Luís Carlos Vianna
OCORRÊNCIA E TRANSMISSÃO
TRANSPLACENTÁRIA DE NEOSPORA
Luís Carlos Vianna
OCORRÊNCIA E TRANSMISSÃO
TRANSPLACENTÁRIA DE NEOSPORA
CANINUM EM NOVILHAS PRENHES
Tese apresentada à Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Campus de Botucatu, como requisito parcial para obtenção do título de Doutor em Medicina Veterinária (Área de Concentração: Clínica Veterinária).
ORIENTADOR: Prof. Ass. Dr. Izidoro Francisco Sartor
Botucatu
2004
FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉCNICA DE AQUISIÇÃO E TRATAMENTO DA INFORMAÇÃO
DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CAMPUS DE BOTUCATU - UNESP BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: SELMA MARIA DE JESUS
Vianna, Luís Carlos.
Ocorrência e transmissão transplacentária de Neospora caninum em novilhas prenhes / Luis Carlos Vianna. – 2004.
Tese (doutorado) – Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Medicina de Botucatu, 2004.
Orientador: Izidoro Francisco Sartor Assunto CAPES: 50501054
1. Novilha - Reprodução 2. Obstetrícia veterinária
CDD 636.208982
Palavras-chave: Bovino; Epidemiologia; Neospora caninum; Transmissão
DADOS CURRICULARES
NASCIMENTO 15.02.1967 – Ribeirão Preto/SP
FILIAÇÃO Luiz Vianna
Luzia Divina Victali
1985/1990 Curso de Graduação : Faculdade de Medicina Veterinária – Universidade Estadual de Londrina/PR
1990 Admissão na Universidade do Oeste Paulista, Unoeste, Curso de Medicina Veterinária.
Professor Assistente: - Semiologia
- Clínica Médica de Grandes Animais - Toxicologia
Professor convidado das disciplinas de: - Metodologia do Trabalho Científico - Fisiologia Veterinária
1993 Ingresso no curso de Especialização em Metodologia do Trabalho Científico, Pós-Graduação “Lato-Sensu”.
1994 Defesa da monografia da Especialização em Metodologia do Trabalho Científico.
Título: “O estudo comparativo entre Ivermectim, Doramectim e Amoxidectim na profilaxia da Cochliomyia Hominivorax na Orquiectomia dos Bovinos”.
1999 Ingresso no Curso de Mestrado em Medicina Veterinária Área de Sanidade Animal da Universidade Estadual de
2000 Defesa da dissertação de Mestrado
Título: “Duração das Infecções Naturais por Estafilococos Coagulase Negativos e Contagem de Células Somáticas em Vacas Primíparas”
2001 Ingresso no Curso de Doutorado em Medicina Veterinária. Área de Clínica Veterinária Sub-área de Enfermidades
Parasitárias dos Animais da Faculdade de Medicina
Veterinária e Zootecnia – Universidade Estadual Paulista – Botucatu/SP
AGRADECIMENTOS
Com a graça divina e imbuído de fé é que consegui realizar esse trabalho que dedico em primeiro lugar a Deus pois é “Somente aquilo que tem por fundamento Jesus Cristo, pode permanecer. O que tiver outro fundamento não pode durar nem ser sólido”.
(A. Chevirer)
À memória de meus pais Luiz Vianna e Luzia Divina Victale que com seu amor e ensinamento me prepararam para a vida.
“Quando lanço-me ao leito, exausto de fadiga, a ti meu pensamento, na distância, em santa romaria então me leva, vendo com os olhos sem visão, tua figura”.
(Shakespeare)
À minha querida esposa Monica, que sempre esteve comigo ao longo dessa jornada proporcionando-me coragem e incentivo.
Amar é ser capaz de aceitar o outro tal qual é. Amar é poder dizer ao outro: “Preciso de ti”.
(Marcel Beauchemin)
Aos meus filhos Carolina e Vitor que compreenderam os momentos de ausência durante essa caminhada.
“Sempre fostes os dois reservados: ninguém sondou as tuas profundezas e ninguém te conhece as íntimas riquezas, tão zelosos que sois de guardar tais segredos”. (Shakespeare)
À minha irmã Neuza, que com carinho sem igual soube proporcionar amor à nossa mãe em momentos sem igual, enquanto a estrada eu percorria.
“A nossa mãe passeia nos jardins, saboreando um sabor já sem sabor. Parece-me tão suave, tão asa, tão saída, tão amor”.
À minha sobrinha Ana Claudia que durante minha ausência soube estar próxima da minha esposa, de meus filhos, de minha irmã e minha mãe.
“Que ninguém venha a ti sem que volte melhor e mais feliz. Todo mundo deveria ver a bondade em teu rosto, teus olhos e teu sorriso”.
(Madre Teresa de Calcutá)
Ao meu Orientador, Izidoro Francisco Sartor que soube compreender minhas dificuldades, e sem nada comentar, orientar-me com maestria os caminhos a trilhar para atingir esse objetivo.
“A vida só pode ser compreendida olhando para trás, mas deve ser vivida olhando para frente”.
(S. Kierkegaard)
À Edviges Maristela Pituco que muito contribuiu para que esses resultados fossem obtidos, solucionando etapas difíceis de serem transpostas.
“A generosidade consiste em dar antes de ser solicitado”. (Sabedoria Árabe)
À Universidade do Oeste Paulista que sempre apoiou-me no crescimento profissional.
“Na casa da ignorância não há espelho no qual se possa ver a alma”. (Gibran)
Ao meu compadre, e irmão Luiz Fernando Coelho da Cunha que está comigo desde a graduação e quis o destino me proporcionar a oportunidade de tê-lo como um grande amigo.
“Não devemos permitir que alguém saia de nossa presença sem se sentir melhor e mais feliz”.
Aos meus amigos e companheiros de trabalho: Alessandra Melchert, Ana Maria Siqueira, Antônio Fluminhan Júnior, Cecília Braga Laposy, Colombo Guerra Carvalho Júnior, Haroldo Alberti, José Ricardo Cecílio Junqueira, Marcos Roberto, Osimar de Carvalho Sanches, Paulo Claudeir Gomes da Silva, Paulo Eduardo Pardo, Raimundo Alberto Tostes, Silvia Maria Franco Andrade, Vamilton Álvares Santarém que de diferentes formas contribuíram para que esse objetivo fosse alcançado.
“Todo homem que encontro é superior a mim em alguma coisa. Por isso, dele sempre aprendo alguma coisa”.
SUMÁRIO RESUMO...X ABSTRACT...XI 1 INTRODUÇÃO ...1 2 REVISÃO DE LITERATURA ...4 3 MATERIAL E MÉTODOS ...26
3.1 Região e Período de Estudo ...26
3.2 Amostra ...26
3.3 Processamento das Amostras...27
3.3.1 Descrição da técnica da PCR utilizada...28
3.3.2 Descrição da técnica de ELISA utilizada ... 31
3.4 Análise Estatística ...32
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO ...33
5 CONCLUSÕES ...38
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 O c o r r ê n c i a d e a n t i c o r p o s a n t i N e o s p o r a c a n i n u m
e m b o v i n o s n o B r a s i l e m o u t r o s p a í s e s d o m u n d o , c o m s e u s r e s p e c t i v o s p e s q u i s a d o r e s e , a t é c n i c a u t i l i z a d a p e l o s m e s m o s . . . 06
TABELA 2 Estado sorológico em 518 mães e fetos testados pela técnica de
ELISA anti-Neospora caninum.. . . 34
TABELA 3 Fetos em diversas idades de gestação oriundos de 103 novilhas
infectadas pelo Neospora caninum. ELISA diluição do soro 1:100 nas novilhas e 1:10 nos fetos.. . . 35
LISTA DE SÍMBOLOS E ABREVIATURAS
® = Marca Registrada °C = grau Celsius µg = Micrograma µl = Microlitro µM = Micromol g = Grama U = Unidade dl = Decilitro L = Litro mL = Mililitro mM = Milimolar M = Molar Ig = Imunoglobulinar.p.m. = rotações por minuto
bp = pares de base
min = Minuto
h = Hora
s = Segundo
Taq = Thermus aquaticus
PCR = reação de polimerase em cadeia
RIFI = reação de imunofluorescência indireta
IHQ = Imunohistoquímica
ISCOM = complexo imunoestimulante
NAT = teste de aglutinação
DNA = ácido dexoribonucléico
RNA = ácido ribonucléico
VIANNA, L.C. “Transmissão vertical de Neospora caninum em novilhas prenhes”. Botucatu, 2004. 52p. Tese (Doutorado em Medicina Veterinária) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Campus de Botucatu, 2004. Universidade Estadual Paulista – UNESP.
RESUMO
Com o objetivo de determinar a ocorrência da transmissão vertical de Neospora caninum 518 novilhas prenhes tiveram o sangue materno e fetal analisados pelo método sorológico de ELISA e pela reação da polimerase em cadeia (PCR). Das novilhas testadas 103 (19,88%) possuíam anticorpos contra Neospora caninum, e 38 (7,34%) fetos foram positivos enquanto que 65 (12,55%) foram negativos. Os 415 (80,11%) animais restantes não apresentaram anticorpos anti-Neospora caninum tanto as mães quanto os fetos. A detecção de anticorpos fetais ocorreu a partir dos quatro meses de gestação. A técnica da reação da PCR convencional não apresentou amplificação de pares de bases em nenhum tecido fetal analisado. Esse fato, sugere a utilização da PCR de duas amplificações.
VIANNA, L.C. “Vertical transmission of Neospora caninum in pregnant heifers”. Botucatu, 2004. 52p. Tese (Doutorado em Medicina Veterinária) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Campus de Botucatu, 2004. Universidade Estadual Paulista – UNESP.
