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Aula 12 - ESTERILIZAÇÃO MICROBIOLOGIA

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Academic year: 2021

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(1)

ESTERILIZAÇÃO  EM  LABORATÓRIOS  

DE  MICROBIOLOGIA  

PROF.  CECÍLIA  DANTAS  VICENTE  

CONDIÇÕES  QUE  INFLUENCIAM  A  

AÇÃO  ANTIMICROBIANA  

• 

Muitos  fatores  influenciam  a  morte  dos  

microrganismos:  

– 

Temperatura;  

– 

Tipo  de  microrganismo;  

– 

Estado  fisiológico  das  células;  

– 

Condições  ambientais;  

TEMPERATURA  

• 

O  aumento  da  temperatura  apressa  a  destruição  dos  

microrganismos.  

Escherichia   coli   foi   exposta   ao   fenol   numa   concentração   de   4,62   g/L  

TIPO  DE  MICRORGANISMO  

• 

As  formas  vegetabvas  são  muito  mais  sensíveis  que  

a  forma  esporulada  que  são  extremamente  

resistentes.  Resistência  dos  esporos  de  

microrganismos.  

Agente  

esterelizante   E.  coli   Esporos  bacterianos   Esporos  fungicos   Vírus  e  bacteriófagos  

Fenol   1   100.000.000   1-­‐2   30   Formaldeído   1   250   2   Calor  seco   1   1.000   2-­‐10   1   Calor  úmido   1   3.000.000   2-­‐10   1-­‐5   Luz  ultravioleta   1   2-­‐5   5-­‐100   5-­‐10  

(2)

ESTADO  FISIOLÓGICO  DAS  CÉLULAS  

• 

Células  jovens  são  mais  facilmente  destruídas  do  que  

células  velhas.  

• 

Alterações  na  natureza  da  membrana,  ocorridas  durante  

o  envelhecimento  podem  modificar  a  permeabilidade  

celular  e  contribuir  para  a  resistência  bacteriana.  

CONDIÇÕES  AMBIENTAIS  

• 

Substrato  ou  meio  de  crescimento  do  microrganismos  

influem  na  eficácia  de  destruição  dos  microrganismos.  

• 

O  calor  é  mais  eficiente  em  meios  ácidos  do  que  

básicos;  

• 

Altas  conc.  de  carboidrato  aumentam  a  resistência  

térmica  dos  microrganismos;  

• 

A  presença  de  matéria  orgânica  diminui  a  eficiência  do  

agente  anbmicrobiano  o  protegendo.    

– 

O  agente  anbmicrobiano  pode  se  combinar  com  a  matéria  

orgânica  formando  produto  não  anbmicrobiano;  

– 

A  matéria  orgânica  pode  proteger  as  células  do  agente  

anbmicrobiano  impedindo  o  contato  com  o  desinfetante;  

ESTERILIZAÇÃO  

• 

Esterilização  é  o  processo  que  promove  

completa  eliminação  ou  destruição  de  todas  

as  formas  de  microrganismos  presentes  :  

vírus,  bactérias,  fungos,  protozoários,  

esporos,  para  um  nível  aceitável  de  

segurança.    

• 

O  processo  de  esterilização  pode  ser  @sico,  

químico,  @sico-­‐  químico.  

Desinfetante  

• 

É  um  agente  químico,  que  mata  as  formas  

vegetabvas,  mas  não  necessariamente,  as  

formas  esporuladas  de  microrganismos  

patogênicos.    

• 

A  desinfecção  é  aplicada  à  objetos  para  

destruir  agentes  infecciosos.  

(3)

ANTISSÉPTICO  

• 

É  uma  substância  que  se  opõe  à  sepsis  ou  

previne  o  crescimento  ou  abvidade  de  

microrganismos  no  corpo  humano.  

(20  –  21  –  22  ...2n  )  -­‐  Nf  =Ni  x  2n Ni  =  1000   Tgeração  =  20min   Após  2  horas   Nf  =  ?  

REPRODUÇÃO  

Curva  de  Crescimento  

Quando  o  microrganismo  perde  sua  capacidade     de  reprodução.  

Em  que  situação  podemos  afirmar  que  houve     morte  bacteriana?  

(4)

•  É  preciso  conhecer  a  resistência  térmica  do              microrganismo  alvo  através  do  seu  valor  D  e  Z.   •  O  que  significa  Valor  D  ?  

•  Valor  D  ou  Tempo  de  Redução  Decimal  é  definido  como  o  TEMPO  (em   minutos),  a  uma  dada  temperatura,  necessário  para  reduzir  90%  da   população  (ou  reduzir  um  ciclo  log  na  curva  de  sobrevivência  térmica)  de   um  determinado  microrganismo.    

•  E  o  valor  Z  ?  

•  É  um  valor  mensurado  em  oC  que  se  deve  aumentar  a  temperatura  para  

que  o  tempo  de  destruição  térmica  seja  reduzido  em  1  ciclo  logarítmico   ou  10  vezes.  

Como  calcular  o  tratamento  DE  ESTERILIZAÇÃO  adequado?  

