tubos dos calibradores.
Esquema da reação:
Partícula magnética Amostra Traçador Emissão de luz
Ativadores (Triggers)
URL LER ALTERAÇÕES DESTACADAS
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BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8596 R02 06.2015 por Precauções
Os reagentes BIO-FLASH são para diagnóstico IN VITRO. Uso exclusivo por profissionais.
A azida sódica pode reagir com encanamentos e ralos de chumbo ou cobre originando azidas metálicas altamente explosivas. Ao eliminar os restos de reagentes, fazê-lo em abundante volume de água.
ATENÇÃO: MATERIAL DE RISCO BIOLÓGICO.
Descartar todos os materiais usados em recipientes adequados para material bio-contaminante. Por favor, não reutilize nem reintroduza reagentes nos cartuchos ou frascos.
Classe de perigo
Não classificado.
Advertências de perigo
Nenhuma.
Recomendações de prudência
P280: Usar luvas de proteção/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial.
P305+351+338: SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com água durante vários minutos. Se usar lentes de contato, retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar.
Coleta e conservação das amostras
Usar soro fresco (inclusive tubos com gel separador de soro) ou plasma (EDTA, Li-Heparina, Na-Heparina e Na-Citrato). Outros anticoagulantes devem ser comprovados antes de utilizar-se. Os anticoagulantes líquidos como o citrato de sódio exercem um efeito de diluição e podem reduzir a concentração nas amostras de pacientes. As amostras não devem ser inativadas por calor. As partículas em suspensão devem ser eliminadas por centrifugação. Nas diretrizes CLSI H18-A3 e H21-A5 encontrará mais informação sobre o manuseio, o transporte, o processamento e a conservação das amostras.
Soro
As amostras de soro podem ser conservadas a 2-8°C durante 8 dias. Para um período de tempo mais longo, devem ser congeladas a uma temperatura igual ou inferior a -20°C. As amostras podem congelar-se/descongelar-se no máximo 3 vezes. Misturá-las bem depois de descongelar. Comprove que não haja bolhas nas amostras e, em caso contrário, elimine-as todas antes da análise.
Plasma
As amostras de plasma podem ser conservadas a 2-8°C durante 8 dias. Para um período de tempo mais longo, devem ser congeladas a uma temperatura igual ou inferior a -20°C. Descongelar o plasma a 37°C. As amostras podem congelar-se/descongelar-se no máximo 3 vezes. Misturá-las bem depois de descongelar. Comprove que não haja bolhas nas amostras e, em caso contrário, elimine-as todas antes da análise.
Volume de amostra
O volume da amostra necessário para realizar um único teste com BIO-FLASH HSV-1 IgG varia em função do tipo de recipiente que se utilize. Um teste requer ao menos 25 µL mais o volume morto, que é de 200 µL se é utilizada a copa de amostra recomendada (REF 3000-8209).
Outros materiais
Os seguintes materiais não são fornecidos com o cartucho de reagentes e devem ser comprados por separado. REF 3000-8597 BIO-FLASH HSV-1 IgG Calibrators (Calibradores)
REF 3000-8598 BIO-FLASH HSV-1 IgG Controls (Controles)
Leia com atenção as instruções correspondentes se deseja mais informação.
Não utilize outros calibradores. A informação que necessita o instrumento BIO-FLASH para calibrar o ensaio BIO-FLASH HSV-1 IgG está incluída nos códigos de barras dos tubos.
Utilizar controles de outros fabricantes pode dar lugar a resultados imprevistos.
