R e v is ta d a S o c ie d a d e B r a s ile ir a d e M e d i c in a T r o p ic a l 18(2): 8 5 -9 3 , A b r - J u n , 1 9 8 5
TESTE D E H EM A G LU TIN A Ç Ã O N A SO RO LOG IA D A M ALÁ RIA HUM AN A
E M PR EG A N D O H EM Á CIA S PA RA SITA D A S PELO
P L A S M O D I U M B E R G H E I
Maria Carmen Arroyo Sanchez-Ruiz, Mário E. Camargo, Antonio Carlos Ceneviva e
Antonio Walter Ferreira
F o i p a d r o n i z a d o u m te s te d e h e m a g l u t i n a ç ã o p a r a a s o r o l o g ia d a m a l á r i a h u m a n a , c o m r e a g e n te c o n s t i t u í d o d e s u s p e n s ã o d e h e m á c i a s d e c a m u n d o n g o s i n f e c t a d a s p e l o P la sm o d iu m b e rg h e i e p r e s e r v a d a s p o r f i x a ç ã o a l d e í d i c a . E m p a c i e n t e s c o m p a r a s i t e m i a p o r P . fa lc ip a ru m o u P . vivax o b te v e - s e u m a s e n s i b i l i d a d e d e 9 8 , 9 % n o s 8 8 c a s o s e s t u d a d o s , o t e s te a p r e s e n t a n d o t í t u l o s e n t r e 4 0 e 6 4 0 . P a r a o g r u p o d e 4 7 6 s o r o s d e i n d i v í d u o s n ã o - m a l á r i c o s , o b te v e - s e u m a e s p e c i f i c i d a d e d e 9 6 , 0 % . O te s te a p r e s e n t o u e l e v a d a r e p r o d u tib il id a d e , m e s m o p a r a d if e r e n t e s lo te s d e a n tíg e n o s . N o s 2 0 0 s o r o s , o b t i d o s a o a c a s o , d e i n d i v í d u o s d e á r e a e n d ê m ic a , o t e s te a p r e s e n to u p o s i t i v i d a d e d e 4 8 , 5 % , c o n t r a 8 8 , 0 % d o t e s te d e i m u n o f l u o r e s c ê n c i a - I g G . A b a i x a p o s i t i v i d a d e p o d e s e r d e v i d a a q u e o t e s te d e h e m a g l u t i n a ç ã o d e t e c ta a n t i c o r p o s I g M . A p ó s t r a t a m e n t o c o m 2 - m e r c a p t o e t a n o l , t o d o s o s s o r o s d e p a c i e n t e s c o m p a r a s i t e m i a t o r n a r a m - s e n ã o r e a g e n te s . E m r e la ç ã o a o te s te d e im u n o f l u o r e s c ê n c i a - I g G , o te s te d e h e m a g l u t i n a ç ã o a p r e s e n t o u í n d i c e d e c o - p o s i t í v i d a d e d e 0 , 9 8 9 p a r a o s s o r o s d e m a l á r i c o s c o m p a r a s i t e m i a . P a r a o s s o r o s d e n ã o - m a l á r i c o s o te s te d e h e m a g l u t i n a ç ã o a p r e s e n t o u í n d i c e d e c o - n e g a t i v i d a d e d e 0 ,9 6 9 . P o r o u t r o la d o , n o g r u p o d e s o r o s d e á r e a e n d ê m i c a , o í n d i c e d e c o - p o s i t i v i d a d e f o i d e 0 , 5 2 8 e o d e c o - n e g a tiv i d a d e , d e 0 ,8 3 3 .
P a la v ra s ch av es: M a lá ria . P l a s m o d i u m b e r g h e i. S o ro lo g ia. Im u n o d ia g n ó stic o . H e m a g lu tin a ç ã o .
A m a lá ria re p re se n ta um d o s m a is sé rio s p ro b lem as de sa ú d e p ú b lic a n o B rasil, p rin c ip a lm e n te n a z o n a e q u a to ria l, e m b o ra te n h a sid o e rra d ic a d a d a s á re a s de m a io r d e n sid a d e d em o g rá fica e de m a io r d esen v o lv im en to só cio -e co n ô m ico .