ABSTRACT
In order to determine occurrence of vertical transmission of Neospora caninum in bovine (Bos taurus indicus), we have analized maternal and fetal blood samples obtained from 518 pregnant heifers by either ELISA and polymerase chain reaction (PCR). We have found a total of 103 heifers (19,88%) with antibodies against
Neospora caninum, from which 38 fetuses (7,34%) showed positive results. Animals
remaining (415/80,11%) neither presented anti-Neospora caninum antibodies in heifers or fetuses. Fetal antibodies detection were detected from the fourth month of gestation. There was not amplification of N. caninum sequence in fetal tissue samples, what could suggest employment of nested-PCR.
1 INTRODUÇÃO H á d u a s d é c a d a s h o u v e a c o n f i r m a ç ã o d o e n c o n t r o d e u m n o v o p a t ó g e n o , d e n o m i n a d o d e N e o s p o r a c a n i n u m p o r D u b e y e t a l . ( 1 9 8 8 b ) . N o B r a s i l , a n t i c o r p o s a n t i - N . c a n i n u m f o r a m i n i c i a l m e n t e d e t e c t a d o s p o r B r a u t i g a m e t a l . ( 1 9 9 6 ) e m b o v i n o s d e l e i t e e c o r t e . A p ó s e s s a d e s c o b e r t a , o u t r o s p e s q u i s a d o r e s b r a s i l e i r o s p a s s a r a m a d e t e c t a r a n t i c o r p o s c o n t r a e s s e p r o t o z o á r i o e m d i f e r e n t e s e s p é c i e s d e a n i m a i s ( G O N D I M & S A R T O R , 1 9 9 7 ; M E L O & L E I T E , 1 9 9 9 ; S T O B B E & C O R T E Z , 1 9 9 9 ; B E L O e t a l . , 1 9 9 9 ; G O N D I M e t a l . , 1 9 9 9 b ) . O p r e j u í z o o c a s i o n a d o p e l o N . c a n i n u m o c o r r e p r i n c i p a l m e n t e p e l o s a b o r t a m e n t o s e m b o v i n o s . N a C a l i f ó r n i a , 4 2 , 5 % d e a b o r t a m e n t o f o r a m a t r i b u í d o s a o N . c a n i n u m ( A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 1 ; A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 5 ) , c o m p r e j u í z o e s t i m a d o e m U S $ 3 5 m i l h õ e s p o r a n o n a p e c u á r i a d e l e i t e ( L I N D S A Y , 1 9 9 8 ) . N a A u s t r á l i a a p e r d a a n u a l e s t i m a d a é d e U S $ 8 5 e U S $ 2 5 m i l h õ e s , r e s p e c t i v a m e n t e , n a p r o d u ç ã o d e l e i t e e d e c o r t e ( L I N D S A Y , 1 9 9 8 ) . A o c o r r ê n c i a d e a n t i c o r p o s n o s r e b a n h o s b r a s i l e i r o s p o d e s e r c o n s i d e r a d a s i g n i f i c a t i v a , c o m p e r c e n t u a i s e q u i v a l e n t e s e a t é s u p e r i o r e s a o s e n c o n t r a d o s p o r p e s q u i s a d o r e s d e o u t r o s p a í s e s . O p r o t o z o á r i o s e m a n t é m n a n a t u r e z a p o r m e i o d e i n f e c ç ã o v e r t i c a l e h o r i z o n t a l .
A t r a n s m i s s ã o h o r i z o n t a l é a q u e l a o n d e o c o r r e a i n f e c ç ã o d a p r o g ê n i e , e m f a s e p ó s - n a t a l , p o r m e i o d a i n g e s t ã o d e á g u a e a l i m e n t o s c o n t a m i n a d o s , c o m o o c i s t o s e x p e l i d o s n a s f e z e s d e c ã e s e c o i o t e s i n f e c t a d o s ( G O N D I M e t a l . , 2 0 0 4 ) . A c o r r e l a ç ã o e n t r e a o c o r r ê n c i a d e a b o r t a m e n t o e m b o v i n o s e a p r e s e n ç a d e c ã e s i n f e c t a d o s e m c o n v í v i o m ú t u o t e m o c a s i o n a d o a u m e n t o n a p r e v a l ê n c i a d e a n i m a i s s o r o p o s i t i v o s e m a m b a s a s e s p é c i e s ( P A R É e t a l . , 1 9 9 8 ; B A R T E L S , e t a l . , 1 9 9 9 ; W O U D A , e t a l . , 1 9 9 9 ; G U I M A R Ã E S J U N I O R , e t a l . , 2 0 0 4 ) . A i n f e c ç ã o v e r t i c a l é r e s p o n s á v e l p e l a d i s s e m i n a ç ã o e m a n u t e n ç ã o d o p a t ó g e n o e m r e b a n h o s b o v i n o s p o r v á r i a s g e r a ç õ e s ( B J Ö R K M A N e t a l . , 1 9 9 6 ) . A t r a n s m i s s ã o d o a g e n t e p a r e c e s e r m a i s c o m u m n o t e r ç o f i n a l d e g e s t a ç ã o , p o r é m , o s p o u c o s e s t u d o s s ã o i n s u f i c i e n t e s p a r a c o n f i r m a r e s s e f a t o . N a s p e s q u i s a s r e a l i z a d a s , n a m a i o r i a d a s v e z e s , s ã o u t i l i z a d o s a n i m a i s r e c é m - n a s c i d o s p a r a e v i d e n c i a r a t r a n s m i s s ã o v e r t i c a l , c o m o n o t r a b a l h o d e P a r é e t a l . ( 1 9 9 6 ) , q u e o b s e r v a r a m u m í n d i c e d e 8 1 % n a t r a n s m i s s ã o v e r t i c a l d e N . c a n i n u m a p a r t i r d e v a c a s s o r o p o s i t i v a s . E m b o r a e x i s t a m e v i d ê n c i a s d e m a i o r i m p o r t â n c i a p a r a a t r a n s m i s s ã o t r a n s p l a c e n t á r i a , a i n d a h á l a c u n a s n a l i t e r a t u r a , c o m o , p o r e x e m p l o , a p a r t i r d e q u e m o m e n t o d a g e s t a ç ã o o c o r r e r i a e s s e f e n ô m e n o .
O d i a g n ó s t i c o d a n e o s p o r o s e p o d e s e r r e a l i z a d o p o r i s o l a m e n t o d o a g e n t e a p a r t i r d e t e c i d o s i n f e c t a d o s , c o m o o c e r e b r a l , p o r r e a ç õ e s d e p o l i m e r a s e e m c a d e i a ( P C R ) n e s s e s t e c i d o s e p o r i m u n o h i s t o q u i m i c a . O r a s t r e a m e n t o e p i d e m i o l ó g i c o é c o m u m e n t e f e i t o p e l a p r o v a d e E L I S A o u R I F I ( D U B E Y e t a l . , 1 9 9 7 ; T H U R M O N D & H I E T A L A , 1 9 9 9 ; E L L I S e t a l . , 1 9 9 9 ) . E s s e e n s a i o f o i r e a l i z a d o c o m o o b j e t i v o d e s e v e r i f i c a r a o c o r r ê n c i a d e a n t i c o r p o s a n t i - N . c a n i n u m e m n o v i l h a s p r e n h e s e s e u s r e s p e c t i v o s f e t o s , e a p o s s i b i l i d a d e d e t r a n s m i s s ã o d e s s e p r o t o z o á r i o p o r v i a t r a n s p l a c e n t á r i a .
2 REVISÃO DE LITERATURA B j e r k ä s e t a l . ( 1 9 8 4 ) , n a N o r u e g a , c o n s i d e r a r a m a p r o b a b i l i d a d e d o s u r g i m e n t o d e u m a n o v a e n f e r m i d a d e a p a r t i r d o a c h a d o d e c i s t o s s e m e l h a n t e s a o s d e T o x o p l a s m a g o n d i i n o s c é r e b r o s d e f i l h o t e s d e c ã e s c o m m i o s i t e e e n c e f a l i t e . P o s t e r i o r m e n t e , D u b e y e t a l . ( 1 9 8 8 a ) , e m B o s t o n , r e a l i z a r a m e s t u d o r e t r o s p e c t i v o , a p a r t i r d e t e c i d o s d e c ã e s f i x a d o s e c o n s e r v a d o s e m p a r a f i n a , o b s e r v a n d o q u e e s s e p r o t o z o á r i o j á e x i s t i a h á p e l o m e n o s 2 0 a n o s e q u e v i n h a s e n d o i d e n t i f i c a d o , e r r o n e a m e n t e , c o m o T . g o n d i i . O e s t u d o d e D u b e y e s e u s c o l a b o r a d o r e s r e s u l t o u n a c l a s s i f i c a ç ã o d o p a r a s i t a , q u e f o i d e n o m i n a d o d e N e o s p o r a c a n i n u m , u m c o c c í d i o p e r t e n c e n t e a o f i l o A p i c o m p l e x a d a f a m í l i a S a r c o c y s t i d a e , j u s t i f i c a n d o , d e s s a f o r m a , s u a s e m e l h a n ç a e c o n f u s ã o c o m T . g o n d i i , p e r t e n c e n t e à m e s m a f a m í l i a . O s c ã e s e c o i o t e s f o r a m c o n s i d e r a d o s h o s p e d e i r o s d e f i n i t i v o s , p o r m e i o d e u m a i n f e c ç ã o e x p e r i m e n t a l , n a q u a l f o r a m e n c o n t r a d o s o o c i s t o s d e N . c a n i n u m n a s f e z e s d e s s e s a n i m a i s ( M c A L L I S T E R e t a l . , 1 9 9 8 ; G O N D I M e t a l . , 2 0 0 4 ) . T h i s t e d & D u b e y ( 1 9 8 9 ) f o r a m o s p r i m e i r o s a i d e n t i f i c a r e m e r e l a t a r e m a n e o s p o r o s e e m b o v i n o s , a p a r t i r d o s c i s t o s d e N . c a n i n u m p r e s e n t e s n o c é r e b r o d e f e t o s d e b o v i n o s , e m
u m r e b a n h o c o m d i s t ú r b i o s r e p r o d u t i v o s d e a b o r t a m e n t o s r e p e t i t i v o s . M a r s h e t a l . ( 1 9 9 5 ) r e a l i z a r a m u m e s t u d o c o m p a r a t i v o e n t r e a m o s t r a s d e N e o s p o r a s p p . i s o l a d a s d e b o v i n o s e c a n i n o s , v e r i f i c a n d o q u e n ã o h a v i a d i f e r e n ç a s i g n i f i c a t i v a n a s e q ü ê n c i a d e n u c l e o t í d e o s , c o m u m a c o n c o r d â n c i a d e 9 9 % e n t r e a s a m o s t r a s . E n t r e t a n t o , a c o m p a r a ç ã o d a s c e p a s d e b o v i n o s e c a n i n o s c o m a d e e q ü i n o r e v e l o u u m a d i f e r e n ç a d e s e t e n u c l e o t í d e o s , p r o p o n d o d e s s a f o r m a , u m a n o v a e s p é c i e d e N e o s p o r a e m e q ü i n o s , i d e n t i f i c a d o c o m o N . h u g h e s i . O p r o t o z o á r i o N . c a n i n u m a t u a l m e n t e é r e c o n h e c i d o c o m o u m p a r a s i t a d e b o v i n o s , c ã e s , o v i n o s , c a p r i n o s , e q ü i n o s e c e r v í d e o s ( B U X T O N e t a l . , 1 9 9 7 ; D U B E Y , 1 9 9 9 a ) . A p a r t i r d o r e c o n h e c i m e n t o d a n e o s p o r o s e e m b o v i n o s , v á r i o s t r a b a l h o s s o r o l ó g i c o s f o r a m r e a l i z a d o s p o r p e s q u i s a d o r e s n a c i o n a i s e e s t r a n g e i r o s , u t i l i z a n d o a s t é c n i c a s s o r o l ó g i c a s d e R I F I e E L I S A , s e n d o q u e a l g u n s e s t ã o l i s t a d o s n a t a b e l a 1 .