Assegure-se de que no instrumento BIO-FLASH haja uma quantidade suficiente dos seguintes consumíveis antes de processar amostras, calibradores ou controles:
REF 3000-8206 BIO-FLASH Cuvettes (Cubetas)
Nota: O desenho da cubeta é protegido por patente (EUA D560,816 / EC Design 000762984-0001)
REF 3000-8204 BIO-FLASH Triggers (Ativadores)
Instrumento / realização do ensaio
No Manual do Usuário do BIO-FLASH encontrará as instruções completas para realizar o ensaio. Calibração
O código de barras do cartucho contém uma Curva de Calibração Mestre (CCM) que é válida para o lote de reagentes. No entanto, a Curva de Calibração de Trabalho (CCT) é necessária para todos os testes. A CCT é específica para cada lote e válida até a data de validade do lote. É preciso obter uma nova CCT quando os resultados dos controles saiam fora do intervalo de aceitação ou quando se tenha realizado ajustes no instrumento.
Leia com atenção o Manual do Usuário do BIO-FLASH para configurar uma CCT. Controle de qualidade
Para realizar um programa completo de controle de qualidade é recomendável passar dois níveis de controles. Os controles negativo e positivo BIO-FLASH HSV-1 IgG foram desenhados para tal programa. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça a sua própria média e desvio padrão e um programa de controle de qualidade para monitorizar seus resultados. Os controles devem ser analisados ao menos cada 24 horas por dia de utilização. Se os controles estão fora do intervalo pode ser necessário recalibrar o instrumento. No Manual do Usuário do instrumento encontrará mais informação. Para a identificação e resolução de situações anormais de controle de qualidade, consulte Westgard et al.8
Conservação e estabilidade
Os reagentes que não tenham sido abertos se mantêm estáveis até a data de validade indicada no rótulo do cartucho se forem conservados a 2-8°C em posição vertical.
Uma vez aberto, a estabilidade do cartucho carregado no instrumento BIO-FLASH ou guardado a 2-8°C é de 13 semanas.
Rastreabilidade dos calibradores e controles
Dado que não há um padrão internacional disponível, os resultados são expressos em S/CO e foram estabelecidos por meio de múltiplos ensaios com o instrumento BIO-FLASH utilizando lotes específicos de reagentes e padrões internos.
Interpretação de resultados
A quantidade de analito em cada amostra é determinada a partir da luz emitida medida (URL) por interpolação na Curva de Calibração de Trabalho guardada. Os resultados obtidos com o BIO-FLASH HSV-1 IgG são expressos em S/CO (Sinal da amostra/Valor de corte). Como o ensaio é qualitativo, o valor numérico do resultado só é indicativo da quantidade de anticorpo presente.
A determinação qualitativa de IgG anti-HSV-1, usando o ensaio BIO-FLASH HSV-1 IgG, ajuda a avaliar o estado imunitário do paciente:
• Amostras com uma concentração < 1,0 S/CO são consideradas não reativas (negativas). • Amostras com uma concentração ≥ 1,0 S/CO são consideradas reativas (positivas).
Um resultado positivo indica infecção passada ou aguda por HSV-1. Um aumento significativo na concentração de anticorpos IgG anti-HSV-1 em amostras pareadas tomadas com intervalo de 2-4 semanas, testadas ao mesmo tempo, pode ser indicativo de infecção recente ou reativação. Porém, para fins diagnósticos, recomenda-se associar este procedimento com a detecção de vírus por técnicas de amplificação e a detecção de anticorpos IgM específicos contra o vírus Herpes Simplex.
Limitações
O resultado de uma única amostra não é suficiente para o diagnóstico da infecção por vírus de herpes simplex tipo 1 e, portanto, os resultados BIO-FLASH HSV-1 IgG devem ser utilizados em conjunção com outros dados; ex., sintomas, história clínica, resultados de outras provas e toda a informação adicional relevante. Um resultado negativo não exclui a possibilidade de exposição ou infecção por HSV-1. Como em todos os ensaios imunológicos sensíveis, existe a possibilidade de obter resultados positivos que não se repitam.