O m é to d o c lá ssic o p a r a o d ia g n ó stic o d a m a lá ria co n siste n a p e s q u isa d e p la sm ó d io s em e x te n sõ e s o u gotas d e sa n g u e. P o ré m o e x a m e m ic ro sc ó p ic o ap re se n ta lim ita çõ e s, p o is in d ic a a p e n a s a p re s e n ç a o u n ã o de p a ra site m ia ; p o d e m o c o rre r re su lta d o s n eg ativ o s falso s, v isto q u e a p a tê n c ia é in flu e n cia d a p elo e s ta d o im une d o indivíduo e p o r a ç ã o de drogas an tim aláricas u tiliz a d a s n a p ro fila x ia o u n a t e r a p i a ^ . P a r a e stu d o s ep id em io ló g ico s, a s lim ita çõ e s d a p e s q u isa d ire ta sã o m a io res, p o is o e x a m e é d e m o ra d o , re q u e r p e s so a l
L aboratório de Sorologia e Soroepidem iologia do Instituto de M edicina T ro p ica l de S ão Paulo, A venida D r. E n éas de C arv alh o A g u iar 4 7 0 , S ão Paulo, SP.
T rab alh o apresentado ao D ep artam en to de A nálises C linicas e T oxicológicas d a F a cu ld ad e de C iências F arm acêu ticas da U niversidade de S ão P au lo p a ra a obtenção do G ra u de M estre em A n álises C linicas.
R ecebido p a ra publicação em 1P/8/84.
ex p e rim e n ta d o e p o d e n ã o se r p re c iso , p rin cip alm e n te q u a n d o se e x a m in a g ran d e n ú m e ro de a m o stra s com b a ix a p a ra s ite m ia 1,7.
O s te ste s so ro ló g ico s têm sido u tiliza d o s co m o m é to d o s c o m p le m e n ta re s ao ex a m e m icro scó p ic o tra d ic io n a l, a p re se n ta n d o g ran d e im p o rtâ n c ia em es tu d o s soroepidem iológicos e no d iagnóstico individual d a m a lá ria lS .
V ário s te ste s so ro ló g ico s têm sid o em p reg ad o s n a p e s q u isa de an tíg en o s o u an tic o rp o s n a m a lá ria h u m a n a . A s re a ç õ e s d e im u n o flu o rescên c ia 2 6 ; en- zim a im u n o e n sa io 20 e ra d io im u n o e n sa io 1 p o d em a p re s e n ta r g ran d e se n sib ilid ad e e esp ec ificid a d e q u an d o sã o e m p re g ad o s siste m a s h o m ólogo s, p o rém re q u e re m re a g e n te s e m a te ria l m u ita s v ez es in acessív eis à m a io ria d o s la b o ra tó rio s. O d esen v o lv im en to de te ste s so ro ló g ico s q u e a p re se n te m a lta sensibilidad e, esp ec ificid a d e e rep ro d u tib ilid ad e , se n d o ao m esm o tem p o , d e fácil e rá p id a e x e c u ç ã o e d e b a ix o custo, a p re s e n ta g ra n d e im p o rtâ n c ia so roepidem io ló gica.
S a n c h e z -R u iz M C A , C a m a rg o M E , C en eviva A C, F erreira A W . T este d e h e m a g lu tin a çã o n a so ro lo g ia d a m a lá ria h u m a n a em p reg a n d o h em á c ia s p a r a s ita d a s p e lo Plasmodium berghei. R ev is ta d a S o cied a d e B r a sile ir a d e M e d ic in a T ro p ica l 1 8 :8 5 -9 3 , A b r J u n , 1 9 85
an tíg en o s n o s te ste s so ro ló g ico s p a r a a m a lá ria h u m a n a, além d a s e sp éc ies q u e in fec tam o h o m em , p lasm ó d io s d e o u tro s a n im ais co m o o P . g a l l i n a -c e u m12 14 27 e 0 P . b e r g h e f t * $ 18 C e n e v iv a e Camargo** p a d ro n iz a ra m o te ste d e h e m a g lu tin a ç ã o com h e m á c ia s d e av es in fe c ta d a s p elo P . g a l l i n a c e u m , d e m o n stra n d o a lta se n sib ilid ad e e b o a esp ecificid a d e em p ac ie n te s c o m m a lá ria p o r P. v i v a x o u P . f a l c i - p a r u m e em ind iv íd u o s a p a re n te m e n te n o rm ais. O P . b e r g h e i v em se n d o u tiliza d o co m o a n tíg en o n a s rea çõ es d e im u n o flu o rescên c ia in d ire ta^ 9 11 18f d e ag lu tin a çã o d o látex** e d e h e m a g lu tin a ç ã o p assiv a^ , te n d o sido o se u em p reg o re c o m e n d a d o ta n to p a ra fins de d iagnóstico* 1 co m o p a ra e stu d o s epidem iológi- c o s 18.
