Leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados de dois hospitais do Recife e susceptibilidade a drogas antifúngicas

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(1)LUCIANA REZENDE BANDEIRA DE MELLO. LEVEDURAS ISOLADAS DO AR DE AMBIENTES CLIMATIZADOS DE DOIS HOSPITAIS DO RECIFE E SUSCEPTIBILIDADE A DROGAS ANTIFÚNGICAS.. Dissertação apresentada ao Mestrado em Biologia de Fungos do Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco, como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Biologia de Fungos, na área de Microbiologia.. ORIENTADORA Profa. Dra. LUSINETE ACIOLE DE QUEIROZ EQUIPE ENVOLVIDA Profa. Dra. VIVIANA GIAMPAOLI, UFPE. DANIEL ARCHIMEDES DA MATTA, Escola Paulista de Medicina - UNIFESP. RECIFE – PE 2003. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(2) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. .. 2.

(3) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 3. DEDICO. Aos. meus. pais,. Arquimedes. e. Elizabeth pelo grande amor, dedicação, apoio em mais uma vitória que é tão minha quanto deles.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(4) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 4. OFEREÇO Às minhas irmãs Mariana e Paula, e minhas avós, Almarinda e Lígia pelo apoio e pela confiança depositada em mim.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(5) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 5. AGRADECIMENTOS. À Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), pela oportunidade oferecida na realização do Curso de Mestrado em Biologia de Fungos. À coordenação do Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), pelo apoio financeiro e técnico-científico. À Coordenação do Mestrado em Biologia de Fungos, na pessoa da Profª Dra. Neiva Tintin de Oliveira, pelo desempenho, apoio e amizade. Ao Departamento de Micologia, CCB, UFPE, nas pessoas de Profa. Dra. Elza Luna Alves Lima e Profa. Dra. Cristina Maria Souza Motta, respectivamente chefe e subchefe. A Dra. Paula Loureiro, Dra. Isis, Dra. Elizabeth e Dr. João Lemos – HEMOPE (Hemocentro de Pernambuco) e ao Dr. Jorge Valadares - Hospital Getúlio Vargas, que contribuíram para o desenvolvimento deste trabalho. Ao prof. Dr. Arnaldo Lopes Colombo, chefe do Laboratório Especial de Micologia/UNIFESP, SP, pela oportunidade do treinamento e apoio técnico oferecidos, a todos os amigos do Laboratório, em especial a Daniel e Carol, pela atenção, colaboração e amizade prestadas. À minha orientadora, Profª. Dra. Lusinete Aciole de Queiroz, pelo apoio, cooperação, incentivo, dedicação, valiosas sugestões e amizade demonstrada. Aos professores do Mestrado em Biologia de Fungos, pelos ensinamentos que a mim possibilitaram maior conhecimento. Em especial as Profas. Oliane Magalhães e Rejane Neves pela paciência, colaboração, companheirismo e amizade demonstrada em todas as fases deste trabalho. À minha família, pela compreensão e momentos difíceis que sempre ultrapassamos juntos. À profa. Viviana Giampaoli, pela sua atenção e dedicação durante a análise estatística deste trabalho.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(6) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 6. A George, André e Luiz Felipe pelo apoio dado durante a execução deste trabalho. Aos Professores Armando Marsden Lacerda Filho, Leonor Costa Maia, Severina Torres de Barros, Sidney Tuyasse Gomes Bastos Silva, Francisco Cordeiro Neto e Maria Auxiliadora de Queiroz Cavalcanti, pelo livre acesso a seus respectivos laboratórios e pela amizade. Ao prof. Pacheco e Ivan pela colaboração cartográfico deste trabalho. À Aparecida, do Instituto Tecnológico de Pernambuco pela colaboração do fornecimento dos dados climáticos. A todos os colegas de Mestrado, Isabella, Gina, Franciene, Fabio, Joana e Marcos pelo companheirismo. Aos amigos Ana Cristina, Elvira, Lili, Meiriana, Bruno, Adriana, Idalina pelo carinho, amizade e colaboração que foram constantes. A todos que direta ou indiretamente colaboraram na realização deste trabalho, desejo expressar os meus sinceros agradecimentos. A Deus por mais uma vitória na escalada de minha vida.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(7) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. LISTA DE TABELAS. TABELA. Páginas. 3.1. Média dos dados climáticos dos períodos relacionados às exposições de placas correspondentes aos meses de dezembro de 2001, janeiro, fevereiro, maio, junho e julho de 2002.. 25. 4.1. Leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, durante os períodos sem chuvas e com chuvas. Susceptibilidade de leveduras sem pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, à anfotericina B e fluconazol. Susceptibilidade de leveduras com pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, à anfotericina B e fluconazol. Leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE durante os períodos sem chuvas e com chuvas. Susceptibilidade de leveduras sem pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE à anfotericina B e fluconazol. Susceptibilidade de leveduras com pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE frente a anfotericina B e fluconazol. 30. 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. 34 35 38 41 42. 7.

(8) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. LISTA DE FIGURAS. FIGURA 3.1 3.2 4.1 4.2 4.3 4.4. Páginas. Desenho do suporte de isopor com espaços para o encaixe das placas a serem expostas. Localização geográfica dos hospitais analisados.. 21. Leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, nos períodos sem chuvas e com chuvas. Espécies de leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, nos períodos sem chuvas * e com chuvas º. Resultados obtidos do isolamento de leveduras do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE nos períodos sem chuvas e com chuvas.. 31. Espécies de leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE nos períodos sem chuvas * e com chuvas º.. 39. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. 24. 31 39. 8.

(9) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 9. RESUMO. Foram isoladas leveduras dos seguintes ambientes climatizados, enfermaria 4 (ENF4), sala de quimioterapia (SQT) e do serviço de pronto atendimento (SPA) do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE); bloco cirúrgico (BC), unidade de tratamento intensivo (UTI) e unidade de pacientes graves (UPG) do Hospital Getúlio Vargas (HGV), Recife. Foram expostas placas com 5 diferentes meios de cultura, em Dezembro/2001, Janeiro e Fevereiro/2002, do período sem chuvas e em Maio, Junho e Julho/2002 do período com chuvas. As exposições foram realizadas com o condicionador de ar ligado, em 3 pontos eqüidistantes em relação à saída do ar condicionado, P1 (ponto da saída do ar condicionado), P2 (ponto eqüidistante do lado direito do condicionador de ar) e P3 (ponto eqüidistante do lado esquerdo do condicionador de ar). Do HEMOPE, foram isoladas 16 amostras de leveduras no período sem chuvas e 27 no período com chuvas; do Hospital Getúlio Vargas, foram isoladas 17 amostras de leveduras no período sem chuvas e 19 no período com chuvas. Foi isolado maior número de leveduras no período com chuvas. Foram isoladas, entre outras, Candida guilliermondii, C. membranaefaciens, C. parapsilosis, Cryptococcus albidus, C. uniguttulatus,. Rhodotorula. glutinis,. R.. graminis,. R.. minuta,. R.. mucilaginosa,. Sporobolomyces roseus, S. salmonicolor, Trichosporon cutaneum, T. pullulans, espécies estas de interesse médico. Houve significância estatística entre pontos eqüidistantes e ambientes; espécies isoladas e ambientes; número de amostras de C parapsilosis e R. mucilaginosa; número esperado de leveduras isoladas nos pontos eqüidistantes. Todas as amostras de leveduras expressaram sensibilidade a anfotericina B e fluconazol quando submetidas aos testes de susceptibilidade de acordo com o documento M27-A2 do NCCLS.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(10) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. SUMÁRIO. AGRADECIMENTOS LISTA DE TABELAS LISTA DE FIGURAS RESUMO ABSTRACT 1.. INTRODUÇÃO. 12. 2.. REVISÃO DA LITERATURA. 14. 3.. MATERIAL E MÉTODOS. 20. 3.1 LOCAIS DE TRABALHO. 20. 3.2 EXPOSIÇÃO DE PLACAS. 20. 3.3 MEIOS DE CULTURA. 21. 3.3.1 PARA ISOLAMENTO. 21. 3.3.2 PARA PURIFICAÇÃO. 21. 3.3.3 PARA IDENTIFICAÇÃO. 21. 3.3.3 PARA OS TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE A DROGAS ANTIFÚNGICAS 3.4 PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS. 22. 3.5 MÉTODOS UTILIZADOS PARA IDENTIFICAÇÃO E CLASSIFICAÇÃO. 22. 3.6 TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE. 22. 3.6.1 DROGAS ANTIFÚNGICAS UTILIZADAS. 22. 22. 3.7 ANÁLISE ESTATÍSTICA. 23. 3.8 COORDENADAS GEOGRÁFICAS DOS HOSPITAIS ANALISADOS. 23. 4.. RESULTADOS. 26. 5.. DISCUSSÃO. 43. 6.. CONCLUSÕES. 48. 7.. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 49. ANEXO 1. 64. ANEXO 2. 72. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. 10.