Resultados esperados
A prevalência de infecção por HSV aumentou nas últimas décadas em todo o mundo, tornando-se uma grande preocupação na saúde pública. Os anticorpos para HSV-1 aumentam com a idade, iniciando na infância, e correlacionam-se com o status socioeconômico, raça e grupo cultural. Por volta dos 30 anos de idade, 50% dos indivíduos com um status socioeconômico alto e 80% com um status socioeconômico baixo são soropositivos.9
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Características funcionais
NOTA: Os seguintes dados são representativos; os resultados em experimentos isolados podem variar respeito a
estes dados.
Comparação de métodos
BIO-FLASH HSV-1 IgG foi avaliado em estudos comparativos com outros ensaios comerciais. Avaliações internas
Um total de 2158 amostras de procedência variada, incluindo soros positivos e negativos para anticorpos IgG anti-herpes, foram testadas com BIO-FLASH HSV-1 IgG em comparação com um método EIA HSV-1 IgG comercialmente disponível.
Método de referência BIO-FLASH
HSV-1 IgG IND NEG POS Total
NEG 2 402 8 412
POS 16 15 1714 1745 Total 18 417 1722 2157*
*1 amostra foi eliminada por dar resultado inconclusivo no reteste com BIO-FLASH.
Os resultados indeterminados não foram considerados para os cálculos. Foram obtidos os seguintes resultados iniciais de sensibilidade relativa, especificidade relativa e concordância global:
Sensibilidade relativa Especificidade relativa Concordância global
N Valor IC 95% Valor IC 95% Valor IC 95%
2157 99,5% 99,1% a 99,8% 96,4% 94,1% a 98,0% 98,9% 98,4% a 99,3%
As amostras discrepantes (23) foram testadas com outros métodos HSV-1 IgG comercialmente disponíveis e 2 delas foram resolvidas como positivas em favor do BIO-FLASH HSV-1 IgG, 3 foram confirmadas como falso negativas, e 8 foram confirmadas como falso positivas pelo BIO-FLASH, enquanto 10 foram classificadas como equívocas, uma vez que não foi possível um consenso. O resumo dos resultados de consenso, excluindo os equívocos, é mostrado na seguinte tabela:
Consenso BIO-FLASH
HSV-1 IgG NEG POS Total
NEG 404 3 407
POS 8 1714 1722
Total 412 1717 2129
Em relação ao consenso foram obtidos os seguintes resultados de sensibilidade relativa, especificidade relativa e concordância global:
Sensibilidade vs. consenso Especificidade vs. consenso Concordância vs. Consenso
N Valor IC 95% Valor IC 95% Valor IC 95%
2129 99,8% 99,5% a 100,0% 98,1% 96,2% a 99,2% 99,5% 99,1% a 99,7% Gestantes
Amostras de soro de 118 mulheres grávidas, incluindo 37 multíparas, foram analisadas em comparação com um método EIA HSV-1 IgG comercialmente disponível. O resumo dos resultados é mostrado na seguinte tabela:
Método de referência BIO-FLASH
HSV-1 IgG NEG POS Total
NEG 31 0 31
POS 0 87 87
Total 31 87 118
Avaliação externa
Uma avaliação externa foi realizada no Laboratorio de Serología do Centro Nacional de Microbiología do Instituto
de Salud Carlos III em Madrid (Espanha). As amostras foram caracterizadas pelo método HerpeSelect® ELISA
HSV-1 IgG e foram testadas com BIO-FLASH HSV-1 IgG.
Método de referência BIO-FLASH
HSV-1 IgG IND NEG POS Total
NEG 7 112 2 121
POS 3 2 312 317
Total 10 114 314 438*
*1 amostra foi eliminada por dar resultado inconclusivo no reteste com BIO-FLASH.