T a b e l a 1 - O c o r r ê n c i a d e a n t i c o r p o s a n t i N e o s p o r a c a n i n u m e m b o v i n o s n o B r a s i l e o u t r o s p a í s e s d o m u n d o , c o m s e u s r e s p e c t i v o s p e s q u i s a d o r e s e a t é c n i c a d e d i a g n ó s t i c o . A u t o r ( e s ) L o c a l T é c n i c a S o r o l ó g i c a R e s u l t a d o s P o s i t i v o s ( %) B r a u t i g a m [ . . . ] ( 1 9 9 6 ) B r a s i l E L I S A 1 7 , 5 G o n d i m e S a r t o r ( 1 9 9 7 ) B r a s i l R I F I 6 0 , 0 P i t u c o [ . . . ] ( 1 9 9 8 ) B r a s i l E L I S A 3 4 , 3 P a r é [ . . . ] ( 1 9 9 8 ) C a n a d á E L I S A 1 6 , 6 A n d r e o t t i [ . . . ] ( 1 9 9 9 ) B r a s i l E L I S A 7 , 7 D a v i s o n [ . . . ] ( 1 9 9 9 a ) I n g l a t e r r a E L I S A 1 6 , 0 G o n d i m [ . . . ] ( 1 9 9 9 b ) B r a s i l R I F I 1 5 , 6 R e s e n d e [ . . . ] ( 1 9 9 9 ) B r a s i l R I F I 2 2 , 2 S a r t o r [ . . . ] ( 1 9 9 9 ) B r a s i l R I F I 1 6 , 3 S a n d e r s o n [ . . . ] ( 2 0 0 0 ) U S A E L I S A 2 4 , 0 M e l o [ . . . ] ( 2 0 0 1 ) B r a s i l E L I S A 1 8 , 6 L o c a t e l l i - D i t t r i c h [ . . . ] ( 2 0 0 1 ) B r a s i l E L I S A 3 4 , 8 D i j k s t r a [ . . . ] ( 2 0 0 1 b ) H o l a n d a E L I S A 3 9 , 4 M o r a l e s [ . . . ] ( 2 0 0 1 ) M é x i c o E L I S A 5 6 , 0 C o r b e l l i n i [ . . . ] ( 2 0 0 2 ) B r a s i l R I F I 1 1 , 2 M u n h o z [ . . . ] ( 2 0 0 2 ) B r a s i l E L I S A 3 3 , 5 S i l v a [ . . . ] ( 2 0 0 2 ) B r a s i l R I F I 3 4 , 7 G u i m a r ã e s J r [ . . . ] ( 2 0 0 4 ) B r a s i l R I F I 1 4 , 3 B r a u t i g a m e t a l . ( 1 9 9 6 ) , n o B r a s i l , f o r a m o s p r i m e i r o s a d e t e c t a r e m a n t i c o r p o s c o n t r a N . c a n i n u m e m s o r o s d e b o v i n o s t a n t o n a p e c u á r i a l e i t e i r a q u a n t o n a d e c o r t e . P o s t e r i o r m e n t e , G o n d i m & S a r t o r ( 1 9 9 7 ) , S t o b b e & C o r t e z ( 1 9 9 9 ) e B e l o e t a l . ( 1 9 9 9 ) v e r i f i c a r a m a n t i c o r p o s a n t i - N . c a n i n u m e m s o r o s d e b o v i n o s l e i t e i r o s , d e c o r t e e e m c ã e s , r e s p e c t i v a m e n t e . E m u m r e b a n h o d e d e z v a c a s l e i t e i r a s , c o m h i s t ó r i c o d e a b o r t a m e n t o , n o m u n i c í p i o d e B o t u c a t u , S ã o P a u l o , f o r a m d e t e c t a d o s a n t i c o r p o s e s p e c í f i c o s c o n t r a N . c a n i n u m e m s e i s a n i m a i s . A s t i t u l a ç õ e s v e r i f i c a d a s f o r a m d e 8 0 0 a 3 2 0 0 , s e n d o q u e
p a r a C o n r a d e t a l . ( 1 9 9 3 ) e D u b e y & L i n d s a y ( 1 9 9 6 ) , p o d e - s e
a n i m a i s p o s i t i v o s a p a r t i r d e t i t u l a ç õ e s i g u a i s o u c o n s i d e r a r
s u p e r i o r e s a 1 6 0 e 2 0 0 , r e s p e c t i v a m e n t e . P o r t a n t o , a s t i t u l a ç õ e s
e n c o n t r a d a s p o s s i b i l i t a r a m a c o r r e l a ç ã o e n t r e a n t i c o r p o s e o s
a b o r t a m e n t o s .
Os estudos revelam maiores ocorrências de soropositivos para N.
caninum em bovinos de leite do que de corte. Na Espanha, Quintanilla-Gozalo et al.
(1999) verificaram prevalência de 35,9% em vacas de leite, enquanto que em plantéis
de pecuária de corte o percentual foi de 17,9.
No Brasil, Andreotti et al. (1999), trabalhando com bovinos de corte, em
Mato Grosso, verificaram a prevalência de 7,7% e Sartor et al. (1999), em São Paulo,
detectaram prevalência de 30,13% pela técnica de ELISA. Outros resultados nacionais
foram obtidos por essa técnica e reportados por Brautigam et al. (1996), Pituco et al.
(1998), Melo & Leite (1999), Melo et al. (2001) e Munhoz et al. (2002), que verificaram
prevalência de 17,5%, 31,5%, 7,7%, 20% e 23,8%, respectivamente.
Quando ocorre um estudo comparativo entre vacas com e sem histórico
de abortamentos, é obtida uma variação de prevalência maior da primeira situação
(TREES et al., 1994; McNAMEE et al., 1994). Essa característica foi encontrada por
Corbellini et al. (2002), no Rio Grande do Sul, que verificaram uma prevalência de
23,3% de vacas soropositivas para N. caninum em animais com histórico de
Stobbe & Cortez (1999), em São Paulo, verificaram a prevalência de
53,6% e 26,2%, enquanto Gondim et al. (1999b), na Bahia, constataram prevalência
de 41,17% e 12,2%.
Fêmeas bovinas adultas, com anticorpos contra N. caninum, apresentam,
no mínimo, duas vezes maior probabilidade de abortar que animais com sorologia
negativa (PARÉ et al., 1997; WALDNER et al., 1998).