N o p re se n te tra b a lh o , foi p a d ro n iz a d o o te ste d e h e m a g lu tin aç ão c o m h e m á c ia s d e c a m u n d o n g o s p a ra sitad o s p e lo P . b e r g h e i. F o ra m e s tu d a d a s as c o n d içõ e s d o p re p a ro d o re a g en te e d a re a liz a ç ã o d o te ste , av a lian d o -se su a esp ec ificid a d e, sen sib ilid ad e e re- p ro d u tib ilid ad e. F o ra m c o m p a ra d o s os resu lta d o s co m o s v erific ad o s p elo s te ste s d e h e m a g lu tin a ç ã o co m P . g a l l i n a c e u m e d e im u n o flu o rescên c ia in d ire ta com P . f a l c i p a r u m e P . v iv a x .
M A T E R I A L E M É T O D O S
S o r o s - p a d r ã o
N o estu d o d a p a d ro n iz a ç ã o d o rea g en te , em p re- g aram -se so ro s-p a d rã o p o sitiv o s, o b tid o s d e p a c ie n te s com p a ra site m ia p o r P . f a l c i p a r u m o u p o r P. v i v a x, to d o s rea g en te s p elo te ste d e im u n o flu o rescên c ia indireta. E m p re g a ra m -se , ta m b ém , so ro s-p a d rã o ne gativos, o b tid o s de in d iv íd u o s re sid e n te s e m reg ião indene.
C a s u ís tic a
E m p re g a ra m -se 2 8 8 a m o stra s d e so ro s d e resi d e n te s n a reg ião a m a z ô n ic a , em á re a s c o m su rto s de m a lária , 4 4 co m p a ra site m ia p o r P. f a l c i p a r u m , 4 4 p o r P. v i v a x e o s 2 0 0 re sta n te s sem c o n firm a çã o clín ica, c o lh id o s a o ac a so , en tre in d iv íd u o s n ão -m a - láricos, co m m a lá ria a tu a l e m a lá ria p reg ressa . O b ti veram -se, a in d a, 4 7 6 a m o stra s d e so ro s de p e s so a s resid en tes e m S ão P a u lo , in c lu in d o d o a d o re s d e b a n c o de sangue, p a c ie n te s d e la b o ra tó rio clín ic o e p a c ie n te s co m d iferen tes p ro c e sso s in feccio sos. T o d a s as a m o s tras d e soro s fo ra m c o n se rv a d a s a -2 0 ° C , a p ó s a d iç ã o de g licerina p .a ., v olum e a volum e.
P l a s m o d i u m b e r g h e i
A c e p a d e P . b e r g h e i, g en tilm e n te fo rn e c id a p elo D r. G . C h a ia , d o D e p a rta m e n to E x p e rim e n ta l d a J o h n s o n & J o h n so n , e m 1 9 7 9 , vem se n d o m a n tid a a c ic lic a m e n te n o la b o ra tó rio . P a r a e sse fim , c a m u n d o n g o s ‘S w iss’, p e s a n d o de 2 0 a 25 g, fo ra m in o cu la- d o s, in tra p e rito n e a lm e n te , c o m 0 ,2 m l d e san g u e to ta l h e p a rin iz a d o e d ilu íd o p a r a o b te n ç ã o d e n ú m e ro de h e m á c ia s p a ra s ita d a s co rre sp o n d e n te a p a ra s ite m ia de 4 % . Q u a n d o o g rau d e p a ra site m ia se elev o u a c im a de 2 0 % (e n tre o 8 ° e o 15.° d ia d e in fec çã o ), o s a n im ais fo ra m sa n g ra d o s p o r p u n ç ã o c a rd ía c a . O san g u e assim o b tid o foi e m p re g a d o n o estu d o d a p a d ro n iz a ç ã o e p re p a ro d o re a g e n te p a r a o te ste d e h e m a g lu tin aç ão .