Os resultados indeterminados não foram considerados para os cálculos. Foram os seguintes os resultados de sensibilidade, especificidade e concordância global:
Sensibilidade relativa Especificidade relativa Concordância global
N Valor IC 95% Valor IC 95% Valor IC 95%
438 99,4% 97,7% a 99,9% 98,2% 93,8% a 99,8% 99,1% 97,6% a 99,7% Painel CDC
O painel de soros humanos Herpes 2012 do CDC (Herpes 2012 Human Serum Panel) consistindo em 100 amostras não identificadas de soro de 50 pacientes foi analisado com o BIO-FLASH HSV-1 IgG. Destas amostras, 46 foram classificadas como positivas e 54 como negativas para IgG anti-HSV-1 com o BIO-FLASH HSV-1 IgG, obtendo-se 100,0% de sensibilidade e 96,3% de especificidade (na realidade, os 2 FP foram revelados como sendo do mesmo paciente).
Precisão
A precisão intra-ensaio e a total (ensaio a ensaio e dia a dia) foram avaliadas em múltiplos ensaios, conforme as diretrizes CLSI EP05-A. Os resultados estão resumidos na tabela seguinte:
Média (S/CO) Intra-ensaio Total
Controle negativo 0,29 0,011 SD 0,018 SD
Controle positivo 3,22 3,1% CV 4,4% CV
Amostra negativa 0,41 0,019 SD 0,024 SD
Amostra próxima ao valor de corte 0,92 3,6% CV 4,7% CV
Amostra positiva 7,36 2,6% CV 3,7% CV
Reprodutibilidade
A repetibilidade entre réplicas, entre lotes e entre instrumentos foi avaliada utilizando 60 amostras. Os resultados estão resumidos na tabela seguinte:
Co-positividade Co-negatividade N % % Réplica 2 vs. Réplica 1 60 100 100 Lote 2 vs. Lote 1 60 100 100 Instrumento 2 vs. Instrumento 1 60 100 100 Interferências
Estudos segundo as diretrizes CLSI EP7-A, demonstraram que os resultados do BIO-FLASH HSV-1 IgG não são afetados pelas seguintes substâncias potencialmente interferentes:
Substância potencialmente interferente Concentração % Interferência
Hemoglobina 500 mg/dL ≤ 10
Bilirrubina indireta 18 mg/dL ≤ 10
Bilirrubina direta 18 mg/dL ≤ 10
Triglicerídeos 1300 mg/dL ≤ 10
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8596 R02 06.2015 por Reatividade cruzada
Foram testados 250 espécimes com reatividade cruzada potencial com o ensaio BIO-FLASH HSV-1 IgG e os resultados foram comparados com ensaios comercialmente disponíveis de HSV-1 IgG mostrando a seguinte concordância:
Reação cruzada potencial Concordância
anti-HSV-2 7/7 IgG anti-Toxo (Toxoplasma gondii) 10/10
anti-CMV (Citomegalovírus humano) 9/9
anti-EBV (vírus Epstein-Barr) 10/10
IgG anti-HHSV6 (herpesvírus humano 6) 10/10
IgG anti-HHSV8 (herpesvírus humano 8) 9/9*
IgG anti-VZV (anticorpos contra o vírus da Varicela Zoster) 10/10
IgG anti-rubéola 10/10
ANA (anticorpos antinucleares) 10/10
LES (Lúpus eritematoso sistêmico) 4/4
RF (fator reumatoide) 10/10
anti-gliadina/CCP3 (anticorpos antipeptídeo citrulinado cíclico) 10/10
Sífilis 10/10
anti-HBs (anticorpos contra o antígeno de superfície da hepatite B) 10/10 HBsAg (antígeno de superfície da hepatite B) 10/10
anti-HCV (vírus da hepatite C) 9/10
anti-HIV (vírus da imunodeficiência humana) 10/10
anti-PV B19 (parvovírus B19) 10/10 Candida albicans 10/10 Chlamydia trachomatis 10/10 Neisseria gonorrhoeae 10/10 Pré-vacinados de gripe 10/10 Pós-vacinados de gripe 9/9* IgG elevada 9/9* IgM elevada 10/10 Anticorpos heterófilos 10/10