S e g u n d o e s t u d o r e a l i z a d o p o r S a n t o s ( 2 0 0 0 ) , n o B r a s i l , a i d e n t i f i c a ç ã o d o p a r a s i t o f o i r e a l i z a d a e m f e t o s d e t r ê s a s e t e m e s e s d e g e s t a ç ã o , p o r m e i o d a t é c n i c a d e i m u n o h i s t o q u í m i c a . E m b o r a o N . c a n i n u m s e j a u m p r o t o z o á r i o c o m a l g u m a s e m e l h a n ç a c o m o T . g o n d i i , a p r e s e n t a c a r a c t e r í s t i c a s d i s t i n t a s e m r e l a ç ã o à s u a e s t r u t u r a a n t i g ê n i c a , i m u n o g ê n i c a e , p a t o g ê n i c a r e l a c i o n a d a a o h o s p e d e i r o ( D U B E Y , 1 9 8 8 b ) . O s c i s t o s p r e s e n t e s n o s t e c i d o s p o s s u e m f o r m a e l í p t i c a c o m a t é 1 0 7 µm d e d iâ m e t r o e s ã o e n c o n t r a d o s c o m u m e n t e e m c é l u l a s d o s i s t e m a n e r v o s o , c o m o c é r e b r o , m e d u l a e s p i n h a l , n e r v o s e r e t i n a ( D U B E Y e t a l . , 1 9 8 8 a ) . A e s p e s s u r a d a p a r e d e d o c i s t o é l i s a , m e d e a t é 4 , 0 µm . G e r a l m e n t e , a e s p e s s u r a d o s c i s t o s v a r i a d e 1 , 0 a 2 , 0 µm , d i f e r e n c i a n d o - s e d o c i s t o d e T . g o n d i i , q u e t e m a e s p e s s u r a d a p a r e d e m e n o r q u e 1 , 0 µ m . O s t a q u i z o í t o s a p r e s e n t a m d o i s a n é i s a p i c a i s , u m a n e l p o l a r , o i t o a 1 8 r o p t r i a s , c o m p l e x o d e G o l g i , r e t í c u l o s e n d o p l a s m á t i c o s r u g o s o e l i s o , u m n ú c l e o e u m n u c l é o l o ( L I N D S A Y
e t a l . , 1 9 9 3 ; D U B E Y e t a l . , 2 0 0 2 ) . O s t a q u i z o í t o s d i v i d e m - s e r a p i d a m e n t e e s ã o e n c o n t r a d o s e m t e c i d o n e r v o s o , m ú s c u l o e s q u e l é t i c o , c o r a ç ã o , f í g a d o , p u l m ã o , r i m p l a c e n t a e f l u i d o s a m i n i ó t i c o s ( D A V I S O N e t a l . , 1 9 9 9 a ) . A d i s c r e p â n c i a n o n ú m e r o d e r o p t r i a s d e s c r i t a p o r d i f e r e n t e s p e s q u i s a d o r e s p o d e s e r d e v i d o à d i f i c u l d a d e e m d i s t i n g u i - l a s d o s g r â n u l o s d e n s o s ( D U B E Y , 1 9 9 3 ) . E m a l g u n s g r u p o s d e t a q u i z o Í t o s , a m a t r i z e n t r e c a d a p a r a s i t a é e l e t r o d e n s a c o n t e n d o m i c r o n e m a s l i v r e s e c o l e ç õ e s d e e s t r u t u r a s t u b u l a r e s ( D U B E Y e t a l . , 1 9 9 5 ) . M i c r o p o r o s n ã o t ê m s i d o e n c o n t r a d o s n o s t a q u i z o í t o s e m a n i m a i s , p o r é m e s t ã o p r e s e n t e s e m t a q u i z o í t o s p r o v e n i e n t e s d e c u l t i v o c e l u l a r ( D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 8 9 ; L I N D S A Y e t a l . , 1 9 9 3 ) . N o i n t e r i o r d o s c i s t o s e s t ã o o s b r a d i z o í t o s , q u e s ã o e n c o n t r a d o s p r i n c i p a l m e n t e n o c é r e b r o . N e s s a f o r m a , o s p a r a s i t o s s ã o d e l g a d o s e m e d e m d e 6 , 0 a 8 , 0 µm d e c o m p r i m e n t o p o r 1 , 0 a 1 , 8 µm d e l a r g u r a e p o s s u e m a s m e s m a s o r g a n e l a s d o s t a q u i z o í t o s , e x c e t o p o r u m m e n o r n ú m e r o d e r o p t r i a s e m a i o r n ú m e r o d e g r â n u l o s P A S p o s i t i v o s . O s o o c i s t o s e s p o r u l a d o s m e d e m d e 1 1 , 7 µm d e c o m p r i m e n t o p o r 1 1 , 3 µm d e d i â m e t r o , c o n t ê m d o i s e s p o r o c i s t o s c o m q u a t r o e s p o r o z o í t o s c a d a u m e e s p o r u l a m , n o m e i o a m b i e n t e ,
e m 2 4 h o r a s ( M c A L L I S T E R , 1 9 9 8 ; D U B E Y , 1 9 9 9 ; D U B E Y e t a l . , 2 0 0 2 ) . O h o s p e d e i r o d e f i n i t i v o e l i m i n a o o c i s t o s q u e e s p o r u l a m n o m e i o a m b i e n t e e p o s t e r i o r m e n t e s ã o i n g e r i d o s p o r u m h o s p e d e i r o i n t e r m e d i á r i o . N o i n t e r i o r d e s s e h o s p e d e i r o , o s e s p o r o z o í t o s s ã o l i b e r a d o s n o t r a t o i n t e s t i n a l , p e n e t r a m n a s c é l u l a s , t r a n s f o r m a n d o - s e e m t a q u i z o í t o s ( D U B E Y e t a l . , 1 9 8 8 b ) . O t e m p o d e p e n e t r a ç ã o d o s t a q u i z o í t o s n a s c é l u l a s h o s p e d e i r a s é d e a p r o x i m a d a m e n t e c i n c o m i n u t o s a p ó s o c o n t a t o e s ã o e n c o n t r a d o s n o c i t o p l a s m a d a c é l u l a , d e n t r o o u n ã o d e v a c ú o l o p a r a s i t ó f o r o . A o p e n e t r a r e m n a s c é l u l a s , o s t a q u i z o í t o s d i v i d e m - s e p o r e n d o d i o g e n i a e c a u s a m l e s õ e s t e c i d u a i s d e v i d o à s u a r á p i d a m u l t i p l i c a ç ã o , a c o m e t e n d o o u t r a s á r e a s t e c i d u a i s d o h o s p e d e i r o e d i s s e m i n a n d o a i n f e c ç ã o ( D U B E Y e t a l . , 1 9 8 8 b ; D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 9 6 ) . N e s s e s a n i m a i s i n f e c t a d o s , o s t a q u i z o í t o s s ã o e n c o n t r a d o s e m c é l u l a s d o s i s t e m a n e r v o s o , m a c r ó f a g o s , f i b r o b l a s t o s , c é l u l a s d o e n d o t é l i o v a s c u l a r , m i ó c i t o s , c é l u l a s d o e p i t é l i o d o s t ú b u l o s r e n a i s e h e p a t ó c i t o s ( D U B E Y , 1 9 8 8 a ; S P E E R & D U B E Y , 1 9 8 9 ; D U B E Y , 1 9 9 3 ; D U B E Y e t a l . , 2 0 0 2 ) . O s c i s t o s t e c i d u a i s s ã o r e s i s t e n t e s à s o l u ç ã o d e p e p s i n a á c i d a d o e s t ô m a g o e s o b r e v i v e m a 4 º C p o r 1 4 d i a s , m a s t o r n a m - s e n ã o i n f e c t a n t e s a – 2 0 º C e m a p e n a s u m d i a ( L I N D S A Y e t a l . , 1 9 9 2 ) .
A p r i n c i p a l l o c a l i z a ç ã o d o N . c a n i n u m é n o c é r e b r o , p o s t e r i o r m e n t e n o c o r a ç ã o e t e m m e n o r i n c i d ê n c i a n o s d e m a i s ó r g ã o s . E m e s t u d o r e a l i z a d o p o r W o u d a e t a l . ( 1 9 9 7 ) a p a r t i r d e 8 0 f e t o s a b o r t a d o s , o p a r a s i t a f o i e n c o n t r a d o e m 8 9 % d o s c é r e b r o s ( 7 1 c a s o s ) e 1 4 % d o s c o r a ç õ e s ( 1 1 c a s o s ) . S e g u n d o D u b e y & L i n d s a y ( 1 9 9 6 ) , n ã o h á u m a á r e a e x a t a n o c é r e b r o p a r a q u e p o s s a s e r e n c o n t r a d o o N . c a n i n u m . P o r t a n t o , q u a l q u e r s e g m e n t o d o c é r e b r o é v i á v e l p a r a a r e a l i z a ç ã o d e e x a m e s . A i n f e c ç ã o n a t u r a l p o r N . c a n i n u m f o i r e p o r t a d a e m c a n i n o s , b o v i n o s , o v i n o s , c a p r i n o s , b u b a l i n o s e e q ü i n o s ( U G G L A e t a l . , 1 9 8 9 ; D U B E Y e t a l . , 1 9 9 0 b ; B A R R e t a l . , 1 9 9 2 ; B A R R e t a l . , 1 9 9 3 ; H U O N G e t a l . , 1 9 9 8 e D U B E Y e t a l . , 1 9 9 9 ) . A c o r r e l a ç ã o e n t r e a n i m a i s l e i t e i r o s c o m h i s t ó r i c o d e a b o r t a m e n t o e s o r o l o g i a p o s i t i v a p a r a N . c a n i n u m d e v á r i a s r e g i õ e s d o B r a s i l , t a m b é m f o i e n c o n t r a d a p o r P i t u c o e t a l . ( 1 9 9 8 ) , a p a r t i r d e 1 0 2 a m o s t r a s q u e v e r i f i c a r a m q u e 3 4 , 3 % d o s a n i m a i s e s t a v a m p o s i t i v o s . D e v e s e r r e s s a l t a d o q u e e s s e s a n i m a i s a p r e s e n t a r a m s o r o l o g i a n e g a t i v a p a r a b r u c e l o s e , l e p t o s p i r o s e , r i n o t r a q u e í t e i n f e c c i o s a e d i a r r é i a v i r a l b o v i n a . E m b o v i n o s d e c o r t e , a f r e q ü ê n c i a d e l e s õ e s f o i o b s e r v a d a e m 4 1 % d o s 7 2 9 f e t o s a b o r t a d o s d e 1 2 6 p r o p r i e d a d e s e