P r e p a r o d e r e a g e n te
S an g u e h e p a rin iz a d o e re c e n te m e n te co lh id o foi cen trifu g ad o a 1 5 0 0 xg, d u ra n te 10 m in u to s, p a ra s e p a ra ç ã o d o p la sm a e d o cre m e le u co c itá rio . A s h e m á c ia s fo ra m la v a d a s p o r q u a tro v ez es co m so lu ç ã o sa lin a ta m p o n a d a co m fo sfa to s (P B S ) (0 ,0 1 M , p H 7 ,2 ) e su sp e n sa s a 1 0 % e m P B S ( N a C l 0 ,1 5 M , fo sfa to s 0 ,1 5 M , p H 7 ,6 ). A seg u ir a d ic io n o u -se igual volu m e de fo rm a ld e íd o d ilu íd o a 5 ,6 % em P B S ( N a C l 0 ,1 5 M , fo sfa to s 0 ,1 5 M , p H 7 ,6 ) p a r a u m a c o n c e n tra ç ã o final d e 2 ,8 % . A p ó s in c u b a ç ã o a 3 7 ° C d u ra n te 18 h o ras, co m ag ita ç ã o p erió d ic a , a s c é lu la s fo ram la v a d a s p o r q u a tro v ez es c o m P B S (0 ,0 1 M , p H 7 ,2 ). O se d im e n to d e h e m á c ia s fo rm o liz a d a s foi su sp e n so a 4 ,5 % em so lu ç ã o d ilu e n te p re p a ra d a co m P B S ( N a C l 0 ,0 7 5 M , fo sfa to s 0 ,0 7 5 M , p H 6 ,4 ) c o n te n d o 4 % de g licin a, 2 ,7 % d e le ite e m p ó d e s n a ta d o , 0 ,2 % d e g lu ta m a to d e sód io, 0 ,1 % d e tio g lico lato d e só d io e 0 ,1 % d e a z id a só d ic a 1^. o re a g en te o b tid o foi co n
se rv a d o a 4 ° C , e m su sp e n sã o , o u liofilizado.
T e s te d e h e m a g l u t i n a ç ã o c o m a n t í g e n o d e P . b e r g h e i ( H A b )
S a n ch ez -R u iz M C A , C a m a rg o M E , C en eviva A C , F erreira A W . T este d e h em a g lu tin a ç ã o n a so ro lo g ia d a m a lá ria h u m a n a em pregando h e m á c ia s p a r a s ita d a s p e lo Plasm odium berghei R ev is ta d a S o cied a d e'B ra s ileira d e M e d ic in a T ro p ica l 1 8 :85 -9 3, Abr-Jun, 1 9 8 5
tivos, so ro s-p a d rã o n eg a tiv o s e te ste m u n h a d o an- tígeno, feito n a a u s ê n c ia de soros.
T e s te d e h e m a g l u t i n a ç ã o c o m a n tíg e n o d e P . g a llin a c e u m ( H A g )
O te ste H A g foi e x e c u ta d o co n fo rm e té c n ic a d e s c rita p o r C e n e v iv a e Camargo**.
T e s te d e i m u n o f l u o r e s c ê n c i a
P a r a o p re p a ro d o s an tíg en o s de P . f a l c i p a r u m e de P. v i v a x e e x e c u ç ã o d o s te ste s, em p re g o u -se a m eto d o lo g ia d e s c rita p o r S u lz e r e co ls.2 6 , u tiliza n d o - se sangue d e in d iv íd u o s c o m p rim o in fec çã o re c e n te e p a ra site m ia elev a d a. P a r a o P . f a l c i p a r u m , o p a ra sito foi a m a d u re c id o a e sq u iz o n te s, seg u n d o L o p e z -A n - tu n a n o 1®. O s te ste s fo ra m e x e c u ta d o s e m p re g an d o -se conjugados an ti-Ig G e anti-IgM . O co n jugad o an ti-Ig G foi p re p a ra d o no L a b o ra tó rio d e Im u n o lo g ia d o In sti tu to d e M e d ic in a T ro p ic a l d e S ã o P a u lo ; o co n ju g ad o an ti-Ig M foi o b tid o co m e rc ia lm e n te (H y la n d -T ra v e - nol).