CURVA  DE  MORTE  TÉRMICA  

N0 de D Tempo min N0 bactérias Vivas N0 bactérias mortas % mortas 0 0 1.000.000 0 0 1D 2 100.000 900.000 90 2D 4 10.000 90.000 99 3D 6 1.000 9.000 99,9 6D 12 1 9 99.9999 8D 16 0,01 0,09 99,999999

Curva  de  MORTE  

Esterilização  

5   10   15   20   25   100   101   102   103   104  

t  (min)  a  T  constante  

D   Tgα=  1  /  D  

α

D=  (t2  –  t1)  /  (log  Ni  –  log  Nf)   Curva  de  sobrevivência  

Esterilização  -­‐  Tratamento  térmico  

10-­‐1   100   101   102   z   230   240   250   Temperatura  (°F)   220  

Curva  de  destruição  térmica  

(5)

•  Para  destruir  uma  população  de  C.  botulinum  bpo  A  (100)  numa  salsicha  

enlatada  cujo  D121o

C=0,13  min  e  Z=90C  (dados  da  literatura).    

                                                                     90%      D=0,13  min  

 a)  100  esporos                                      10  esporos  

                                         T=  121  0C,      Z  =  9  0C                                          90%      D=0,013  min        b)  100  esporos              10  esporos          T=  130  0C,    Z  =  9  0C                                                    90%      D=1,3  min        c)  100  esporos              10  esporos          T=  112  0C,    Z  =  9  0C

                                                                     

"Quanto  maior  a  temperatura  menor  o  tempo  de  destruição  térmica  da  população  alvo"  

PRINCIPAIS  MÉTODOS  DE  CONSERVAÇÃO  

Tipos  de  Esterilização  

• 

Esterilização  por  meios  Físicos  

– 

Vapor  saturado  sob  pressão  (calor  úmido)  

– 

Calor  seco  

– 

Filtração  

– 

Radiação  ionizante  

– 

Radiação  não  ionizante  

Tipos  de  Esterilização  

•  Esterilização  por  meios  Químicos  

–  Formaldeído  e  Glutaraldeído   –  Ácido  peracébco  

–  Peróxido  de  hidrogênio  de  ozônio   –  Álcoois  

–  Quaternário  amônia   –  Halogênios   –  Compostos  fenólicos  

•  Esterilização  por  meios  Físico-­‐químicos  

–  Vapor  formaldeído   –  Óxido  de  ebleno  

–  Plasma  de  Peróxido  de  Hidrogênio  

–  Plasma  de  gases  (vapor  de  ácido  peracébco  e  peróxido  de  hidrogênio;   oxigênio,  hidrogênio  e  gás  argonio)      

Vapor  saturado  sob  pressão  

 (calor  úmido)  

(6)

TIPOS  DE  VAPOR  

• 

Vapor  saturado:  é  a  camada  mais  próxima  da  

superzcie  líquida,  encontra-­‐se  no  limiar  do  

estado  líquido  e  gasoso,  podendo  apresentar-­‐

se  seca  ou  úmida.  

– 

Vapor  úmido:  é  normalmente  formado  quando  o  

vapor  carrega  a  água  que  fica  nas  tubulações.  

– 

Vapor  super  aquecido:  vapor  saturado  submebdo  

à  temperaturas  mais  elevadas.  

Vantagens  e  Desvantagens  

• 

O  vapor  saturado  seco  é  mais  ublizado  uma  vez  que  o  

vapor  úmido  tem  um  excesso  de  água  que  torna  

úmidos  os  materiais  dentro  da  esterilizadora;  e  capaz  

de  circular  por  convecção  permibndo  sua  penetração  

em  materiais  porosos.  

• 

 O  vapor  super  aquecido  é  deficiente  de  umidade  

necessária  para  a  esterilização.  

• 

A  produção  do  vapor  ublizado  na  esterilização  requer  

alguns  cuidados  como:  

– 

 a  água  deve  estar  livre  de  contaminantes  em  

concentração  que  possa  interferir  no  processo  de  

esterilização,  danificar  o  aparelho  ou  os  produtos  a  serem  

esterilizados.  

Autoclaves  

•  Composta  por  câmara  em  aço  inox,  com  uma  ou  duas  portas,  possui  

válvula  de  segurança,  manômetros  de  pressão  e  um  indicador  de   temperatura.    

•  Elas  podem  ser  divididas  em:  

–  Autoclave  ver_cal:    

– Autoclave  gravitacional:  o  ar  é  removido  por  gravidade,  assim  

quando  o  vapor  é  admibdo  na  câmara,  o  ar  no  interior  desta,   que  é  mais  frio  (mais  denso),  sai  por  uma  válvula  na  superzcie   inferior  da  câmara.  Pode  ocorrer  a  permanência  de  ar  residual   neste  processo,  sendo  a  esterilização  compromebda  

principalmente  para  materiais  densos  ou  porosos.  

– Autoclave  pré-­‐vácuo:  o  ar  é  removido  pela  formação  de  vácuo,  

antes  da  entrada  do  vapor,  assim  quando  este  é  admibdo,   penetra  instantaneamente  nos  pacotes.  

– Autoclave  vácuo  fracionado:  remoção  do  ar  em  períodos  

intermitentes,  com  injeção  simultânea  de  vapor.    

TEMPO  X  TEMPERATURA  DE  

ESTERILIZAÇÃO  CALOR  

(7)

Autoclaves  

• 

horizontal  ou  verbcal.    