D u b e y e t a l . ( 1 9 9 6 ) r e l a t a r a m o p r i m e i r o c a s o d e n e o s p o r o s e e m u m b e z e r r o d e c o r t e e m M a r y l a n d . S e g u n d o B a r r e t a l . ( 1 9 9 7 ) , o p r e j u í z o e c o n ô m i c o d e t e r m i n a d o p e l a n e o s p o r o s e , n o s p l a n t é i s d e b o v i n o s d e l e i t e d a C a l i f ó r n i a , é e s t i m a d o e m 3 5 m i l h õ e s d e d ó l a r e s a n u a i s . A p ó s u m e s t u d o r e a l i z a d o p o r K a s a r i e t a l . ( 1 9 9 9 ) n o T e x a s , c o n s t a t o u - s e n a i n d ú s t r i a d a c a r n e , u m p r e j u í z o e s t i m a d o e n t r e U S $ 1 5 e U S $ 2 4 m i l h õ e s a n u a i s , e m d e c o r r ê n c i a d e a b o r t a m e n t o e n a t i m o r t o s d e t e r m i n a d o s p o r N . c a n i n u m . . T h u r m o n d & H i e t a l a ( 1 9 9 7 b ) r e p o r t a r a m q u e v a c a s l e i t e i r a s , e m s u a p r i m e i r a l a c t a ç ã o e c o m s o r o d i a g n ó s t i c o p o s i t i v o p a r a N . c a n i n u m p r o d u z e m m e n o s l e i t e q u e a s n e g a t i v a s . A c o r r e l a ç ã o e n t r e a p r e s e n ç a d e i n f e c ç ã o e m c ã e s e o s u r g i m e n t o d e l a e m b o v i n o s i n d i c a a m a n u t e n ç ã o d a i n f e c ç ã o , p o r m e i o d a t r a n s m i s s ã o h o r i z o n t a l ( P A R É e t a l . , 1 9 9 8 ; M c A L L I S T E R , 1 9 9 9 ; G U I M A R Ã E S J U N I O R e t a l . , 2 0 0 4 ) . A i n g e s t ã o , p e l o c ã o e c o i o t e , d e t e c i d o s d e o r i g e m a n i m a l c o n t e n d o b r a d i z o í t o s , t a q u i z o í t o s o u o o c i s t o s e s p o r u l a d o s f a z c o m q u e h a j a a i n f e c ç ã o , t o r n a n d o - s e e l e , t a n t o h o s p e d e i r o i n t e r m e d i á r i o q u a n t o d e f i n i t i v o ( D U B E Y e t a l . , 1 9 8 8 a ; D U B E Y e t a l . , 1 9 9 0 a ; M c A L L I S T E R e t a l . , 1 9 9 8 ; L I N D S A Y e t a l . , 1 9 9 9 a ; G O N D I M e t a l . , 2 0 0 4 ) . A e l i m i n a ç ã o d e o o c i s t o s p e l a s f e z e s , f a z d o c ã o o h o s p e d e i r o d e f i n i t i v o . A c o n t a m i n a ç ã o d a á g u a e a l i m e n t o s
c o n s u m i d o s p e l o s h o s p e d e i r o s i n t e r m e d i á r i o s f a c i l i t a m a p r o p a g a ç ã o d a i n f e c ç ã o ( M c A L L I S T E R e t a l . , 1 9 9 8 ) . A i n f e c ç ã o p o r N . c a n i n u m e m b o v i n o s p o d e o c o r r e r a t r a v é s d a t r a n s m i s s ã o c o n g ê n i t a e f e c a l - o r a l ( M c A L L I S T E R e t a l . , 1 9 9 8 ) . A t r a n s m i s s ã o h o r i z o n t a l é r e p r e s e n t a d a p e l a e l i m i n a ç ã o d e o o c i s t o s p e l o c o l o s t r o e p e l o l e i t e d e v a c a s ( U G G L A e t a l . , 1 9 9 8 ) , c o m i n g e s t ã o d e á g u a o u a l i m e n t o s c o n t a m i n a d o s , d e t e r m i n a n d o s u r t o s d e a b o r t a m e n t o . P e s q u i s a d o r e s i n d i c a m a t r a n s m i s s ã o h o r i z o n t a l c o m o a p r i n c i p a l r e s p o n s á v e l p e l a m a n u t e n ç ã o d a n e o s p o r o s e e m b o v i n o s ( T H U R M O N D e t a l . , 1 9 9 7 b ; H I E T A L A & T H U R M O N D , 1 9 9 9 ; D I J K S T R A e t a l . , 2 0 0 1 a ; K A S H I W A S A K I e t a l . , 2 0 0 1 ; D I J K S T R A e t a l . , 2 0 0 2 ; M c A L L I S T E R & L A T H A M , 2 0 0 2 ) . E m b o v i n o s , s e g u n d o Y a e g e r e t a l . ( 1 9 9 4 ) , o s f e t o s p o d e m m o r r e r n o ú t e r o , s e n d o a b s o r v i d o s , m u m i f i c a d o s , a u t o l i z a d o s , o u n a s c e r d o e n t e s o u c l i n i c a m e n t e n o r m a i s , p o r é m c o n g e n i t a m e n t e i n f e c t a d o s . A t r a n s m i s s ã o t r a n s p l a c e n t á r i a f o i d e m o n s t r a d a e m c a n i n o s , f e l i n o s , o v i n o s , b o v i n o s , c a m u n d o n g o s e s u í n o s ( D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 8 9 ; D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 9 0 ; B A R R e t a l . , 1 9 9 4 ; C O L E e t a l . , 1 9 9 5 a ; C O L E e t a l . , 1 9 9 5 b ) . A t r a n s m i s s ã o v e r t i c a l e s t á b e m e s t a b e l e c i d a e m b o v i n o s , c o n t r i b u i n d o s i g n i f i c a t i v a m e n t e p a r a a m a n u t e n ç ã o d a i n f e c ç ã o n o r e b a n h o ( A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 7 ; D U B E Y e t a l . , 1 9 9 2 ; T H U R M O N D
e t a l . , 1 9 9 7 b ; W O U D A e t a l . , 1 9 9 8 ) . P e s q u i s a d o r e s i n d i c a m a v i a d e t r a n s m i s s ã o v e r t i c a l c o m m a i o r p r e d o m í n i o , s e n d o r e s p o n s á v e l p e l a m a i o r i a d a s i n f e c ç õ e s c o n g ê n i t a s ( B J Ö R K M A N e t a l . , 1 9 9 6 ; P A R É e t a l . , 1 9 9 6 ; P A R É e t a l . , 1 9 9 7 ; T H U R M O N D & H I E T A L A , 1 9 9 7 b ; D A V I S O N e t a l . , 1 9 9 9 a ; H I E T A L A & T H U R M O N D , 1 9 9 9 ) . O a p a r e c i m e n t o d a i n f e c ç ã o p o r N . c a n i n u m e m u m r e b a n h o , p o d e s e r d e v i d o à e n t r a d a d e u m a f ê m e a i n f e c t a d a , a q u a l t r a n s m i t e o p a r a s i t o p a r a s e u s d e s c e n d e n t e s , p o r v á r i a s g e r a ç õ e s . D e s s a f o r m a , a i n f e c ç ã o n o p l a n t e l d e b o v i n o s é m a n t i d a ( P A R É e t a l . , 1 9 9 4 ) . E m u m t r a b a l h o r e a l i z a d o p o r B j ö r k m a n e t a l . ( 1 9 9 6 ) f o r a m c o n s t a t a d o s q u e 2 9 , 0 % d o s a n i m a i s s o r o - r e a g e n t e s a o N . c a n i n u m e r a m d e s c e n d e n t e s d e v a c a s a d q u i r i d a s d e o u t r a s p r o p r i e d a d e s l e i t e i r a s . M a i n a r - J a i m e e t a l . ( 1 9 9 9 ) r e l a t a r a m q u e a r e l a ç ã o d a s o r o p o s i t i v i d a d e a o a b o r t a m e n t o f o i m a i o r e m v a c a s a d q u i r i d a s ( 3 7 , 6 % ) , d o q u e e n t r e a s v a c a s c r i a d a s n a p r o p r i e d a d e ( 2 9 , 1 % ) . E s t u d o s d e m o n s t r a m q u e t a n t o v a c a s q u a n t o n o v i l h a s i n f e c t a d a s p e l o N . c a n i n u m p o d e m t r a n s m i t i r a i n f e c ç ã o p a r a s e u s d e s c e n d e n t e s , e m d i f e r e n t e s g e s t a ç õ e s , c o n s e c u t i v a s o u n ã o ( P A R É e t a l . , 1 9 9 6 ; A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 7 ) . S e g u n d o T h u r m o n d & H i e t a l a ( 1 9 9 7 a ) , f o r a m e n c o n t r a d o s p e r c e n t u a i s , n a t r a n s m i s s ã o v e r t i c a l d e 8 1 , 0 % e 1 0 0 , 0 % , e m e x p e r i m e n t o c o m 1 1 5 e 1 4 5 a n i m a i s , r e s p e c t i v a m e n t e , a p a r t i r d e s o r o p o s i t i v i d a d e d e b e z e r r o s r e c é m - n a s c i d o s d e f ê m e a s