(11) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 11. ABSTRACT. Yeasts were isolated from following climatized environments: nursery 4 (N4), chemotherapy`s room (QMR) and ready attendance service (RAS) from Hematologycenter of Pernambuco (HEMOPE); surgery`s romm (SR), intensive care unit (ICU) and unit of critical patients (UCP) of the Getúlio Vargas` Hospital, Recife. Plates were exposed with 5 diferents media, in December/2001, January and February/2002, during a season without rains and in May, June and July/2002, a season with rains. The expositions were made with air conditioner working on in 3 equidistant points in relation to the exit of air conditioner, P1 (exit point from the air conditioner), P2 (equidistant point from right side of the air conditioner) and P3 (equidistant point from left side of the air conditioner). From HEMOPE, were isolated 16 yeasts strains from the season without rains and 27 from the season with rains; from Getúlio Vargas` Hospital, 17 strains yeasts were isolated in the season without rains and 19 with rains. A higher number of yeast were isolated in the rains season. The yeast species, among others, Candida guilliermondii, C. membranaefaciens, C. parapsilosis, Cryptococcus albidus, C. uniguttulatus, Rhodotorula glutinis, R. graminis, R. minuta, R. mucilaginosa, Sporobolomyces roseus, S. salmonicolor, Trichosporon cutaneum, T. pullulans, these species of medical interest. There were statistical significancy between equidistant points and environments; isolated species and environments; number os samples of C. parapsilosis and R. mucilaginosa; expect numbers of yeasts isolated from equidistants points. All the samples yeast were anfotericina B and fluconazol sensible when tested according to M27-A2 protocol from NCCLS.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(12) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 12. 1. INTRODUÇÃO. Leveduras são fungos unicelulares que se reproduzem predominantemente por brotação e/ou fissão. Estão amplamente distribuídas em natureza e têm sido isoladas do ar, homens, animais, alimentos, flores, insetos, solo, águas, entre outros (Lodder, 1970; Phaff et al., 1978; Krejer-van Rij, 1984; Barnett et al., 1990; Fischer & Cook, 2001; Lacaz et al., 2002). No meio ambiente ou integrantes da microbiota própria do homem, os fungos podem em determinadas oportunidades passarem de sapróbios a patogênicos, provocando quadros clínicos variáveis, desde processos febris, benignos, a septicemias, algumas vezes fatais, se não forem diagnosticados e tratados precocemente (Zaitz et al., 1998; Lacaz et al., 2002). A doença por fungos oportunistas adquire, na prática médica, importância cada vez maior em ambientes hospitalares e em serviços especializados, onde são internados pacientes com doenças diversas (Gerberding, 1998; Lacaz et al., 2002). Fatores ligados ou não ao hospedeiro, explicam a grande incidência de infecções fúngicas, principalmente nesses ambientes, onde a micota nosocomial é rica em fungos chamados contaminantes (Lacaz, 1977; Eickhoff, 1994; Zaitz et al., 1998). Entre as infecções fúngicas oportunistas, as leveduroses são as mais freqüentes em portadores de câncer, síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA), neutropenia prolongada, indivíduos submetidos a transplantes ou internos em unidade de tratamento intensivo (UTI) tornando-se um problema de saúde pública em diferentes centros médicos do mundo. As leveduroses podem apresentar-se como infecções superficiais e/ou invasivas, com envolvimento de um ou vários órgãos, incluindo infecção na corrente sangüínea, tornando-se indiscutível a relevância desses agentes entre os causadores de infecções hospitalares. (Barchiesi et al., 1999; Jehn, 2000). A presença de fungos no ar atmosférico é um tema de grande importância na área da saúde, nas infecções por agentes oportunistas dos ambientes hospitalares, sendo uma preocupação dos administradores de hospitais e daqueles que controlam os aspectos microbiológicos, profiláticos e terapêuticos das referidas infecções (Lacaz et al., 2002). A. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(13) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 13. presença de fungos no ar atmosférico tem induzido pesquisas a fim de conhecer, monitorar e até mesmo encontrar alérgenos e patógenos do homem, animais e plantas (McGowan, 1981; Mishra et al., 1992; Lacaz et al., 2002). A vigilância microbiológica dos sistemas centrais de ar condicionado foi iniciada mediante o aumento de infecções nosocomiais causadas por fungos oportunistas em pacientes imunocomprometidos (Fox, et al., 1990). Espécies de leveduras têm sido isoladas de infecções nosocomiais, destacando-se as espécies de Candida, principalmente em ambientes de alto risco em unidades de cuidado crítico, além de outros locais do hospital, constituindo um problema epidemiológico envolvendo vários fatores de risco. Candidíase invasiva pode atingir um percentual de mortalidade superior a 38% (Wey, et al., 1989). Nos últimos anos, vários agentes antifúngicos têm sido formulados e avaliados para o acompanhamento de infecções fúngicas. Entre os agentes, a anfotericina B e fluconazol, são usados no tratamento das micoses (Terrell, 1999; Saito et al., 2001; Tolemar et al., 2001). Até recentemente, os testes de susceptibilidade aos antifúngicos não eram julgados necessários porque a maioria dos fungos, clinicamente importantes, evidenciava sensibilidade a anfotericina B. Entretanto, nos últimos anos, o uso de novas e mais efetivas drogas antibacterianas e imunossupressoras, transplantes de órgãos, tratamentos de câncer, e da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) entre outros, aumentaram a sobrevida dos pacientes tornando de grande importância que os laboratórios estejam aptos a predizer o sucesso da terapêutica instituída (Shehan et al., 1993). No entanto, tais pacientes tornaram-se mais susceptíveis às infecções fúngicas, com reflexos na maior permanência hospitalar e taxas de mortalidade e morbidade (Bodey et al., 1992; Johnson et al., 1995; Odds, 1993; Rex et al., 1995; White et al., 2001). Tendo em vista a importância de propágulos de fungos viáveis em ambientes hospitalares, assim como, a relevância de testes para avaliar a susceptibilidade antifúngica, o propósito desta pesquisa foi isolar leveduras presentes no ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco e do Hospital Getúlio Vargas; verificar a ocorrência de leveduras em diferentes pontos eqüidistantes; verificar a ocorrência de leveduras em períodos sem chuvas e com chuvas; testar a susceptibilidade dessas leveduras a drogas antifúngicas.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(14) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 14. 2. REVISÃO DA LITERATURA. Em 400 a.C., Hipocrates já acreditava que o ar, água e os ambientes influenciavam na saúde da população. No segundo século depois de Cristo, Galeno considerava o ar como responsável por muitas doenças ou mortes de pessoas. Essas considerações foram aceitas até o século XIV e duzentos anos mais tarde, Fracastorius observou que a infecção poderia ser transmitida por contato direto, contato indireto e até mesmo através do ar (Eickhoff, 1994). Fungos oportunistas são importantes causa de infecções adquiridas em ambiente hospitalar. Ao lado de infecções causadas por fungos cuja patogenicidade é conhecida, a exemplo de Cryptococcus neoformans, Candida albicans e Aspergillus fumigatus, infecções sistêmicas têm sido relacionadas a fungos outrora considerados como contaminantes de laboratório como espécies de Rhodotorula, Aspergillus e de outros gêneros (Pfaller & Wenzel, 1992; Morrison et al., 1993; Perfect et al., 1993; Beck-Sague & Jarvis, 1993; Lacaz et al., 2002). O desenvolvimento de infecções fúngicas nos casos de antibioticoterapia, imunossupressão, cirurgia, transplantes, pode estar associado à exposição ao ambiente com grande quantidade de propágulos infectantes. Vários surtos de infecções por fungos oportunistas têm sido relatados em centros médicos com controle inadequado de sistema de ventilação ou mesmo em situações de reformas ou construção de novas áreas nas proximidades das unidades onde há atendimento a pacientes. Além disso, a letalidade por estas micoses é muito alta, o que indica a necessidade de medidas preventivas a tais infecções (Rippon, 1990; Kwon-Chung & Benett, 1992; Lacaz et al., 2002) . Para análise quantitativa de fungos presentes no ar, têm sido utilizados vários aparelhos como: “Sentry Portable Air Sampler” (Botard e Kelley, 1968); Sartorius MD8 (Rainer et al.,200); “Reuter centrifugal air sampler” (RCS); “Andersen single ou six-stage impactor” (N6 Andersen); “Surface air sampler” (SAS); “Slit-to-agar air sampler” (Mishra, et al., 1992). Botard e Kelley (1968) utilizaram o aparelho Sentry Portable Air Sampler para observar a ocorrência de Histoplasma capsulatum e Cryptococcus neoformans em janelas de. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(15) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 15. ar condicionado. Oitenta e quatro amostras de ar foram coletadas de 42 janelas de ar condicionado. Foi isolada uma única colônia de C. neorformans. O N6 Andersen foi utilizado na investigação da relação entre a poluição interna do ar e a síndrome do edifício doente, onde Cladosporium spp, Aspergillus spp e Penicillium spp foram os gêneros predominantes (Harrison et a.l., 1992). Berardi e Leoni (1993) utilizando o coletor SAS para avaliar a contaminação de várias áreas de um hospital de Bologna no inverno e no verão, isolaram Cladosporium spp, Penicillium spp, Aspergillus spp, Alternaria spp e Mucor spp como gêneros predominantes e verificaram a maior incidência de fungos no período de verão. Rainer et al (2000) analisando a biodiversidade e concentração de fungos no ar de ambiente hospitalar obtiveram mais de 1400 isolados utilizando o aparelho Sartorius MD8. Entre 99 espécies identificadas, oito foram de leveduras, como Candida famata, C. parapsilosis, Cryptococcus albidus, Rhodotorula glutinis, R. minuta, Sporobolomyces salmonicolor, Trichosporon cutaneum e Zygosaccharomyces rouxii e entre 91 amostras de fungos filamentos, 50 amostras foram de espécies descritas como potencialmente patógenas, entre as quais Aspergillus fumigatus e A. terreus. Vários meios de cultura também são utilizados, como ágar Sabouraud, ágar melaço, ágar extrato de malte (MEA), ágar dicloram glicerol-18 (DG-18) entre outros. Wu et al (1999), para isolar fungos de ambiente hospitalar utilizou o N6 Andersen e dois meios de cultura, Dicloram glicerol –18 Ágar (DG18) e Agar extrato de malte (MEA); a freqüência de isolamento de fungos em DG18 foi: leveduras (64,9%), fungos não esporulantes (46,2%), Penicillium spp (45,2%), Aspergillus spp (36%) e Cladosporium spp (19,8%); em MEA foi: fungos não esporulantes (37,8%), Penicillium spp (24,9%), leveduras (18,3%), Aspergillus spp (16,9%) e Cladosporium spp (16,1%). Tradicionalmente, o método mais empregado consiste na exposição de placas com meios de cultura apropriados, para sedimentação de propágulos fúngicos, durante 15 a 30 minutos em determinado ambiente, para posterior identificação dos fungos isolados. Essa técnica, embora qualitativa, permite verificar a variação sazonal, bem como se ter uma idéia aproximada dos fungos predominantes em determinado ambiente (Lacaz, 1991; Mishra, et al., 1992; Zaitz et al., 1998).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(16) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 16. A incidência de fungos no ar do Rio de Janeiro foi estudada por Passarelli et al (1949), os quais calcularam as unidades formadoras de colônias (UFC) e obtiveram os percentuais de: leveduras (não identificadas) 30,2%; Hormodendrum spp 16,5%; Rhodotorula spp 16,4%; Penicillium spp 14,3%; Aspergillus spp 8,0%; Fusarium spp 3,5%. Em 1958, Lacaz et al assinalaram na cidade de São Paulo, a seguinte incidência de fungos do ar: Penicillium spp 83,7%; Cladosporium spp 73,4%; Rhodotorula spp 63,2%; Torulopsis spp 24,4%; leveduras brancas não identificadas 20%; leveduras pretas não identificadas 14%; Mucor spp 12%; Aspergillus spp 10,2%; Candida spp 10,2%; Cephalosporium spp 8,1%; Pullularia spp 8,1%; Hormiscium spp 6,1%; Neurospora spp 4%; Rhizopus spp 4%; Geotrichum spp, Geothichoides spp, Streptomyces spp e Sporotrix spp 2%. (Lacaz et al, 1958). Voros Felkai (1966) pesquisando a incidência de leveduras no ar de Budapeste, utilizou a técnica de exposição de placas com o meio ágar melaço. Durante um período de 14 meses foram isoladas 100 amostras de Rhodotorula spp. Dessas, 34 foram R. glutinis; 26 R. mucilaginosa; 16 R.rubra; 11 R. minuta; quatro R. zsoltü; duas R. aurantiaca; uma R. marina; uma R. peneai; uma R. laryngis e duas não identificadas. Durante um período de 18 meses de pesquisa, expondo por 15 minutos placas de Petri contendo ágar melaço, Voros Felkai (1967), isolou do ar de Budapeste 329 amostras de levedura, dessas 100 amostras pertenciam ao gênero Cryptococcus, sendo 74 de C. albidus, 17 de C. diffluens, nove de C. laurentii. Sandhu e Waraich (1981) pesquisaram leveduras, durante um ano, do ar urbano de Amritsar, Índia, através da exposição de placas contendo ágar extrato de malte com extrato de levedura. Foram isoladas espécies de Candida (43,1%), Rhodotorula spp (28,5%), Torulopsis spp (18,2%), Cryptococcus spp (6,3%), Saccharomyces spp (2,1%) e Sporobolomyces spp (1,8%). Almeida et al (1988) analisaram a microbiota fúngica de ambientes considerados assépticos de laboratório de produção de imunobiológicos, através de exposição de placas contendo os meios ágar Sabouraud e ágar soja, enriquecidos com extrato de levedura, em três épocas distintas do ano, antes e imediatamente após as manobras técnicas realizadas em três áreas de trabalho: ambiente aberto, ambiente fechado sem filtração de ar e ambiente fechado. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(17) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 17. com filtração de ar. Os autores isolaram 67 amostras de fungos; sendo 64 fungos filamentosos e três leveduras, duas amostras de Rhodotorula rubra e uma Torulopsis candida (Candida candida). Nasim et al. (1998), expondo placas contendo MEA, ágar Czapek (CzA) e ágar batata dextrose (BDA) pesquisaram a aeromicoflora de quatro hospitais de Lahore, Paquistão, observando a variação sazonal. Foram isoladas 31 espécies pertencentes a 16 gêneros sendo, Aspergilus flavus (32,82%), Penicillium expansum (13,74%) e P. atrovenetum (10,24%) as mais freqüentes. A maior ocorrência de fungos foi em maio e a menor em dezembro. Alternaria alternata, A. flavus e P. atrovenetum foram isoladas de todas as épocas do ano. Os três meios foram igualmente efetivos para a coleta de esporos do ar, com MEA foram obtidas 1446 UFC, com CzA, 1507 UFC e com BDA, 1166 UFC, não havendo diferenças significativas nos resultados. Lima Filho et al (1998), determinaram a microbiota ambiental dos centros cirúrgicos oftalmológicos, com os aparelhos de ar condicionado ligados ou não, ressaltando a importância da fonte de infecção pós-operatória, proveniente de contaminação ambiental. Placas contendo os meios de cultura ágar Sabouraud e ágar sangue, foram expostas por 1 hora. Foram isoladas 258 microorganismos, sendo 228 colônias de bactérias e 30 de fungos tanto filamentosos quanto leveduras. Dos fungos, 22 colônias foram de salas com ar condicionado ligado e oito de salas com o ar condicionado desligado. Até o final de 1970 haviam limitações quanto à necessidade de recorrer a testes para avaliar a sensibilidade de fungos a drogas antifúngicas, devido ao escasso conhecimento sobre infecções fúngicas sistêmicas nosocomiais, assim como a pequena quantidade de agentes terapêuticos, e ainda, a eficácia constante da anfotericina B, apesar de seus efeitos colaterais. Em virtude da preocupação com o aumento da sobrevida de pacientes com o sistema imune comprometido, como nos casos de pacientes portadores de SIDA, câncer, transplantes entre outros, estão sendo adotadas medidas necessárias para tratamento adequado nos casos de micoses (Cury, 1998; Silva et al., 1998; Rocha & Sidrim, 1999; Hossain & Ghannoum, 2000; Saballs et al., 2000).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(18) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 18. Com a crescente freqüência de infecções fúngicas, bem como relatos de resistência a agentes antifúngicos, pesquisas com testes de susceptibilidade têm sido utilizadas para aplicabilidade clínica (Bossche et al., 1998; Silva et al., 1998; Hoffman & Pfaller, 2001). Nos últimos anos vários antifúngicos têm sido formulados e avaliados no acompanhamento de infecções fúngicas. Entre os agentes polienos utilizados, a anfotericina B e nistatina, entre os azóis, fluconazol, itraconazol, cetoconazol, miconazol e outros (Katzung, 1994; Kaufman, 1996; Mitstutake et al., 1994; Pfaller et al., 1997; Venkateswarlu et al., 1997; Walsh et al., 1997; Zaitz et al., 1998; De Pauw et al., 1999; Rai et al., 1999; Sidrim & Moreira, 1999; Terrel, 1999; Chang et al., 2000; De Pauw et al., 2000; Uchida et al., 2000; Simonetti et al., 2001). O desenvolvimento da padronização de métodos de testes de susceptibilidade a antifúngicos, tem sido foco de intensas pesquisas nos últimos 15 anos. Métodos de referência para leveduras e fungos filamentosos estão agora disponíveis (Colombo, 1994; Young et al., 1999; Gotzsche & Johansen, 2000; Vazquez, 2000;Huang et al. 2001; Kleinpeter & Butt, 2001; Rex et al., 2001). Anfotericina B foi desenvolvida na década de 50, ainda permanecendo muitas questões sobre sua farmacocinética, toxicidade e mecanismo de ação; é considerada a mais efetiva droga fungicida para o tratamento de infecções sistêmicas como candidíase, criptococose, aspergilose, paracoccidioidomicose, histoplasmose e outras (Colombo et al., 1994; Sperry et al., 1998; Luna et al., 2000; Knoppert et al., 2001; Modo, 2001). Com a introdução de fluconazol para tratamento de micoses em indivíduos com SIDA, o uso prolongado dessa droga tem resultado na resistência de Candida albicans e de outras espécies de Candida, assim como, na recidiva principalmente nesses indivíduos (Roig et al., 1990; Dupont et al., 1994; Pfaler et al., 1994; Redding et al., 1994; Sangeorzan et al., 1994; Colombo et al., 1995; Rex et al., 1995; Sanglard et al., 1995; Barchiesi et al., 1996; Quereda et al., 1996; Revancar et al., 1996; Ruhnke et al., 1996; Laguna et al., 1997; Evans, 1998; Jandourek et al., 1998). A crescente utilização de agentes antifúngicos para profilaxia e tratamento tem colaborado para o aumento da resistência a estas drogas. Combinação de drogas pode. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(19) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 19. prevenir ou diminuir o desenvolvimento de resistência. (Zaitz et al., 1998; Quindós et al., 1999; Czaica et al., 2000). Resistência a fluconazol pode emergir em criptococose e em algumas candidíases, como é constatada naquelas por C. krusei, a qual nos últimos anos tornou-se um patógeno importante pelo aumento de infecções devido à resistência a esse antifúngico (Chavanete et al. 1994; Collin et al. 1999; Cuenca-Estrella et al., 2001; Katiyar & Edlind, 2001). Comparadas às amostras de C. albicans, profilaxia e relatos de falha no tratamento com fluconazol têm sido registrados com espécies intrinsecamente menos sensíveis a essa droga, como C. glabrata e C. krusei. Essas informações enfatizam a importância da identificação de espécies de Candida e do estudo da prevalência das mesmas no ambiente hospitalar, no sentido de otimizar as condutas de terapêutica ou dirigidas a infecções fúngicas invasivas (Iwata, 1992; Odds, 1993). Em pacientes hospitalizados onde a alta incidência de fungemia apresenta índices de mortalidade em torno de 60% justifica a importância da implantação de medidas preventivas para as infecções, assim como o diagnóstico e tratamento de infecções fúngicas invasivas (Wenzel & Pfaller, 1991; Finkelstein, 1993).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(20) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 20. 3. MATERIAL E MÉTODOS 3.1 LOCAIS DE TRABALHO HOSPITAIS COM OS AMBIENTES ANALISADOS E RESPECTIVAS METRAGENS. ü Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE): Enfermaria 4 (ENF4), 31,98m3; Sala de Quimioterapia (SQT), 68,39m3; Serviço de Pronto Atendimento (SPA), 113,97m3. ü Hospital Getúlio Vargas: Bloco Cirúrgico (BC), 90m3; Unidade de Terapia Intensiva (UTI), 456m3; Unidade Geral de Pacientes Graves (UPG), 112,5m3. ü Laboratórios da Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Departamento de Micologia, Centro de Ciências Biológicas, da Universidade Federal de Pernambuco.. 3.2 EXPOSIÇÃO DE PLACAS. Placas contendo os meios de cultura para isolamento de leveduras foram expostas, simultaneamente por três pessoas, em três pontos eqüidistantes de cada ambiente: na saída do ar condicionado (P1), lado direito do condicionador de ar (P2) e lado esquerdo do condicionador de ar (P3). Para cada ponto eqüidistante foram utilizadas cinco placas contendo os diferentes meios de cultura para isolamento. As placas foram expostas pela manhã, durante dez minutos, duas vezes por mês, em Dezembro de 2001, Janeiro e Fevereiro de 2002, período sem chuvas correspondente ao verão e em Maio, Junho e Julho de 2002, período com chuvas correspondente ao inverno. No HEMOPE as placas foram expostas na enfermaria 4 (ENF4), na sala de quimioterapia (SQT) e no serviço de pronto atendimento (SPA); no Hospital Getúlio Vargas as exposições foram feitas no bloco cirúrgico (BC), na unidade de tratamento intensivo (UTI) e na unidade de pacientes graves (UPG). A altura em relação ao piso, para a exposição das placas, variou de acordo com a localização do condicionador de ar. Para exposição, as placas foram encaixadas em um suporte de isopor (Figura 3.1).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(21) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 21. Figura 3.1 Desenho do suporte de isopor com espaços para o encaixe das placas a serem expostas.. 3.3 MEIOS DE CULTURA 3.3.1 PARA ISOLAMENTO ü Ágar Sabouraud adicionado de extrato de Niger (Guizotia abyssinica) e 50 mg/l de cloranfenicol - para facilitar a detecção de Cryptococcus neoformans e de outras espécies deste gênero; ü Ágar bile de boi adicionado de 50 mg/l de cloranfenicol - para aumentar a possibilidade do isolamento de espécies de Candida que produzem pseudomicélio e também clamidosporo, facilitando a detecção de C. albicans; ü Ágar Christensen adicionado de 50 mg/l de cloranfenicol - para facilitar a detecção de Cryptococcus neoformans e de outras espécies deste gênero; ü Ágar malte adicionado de 50 mg/l de cloranfenicol - como meio tradicionalmente propício para o isolamento de leveduras; Esses meios de cultura foram preparados segundo Lacaz et al. (1991). ü Ágar Candida ID da BioMerieux.- indicado para detecção de C. albicans, pela coloração azul da colônia.. 3.3.2 PARA PURIFICAÇÃO ü Ágar Sabouraud adicionado de 0,5% de extrato de levedura e 50mg/l de cloranfenicol.. 3.3.3 PARA IDENTIFICAÇÃO ü Foram utilizados os meios preconizados por Lodder (1970) e Kreger-van Rij (1984).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(22) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 22. 3.3.4 PARA OS TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE A ANTIFÚNGICOS ü RPMI-1640 com L-glutamina, 2,0g/L de glicose, sem bicarbonato de sódio e tamponado com MOPS a pH 7,0 (American Biorganic,Niagara Falls,N.Y.).. 3.4 PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS Para isolamento de leveduras, as placas foram mantidas à temperatura ambiente (28ºC ± 1ºC) durante dez dias. A medida que surgiram, as colônias foram contadas e repicadas para ágar Sabouraud adicionado de 0,5% de extrato de levedura e de 50mg/l de cloranfenicol para posterior purificação e identificação.. 3.5 MÉTODOS UTILIZADOS PARA IDENTIFICAÇÃO E CLASSIFICAÇÃO Para identificação e classificação das leveduras foram adotadas as normas contidas em Lodder (1970); Kreger-van Rij (1984) e Barnett et al. (1990).. 3.6 TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE A ANTIFÚNGICOS Os testes de susceptibilidade foram realizados segundo o método da microdiluição em caldo, realizado de acordo com a padronização publicada no documento M27-A2 pelo NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS (NCCLS, 2002). Além das amostras isoladas do ar, foram incluídos dois organismos-controle, Candida parapsilosis ATCC 22019 e C. albicans ATCC 90028, do qual são previamente conhecidas as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) para anfotericina B e fluconazol (Rex, et al.,1997; Wanger et al., 1995). Esta técnica está descrita por Colombo em Lacaz et al. (2002).. 3.6.1 ANTIFÚNGICOS UTILIZADOS Foram utilizadas, anfotericina B (Fungison 50mg – Bristol-Myer Squibb) e fluconazol (Zoltec 20mg - Pfizer), adquiridos sob a forma de droga comercial, ambos para infusão intravenosa. A solução estoque da anfotericina B foi preparada diluindo-se o. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(23) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 23. conteúdo do frasco do Fungison em água destilada esterilizada para se obter a concentração de 5.000µg/mL. Para os testes com fluconazol foi usado Zoltec, 2000µg/mL, sem diluição.. 3.7 ANÁLISE ESTATÍSTICA. A análise estatística foi feita pela Profa. Dra. Viviana Giampaoli do Departamento de Estatística, Centro de Ciências Exatas e da Natureza, Universidade Federal de Pernambuco. Foram utilizados o teste exato de Fischer e o modelo de regressão de Poisson onde se adotou como nível de significância 5% ou 10% segundo o caso. Os cálculos foram realizados com o programa para análises estatísticas S-pws 2000.. 3.8 COORDENADAS GEOGRÁFICAS DOS HOSPITAIS As coordenadas UTM (Universal Transverso de Mercato) no Sistema de Referência SAD-69 do HEMOPE são: 290841.61 mE e 9109386.06 mN no Fuso 25, cujas coordenadas geográficas são: 8º 03’ 09” de latitude e 34º 53’ 52” de longitude; do Hospital Getúlio Vargas, são: 288146.09 mE e 9109535.32 mN no Fuso 25, cujas coordenadas geográficas são: 8º 03’ 04” de latitude e 34º 55’ 20” de longitude (Figura 3.1). A média dos dados climáticos dos meses de Dezembro de 2001, Janeiro, Fevereiro, Maio, Junho e Julho de 2002 correspondentes às exposições de placas estão contidos na tabela 3.1.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(24) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... Figura 3.1 Localização geográfica dos hospitais analisados.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. .. 24.