• 

Horizontal    

– 

paredes  duplas,    

– 

separadas  por  um  espaço  onde  o  vapor  circula  para  

manter  o  calor  na  câmara  interna  durante  a  esterilização;    

• 

verbcal

   

– 

não  são  adequadas  pois  dificultam  a  circulação  do  vapor,    

– 

Dificultam  a  drenagem  do  ar  e  a  penetração  do  vapor  

devido  à  distribuição  dos  pacotes  a  serem  esterilizados,  

que  ficam  sobrepostos.  

Uma  autoclave  e  seus  principais  componentes.    

Mecanismo  de  ação  e  ciclo  de  

esterilização  

• 

O  efeito  letal  decorre  da  ação  conjugada  da  

temperatura  e  umidade.    

• 

O  vapor,  em  contato  com  uma  superzcie  mais  

fria,  umedece,  libera  calor,  penetra  nos  

materiais  porosos  e  possibilita  a  coagulação  

das  proteínas  dos  microrganismos.  

CICLO  DE  ESTERILIZAÇÃO  

• 

O  ciclo  de  esterilização  compreende:  

– 

remoção  do  ar;  

– 

admissão  do  vapor;  

– 

exaustão  do  vapor    

(8)

Remoção  do  ar  

• 

Remoção  do  ar:    

– 

é  necessário  que  o  vapor  entre  em  contato  com  

todos  os  ar?gos  da  câmara  e,    

– 

é  preciso  que  o  ar  seja  removido,  

– 

a  remoção  do  ar  pode  ser  por  gravidade  ou  por  

u?lização  de  vácuo  antes  da  entrada  do  vapor.  

Admissão  do  vapor  

• 

Admissão  do  vapor:    

– 

é  também  o  período  de  exposição.    

– 

é  iniciado  pela  entrada  do  vapor,  subs?tuindo  o  ar  

no  interior  da  câmara.    

– 

O  tempo  de  exposição  começa  a  ser  marcado  

quando  a  temperatura  de  esterilização  é  a?ngida.    

– 

O  tempo  de  exposição  pode  ser  dividido  em  três  

partes:  tempo  de  penetração  do  vapor,  tempo  de  

esterilização  e  intervalo  de  confiança.  

Exaustão  do  vapor  

• 

Exaustão  do  vapor:    

– 

é  realizada  por  uma  válvula  ou  condensador.  

– 

A  exaustão  pode  ser  rápida  para  ar?gos  de  

superKcie  ou  espessura;    

– 

para  líquidos  a  exaustão  deve  ser  o  mais  lenta  

possível  para  se  evitar  a  ebulição,  extravazamento  

ou  rompimento  do  recipiente.  

Secagem  dos  ar?gos  

• 

Secagem  dos  ar?gos:    

– 

é  ob?da  pelo  calor  das  paredes  da  câmara  em  

atmosfera  rarefeita.    

– 

Nas  autoclaves  de  exaustão  por  gravidade,  o  

tempo  de  secagem  varia  de  15  a  45  minutos;  

– 

 nas  autoclaves  de  alto  vácuo  o  tempo  é  de  5  

(9)

Disposição  dos  ar_gos  dentro  da  

câmara  

• 

Arbgos  de  superzcie  como  bandejas,  bacias  e  instrumentais  

não  devem  ser  esterilizados  com  arbgos  de  espessura  como  

nas  autoclaves  gravitacionais.    

• 

O  volume  de  material  dentro  da  autoclave  não  deve  

exceder  80%  da  sua  capacidade.    

• 

Os  pacotes  devem  ser  colocados  de  maneira  que  haja  um  

espaçamento  de  25  a  50  mm  entre  eles,  e  de  forma  que  o  

vapor  possa  circular  por  todos  os  itens  da  câmara.    

• 

Os  pacotes  maiores  devem  ser  colocados  na  parte  inferior    

• 

Os  menores  na  parte  superior  da  câmara;  os  maiores  

podem  ter  no  máximo  30cm  x  30cm  x  50cm  de  tamanho  

Cuidados  básicos  para  a  eficiência  da  

autoclavação  

• 

Antes  da  esterilização  higienizar  convenientemente  os  

materiais:  

– 

Material  crí?co  deve  permanecer  em  solução  desinfetante  

durante  30  minutos,  antes  de  se  realizar  a  limpeza.  

– 

Os  materiais  devem  ser  lavados  manualmente  com  o  uso  

de  escovas,  ou  em  lavadoras  ultra-­‐sônicas.  

– 

Placas  e  tubos  devem  ser  lavados  com  água  e  detergente  

apropriado;    

– 

O  enxague  deve  ser  abundante  para  que  este  seja  

removido  completamente  resíduos  de    detergente  

– 

Acondicionar  os  ar?gos  em  embalagens  adequadas,  que  

permitam  a  esterilização  e  a  estocagem  do  ar?go.  

Cuidados  básicos  para  a  eficiência  da  

autoclavação  

•  Idenbficar  os  pacotes  corretamente,  

•  Não  ultrapassar  as  dimensões  de  30cm  x  30cm  x  50cm,  e  o  peso  de  

7  kg.    

•  Colocar  os  pacotes  pesados  sob  os  mais  leves;  

•   Evitar  encostá-­‐los  nas  paredes  da  câmara,  deixar  espaço  entre  eles  

para  facilitar  a  drenagem  do  ar  e  penetração  do  vapor.    

•  Não  sobrecarregar  o  equipamento,  ublizar  apenas  80%  de  sua  

capacidade.  