s o r o p o s i t i v a s . N o v i l h a s i n f e c t a d a s c o n g e n i t a m e n t e e m o n i t o r a d a s d e s d e o n a s c i m e n t o r e t i n h a m a i n f e c ç ã o p o r l o n g o t e m p o p a r a s e u s d e s c e n d e n t e s ( A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 7 ) . O a b o r t a m e n t o d e t e r m i n a d o p e l o N . c a n i n u m p o d e o c o r r e r e m q u a l q u e r f a s e d a g e s t a ç ã o , e n t r e t a n t o a p r e v a l ê n c i a é m a i o r e n t r e o s d o i s t e r ç o s i n i c i a i s d a g e s t a ç ã o ( D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 9 6 ) . A c o m p a r a ç ã o e n t r e a n i m a i s s o r o n e g a t i v o s e v a c a s i n f e c t a d a s p o r N . c a n i n u m d e t e r m i n a u m a p r o b a b i l i d a d e d a o r d e m d e d u a s v e z e s o r i s c o d e a b o r t o ( P A R É e t a l . , 1 9 9 7 ) e , u m a u m e n t o d e 7 , 4 v e z e s , n a s n o v i l h a s c o n g e n i t a m e n t e i n f e c t a d a s ( T H U R M O N D & H I E T A L A , 1 9 9 7 a ) . D a v i s o n e t a l . ( 1 9 9 9 a ) e s t i m a r a m e m 9 5 , 2 % a p r o b a b i l i d a d e d o n a s c i m e n t o d e u m b e z e r r o i n f e c t a d o , g e r a d o e m u m a v a c a l e i t e i r a p o s i t i v a p a r a N . c a n i n u m . V á r i o s p e s q u i s a d o r e s ( M c A L I S T E R e t a l . , 1 9 9 8 ; U G G L A e t a l . , 1 9 9 8 ; D e M A R E Z e t a l . , 1 9 9 9 , L I N D S A Y e t a l . , 1 9 9 9 ) d e m o n s t r a r a m e x p e r i m e n t a l m e n t e a i n f e c ç ã o h o r i z o n t a l e m b o v i n o s , a p a r t i r d a i n g e s t ã o d e c o l o s t r o o u l e i t e d e v a c a s i n f e c t a d a s o u a l i m e n t o s c o n t a m i n a d o s c o m t a q u i z o í t o s . P o r m e i o d e i n f e c ç ã o e x p e r i m e n t a l , f o i c o m p r o v a d a a t r a n s m i s s ã o d e N . c a n i n u m p e l a v i a l a c t o g ê n i c a e m c a m u n d o n g o s e b e z e r r o s ( C O L E e t a l . , 1 9 9 5 b ; U G G L A e t a l . , 1 9 9 8 ) . Q u i n t a n i l l a & G o z a l o , ( 1 9 9 9 ) v e r i f i c a r a m q u e a i n f e c ç ã o o r a l , v i a c o l o s t r o , é o u t r a
p o s s í v e l v i a d e t r a n s m i s s ã o h o r i z o n t a l , e m r e c é m n a s c i d o s . P o r é m , e s s a v i a d e t r a n s m i s s ã o n ã o f o i r e l a t a d a e m c ã e s ( C O L E e t a l . , 1 9 9 5 a ) . A t r a n s m i s s ã o f e c a l - o r a l d o N . c a n i n u m e m b e z e r r o s f o i c o m p r o v a d a e x p e r i m e n t a l m e n t e , p o r D e M a r e z e t a l . ( 1 9 9 9 ) . A r e s p o s t a i m u n o l ó g i c a f o i d e s e n v o l v i d a e n t r e d u a s a q u a t r o s e m a n a s , a p ó s a i n o c u l a ç ã o d e 1 04 a 1 05 o o c i s t o s e o p a r a s i t o , e n c o n t r a d o n o c é r e b r o e m e d u l a e s p i n h a l d o s a n i m a i s d o e s t u d o . A p r i n c i p a l c a r a c t e r í s t i c a c l í n i c a e m v a c a s i n f e c t a d a s p o r N . c a n i n u m é o a b o r t a m e n t o , q u e p o d e o c o r r e r e n t r e o t e r c e i r o e n o n o m ê s d e g e s t a ç ã o ( A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 1 ; B A R R e t a l . , 1 9 9 1 ) . O s a b o r t a m e n t o s p o d e m o c o r r e r e m f o r m a d e s u r t o s o u e s p o r á d i c o s e e m q u a l q u e r e s t a ç ã o d o a n o ( B A R R , 1 9 9 4 ; M c A L L I S T E R e t a l . , 1 9 9 6 ) . A n d e r s o n ( 1 9 9 1 ) v e r i f i c o u n a C a l i f o r n i a , q u e a m a i o r i a d o s a b o r t a m e n t o s o c o r r e r a m n o p e r í o d o d e i n v e r n o . P o r o u t r o l a d o , n a H o l a n d a , a m a i o r t a x a f o i o b s e r v a d a n o v e r ã o ( L I N D S A Y e t a l . , 1 9 9 6 ) . O s a n i m a i s a p r e s e n t a m , p o r o c a s i ã o d o a b o r t a m e n t o , t i t u l a ç ã o d e a n t i c o r p o s c o n t r a N . c a n i n u m , m a i s e l e v a d o s , e d e 2 a 3 m e s e s a p ó s o a b o r t a m e n t o , a t i t u l a ç ã o d e a n t i c o r p o s d i m i n u i , p o d e n d o a t i n g i r t i t u l a ç õ e s c o n s i d e r a d a s n e g a t i v a s ( I N N E S , 1 9 9 7 ) .
A p r e s e n ç a p a r c i a l d e a u t ó l i s e n o s f e t o s a b o r t a d o s s u g e r e q u e a e x p u l s ã o o c o r r e , a l g u m a s v e z e s , a p ó s s u a m o r t e ( A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 1 ) . S e g u n d o B A R R e t a l . ( 1 9 9 5 ) , a m u m i f i c a ç ã o d o f e t o é u m i n d i c a t i v o d e q u e a i n f e c ç ã o f o i i n s t a l a d a a n t e s d o q u i n t o m ê s d e g e s t a ç ã o . O n a s c i m e n t o d e a n i m a l c o m a s p e c t o c l i n i c o n o r m a l , p o r é m c r o n i c a m e n t e i n f e c t a d o , é r e p o r t a d a p o r L i n d s a y e t a l . ( 1 9 9 6 ) e H o a r ( 1 9 9 6 ) . B e z e r r o s n a s c i d o s d e m ã e s i n f e c t a d a s m o s t r a m s i n a i s c l í n i c o s e m c e r c a d e c i n c o d i a s a p ó s o p a r t o ( B A R R e t a l . , 1 9 9 3 ) . D U B E Y ( 1 9 8 9 ) o b s e r v o u m i e l i t e , m i o c a r d i t e e e n c e f a l i t e a s s o c i a d a s a o N . c a n i n u m , e m b e z e r r o s i n f e c t a d o s . D U B E Y e t a l . ( 1 9 9 2 ) d e s c r e v e r a m o c a s o d e u m b e z e r r o i n f e c t a d o p o r N . c a n i n u m , e m I n d i a n a , E s t a d o s U n i d o s , q u e n a s c e u c l i n i c a m e n t e n o r m a l . A p ó s d u a s s e m a n a s , c o m e ç o u a a p r e s e n t a r f r a q u e z a e , c o m q u a t r o s e m a n a s d e i d a d e , m o r r e u d e v i d o a u m a p a r a l i s i a . O s s i n a i s c l í n i c o s d e b e z e r r o s n e o n a t o s i n f e c t a d o s p o r N . c a n i n u m s ã o : m e m b r o s p o s t e r i o r e s e / o u a n t e r i o r e s f l e x i o n a d o s o u h i p e r e s t e n d i d o s , a t a x i a , d i m i n u i ç ã o d o r e f l e x o p a t e l a r , p e r d a d e c o n s c i ê n c i a , e x o f t a l m i a , a s s i m e t r i a o c u l a r e d e f o r m i d a d e s a s s o c i a d a s c o m l e s õ e s d e c é l u l a s n e r v o s a s n a f a s e e m b r i o n á r i a ( P I C O U X e t a l . , 1 9 9 8 ) . L i n d s a y e t a l . ( 1 9 9 6 ) a f i r m a q u e a m a i o r i a
d o s b e z e r r o s c o m s i n a i s c l í n i c o s d e v i d o à i n f e c ç ã o p e l o p r o t o z o á r i o m o r r e d e n t r o d a s p r i m e i r a s q u a t r o s e m a n a s d e v i d a . E m f u n ç ã o d a d i f i c u l d a d e d e d i a g n ó s t i c o e m a n i m a l v i v o , a s p r o v a s s o r o d i a g n ó s t i c a s s ã o d e g r a n d e v a l i a e p e r m i t e m g r a n d e s a v a n ç o s n o c o n h e c i m e n t o d a b i o l o g i a e e p i d e m i o l o g i a d o N . c a n i n u m ( B J Ö R K M A N & U G G L A , 1 9 9 9 ) . S e g u n d o P a r é e t a l . ( 1 9 9 5 a ) e ( 1 9 9 5 b ) , a s p r o v a s s o r o l ó g i c a s q u e p e r m i t e m o d i a g n ó s t i c o d a n e o s p o r o s e b o v i n a a i m u n o f l u o r e s c ê n c i a i n d i r e t a ( R I F I ) , i m u n o a d s o r ç ã o e n z i m á t i c a ( E L I S A ) , e t e s t e m o d i f i c a d o d e a g l u t i n a ç ã o p a r a a n t i c o r p o s d e N . c a n i n u m ( N A T ) . A u t i l i z a ç ã o d a i m u n o h i s t o q u í m i c a , c o m a n t i c o r p o s a n t i -N . c a n i n u m é n e c e s s á r i a , e m c a s o s d e t í t u l o s d e a n t i c o r p o s 2 0 0 n a R I F I . E m b o r a R I F I s e j a c o n s i d e r a d a e s p e c í f i c a , n ã o é d e s c a r t a d a a p o s s i b i l i d a d e d e d e s e n v o l v i m e n t o d e u m a r e a ç ã o c r u z a d a c o m T . g o n d i i , p e l a p r o d u ç ã o d e u m a e n z i m a a s s o c i a d a a u m a n t i c o r p o i m u n o a b s o r v e n t e ( P A R É e t a l . , 1 9 9 5 a ) . A p a r t i r d e t e c i d o s o u f l u í d o s d e f e t o s a b o r t a d o s o u d e b e z e r r o s i n f e c t a d o s , é p o s s í v e l a r e a l i z a ç ã o d o d i a g n ó s t i c o . E s s a s a m o s t r a s d e v e m , p r e f e r e n c i a l m e n t e s e r a c o m p a n h a d a s d e s o r o s a n g u í n e o m a t e r n o ( D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 9 6 ) . A i d e n t i f i c a ç ã o d e t a q u i z o í t o s e / o u c i s t o s d e N . c a n i n u m , p o r m e i o d e e x a m e s h i s t o l ó g i c o s e d e i m u n o h i s t o q u í m i c a é