(25) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 25. Tabela 3.1 Média dos dados climáticos dos períodos relacionados às exposições de placas correspondentes aos meses de dezembro de 2001, janeiro, fevereiro, maio, junho e julho de 2002.. Dados climáticos. Período sem chuvas. Período com chuvas. Dez/2001 Jan/2002. Fev/2002. Mai/2002. Jun/2002. Jul/2002. Chuvas. 1,84 mm. 5,92 mm. 6,70 mm. 8,26 mm. 17,96 mm. 7,76 mm. Temperatura. 27,57ºC. 26,66ºC. 27,02ºC. 26,12ºC. 24,8ºC. 23,9ºC. Umidade relativa do ar. 82,5%. 88,1%. 83,6%. 91,3%. 91,3%. 82,9%. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(26) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 26. 4. RESULTADOS Para o isolamento de leveduras do ar de ambientes climatizados de dois hospitais escola do Recife – Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE) e Hospital Getúlio Vargas, foram expostas um total de 540 placas por hospital, 270 placas em seis exposições no período sem chuvas e 270 em seis exposições no período com chuvas. Foram obtidas 79 amostras de leveduras pertencentes às espécies: Candida guilliermondii (Castellani) Langeron & Guerra, 01 amostra. C. maltosa Komata et al., 01 amostra. C. maritima (Siepmann) Van Uden & Buckley, 01 amostra. C. membranaefaciens (Lodder & Krejer-Van Rij) Wickerhan & Burton, 01 amostra. C. obtusa (Dietrichson) Van Uden & Do Carmo-Sousa EX Van Uden & Buckley, 01 amostra. C. parapsilosis (Ashford) Langeron et Talice, 29 amostras. Cryptococcus albidus (Saito) Skinner, 06 amostras. C. kuetzingii Fell et Phaff, 01 amostra. C. uniguttulatus (Wolfram et Zach) Phaff et Fell., 03 amostras. Rhodotorula aurantiaca (Saito) Lodder, 01 amostra. R. glutinis (Fres.) Harrison, 03 amostras. R. graminis Di Menna, 01 amostra. R. minuta (Saito) Harrison, 01 amostra. R. mucilaginosa (Jörgensen) Harrison, 17 amostras. Sporobolomyces holsaticus Windisch, 05 amostras. S. roseus Kluyver et Van Niel, 01 amostra. S. salmonicolor (Fischer et Brebeck) Kluyver et Van Niel, 01 amostra. Trichosporon cutaneum (De Beurm., Gougerot et Vaucher) Ota, 02 amostras T. inkin (Oho) do Carmo-Sousa et Van Uden, 02 amostras T. pullulans (Lindner) Diddens et Lodder, 01 amostra.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(27) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 27. LEVEDURAS ISOLADAS DO HEMOPE. Do HEMOPE, foram obtidas 43 amostras de leveduras, 16 no período sem chuvas, 7 do P1, 7 do P2 e 2 do P3; 27 no período com chuvas, 10 do P1, 7 do P2 e 10 do P3 (Tabela 4.1). Durante o período sem chuvas foram obtidas, 05 amostras de leveduras da ENF4, 04 do P1 e 01 do P3; da SQT foram isoladas 06 amostras, 03 do P1 e 03 do P2; do SPA 05 amostras, 04 do P2 e 01 do P3. Durante o período com chuvas foram obtidas 27 amostras de leveduras, 09 da ENF4, 02 do P1, 02 do P2 e 05 do P3; da SQT 14 amostras, 07 do P1, 03 do P2 e 04 do P3; do SPA 04 amostras, 01 do P1, 02 do P2 e 01 do P3. Do P2 da ENF, P3 da SQT e P1 do SPA não foram isoladas leveduras no período sem chuvas. Os resultados obtidos do isolamento de leveduras no período sem chuvas e do período com chuvas permitiram a elaboração de um gráfico, o qual facilita a visualização de que foi maior o número de leveduras isoladas no período com chuvas. (Figura 4.1) Foram obtidas espécies de Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Sporobolomyces e Trichosporon. Foram isoladas: 01 amostra de C. guilliermondii, 01 de C. maltosa, 01 de C. maritima, 01 de C. membranaefaciens e 11 de C. parapsilosis. A amostra de C. maltosa foi isolada do P2 da SQT durante o período sem chuvas. As amostras de C. guilliermondii, C. maritima e C. membranaefaciens foram isoladas do P3 da ENF4, P2 da ENF4 e P3 da SQT respectivamente, durante o período com chuvas. De C. parapsilosis, durante o período sem chuvas, foram isoladas 02 amostras do P1 da SQT, 01 do P2 do SPA; no período com chuvas, da SQT foram isoladas 04 amostras do P1, 01 do P2 e 01 do P3; e do SPA foi isolada 01 amostra do P2. Esta espécie não foi isolada da ENF4. Foram isoladas 03 amostras de C. albidus, 01 de C. kuetzingii e 02 de C. uniguttulatus. Durante o período sem chuvas foi isolada 01 amostra de C. albidus do P2 da SQT. Durante o período com chuvas foram isoladas: 02 amostras de C. albidus, 01 do P3 da ENF4 e 01 do P1 da SQT, 02 de C. uniguttulatus do P1 da ENF4 e 01 de C. kuetzingii do P2 da SQT.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(28) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 28. De Rhodotorula, foram isoladas 02 amostras de R. glutinis, 01 R. graminis, 01 R. minuta e 10 R. mucilaginosa. Durante o período sem chuvas 02 amostras de R. glutinis foram isoladas do P1 da ENF4; R. graminis foi isolada apenas do P2 do SPA e de R. mucilaginosa, 01 amostra foi isolada do P1 da ENF4, 01 do P2 da SQT e 01 do P2 do SPA. Durante o período com chuvas R. minuta foi isolada do P2 do SPA e de R. mucilaginosa 01amostra foi isolada do P2 da ENF4, 02 do P3 da ENF4, 01 do P2 da SQT, 01 do P3 da SQT e 01 do P1 do SPA. Foram isoladas 02 amostras de S. holsaticus, 01 S. roseus e 01 S. salmonicolor. No período sem chuvas as 02 amostras de S. holsaticus foram isoladas do P1 e do P3 da ENF4 e a de S. salmonicolor do P2 do SPA. A amostra de S. roseus foi isolada do P3 da SQT durante o período com chuvas. Trichosporon foi representado por 02 amostras de T. cutaneum, 01 de T. inkin e 01 de T. pullulans. Uma amostra de T. cutaneum foi isolada do P1 da SQT no período sem chuvas e 01 do P3 do SPA no período com chuvas. As amostras de T. inkin e T. pullulans foram isoladas do P1 da SQT e do P3 da ENF4, respectivamente, durante o período com chuvas. O maior número de leveduras foi isolado da SQT. A figura 4.2 demonstra a relação das espécies com os locais dos quais foram isoladas, indicando que durante o período com chuvas, do P3 da ENF4 e do P3 da SQT, se obteve maior número de espécies diferentes, entretanto do P1 da SQT foi de onde se obteve maior números de isolados. Considerando o número de leveduras isoladas: ao aplicar o teste exato de Fischer, não foi possível estabelecer uma associação estatística significativa ao nível de 5% entre as variáveis ambientes e períodos (P valor = 0.465); pontos eqüidistantes e períodos (P valor = 0.2176); porém existiu associação estatística significativa ao nível de 10% entre os pontos eqüidistantes e ambientes (P valor = 0.0759). Não houve diferenças significativas em relação ao número de leveduras isoladas e tamanho dos ambientes quando se aplicou o modelo de regressão de Poisson (P valor = 0.292322).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(29) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 29. Ao aplicar o teste exato de Fisher houve diferenças significativas ao nível de 10% entre as espécies de leveduras isoladas e a quantidade de leveduras isoladas (P valor = 0.08), onde C. parapsilosis e R. mucilaginosa apresentaram freqüência de 26% e 24%, respectivamente. Analisando as espécies de leveduras e os períodos (P valor = 0.91) e as espécies e os pontos eqüidistantes (P valor = 0.56) não se encontrou associação significativa ao nível de 5%. Foi observado associação significativa ao nível de 5% entre espécies de leveduras e os ambientes (P valor = 0.03). Destacando C. parapsilosis a espécie mais freqüente da SQT com 73% e R. mucilaginosa da ENF4 com 40% (Anexo 1).