•  Colocar  a  fita  indicadora  na  embalagem  externa  e  vedar  os  pacotes  

menores  com  a  mesma  

•  Recipientes  como  bacias,  jarros,  ou  outros  que  possuem  

concavidade  devem  ser  colocados  com  sua  abertura  para  baixo  para   facilitar  o  escoamento  do  ar  e  da  água  resultante  da  condensação   do  vapor.  

Durante  a  esterilização  

• 

Verificar  constantemente  os  indicadores  de  

(10)

Após  a  esterilização    

• 

A  porta  do  aparelho  deve  ser  aberta  lentamente  e  

deve  permanecer  entreaberta  de  5  a  10  minutos.  

• 

Os  pacotes  não  devem  ser  colocados  em  

superKcies  metálicas  logo  após  a  esterilização,  

pois  em  contato  com  superKcie  fria  o  vapor  

residual  se  condensa  e  torna  as  embalagens  

úmidas,  comprometendo  a  esterilização  uma  vez  

que  a  umidade  diminui  a  resistência  do  invólucro  

de  papel  e  interfere  no  mecanismo  de  filtração  do  

ar.  

Falhas  no  processo  de  autoclavação  

• 

Principais  falhas  humanas:  

– limpeza  incorreta  ou  deficiente  dos  materiais;ublização  de  

invólucros  inadequados  para  os  arbgos  a  serem  esterilizados;  

– confecção  de  pacotes  muito  grandes,  pesados  ou  

apertados;disposição  inadequada  dos  pacotes  na  câmara;  

– abertura  muito  rápida  da  porta  ao  término  da  

esterilização;tempo  de  esterilização  insuficiente;  

– ublização  de  pacotes  que  saíram  úmidos  da  autoclave;  

– mistura  de  pacotes  esterilizados  e  não  esterilizados;  

– não  idenbficação  da  data  de  esterilização  e  data-­‐limite  de  

validade  nos  pacotes;  

– desconhecimento  ou  despreparo  da  equipe  para  usar  o  

equipamento.  

Falhas  no  processo  de  autoclavação  

• 

As  falhas  mecânicas  decorrem  da  operação  

incorreta  e  da  falta  de  manutenção  das  

autoclaves.  

Prevenção  de  riscos  operacionais  

•  O  manuseio  das  autoclaves,  embora  existam  diferentes  modelos  e  

cada  um  deles  possua  seu  próprio  manual  de  instrução  de  uso,   alguns  cuidados  são  fundamentais  para  a  prevenção  de  acidentes:  

– manter  as  válvulas  de  segurança  em  boas  condições  de  uso;  

– não  abrir  a  porta  da  autoclave  enquanto  a  pressão  da  câmara  não  se  

igualar  à  pressão  externa;    

– ao  abrir  a  porta  da  autoclave  proteger  o  rosto  para  evitar  

queimaduras,  explosões  ou  implosões  dos  frascos  de  vidro;  

– u_lizar  luvas  de  amianto  para  a  re_rada  dos  ar_gos  metálicos  da  

câmara;  

– verificar  periodicamente  o  funcionamento  de  termostatos,  válvulas  

de  segurança;  

– não  forçar  a  porta  para  abrir  quando  esta  emperrar;a  porta  da  

autoclave  deve  possuir  uma  trava  de  segurança  para  que  esta  não   abra  enquanto  houver  pressão  no  interior  da  câmara.  

(11)

ESTERILIZAÇÃO  DE  MATERIAIS  NO  

LABORATÓRIO  DE  MICROBIOLOGIA  

DO  IFAL  –  COORDENAÇÃO  DE  

QUÍMICA  

ESTERILIZAÇÃO  DE    MATERIAIS  

• 

 Todo  o  material  ublizado  no  laboratório  de  

microbiologia  deve  receber  a  seguinte  

seqüência    de  tratamento:  

•  DESCONTAMINAÇÃO  

•  LAVAGEM  

•  SECAGEM  

•  ESTERILIZAÇÃO    

•  ARMAZENAMENTO  

DESCONTAMINAÇÃO  

•  Descontaminação  é  a  etapa  na  qual  materiais  já  u_lizados  são  

descontaminados.  Ex.  placas  contendo  meios  de  cultura  e  colônias   de  análise  finalizadas.  

•    -­‐  Autoclave  120  °C  /60  min.  →    Descontaminações  

•    Obs.:    Não  autoclavar  tubos  que  contenham  reabvos  de  KOVAC'S.  

Placas  depois  de  autoclavadas  para  

descarte  e  lavagem  

(12)

Lavagem  

 -­‐  Enxaguar  o  material  em  água  corrente,  eliminado  material   orgânico.  

         -­‐  Ublizar  detergente  neutro.  

   -­‐  Preparar  a  solução  e  mergulhar  todo  material  a  ser  lavado.          -­‐  Deixar  de  molho  por  no  mínimo  30  minutos  ou  por  até  24  horas  

dependendo  do  grau  de  sujidade.  

 -­‐  Esfregar  o  material  com  escova  ou  esponja          -­‐  Enxaguar  o  material  com  bastante  água  corrente.  

 -­‐  Enxaguar  dez  vezes  com  água  corrente,  enchendo  e  esvaziando   totalmente  a  vidraria.  

 -­‐  Ublizar,  no  úlbmo  enxágüe,  água  desblada.    