A n á l i s e e s t a t í s t i c a d o s r e s u l t a d o s
A s m é d ia s g e o m é tric a s d o s títu lo s fo ra m c a l
c u la d a s seg u n d o m é to d o d e sc rito p o r W h ite 28, utili- za n d o -se títu lo s co d ificad o s. A sig n ificân cia d a dife re n ç a e n tre m é d ia s g e o m étric ás de títu lo s foi verifi c a d a p elo te ste “ t” de S tu d e n t de a m o stra s p are a- d a s 28. A c o rre la ç ã o en tre títu lo s o b tid o s foi d ete r m in a d a ca lc u la n d o -se o co e ficien te d e co rre la ç ã o lin e a r d e P e a rs o n 2^.
R E S U L T A D O S
S e n s i b i l i d a d e d o t e s te H A b
O s 4 4 so ro s d e in d iv íd u o s com p a ra site m ia p o r P . v i v a x a p re se n ta ra m títu lo s que o sc ila ra m en tre 4 0 e 3 2 0 . C o m o s 4 4 so ro s d e in d iv íd u o s co m m a lá ria p o r P . f a l c i p a r u m o b tiv e ra m -se títu lo s v a ria n d o en tre 2 0 e 6 4 0 . A T a b e la 1 a p re se n ta a d istrib u içã o d o s títulos o b tid o s n o s 88 so ro s estu d a d o s. O te ste ap re sen to u se n sib ilid ad e d e 9 8 ,9 % (L . C . 9 5 % = 9 3 ,9 - 1 0 0 ,0 ), p a r a títu lo s ig u ais o u su p e rio re s a 40.
A p ó s tra ta m e n to co m 2 -m e rc a p to e ta n o l10, os so ro s q u e a p re se n ta v a m títu lo s v a ria n d o en tre 4 0 e 6 4 0 , to m a ra m -se n ã o rea g e n te s p elo teste H A b , e m b o ra os títu lo s p e la im u n o flu o rescên c ia com conju g a d o a n ti-Ig G te n h a m p e rm a n e c id o in a lterad o s.
T a b e la 1 - F r e q ü ê n c i a e m é d i a g e o m é t r i c a d o s t í t u l o s ( M G T ) o b t i d o s p e l o te s te H A b p a r a s o r o s d e 8 8 i n d i v í d u o s c o m p a r a s i t e m i a .
E s p é c i e í n f e c t a n t e T í t u l o s M G T
2 0 4 0 8 0 1 6 0 3 2 0 6 4 0
P . f a l c i p a r u m 1 6 13 14 8 2 2 1 4
P . v i v a x 0 6 19 13 6 0 108
T o ta l 12 32 27 14 116
E s p e c i f i c i d a d e d o t e s te H A b
A esp e c ific id a d e d o te ste H A b foi d e 9 6 ,0 % (L . C . 9 5 % = 9 3 ,8 - 9 7 ,6 ), em so ro s d ilu íd o s a 1 /4 0 , n o g ru p o d e 4 7 6 so ro s estu d a d o s. A T a b e la .2 a p re se n ta a fre q ü ê n c ia d e títu lo s o b se rv a d o s.
R e p r o d u t i b i l i d a d e d o te s te H A b
E m te ste s re a liz a d o s em trip licata, n o m e sm o d ia, e c o m o m e sm o re a g e n te fren te a 3 0 so ro sco n
S a n c h e z -R u iz M C A , C a m a rg o M E , C en eviva A C , F erreira A W . T este d e h em a g lu tin a ç ã o n a so r o lo g ia d a m a lá ria h u m a n a em p reg a n d o h em á c ia s p a r a s ita d a s p e lo Plasmodium berghei R ev is ta d a S o cied a d e B ra sile ir a d e M e d ic in a T ro p ica l 1 8 :8 5 -9 3 , A b r-Ju n , 1 9 85
T a b e la 2 - T e s te H A b : F r e q ü ê n c i a d e t í t u l o s e p o r c e n t a g e m d e s o r o s n ã o r e a g e n te s , c o m l i m i t e s d e c o n f i a n ç a d e 9 5 % d e p r o b a b i l i d a d e , o b t i d o s e m 4 7 6 s o r o s .