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(30) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 30. Tabela 4.1 Leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife durante os períodos sem chuvas e com chuvas. ENF4 (31,98m3). LEVEDURAS P1. P1. P2. P2. P3. Candida guilliermondii. SQT (68,39m3) P3. P1. P1. P2. P2. P3. P3. P1. P1. P2. P3. P3. 01 01. C. maritima. 01. 01. 01. C. membranaefaciens. 01. C. parapsilosis. 02. Cryptococcus. albidus. 01. 04 01. 01. 01. 01. 01. 01. 01. 11. 01. C. kuetzingii. 03 01. C. uniguttulatus. 01. 02. 02. 02. 02. R. graminis. 01. R. minuta. 01 01. R. mucilaginosa. 01. Sporobolomyces holsaticus. 01. 01. 02. 01. 01. 01. 01. 01. 01. 01. 10. 01. 02. S. roseus. 01. 01. S. salmonicolor. 01. Trichosporon cutaneum. 01. 01. T. inkin. 01 01. T. pullulans TOTAL. P2. 01. C. maltosa. Rhodotorula glutinis. SPA (113,97m3). 02. 00. 02 14. 01. 05. 02 01. 01 04. TOTAL. AMBIENTES / m3 / PERÍODOS. 01 03. 07. 03. 03 20. 00. 04. 00. 01. 04. 02. 01. 01. 43. 09. vermelho = período sem chuvas; azul = período com chuvas; ENF4 = enfermaria, SQT = sala de quimioterapia, SPA = serviço de pronto atendimento, P1 = ponto da saída do ar condicionado, P2 = ponto eqüidistante do lado direto do ar condicionado e P3 = ponto eqüidistante do lado esquerdo do ar condicionado.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(31) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. COM CHUVAS. SPA. P3. SEM CHUVAS. P2. ENF4 = enfermaria SQT = sala de quimioterapia SPA = serviço de pronto atendimento. P1. SQT. P3 P2 P1. Pontos eqüidistantes: P1= saída do ar condicionado P2= lado direito do condicionador de ar P3= lado esquerdo do condicionador de ar. P3 ENF. Ambientes/Pontos eqüidistantes. 31. P2 P1 0. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. UFC. Figura 4.1 Leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, nos períodos sem chuvas e com chuvas. Candida guilliermondii C. maltosa C. maritima C. membranaefaciens C. parapsilosis Cryptococcus. albidus C. kuetzingii C. uniguttulatus Rhodotorula glutinis R. graminis R. minuta R. mucilaginosa Sporobolomyces holsaticus S. roseus S. salmonicolor Trichosporon cutaneum T. inkin T. pullulans. SPA (113,97m3). P3º P3* P2º P2* P1º P1*. SQT (68,39m3). P3* P2º P2* P1º P1* P3º. ENF4 (31,98m3). Ambientes/Pontos eqüidistantes. P3º. ENF4 = enfermaria SQT = sala de quimioterapia SPA = serviço de pronto atendimento. P3* P2º P2* P1º P1* 0. 1. 2. 3. 4. 5. UFC. 6. Pontos eqüidistantes: P1= saída do ar condicionado P2= lado direito do condicionador de ar P3= lado esquerdo do condicionador de ar. Figura 4.2 Espécies de leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, nos períodos sem chuvas* e com chuvas º.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(32) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 32. TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE A DROGAS ANTIFÚNGICAS COM AS LEVEDURAS ISOLADAS DO HEMOPE As concentrações inibitórias mínimas (CIM) de anfotericina B e fluconazol frente às leveduras isoladas foram determinadas pelo método de microdiluição padronizado pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) para espécies de Candida e de Cryptococcus. Das 43 amostras de leveduras testadas, todas foram sensíveis à anfotericina B com CIMs variando de 0,03µg/mL a 0,5µg/mL e a fluconazol com CIMs variando de 0,125µg/mL a 2µg/mL, (Tabela 4.2 e Tabela 4.3). Os resultados obtidos com os organismoscontrole C. parapsilosis ATCC 22019 foram 0,5µg/mL à anfotericina B e 2µg/mL a fluconazol; com C. albicans ATCC 90028 foram 0,5µg/mL à anfotericina B e 0,5µg/mL a fluconazol. Estes valores estão dentro dos intervalos aceito pelo NCCLS no documento M27A2, 2002. LEVEDURAS SEM PIGMENTO CAROTENÓIDE. Entre as amostras de C. parapsilosis houve variação da CIM de 0,06µg/mL a 0,25µg/mL para anfotericina B e de 0,25µg/mL a 1µg/mL para fluconazol; com C. uniguttulatus a CIM para anfotericina B foi de 0,125µg/mL a 0,5µg/mL e para fluconazol, 0,5µg/mL a 2µg/mL; com T. cutaneum, a CIM para anfotericina B foi de 0,06µg/mL a 0,25µg/mL; com R. mucilaginosa, a CIM para anfotericina B de 0,125µg/mL a 0,5µg/mL e para fluconazol 0,25µg/mL a 2µg/mL. C. maltosa. C. maritima, C. membranaefaciens, T. inkin e a amostra ENFP1-I70 de C. uniguttulatus, expressaram CIM para anfotericina B de 0,5µg/mL, expressando menor sensibilidade comparadas com as demais amostras isoladas. Considerando fluconazol, C. membranaefaciens e a amostra de C. uniguttulatus, ENF.P1-I70, expressaram CIM de 2µg/mL, menos sensíveis que as demais amostras. LEVEDURAS COM PIGMENTO CAROTENÓIDE. Das amostras de leveduras com pigmento carotenóide, R. graminis expressou CIM de 0,5µg/mL para anfotericina B, menos sensível que os demais isolados. Em relação ao fluconazol, as amostras de R. mucilaginosa, ENF.P3-I27, ENF.P3-I37 e SQT.P3-I22 expressaram menor sensibilidade que as demais amostras isoladas apresentando CIM de 2µg/mL.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(33) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 33. A leitura do resultado da CIM das amostras R. glutinis ENFP1 – V9, ENFP1 – V13, R. graminis SPAP2 – V2; R. minuta SPAP2 – I24; R. mucilaginosa ENFP3 – I27, SPAP2 V44, S. holsaticus UTIP1 – V23, ENFP3 – V31, ENFP1- V34; S. roseus SQTP3 – I23; S. salmonicolor SPAP2 – V6 foi concluído com 72 horas, pelo escasso crescimento em 48 horas. Vale salientar que a leitura dos resultados para os organismos-controle foi concluída no tempo padronizado de 48 horas.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(34) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. Tabela 4.2 Susceptibilidade de leveduras sem pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, à anfotericina B e fluconazol.. Leveduras. Amostra. Drogas antifúngicas / CIM (µg/mL) Anf B Fluco 0.06 1. Candida guilliermondii. ENF.P3 – I20. C. maltosa. SQT.P2 – V18. 0.5. 0.5. C. maritima. ENF.P2 – I43. 0.5. 1. C. membranaefaciens. SQT.P3 – I53. 0.5. 2. C. parapsilosis. SPA.P2 – V4. 0,06. 0,5. SPA.P3 – V46. 0,25. 0,5. SPA.P2 – I29. 0,125. 0,5. SQT.P1 – V38. 0,06. 0,25. SQT.P1 – V49. 0,06. 0,5. SQT.P1 – I51. 0,125. 1. SQT.P1 – I54. 0,125. 0,25. SQT.P1 – I62. 0,25. 0,5. SQT.P1 – I63. 0,25. 0,5. SQT.P2 – I69. 0,125. 1. SQT.P3 – I50. 0,125. 0,25. SQT.P1 – I60. 0,25. 0,5. SQT.P2 - V40. 0,25. 0,5. ENF.P3 – I57. 0,25. 0,5. C. kuetzingii. SQT.P2 – I25. 0,25. 1. C. uniguttulatus. SQT.P1 – I1. 0,125. 0,5. ENF.P1 – I70. 0,5. 2. SQT.P1 – V41. 0,06. 0,25. SPA.P3 – I8. 0,25. 0,25. T. inkin. SQT.P1 – I61. 0,5. 1. T. pullulans. ENF.P3 – I18. 0,25. 0,125. Cryptococcus albidus. Trichosporon cutaneum. Anf B = Anfotericina B; Fluco = Fluconazol; CIM = Concentração Inibitória Mínima; ENF = enfermaria 4, SQT = sala de quimioterapia, SPA = serviço de pronto atendimento, P1 = ponto da saída do ar condicionado, P2 = ponto eqüidistante do lado direto do ar condicionado e P3 = ponto eqüidistante do lado esquerdo do ar condicionado.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. 34.