 -­‐  Deixar  drenar  a  água  das  vidrarias  em  cestas  de  aço  inoxidável   com  fundo  perfurado  

Secagem  

-­‐  A  secagem  vai  variar  com  o  bpo  de  material.  

Esta  secagem  pode  ser  feita  a  temperatura  

ambiente  ou    em  estufa.  

Preparo  dos  materiais  

• 

Após  a  secagem  cada  material  deve  ser  preparado  de  

acordo  com  o  bpo  de  tratamento  que  vai  receber.    

• 

Os  materiais  que  recebem  tratamento  por  calor  seco  

podem  ser  embrulhados  em  papel  Kra‚  (pardo)  ou  

acondicionados  em  cilindros  apropriados.    

• 

Todos  os  materiais  devem  ser  devidamente  idenbficados.  

• 

As  pipetas  antes  de  serem  esterilizadas  devem  ser  

embrulhadas  individualmente  em  papel  Kra‚  ou  

acondicionadas  em  cilindros  apropriados.    

• 

No  caso  de  tratamento  por  vapor  (autoclave)  os  materiais  

devem  ser  acondicionados  dentro  de  vidros  com  gaze  ou  

algodão  no  fundo  (ponteiras  e  bastões),  deixando  a  tampa  

do  vidro  semi  aberta  durante  o  tratamento.    

Esterilização  por  calor  húmido  em  

autoclave.  

(13)

Autoclave  verbcal  do  lab.  Microbiologia  IFAL  

•  Verificar  o  nível  da  água,  que  deve  cobrir  totalmente  a  resistência  ou  apoio  do   cesto;  

•  Trocar  a  água  da  autoclave  a  cada  mês  ou  quando  for  necessário  abrindo  a  válvula   do  dreno,  e  esvaziar  com  ajuda  de  um  balde;  

•  Adicionar  água  desblada  até  cobrir  a  resistência  ou  apoio  do  cesto;   •  Baixar  a    tampa  da  autoclave  e  fechar  as  manoplas;  

•  Ligar  a  tomada  da  autoclave  e  o  botão  de  ajuste  de  temperatura  (máximo);   •  Deixar  a  válvula  de  segurança  aberta,  e  deixar  sair  vapor  até  começar  a  gotejar  

água,  então  fechá-­‐la;  

•  Aguardar  que  a  temperatura  alcance  121  ºC  e  a  pressão  de  1,1  Kgf./cm2;   •  Ajustar  o  controle  de  temperatura  para  médio,  e  inicial  a  marcação  do  tempo  de  

autoclavagem;  

•  Após  o  tempo  de  esterilização,  ajustar  o  botão  de  temperatura  (desligar)  e  desligar   a  a  tomada;  

•   Não  abrir  a  tampa  da  autoclave  até  que  a  pressão  abnja  0  Kgf./cm2  e  a  válvula  de   segurança  seja  aberta,  liberando  o  vapor  conbdo  na  autoclave;  

•  Só  então,  abria  as  manoplas  da  tampa  da  autoclave  e  rebrar  o  material   esterilizado.  

Tabela  de  esterilização  do  lab  

microbiologia  do  IFAL  

Esterilização  Calor  seco  

Esterilização  Calor  seco  

• 

Flambagem:  aquece-­‐se  o  material,  principalmente  fios  de  

plabna  e  pinças,  na  chama  do  bico  de  gás,  aquecendo-­‐os  até  

ao  rubro.  Este  método  elimina  apenas  as  formas  vegetabvas  

dos  microrganismos,  não  sendo  portanto  considerado  um  

método  de  esterilização.  

(14)

Esterilização  Calor  seco  

• 

Incineração:  é  um  método  destrubvo  para  os  

materiais,  é  eficiente  na  destruição  de  matéria  

orgânica  e  lixo  hospitalar.  

Esterilização  Calor  seco  

• 

Raios  infravermelhos:  ubliza-­‐se  de  lâmpadas  

que  emitem  radiação  infravermelha,  essa  

radiação  aquece  a  superzcie  exposta  a  uma  

temperatura  de  cerca  de  180

O

 C.  

• 

Estufa  de  ar  quente:  consbtui-­‐se  no  uso  de  

estufas  elétricas.  É  o  método  mais  ublizado  

dentre  os  de  esterilização  por  calor  seco.  

Esterilização  Calor  seco  

•  O  uso  do  calor  seco,  por  NÃO  SER  PENETRANTE  COMO  O  CALOR  

ÚMIDO,  requer  o  uso  de  temperaturas  muito  elevadas  e  tempo  de  

exposição  muito  prolongado,  por  isso  este  método  de  esterilização   só  deve  ser  ublizado  quando  o  contato  com  vapor  é  inadequado.  

•  As  temperaturas  muito  elevadas  podem  interferir  na  ESTABILIDADE  

DE  ALGUNS  MATERIAIS,  como  por  exemplo  o  aço  quando  

submebdo  a  temperaturas  muito  elevadas  perde  a  têmpera;    

•  Para  outros  materiais  como  borracha  e  tecidos  além  da  

temperatura  empregada  ser  altamente  destrubva,  o  poder  de   penetração  do  calor  seco  é  baixo,  sendo  assim  a  esterilização  por   este  método  inadequada.  

•  Os  MATERIAIS  INDICADOS  para  serem  esterilizados  por  este  

método  são  instrumentos  de  ponta  ou  de  corte,  que  podem  ser   oxidados  pelo  vapor,  vidrarias,  óleos  e  pomadas.  