p o s s í v e l , a p a r t i r d e a m o s t r a s d e c é r e b r o , m e d u l a e s p i n h a l , c o r a ç ã o , f í g a d o , m ú s c u l o e s q u e l é t i c o , p u l m ã o , r i m , e p l a c e n t a ( S H I V A P R A S A D e t a l . , 1 9 8 9 ; B A R R e t a l . , 1 9 9 0 ; T H O R N T O N e t a l . , 1 9 9 1 ; L I N D S A Y e t a l . , 1 9 9 3 ) . P e l a t é c n i c a d e i m u n o h i s t o q u í m i c a ( I H Q ) , u t i l i z a d a e m a m o s t r a s d e c é r e b r o f e t a l , f o i r e a l i z a d o o p r i m e i r o d i a g n ó s t i c o n o B r a s i l d e N . c a n i n u m e m u m f e t o b o v i n o a b o r t a d o , c o m i d a d e g e s t a c i o n a l d e o i t o m e s e s , p r o v e n i e n t e d e u m r e b a n h o l e i t e i r o c o m h i s t ó r i c o d e a b o r t a m e n t o , p o r G o n d i m ( 1 9 9 9 a ) . L e s õ e s d e g e n e r a t i v a s e i n f l a m a t ó r i a s , c o m á r e a s d e n e c r o s e m u l t i f o c a l e i n f i l t r a d o d e c é l u l a s m o n o n u c l e a r e s , s ã o c o m u m e n t e v i s u a l i z a d a s n o c é r e b r o d e f e t o s i n f e c t a d o s , q u a n d o p r o c e s s a d a s h i s t o l o g i c a m e n t e ( A N D E R S O N e t a l . , 1 9 9 1 ) . O t e s t e s o r o l ó g i c o d a r e a ç ã o d e i m u n o f l u o r e s c ê n c i a i n d i r e t a ( R I F I ) f o i o p r i m e i r o m é t o d o a s e r u t i l i z a d o p a r a o d i a g n ó s t i c o d e a n t i c o r p o s c o n t r a N . c a n i n u m ( D U B E Y e t a l . , 1 9 8 8 a ) . E n q u a n t o D u b e y e t a l . ( 1 9 8 8 a ) , n o s E U A , d e s e n v o l v e r a m a p r i m e i r a R I F I , a p a r t i r d e c u l t i v o c e l u l a r d e t e c i d o s d e f i l h o t e s d e c ã e s , C o n r a d e t a l . ( 1 9 9 3 b ) d e s e n v o l v e r a m a p r i m e i r a R I F I p a r a d e t e c ç ã o d e a n t i c o r p o s c o n t r a N . c a n i n u m , a p a r t i r d e p r o t o z o á r i o s i s o l a d o s d e b o v i n o s . E s t e s a u t o r e s v e r i f i c a r a m q u e 5 5 v a c a s c o m h i s t ó r i c o d e a b o r t a m e n t o , c a u s a d o p e l o N . c a n i n u m , a p r e s e n t a r a m t í t u l o s v a r i a n d o d e 3 2 0 a 5 1 2 0 , n o s s o r o s c o l h i d o s a p ó s a e x p u l s ã o
d o s f e t o s . N u m p e r í o d o d e c i n c o m e s e s , o s t í t u l o s d e s e i s v a c a s d i m i n u í r a m p a r a 1 6 0 , e d e s t a s , d u a s a p r e s e n t a r a m a u m e n t o n o s s e u s t í t u l o s d e a n t i c o r p o s e m s u a s g e s t a ç õ e s s u b s e q ü e n t e s , g e r a n d o b e z e r r o s i n f e c t a d o s c o n g e n i t a m e n t e . A a u s ê n c i a d e a n t i c o r p o s e m u m a ú n i c a a m o s t r a d e s a n g u e , n ã o d e v e s e r c o n s i d e r a d o n e g a t i v o d e v i d o à o c o r r ê n c i a d a s o r o c o n v e r s ã o ( D A N N A T T , 1 9 9 8 ) . O l i m i t e d o t e s t e d e t e r m i n a a i n f e c ç ã o e m b o v i n o s a d u l t o s , a i n d a n ã o f o i p a d r o n i z a d o . O s t í t u l o s p o d e m s e r d e 1 6 0 ( P A C K H A M e t a l . , 1 9 9 8 ) , o u d e 2 0 0 ( D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 9 6 ) . O l i m i t e u t i l i z a d o p a r a d e t e r m i n a r a i n f e c ç ã o p o r N . c a n i n u m , a p a r t i r d e e x a m e s d e s o r o s e f l u i d o s f e t a i s , é i n f e r i o r a o s d o s b o v i n o s a d u l t o s . A c o m p a r a ç ã o e n t r e o a n i m a l a d u l t o e o f e t o m o s t r a q u e e s t e ú l t i m o p o s s u i e x p o s i ç ã o m e n o r a o s a n t í g e n o s , r e s u l t a n d o e m m e n o r q u a n t i d a d e d e a n t i c o r p o s n ã o e s p e c í f i c o s ( O S A W A e t a l . , 1 9 9 8 ) . A i n f e c ç ã o p o r N . c a n i n u m e m f e t o s n ã o p o d e s e r d e s c a r t a d a , d e v i d o à a u s ê n c i a d e a n t i c o r p o s e m s o r o o u f l u i d o s f e t a i s . A p r e s e n ç a d e a n t i c o r p o s c o n t r a o p a r a s i t o é d e t e r m i n a d a p e l a c o n d i ç ã o i m u n o l ó g i c a d o f e t o , q u e p o r s u a v e z , d e p e n d e d a i d a d e g e s t a c i o n a l , d a d o s e i n f e c t a n t e e d a r e s p o s t a i m u n e d a m ã e ( R E I C H E L & D R A K E , 1 9 9 6 ; D U B E Y e t a l . , 1 9 9 7 ; W O U D A e t a l . , 1 9 9 7 ; ) . A c o n c e n t r a ç ã o d e i m u n o g l o b u l i n a s f e t a i s d i m i n u e m c o m a
a u t ó l i s e d o f e t o , c o n t r i b u i n d o d e s s a f o r m a , p a r a a n ã o d e t e c ç ã o d e a n t i c o r p o s n o s l í q u i d o s f e t a i s e m d e c o m p o s i ç ã o ( W O U D A e t a l . , 1 9 9 7 ) . A p a r t i r d a a n á l i s e p e l a R I F I , r e a l i z a d a e m f l u i d o s d e f e t o s c o m v á r i a s i d a d e s g e s t a c i o n a i s , B a r r e t a l . ( 1 9 9 5 ) v e r i f i c a r a m u m a m a i o r q u a n t i d a d e d e s o r o r e a g e n t e s a o N . c a n i n u m e m f e t o s d e s e i s a n o v e m e s e s , c o m p a r a d o s a o s d e m e n o s d e c i n c o m e s e s . W o u d a e t a l . ( 1 9 9 7 ) n ã o o b s e r v a r a m a n t i c o r p o s a n t i - N . c a n i n u m e m f e t o s d e d o i s a q u a t r o m e s e s e , d o s a n i m a i s s o r o r r e a g e n t e s , o t í t u l o m a i s a l t o , 8 0 0 , f o i r e l a t a d o e m u m f e t o a b o r t a d o c o m s e t e m e s e s . S e g u n d o D u b e y e t a l . ( 1 9 9 7 ) , a d e t e c ç ã o d e a n t i c o r p o s a n t i - N . c a n i n u m , e m s o r o s d e v a c a s q u e a b o r t a r a m , a p e n a s i n d i c a e x p o s i ç ã o m a t e r n a a o p a r a s i t o e n ã o a c a u s a d e a b o r t o i n d i v i d u a l , d e n t r o d e u m r e b a n h o . P o r é m , a d e t e c ç ã o d e a l t o s t í t u l o s e m c a s o s d e a b o r t a m e n t o , c o m o 1 2 8 0 ( C O N R A D e t a l . , 1 9 9 3 b ; T R E E S e t a l . , 1 9 9 4 ) e 4 0 9 6 ( B U X T O N e t a l . , 1 9 9 7 ) , s u g e r e a c o n f i r m a ç ã o d o d i a g n ó s t i c o d e N . c a n i n u m . O u t r a t é c n i c a s o r o l ó g i c a u t i l i z a d a p a r a o d i a g n ó s t i c o d a n e o s p o r o s e é o e n s a i o i m u n o e n z i m á t i c o ( E L I S A ) . E n q u a n t o n a R I F I s ã o u t i l i z a d o s c o m o a n t í g e n o s o s t a q u i z o í t a s i n t e i r o s , o E L I S A f o i d e s e n v o l v i d o c o m a n t í g e n o s d e t a q u i z o í t a s i n c o r p o r a d o s a o s c o m p l e x o s i m u n o e s t i m u l a n t e s ( I S C O M ) . A n t í g e n o s r e c o m b i n a n t e s
o u d e c a p t u r a , t e s t e d e a g l u t i n a ç ã o ( N A T ) e “ i m m u n o b l o t i n g ” ( I B ) t ê m s i d o e n v o l v i d o s e m e s t u d o s e p i d e m i o l ó g i c o s p a r a d e t e c t a r a p r e s e n ç a d e a n t i c o r p o s a n t i - N . c a n i n u m e m i n f e c ç õ e s n a t u r a i s , a l é m d e s e r e m a m p l a m e n t e u t i l i z a d o s n o m o n i t o r a m e n t o d e i n f e c ç õ e s e x p e r i m e n t a i s ( P A R É e t a l . , 1 9 9 5 b ; L A L L Y e t a l . , 1 9 9 6 ; J E N K I N S e t a l . , 2 0 0 0 ) . P a r é e t a l . ( 1 9 9 5 b ) r e p o r t a r a m q u e o t e s t e d e E L I S A , q u e u t i l i z a a n t í g e n o t o t a l , a p r e s e n t a s e n s i b i l i d a d e e e s p e c i f i c i d a d e d e 8 9 , 0 % e 9 7 , 0 % , r e s p e c t i v a m e n t e . E s s a t é c n i c a p e r m i t e q u e g r a n d e n ú m e r o d e a m o s t r a s s e j a p r o c e s s a d o r a p i d a m e n t e ( V E N K A S T E I N & W A K E L I , 1 9 9 4 ) . E m o u t r a m o d a l i d a d e d e s s a t é c n i c a , n a q u a l é u t i l i z a d o a n t í g e n o r e c o m b i n a n t e , a s e n s i b i l i d a d e e e s p e c i f i c i d a d e p o d e s e r d e a t é 9 8 , 0 % e 1 0 0 , 0 % , s e g u n d o S c h a r e s e t a l . ( 1 9 9 8 ) . A t é c n i c a d e E L I S A f o i u t i l i z a d a p a r a a v a l i a r t i t u l a ç õ e s d e a n t i c o r p o s c o n t r a N . c a n i n u m , e m b o v i n o s d e t o d a s a s i d a d e s e d e a m b o s o s s e x o s , e m d o i s r e b a n h o s e n d e m i c a m e n t e i n f e c t a d o s , s e n d o v e r i f i c a d a s e n s i b i l i d a d e d e 8 5 , 0 % e e s p e c i f i c i d a d e d e 9 0 , 0 % . F o i v e r i f i c a d o q u e a t i t u l a ç ã o d e a n t i c o r p o s , n o s b e z e r r o s , d i m i n u i a p ó s o n a s c i m e n t o e a u m e n t a s i g n i f i c a t i v a m e n t e n a s n o v i l h a s , a o r e d o r d e 1 8 a 2 4 m e s e s d e i d a d e ( D A V I S O N e t a l . , 1 9 9 9 b ) . O t e s t e d e a g l u t i n a ç ã o p a r a a n t i c o r p o s d e N . c a n i n u m ( N A T ) f o i d e s e n v o l v i d o p o r R o m a n d e t a l . ( 1 9 9 8 ) , u t i l i z a n d o s o r o s d e v a c a s e d e c ã e s n a t u r a l m e n t e i n f e c t a d o s , e s o r o s d e c o e l h o ,