(35) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. Tabela 4.3 Susceptibilidade de leveduras com pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE), Recife, à anfotericina B e fluconazol. Leveduras Rhodotorula glutinis. Amostra ENF.P1 – V9. Drogas antifúngicas / CIM (µg/mL) Anf B Fluco 0,06 0,125. ENF.P1 – V13. 0,06. 0,125. R. graminis. SPA.P2 – V2. 0,5. 1. R. minuta. SPA.P2 – I24. 0,25. 0,5. R. mucilaginosa. ENF.P1 – V30. 0,25. 1. ENF.P2 – I49. 0,25. 0,5. ENF.P3 – I27. 0,25. 2. ENF.P3 – I37. 0,25. 2. SQT.P1 – I55. 0,5. 0,5. SQT.P2 - V45. 0,125. 0,25. SQT.P2 – I 52. 0,25. 1. SQT.P3 – I22. 0,25. 2. SPA.P1- I38. 0,25. 0,5. SPA.P2 V44. 0,25. 0,5. ENF.P3 – V31. 0,25. 0,5. ENF.P1- V34. 0,25. 0,5. S. roseus. SQT.P3 – I23. 0,125. 0,125. S. salmonicolor. SPA.P2 – V6. 0,125. 0,125. Sporobolomyces holsaticus. Anf B = Anfotericina B; Fluco = Fluconazol; CIM = Concentração Inibitória Mínima; ENF = enfermaria 4, SQT = sala de quimioterapia, SPA = serviço de pronto atendimento, P1 = ponto da saída do ar condicionado, P2 = ponto eqüidistante do lado direto do ar condicionado e P3 = ponto eqüidistante do lado esquerdo do ar condicionado.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. 35.

(36) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 36. LEVEDURAS ISOLADAS DO HOSPITAL GETÚLIO VARGAS Dos ambientes analisados do Hospital Getúlio Vargas, foram obtidas 36 amostras de leveduras: 17 no período sem chuvas, 14 do P1 e 03 do P2, 19 no período com chuvas, 07 do P1, 05 do P2 e 07 do P3 (Tabela 4.3). Durante o período sem chuvas foram obtidas: 05 amostras de leveduras do BC, sendo 05 do P1; da UTI foram isoladas 05 amostras, 03 do P1 e 02 do P2; da UPG, 07 amostras, 06 do P1 e 01 do P2. Durante o período com chuvas foram obtidas 19 amostras de leveduras, 03 do BC, 02 do P2 e 01 do P3; 03 da UTI, 01 do P1 e 02 do P3; 13 da UPG, 06 do P1, 03 do P2 e 04 do P3. Do P2 e P3 do BC, P3 da UTI e P3 da UPG não foram isoladas leveduras no período sem chuvas; do P1 do BC e do P2 da UTI não foram isoladas leveduras no período com chuvas. A relação dos resultados obtidos entre o período sem chuvas com os obtidos durante o período com chuvas permitiu a elaboração de um gráfico o qual facilita a visualização de que foi maior o número de leveduras isoladas no período com chuvas (Figura 4.3). Foram obtidas espécies de Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Sporobolomyces e Trichosporon. Foram isoladas 18 amostras de C. parapsilosis e 01 de C. obtusa. De C. parapsilosis, durante o período sem chuvas, foram isoladas 02 amostras do P1 do BC, 01 do P1 da UTI, 02 do P2 da UTI e 04 do P1 da UPG; e durante o período com chuvas foram isoladas 01 amostra do P3 da UTI, 01 do P1 da UPG, 03 do P2 da UPG e 03 de P3 da UPG. A amostra de C. obtusa foi isolada do P2 do BC durante o período com chuvas. Foram isoladas 03 de C. albidus, 01 C. uniguttulatus. Durante o período sem chuvas foram isoladas 01 amostra de C. albidus do P1 da UPG e 01 de C. uniguttulatus do P1 da UTI. Durante o período com chuvas foram isoladas 02 amostras de C. albidus, 01 do P2 do BC e 01 do P1 da UPG. De Rhodotorula foram isoladas: 01 amostra de R. aurantiaca, 01 R. glutinis e 07 R. mucilaginosa. Durante o período sem chuvas, foram isoladas 01 amostra de R. glutinis do P1 do BC e 02 R. mucilaginosa, 01 do P1 e 01 do P2 da UPG. Durante o período com chuvas, R.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(37) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 37. aurantiaca foi isolada do P1 da UPG e 01 amostra de R. mucilaginosa do P3 da UTI, 03 do P1 da UPG e 01 do P3 da UPG. Duas amostras de S. holsaticus foram isoladas do P1 do BC e 01 do P1 da UTI durante o período sem chuvas. De Trichosporon foi isolada apenas 01 amostra de T. inkin do P1 da UTI durante o período com chuvas. O maior número de leveduras foi isolado da UPG. A figura 4.4 demonstra a relação das espécies com os locais dos quais foram isoladas, indicando que durante o período com chuvas, do P1 da UPG foi o local de onde se obteve maior número de espécies diferentes, entretanto do P1 da UPG nos períodos sem e com chuvas foi de onde se obteve maior número de isolados. Considerando o número de leveduras isoladas: ao aplicar o teste exato de Fischer, não foi possível estabelecer uma associação estatística significativa ao nível de 5% entre as variáveis ambientes e períodos (Pvalor = 0.2932), pontos eqüidistantes e ambientes (P 1.00); porém existiu associação entre os pontos eqüidistantes e períodos (P 0.0073). Ao se analisar a associação entre o tamanho do ambiente com o número de leveduras isoladas segundo o ajuste do modelo de regressão de Poisson, não foi possível encontrar associação; porém, segundo o modelo de Poisson existe associação significativa ao nível de 5% (P valor = 0.009) entre o número esperado de leveduras nos pontos eqüidistantes, onde do P1 se espera isolar de 3 a 4 amostras de leveduras, do P2 e P3 entre 1 a 2 amostras de leveduras. Ao aplicar o teste exato de Fisher houve diferenças significativas ao nível de 10% entre as espécies de leveduras isoladas e a quantidade de leveduras isoladas (P valor = 0.076), onde C. parapslosis e R. mucilaginosa apresentaram freqüência de 50% e 20%, respectivamente. Analisando as espécies de leveduras e os períodos (P valor = 0.38), as espécies e os pontos eqüidistantes (P valor = 0.41) e entre as espécies de leveduras isoladas e o ambiente (P valor = 0.12) não se encontrou associação significativa ao nível de 5% (Anexo 2).. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(38) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 38. Tabela 4.4 Leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE durante os períodos sem chuvas e com chuvas.. LEVEDURAS. BC (90m3) P1. P1. P2. Candida obtusa C. parapsilosis. P2. P3. UTI (456m3) P3. P1. P1. P2. P2. P3. UPG (112,5m3) P3. P1. 02. 01. 01. 02. 01. 01. 04. 01. 01. 01. P2. P3. P3. 03. 03. 01 01. 01. 01. 01. R. mucilaginosa. 01 02. 01. 03. 01. 01. 01. Trichosporon inkin 00. 00. 02 08. 00. 01. 03. 07 03. 01 05. 18 03. 01. Rhodotorula aurantiaca. TOTAL. P2. 01. C. uniguttulatus. Sporobolomyces holsaticus. P1. 01. Cryptococcus albidus. R. glutinis. TOTAL. AMBIENTES / m3 / PERÍODOS. 01. 01 02. 00 08. 00. 02. 06. 06. 01. 03 20. 00. 04. 36. vermelho = período sem chuvas; azul = período com chuvas; BC = bloco cirúrgico, UTI = unidade de tratamento intensivo, UPG = unidade de pacientes graves, P1 = ponto da saída do ar condicionado, P2 = ponto eqüidistante do lado direto do ar condicionado e P3 = ponto eqüidistante do lado esquerdo do ar condicionado.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(39) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. UPG. P3. COM CHUVAS SEM CHUVAS. P2 P1. BC = bloco cirúrgico UTI = unidade de tratamento intensivo UPG = unidade de pacientes graves. UTI. P3 P2 P1. Pontos eqüidistantes: P1= saída do ar condicionado P2= lado direito do condicionador de ar P3= lado esquerdo do condicionador de ar. P3 BC. Ambientes/Pontos eqüidistantes. 39. P2 P1 0. 1. 2. 3. 4. 5. 6 UFC. UTI (456m3) BC (90m3). Ambientes/Pontos eqüidistantes. UPG (112,5m3). Figura 4.3 Resultados obtidos do isolamento de leveduras do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE, nos períodos sem chuvas e com chuvas. Candida obtusa C. parapsilosis Cryptococcus albidus C. uniguttulatus Rhodotorula aurantiaca R. glutinis R. mucilaginosa Sporobolomyces holsaticus Trichosporon inkin. P3º P3* P2º P2* P1º P1* P3º P3* P2º P2* P1º P1* P3º P3* P2º P2* P1º P1*. BC = bloco cirúrgico UTI = unidade de tratamento intensivo UPG = unidade de pacientes graves. 