Esterilização  Calor  seco  

• 

Este  processo  causa  a  destruição  dos  microrganismos  

fundamentalmente  por  um  processo  de  oxidação,  ocorrendo  

uma  desidratação  progressiva  do  núcleo  das  células.      

• 

ESTUFA  (Temperatura  (

o  

C)  /Tempo  de  Exposição)      

• 

180  /30  minutos    

• 

170  /  1  hora    

• 

160  /  2  horas    

• 

150  /  2  horas  e  30  minutos    

• 

140  /  3  horas    

(15)

Esterilização  Calor  seco  

•  Falhas  no  processo:  

–  Distribuir  os  arbgos  no  interior  da  câmara,  não  deixar  que  toquem  as  

paredes  do  interior  do  equipamento,    

–  Deixar  também  um  espaço  entre  os  materiais,  para  favorecer  a  

circulação  do  ar;    

–  O  invólucro  deve  ser  adequado  para  este  bpo  de  esterilização  e  para  o  

material  a  ser  esterilizado.  

–  As  embalagens  mais  ublizadas  são  as  caixas  metálicas,  papel  alumínio  e  

frascos  de  vidro  refratário;    

–  Os  arbgos  a  serem  esterilizados  devem  possuir  boa  condubvidade  

térmica.  

–  Materiais  não  termorresistentes  não  devem  ser  esterilizados  por  este  

método,  como  os  tecidos,  borrachas  e  papéis;    

–  O  equipamento  deve  ser  calibrado  e  validado.    

–  O  fabricante  precisa  informar  qual  o  ponto  mais  frio  da  câmara.  

–   A  esterilização  é  eficiente  quando  neste  ponto  a  temperatura  é  abngida,  

é  necessário  portanto  que  os  testes  com  os  indicadores  biológicos  sejam   realizados  neste  local.  

ESTERILIZAÇÃO  POR  FILTRAÇÃO  

ESTERILIZAÇÃO  POR  FILTRAÇÃO  

• 

É  a  passagem  de  um  líquido  ou  gás  através  de  

um  material  semelhante  a  uma  tela,  com  

poros  pequenos  o  suficiente  para  reter  os  

microrganismos.  

• 

 A  filtração  é  usada  para  esterilizar  os  

materiais  sensíveis  ao  calor,  como  alguns  

meios  de  cultura,  enzimas,  vacinas  e  soluções  

anbbióbcas  

ESTERILIZAÇÃO  POR  FILTRAÇÃO  

• 

Filtros  de  membrana  compostos  de  

substâncias  como  ésteres  de  celulose  ou  

polímeros  plásbcos,  tornaram-­‐se  populares  

para  uso  industrial  e  laboratorial.  

• 

Filtros  HEPA  (high  efficiency  parbculate  air)  

removem  quase  todos  os  microrganismos  

maiores  que  cerca  de  0,3  micrometros  de  

diâmetros.  

(16)

ESTERILIZAÇÃO  POR  FILTRAÇÃO  

• 

O  ar  que  circula  em  câmaras  de  fluxo  laminar  de  segurança  

biológica  (Fotografia  abaixo)  ou  em  “salas  limpas”  é  

frequentemente  sujeito  a  filtração  através  de  filtros  de  

elevada  eficiência  (High  Efficiency  Parbcle  Air  –  HEPA-­‐  Filter)  

que  permitem  a  retenção  de  pelo  menos  99,999%  das  células  

e  esporos  microbianos  ou  outras  parˆculas  presentes  no  ar.  

ESTERILIZAÇÃO  POR  FILTRAÇÃO  

• 

A  filtração  através  de  membranas  filtrantes  pode  ser  ublizada  

para:  

– 

 esterilizar  soluções,  para  concentrar  células  microbianas  a  

parbr  de  volumes  grandes  de  amostras  líquidas,    

– 

como  acontece  na  análise  bacteriológica  de  águas.  

RADIAÇÕES  IONIZANTES  

(17)

RADIAÇÃO  ELETROMAGNÉTICA  

•  A radiação eletromagnética é uma oscilação, em fase, dos campos elétricos e magnéticos. As oscilações dos campos magnéticos e elétricos são perpendiculares entre si e podem ser entendidos como a propagação de uma onda transversal, onde as oscilações sao perpendiculares à direção do movimento da onda (como as ondas da superficie de uma lâmina de água), que pode se deslocar através do vácuo, ou entendidos como o deslocamento de pequenas partículas, dentro do ponto de vista quântica, chamadas fótons.

Espectro  de  energia  radiante  

RADIAÇÃO  IONIZANTE  

•  A  radiação  ionizante  -­‐  È  um  método  de  esterilização  que  ubliza  a  

baixa  temperatura,  portanto  que  pode  ser  ublizado  em  materiais   termossensÌveis.  

•  Certos  átomos  possuem  a  propriedade  de  emibrem  ondas  ou  

partÌculas  de  acordo  com  a  instabilidade  de  seus  núcleos,  esta   propriedade  é  chamada  de  radioabvidade.    

•  Alguns  elementos,  como  o  Rádio  e  o  Urânio,  são  naturalmente  

radioabvos  pois  possuem  seus  núcleos  instáveis,  outros  são   produzidos  arbficialmente,  como  o  Cobalto  60  e  Césio  137.  