r a t o s e o v i n o s , e x p e r i m e n t a l m e n t e i n f e c t a d o s c o m t a q u i z o í t o s o u o o c i s t o s d e N . c a n i n u m . A P C R é a l t a m e n t e s e n s í v e l e e s p e c í f i c a p a r a o d i a g n ó s t i c o d a n e o s p o r o s e ( E L L I S , 1 9 9 8 ; E L L I S e t a l . , 1 9 9 9 ) . E s t a t é c n i c a v e m s e n d o u t i l i z a d a p a r a d e t e c t a r o D N A d e N . c a n i n u m , t a n t o e m i n f e c ç õ e s n a t u r a i s , q u a n t o e x p e r i m e n t a i s ( H O L M D A H L e t a l . , 1 9 9 6 ; H O e t a l . , 1 9 9 7 ) . O t e s t e d a P C R c o m p e t i t i v o é u s a d o p a r a t r a n s f o r m a r o P C R d e m é t o d o q u a l i t a t i v o , p a r a e n s a i o q u a n t i t a t i v o . A t é c n i c a e n v o l v e q u a n t i d a d e c o n h e c i d a d e u m c o m p e t i d o r m o l e c u l a r e x ó g e n o , t a m b é m c o n h e c i d o c o m o P C R m í m i c o , o q u a l p r o m o v e a a m p l i a ç ã o d o s m e s m o s “ p r i m e r s ” , q u e p o s s u e m u m a s e q ü ê n c i a m a p e a d a d o s c o m p o n e n t e s d o P C R p a d r ã o ( Z I M M E R M A N N e t a l . , 1 9 9 6 ) . O p o t e n c i a l z o o n ó t i c o d e s t e p a r a s i t a a i n d a n ã o é c o n h e c i d o ( D U B E Y & L I N D S A Y , 1 9 9 6 ) . N e n h u m c a s o d e n e o s p o r o s e f o i r e l a t a d o e m h u m a n o s . E n t r e t a n t o , T r a n a s e t a l . ( 1 9 9 9 ) , e x a m i n a n d o a m o s t r a s d e s a n g u e d e d o a d o r e s h u m a n o s , o b t i v e r a m t í t u l o 1 0 0 p a r a N . c a n i n u m , p e l a R I F I e n q u a n t o P e t e r s e n e t a l . ( 1 9 9 9 ) , e x a m i n a n d o a m o s t r a s d e s o r o d e 7 6 m u l h e r e s c o m h i s t ó r i c o d e a b o r t a m e n t o , n ã o d e t e c t a r a m a n t i c o r p o s c o n t r a e s t e p a r a s i t a p o r m e i o d o E L I S A , R I F I e I B . P o r o u t r o l a d o , o s u c e s s o d a t r a n s m i s s ã o e x p e r i m e n t a l d o a g e n t e e m p r i m a t a s n ã o h u m a n o s , i n d i c a a
p o s s i b i l i d a d e d e i n f e c ç ã o n o h o m e m ( S U N D E R M A N N e t a l . , 1 9 9 7 , F U N C H S e t a l . , 1 9 9 8 ) . A p r e v e n ç ã o d a t r a n s m i s s ã o v e r t i c a l e h o r i z o n t a l é a b a s e p a r a o c o n t r ô l e d a s i n f e c ç õ e s p o r N . c a n i n u m ( P A R É e t a l . , 1 9 9 8 ) . A r e a l i z a ç ã o d e t e s t e s s o r o l ó g i c o s n o s a n i m a i s é f u n d a m e n t a l p a r a a v a l i a r o g r a u d e i n f e c ç ã o d o r e b a n h o ( T H U R M O N D & H I E T A L A , 1 9 9 5 ) . A s o r o l o g i a d e v e s e r r e a l i z a d a e m t o d o s o s a n i m a i s d o r e b a n h o e , n ã o a p e n a s , n a s v a c a s q u e a b o r t a r a m . I s t o p o r q u e o s b o v i n o s p o d e m a d q u i r i r a i n f e c ç ã o a p ó s o n a s c i m e n t o p e l a i n g e s t ã o d e o o c i s t o s ( M c A L L I S T E R e t a l . , 1 9 9 8 ) . A l é m d i s s o , a n i m a i s c l i n i c a m e n t e n o r m a i s , g e r a d o s p o r v a c a s s o r o p o s i t i v a s , p o d e m a p r e s e n t a r t í t u l o s d e a n t i c o r p o s ( D A N N A T e t a l . , 1 9 9 5 ) . O d e s c a r t e d e a n i m a i s i n f e c t a d o s ( p e l a v i a c o n g ê n i t a ) e v i t a a d i s s e m i n a ç ã o d o p a r a s i t o n o r e b a n h o p e l a t r a n s m i s s ã o v e r t i c a l ( T H U R M O N D & H I E T A L A 1 9 9 5 ; W O U D A e t a l . , 1 9 9 8 ) . P r o t e g e r o s a l i m e n t o s e á g u a d a c o n t a m i n a ç ã o c o m o o c i s t o s p e l a s f e z e s d e c ã e s ; n ã o f o r n e c e r n e m p e r m i t i r a c e s s o d o s c ã e s à p l a c e n t a , c a r n e e v í s c e r a s d e f e t o s a b o r t a d o s , e d e v a c a s e b e z e r r o s m o r t o s ; c o i b i r o c o n t a t o d e c ã e s c o m a s i n s t a l a ç õ e s t i p o s d e p ó s i t o s e c u r r a i s , s ã o m e d i d a s p r e v e n t i v a s , q u e v i s a m o c o n t r o l e d a i n f e c ç ã o p o r N . c a n i n u m , p e l a s v i a s d e t r a n s m i s s ã o h o r i z o n t a l
e / o u v e r t i c a l ( M c A L L I S T E R e t a l . , 1 9 9 8 ; P A R É e t a l . , 1 9 9 8 ;
3 MATERIAL E MÉTODOS
3.1 Região e Período de Estudo
Amostras procedentes de rebanhos pertencentes a 26 municípios da
região Oeste do Estado de São Paulo, foram colhidas durante abates no frigorífico
Santa Maria, localizado no município de Presidente Prudente - São Paulo, durante o
período de maio a dezembro de 2003.
A região apresenta temperatura média anual de 22,5°C com pluviosidade
média anual de 1.300mm.
3.2 Amostra
As amostras foram obtidas de novilhas prenhes cuja base racial era de
zebuínos, provenientes de propriedades cujo manejo, na maioria das vezes, era de
recria e de engorda. Como característica da região, a movimentação de rebanhos
entre propriedades era intensa, não havendo fixação de um animal, do nascimento até
a fase reprodutiva, em uma mesma propriedade.
Foram testadas 518 novilhas prenhes, cujo sangue foi colhido por meio
Os fetos obtidos desses animais, devidamente identificados, foram
encaminhados para o Laboratório de Anatomia Patológica da Universidade do Oeste
Paulista onde, por meio de necropsia, eram colhidos: sangue, por punção cardíaca, e
tecidos cardíaco, pulmonar, hepático, renal, esplênico, cerebral e placentário. Também
durante a necropsia foi mensurado o comprimento da coluna vertebral desses fetos, a
partir da articulação atlanto-occiptal até o final do sacro e aferido seus pesos para a
determinação de suas idades, segundo recomendações de Roberts (1984).
3.3 Processamento das Amostras
Os soros maternos e fetais foram acondicionados em microtubos de
polipropileno previamente identificados e mantidos a –20°C, e os tecidos fetais em
refrigeração, até serem processados no laboratório de viroses de Bovídeos do Instituto
Biológico de São Paulo.
As 518 amostras de soro materno e fetal e a mesma quantidade de
3.3.1 Descrição da técnica da PCR utilizada
Os tecidos fetais foram macerados na proporção de 2,0 g de material
para 8,0mL de meio Eagle’s minimal essential médium1 com 1% de antibiótico em homogeneizador2 por 30 segundos em velocidade alta. O material foi transferido para tubo de ensaio, com acréscimo de 100μL de mistura contendo antibiótico
(estreptomicina, gentamicina, penicilina, anfotericinaB), deixado 1h na geladeira e,
posteriormente, congelado. Depois foi centrifugado durante 10 minutos a 1500 yxg, em
centrifuga refrigerada, e foi utilizado o sobrenadante para realização da PCR. A PCR
foi composta das etapas de extração, amplificação e leitura por meio da eletroforese
em gel de agarose a 2%.
A extração foi realizada com trizol3 segundo recomendações do fabricante, com algumas modificações. Da amostra foram utilizados 250μL e
acrescentados 750μL de trizol.
1 Mem – Cultilab
2 Stomacher® 80 – Biomaster Lab System