0. 1. 2. 3. 4. 5. 6 UFC. Pontos eqüidistantes: P1= saída do ar condicionado P2= lado direito do condicionador de ar P3= lado esquerdo do condicionador de ar. Figura 4.4 Espécies de leveduras isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE, nos períodos sem chuvas* e com chuvas º.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(40) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 40. TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE A DROGAS ANTIFÚNGICAS COM AS LEVEDURAS ISOLADAS DO HOSPITAL GETÚLIO VARGAS. As concentrações inibitórias mínimas (CIM) de anfotericina B e fluconazol frente às leveduras isoladas foram determinadas pelo o método de microdiluição padronizado pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) para espécies de Candida e Cryptococcus. Das 36 amostras de leveduras testadas, todas foram sensíveis à anfotericina B com CIMs variando de 0,06µg/mL a 1µg/mL e a fluconazol com CIMs variando de 0,125µg/mL a 2µg/mL (Tabela 4.4). Os resultados obtidos com os organismos-controle C. parapsilosis ATCC 22019 foram 0,5µg/mL à anfotericina B e 2µg/mL a fluconazol. Com C. albicans ATCC 90028 foram 0,5 µg/mL à anfotericina B e 0,5µg/mL a fluconazol. Estes valores estão dentro dos intervalos aceito pelo NCCLS no documento M27-A2, 2002 (Tabela 4.5 e Tabela 4.6). LEVEDURAS SEM PIGMENTO CAROTENÓIDE. Entre as amostras de C. parapsilosis houve variação da CIM de 0,06µg/mL a 0,5µg/mL para anfotericina B e de 0,25µg/mL a 2µg/mL para fluconazol; com C. albidus a CIM foi de 0,25µg/mL a 0,5µg/mL para anfotericina B; com R. mucilaginosa, de 0,125µg/mL a 0,5µg/mL para anfotericina B e 0,25µg/mL a 1µg/mL para fluconazol. C. obtusa expressou CIM para anfotericina B de 1µg/mL, o que foi superior das demais espécies com pigmento carotenóide. Considerando fluconazol, a amostra de C. parapsilosis BC.P1-V43, expressou CIM de 2µg/mL, menos sensíveis que as demais amostras de leveduras. LEVEDURAS COM PIGMENTO CAROTENÓIDE. As amostras de R. mucilaginosa UTI,P3-I30, UPG.P1-I34, UPG.P3-I36 e UPG.P1I71 expressaram CIMs de 0,5µg/mL para anfotericina B e de 1µg/mL para fluconazol, menos sensível que os demais isolados A leitura da CIM das amostras R. glutinis BCP1 – V27; R. mucilaginosa UPGP2 – V16, UPGP1 – V19, UPGP1 – I34; S. holsaticus BCP1 – V21, UTIP1 – V23 foi concluído com 72 horas, pelo escasso crescimento em 48 horas. Vale salientar que a leitura dos resultados para os organismos-controle foi concluída no tempo padronizado de 48 horas.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.

(41) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. Tabela 4.5 Susceptibilidade de leveduras sem pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE,à anfotericina B e fluconazol. Leveduras. Amostras. Droga antifúngica / CIM (µg/mL) Anf B. Fluco. 1. 1. Candida obtusa. BC.P2 – I47. C. parapsilosis. UPG.P1 – V15. 0,25. 1. UTI.P1 – V25. 0,5. 1. BC.P1 V28. 0,25. 1. UTI.P2 – V29. 0,25. 0,25. UPG.P1 – V36. 0,25. 0,5. UPG.P1 – V39. 0,125. 0,5. UTI.P2 – V42. 0,25. 0,5. BC.P1 – V43. 0,25. 2. UPG.P1 – V48. 0,25. 1. UPG.P3 – I3. 0,25. 1. UTI.P3 – I4. 0,06. 0,25. UPG.P3 – I35. 0,125. 0,5. UPG.P1 – I41. 0,125. 0,5. UPG.P2 – I42. 0,125. 0,5. BC.P3 – I44. 0,5. 0,5. UPG.P3 – I46. 0,25. 0,5. UPG.P2 – I56. 0,25. 1. UPG.P2 – I65. 0,125. 1. UPG.P1 – V47. 0,25. 0,5. BC.P2 – I13. 0,25. 0,5. UPG.P1 – I40. 0,5. 0,5. C. uniguttulatus. UTI.P1 – V24. 0,25. 0,5. Trichosporon inkin. UTI.P1 – I67. 0,5. 1. Cryptococcus albidus. Anfo B = Anfotericina B; Fluco = Fluconazol; CIM = Concentração Inibitória Mínima; BC = bloco cirúrgico, UTI = unidade de tratamento intensivo, UPG = unidade de pacientes graves, P1 = ponto da saída do ar condicionado, P2 = ponto eqüidistante do lado direto do ar condicionado e P3 = ponto eqüidistante do lado esquerdo do ar condicionado.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. 41.

(42) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. Tabela 4.6 Susceptibilidade de leveduras com pigmento carotenóide isoladas do ar de ambientes climatizados do Hospital Getúlio Vargas, Recife-PE, frente a anfotericina B e fluconazol. Leveduras. Amostras. Droga antifúngica / CIM (µg/mL). Rhodotorula aurantiaca. UPG.P1 – I33. Anf B 0,125. R. glutinis. BC.P1 – V27. 0,06. 0,125. R. mucilaginosa. UPG.P2 – V16. 0,125. 0,25. UPG.P1 – V19. 0,25. 1. UTI.P3 – I30. 0,5. 1. UPG.P1 – I34. 0,5. 1. UPG.P3 – I36. 0,5. 0,5. UPG.P1 – I48. 0,125. 0,25. UPG.P1 – I71. 0,5. 1. BC.P1 – V21. 0,25. 0,5. UTI.P1 – V23. 0,25. 0,5. BC.P1 – V26. 0,06. 0,25. Sporobolomyces holsaticus. Fluco 0,25. Anfo B = Anfotericina B; Fluco = Fluconazol; CIM = Concentração Inibitória Mínima; BC = bloco cirúrgico, UTI = unidade de tratamento intensivo, UPG = unidade de pacientes graves, P1 = ponto da saída do ar condicionado, P2 = ponto eqüidistante do lado direto do ar condicionado e P3 = ponto eqüidistante do lado esquerdo do ar condicionado.. PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com. 42.

(43) BANDEIRA DE MELLO, L. R. Leveduras isoladas do ar de ambientes.... .. 43. 5. DISCUSSÃO A utilização de cinco meios de cultura foi para aumentar a possibilidade do isolamento de maior número de leveduras. O ágar malte foi o mais propício em relação ao número de leveduras isoladas, entretanto o ágar Sabouraud adicionado de extrato de niger foi o mais favorável para o isolamento de espécies de Cryptococcus. O ágar malte também tem sido utilizados por outros autores para o isolamento de fungos do ar (Sandhu e Waraich, 1981; Nasim et al., 1998; Rainer et al., 2000). Entretanto, Wu et al. (2000) constataram que entre o meio ágar malte e o dicloran-18, este último foi o mais efetivo para o isolamento de leveduras utilizando para coleta o aparelho N6 Andersen. A maioria dos trabalhos consultados cita o uso apenas de um meio de cultura sem discriminar se foi utilizado para isolamento de leveduras e/ou de fungos filamentosos. Os demais meios utilizados neste trabalho, não são citados por outros autores. Botard e Kelley (1968); Sandhu e Waraich (1981); Lopez-Martinez et al. (1984); Harrison et al. (1992); Rainer et al. (2000); Wu et al. (2000); Távora et al. (2003), utilizando aparelhos coletores demonstraram que o isolamento de leveduras não foi expressivo. Além disso, Vidotto et al. (1986); Berardi e Leoni (1993); Overberger et al. (1995); Yasmeen e Saxena (1995) não isolaram leveduras do ar de ambientes hospitalares utilizando esses aparelhos coletores. Sabe-se que a quantidade de propágulos de fungos filamentosos dispersa nos ambientes, tanto externos como internos, sempre é maior do que a de propágulos de leveduras. Isto indica que a utilização de aparelhos coletores poderá dificultar e restringir o isolamento de leveduras do ar de ambientes. O método de exposição de placas foi utilizado por Passarelli et al (1949); Lacaz (1958) Vörös-Felkai (1966), Vörös-Felkai (1967), Calvo et al. (1980), e Sandhu e Waraich (1981) para o isolamento de leveduras do ar de ambientes abertos; por Nasim et al. (1998) para o isolamento de fungos filamentosos e de leveduras do ar de ambientes abertos e por LopezMartinez et al. (1984); Almeida et al. (1988); Palmas et al. (1989); Lima Filho et al. (1998). PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com.