•  A  radiação  ionizante  -­‐    Possui  a  capacidade  de  alterar  a  carga  

elétrica  do  material  irradiado  por  deslocamento  de  elétrons.Para   fins  de  esterilização  industrial  as  fontes  de  raios  beta  e  gama  são  as   ublizadas.  

RADIAÇÃO  IONIZANTE  

•  Radiação  Beta  -­‐  Este  bpo  de  radiação  é  conseguida  através  da  

desintegração  natural  de  elementos  como  o  Iodo  131  ou  Cobalto   60,  ou  ainda  arbficialmente  por  meio  de  máquinas  aceleradoras  de   elétrons  (eléctron  beam).O  eléctron  beam  é  ublizado  para  a   esterilização  de  materiais  plásbcos  de  baixa  espessura  Seu  poder  de   penetração  é  pequeno  e  depende  de  sua  energia.  Para  o  tecido   humano,  consegue  atravessar  espessura  de  alguns  milímetros.  Esta   propriedade,  permite  aplicações  médicas  em  superzcies  da  pele  ou   na  aceleração  da  cicatrização  de  cirurgias  plásbcas  ou  do  globo   ocular.  

•  Radiação  Gama  -­‐  É  produzida  pela  desintegração  de  certos  

elementos  radioabvos,  o  mais  ublizado  é  o  Cobalto  60.  Os  raios   gama  possuem  grande  penetração  nos  materias,  sendo  letais  a   vários  microrganismos.  

(18)

RADIAÇÃO  IONIZANTE  

• 

O  processo  de  esterilização  e  descontaminação  por  energia  

ionizante,  consiste  na  exposição  dos  produtos  a  ação  de  

ondas  eletromagnébcas  curtas,  geradas  a  parbr  de  fontes  

seladas  de  Cobalto  60.  

• 

Ao  encontrarem  organismos  vivos  presentes  no  produto  em  

tratamento,  provocam  o  rompimento  de  seus  DNAs,  

levando-­‐os  à  falência  ou  à  incapacidade  de  reprodução.    

• 

Elevado  poder  de  penetração  das  ondas  eletromagnébcas,  

os  organismos  vivos  podem  ser  alcançados  onde  quer  que  

eles  estejam,  seja  em  embalagens  lacradas  ou  em  produtos  

acondicionados  das  mais  variadas  maneiras.  

• 

 Essa  caracterísbca  garante  a  eficácia  do  processo.  

Irradiadores  industriais  de  grande  

porte  

EMBRARAD  

Irradiadores  industriais  de  grande  

porte  

•  Aplicação  de  dose  elevadas  de  radiação  nas  caixas  e  containers,  cheios  dos  

materiais,  que  passam  durante  um  intervalo  de  tempo,  defronte  ao  feixe,   movidos  por  uma  esteira  transportadora.    

•  As  caixas  são  irradiadas  de  um  lado  e  do  outro  para  garanbr  a  

homogeneidade  das  doses  aplicadas,  na  faixa  de  até  varios  kiloGrays.  

•  A  fonte  é  consbtuida  de  várias  varetas  de  aço  inox,  dispostas  num  arranjo  

semelhante  a  de  um  secador  de  roupa  de  apartamento,  contendo   pasblhas  empilhadas  de  Co-­‐60  metálico,  em  seu  interior.    

•  Quando  recolhida,  fica  no  fundo  de  uma  piscina  cheio  de  água  ,  que  

funciona  como  blindagem  para  os  operadores  no  processo  de  manutenção   e  ajustes.    

Irradiadores  industriais  de  grande  

porte  

•  Durante  a  irradiação,  a  fonte  é  elevada  até  o  nível  de  percurso  das  caixas  

em  movimento  conˆnuo  na  esteira.  

•   Todo  o  sistema  é  controlado  de  fora,  uma  vez  que  tudo  deve  ser  

extremamente  blindado  devido  a  alˆssima  abvidade  da  fonte.  

•  Uma  pessoa  exposta  por  um  segundo,  num  feixe  deste  bpo,  morreria  em  

poucos  segundos.  

•   Com  tudo  isto,  trata-­‐se  de  uma  instalação  bastante  segura,  com  poucos  

acidentes  ocorridos  no  mundo.  

•  Estes  irradiadores  podem,  dependendo  da  dose  radiação  aplicada,  inibir  

brotação  em  tubérculos  (batata),  bulbos  (cebola  e  alho);  destruir  tenia,   trichinella  em  carnes  ;  matar  e  esterilizar  insetos  em  cereais,  farinha,   frutosfrescos  e  secos;  esterilizar  larvas  e  reduzir  a  população  de  fungos  em   frutos  e  vegetais;  destruir  salmonella  em  carnes,  frango,  ovos;  reduzir  a   população  de  micróbios  em  ingredientes  e  especiarias  e  preservar   alimentos  perecíveis,  por  longo  período,  sem  refrigeração.  

(19)

RADIAÇÃO  NÃO  IONIZANTE  

• 

UV  (260nm)    

• 

Microondas  

LUZ  UV  

CABINE  DE  SEGURANÇA  BIOLÓGICA  (CSB)  

LUZ  ULTRA-­‐VIOLETA  

LUZ  UV  USADA  PARA  ESTERILIZAÇÃO   SUPERFICIAL  DAS  CSB  

Esterilização/Desinfecção/Assepsia  

por  meios  Químicos    

Formaldeído  e  Glutaraldeído  

Ácido  peracébco  

Peróxido  de  hidrogênio  de  ozônio  

Álcoois  

Quaternário  amônia  

Halogênios  

Compostos  fenólicos  

(20)

Ácido  Peracébco  

• 

Desinfetantes  líquido.    

• 

Modo  de  uso:  por  submersão.      

• 

Indicação:  para  uso  materiais  em  inox  submersíveis.  

• 

Concentração:  35%,  estabilizada  que  será  diluída  (  a  0,2%)  

automabcamente  em  água  estéril  (máquina  ainda  não  

disponível  no  país).    

• 

Tempo  de  processamento:  12  minutos  a  50  a  56º.C  ou  10  

minutos  para  desinfecção  e  20  para  esterilização  se  o  

processo  for  imersão.  

Peróxido  de  hidrogênio  e  ozônio  

(21)

Halogênios  

Halogênios  

Compostos  fenólicos  

Esterilização  por  meios  Físico-­‐

químicos  

Vapor  formaldeído  

Óxido  de  ebleno  

(22)

Vapor  de  formaldeído  

Na   Europa   usa-­‐se   ciclos   de   esterilização   por   gás   de   formaldeído   e   vapor   a   baixa   temperatura   com  concentrações  de  formaldeído  entre  3  mg/l  a  100  mg/l,  temperaturas  entre  55°C  a  80°C,   com  tempo  de  exposição  de  01  a  04  horas.  

O  FormaldeÌdo  para  esterilização  em  sua  forma  gasosa  esta  bem  abaixo  da  faixa  explosiva  e  não   é  inflamável.  

Ele  possui  um  odor  picante  e  irritante  em  concentrações  superiores  a  1  ppm,    

È  altamente  solíúvel  em  água,  e  esta  associado  à  irritação  das  mucosas  ,  ocular  e  vias  aéreas   superiores.  

O   processo   de   esterilização   por   gás   de   formaldeÌdo   segue   o   indicado   na   Norma   EuropÈia   EN   14.180:2003:  

Estágios  do  ciclo  de  esterilização     1.  Pré  aquecimento  da  máquina:   2.  Vácuo  

3.  Pulso  de  entrada  do  vapor   4.  Aquecimento  com  entrada  de  gás   5.  Esterilização  

6.  Registrada  do  gás  formol   7.  Secagem  de  carga  

8.  Estabilização  para  abertura  da  porta    

Vapor  de  formaldeído  

Óxido  de  ebleno  

Plasma  de  Peróxido  de  hidrogênio  

1-­‐Fase  do  Vácuo  –  Vaporização  do  H2O2  na  câmara.  

2-­‐Fase  da  Injeção  –  injeção  de  H2O2  líquido  na  câmara  de  tratamento  e  

emissão  de  microondas,  que  imediatamente  se  transforma  em  uma   solução  de  vapor,  resultando  num  plasma  com  radicais  livres  que   desnaturam  as  proteínas  microbianas,  levando  a  morte  celular,  ou  seja,   matando  todas  as  bactérias  que  estejam  presentes  na  superfÌcie  do   interior  da  câmara.  

3-­‐Fase  da  Difusão    -­‐  O  vapor  do  H2O2  permanece  na  câmara,  e  esteriliza  

rapidamente  todos  os  disposibvos  sem  deixar  nenhum  resÌíduo  tóxico.   A  pressão  da  câmara  é  reduzida  e  a  descarga  do  plasma  é  iniciada.   4-­‐Fase  do  Plasma  -­‐  Fase  de  esterilização  propriamente  dita.  Um  campo   eletromagnébco  é  criado  e  o  vapor  H2O2  quebra  imediatamente  sua  

estrutura  molecular,  produzindo  uma  nuvem  de  baixa  temperatura  de   plasma  que  produz  uma  luz  de  cor  ultravioleta  e  radical  livres.  Depois   da  ação  do  plasma,  os  componentes  abvados  (H,  H,  O  e  O),  perdem   sua  energia  elevada  e  recombinam  para  dar  forma  ao  oxigênio  (O)  e  à   água  (H2O).  

As  fases  2,  3  e  4  são  repebdas  para  garanbr  a  eficácia  do  processo.   5-­‐Fase  Da  Venblação    -­‐  A  câmara  é  exalada  para  igualar  a  press„o  interna  e  

(23)

Plasma  de  ácido  peracébco  

•  Dois  os  agentes  abvos.  

•  O  primeiro  é  o    Ácido  peracébco  (5%)  com  Peróxido  de  Hidrogênio  (22%);    

•  O  segundo  é  o  ácido  Peracébco  com  uma  mistura  de  gás  argônio  com  O2  e  

H2  do  qual  irá  ser  formado  o  plasma.    

•  As  fases  de  plasma  são  alternadas  com  fases  de  vapor.  

•   A  parbr  de  35%  de  ácido  peracébco  ocorre  diluição  em  água  filtrada  para  

2%    

•  Indicação:  materiais  termosensíveis.Temperatura:  50º.C  

•  Tempo  do  ciclo:  4  a  6  horas  [11]    

•  Aeração:  não  é  necessária.Limitações:  não  processa  líquidos,  limitado  a  

uso  de  materiais  de  aço.  

•  Ainda  não  disponível  no  país.  

•  Embalagens:  preferir  polipropileno  e  poliolefinas.  

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