S o r o s Np
< 1 0 1 0
T í t u l o s
2 0 4 0 8 0 1 6 0
% d e s o r o s n ã o - r e a g e n te s
< 4 0 ( L . C . 9 5 % )
d o ad o res de san g u e 2 0 0 141 21 35 2 1 — 9 8 ,5 ( 9 6 , 0 - 9 8 ,7 )
la b o rató rio clínico 94 92 1 1 - 1 0 0 ,0 ( 9 6 , 2 - 1 0 0 , 0 )
p acien tes com : sífilis 2 4 16 2 3 3 - 8 7 ,5 ( 6 7 , 6 - 9 7 ,3 )
m o non ucleose 31 18 1 8 1 1 2 87,1 ( 7 0 , 2 - 9 6 ,4 )
p araco ccíd io id o m ico se 2 0 10 2 7 1 - - 9 5 ,0 (7 5 ,1 - 9 9 ,9 )
toxo plasm ose 31 2 4 2 3 - 2 - 9 3 ,5 ( 7 8 , 6 - 9 9 ,2 )
d o en ç a de C h a g a s c rô n ic a 33 25 5 3 - - 1 0 0 ,0 ( 8 9 , 4 - 1 0 0 , 0 ) d o en ç a d e C h a g a s agu d a 4 - - 2 - - 2 5 0 ,0 ( 6 , 8 - 9 3 ,2 ) leish m an io se v isceral 9 7 - 1 1 - 8 8 ,9 ( 5 1 , 8 - 9 9 ,7 ) leishm an iose te g u m e n ta r 30 17 4 6 - 2 1 9 0 ,0 ( 7 3 , 5 - 9 7 ,9 )
T o ta l 4 7 6 3 5 0 38 6 9 8 6 5 9 6 ,0 ( 9 3 , 8 - 9 7 ,6 )
A p l i c a ç ã o d o te s te H A b a s o r o s d e á r e a e n d ê m i c a
E m so ro s d e 2 0 0 in d iv íd u o s resid e n te s em á re a e n d ê m ic a, co lh id o s a o a c a s o , o te ste H A b a p re se n to u p o sitiv idade d e 4 8 ,5 % (L . C . 9 5 % = 4 1 ,4 - 5 5 ,6 ), co m títu lo s v a ria n d o en tre 4 0 e 6 4 0 .
R e s u l t a d o s c o m p a r a t i v o s c o m o u tr o s te s te s
O s so ro s e m p re g ad o s n o e stu d o d e se n sib ilid ad e e esp ecificid ad e d o te ste H A b , b e m c o m o o s de á re a en dêm ica, fo ram , co n c o m ita n te m e n te , su b m e tid o s a te ste s de im u n o flu o rescên c ia in d ire ta, c o m an tíg en o s
de P . f a l c i p a r u m e d e P . v i v a x , e d e h e m a g lu tin a ç ã o c o m a n tíg en o de-P. g a l l i n a c e u m (H A g ).
A T a b e la 3 a p re s e n ta o s re su lta d o s o b tid o s em so ro s d e in d iv íd u o s m a lá ric o s c o m p a ra site m ia . N e s te g ru p o d e so ro s, o s te ste s H A b e H A g a p re s e n ta ra m a m e sm a se n sib ilid ad e ( 9 8 ,9 % ), c o m ín d ic e d e c o n c o r d â n c ia de 0 ,9 7 7 ( T a b e la 4 ). O s títu lo s o b tid o s n o te ste H A b fo ra m sig n ific ativ am en te m a is e le v a d o s q u e os e n c o n tra d o s n o te ste H A g ( t = 1 8 ,1 1 ; g ra u s de lib er d a d e = 8 7 ; p < 0 ,0 0 1 ) . O c o e ficie n te d e c o rre la ç ã o lin e a r d e P e a rs o n , r = 0 ,6 1 ( t = 7 ,1 4 ; g rau s d e lib e r d a d e = 8 6 , p < 0 ,0 0 1 ) , rev e lo u a e x istê n c ia d e a lto g rau de c o rre la ç ã o lin e a r en tre o s títu lo s d e am b o s os te stes.
T a b e la 3 - S e n s i b i l i d a d e d o s te s te s d e i m u n o f l u o r e s c ê n c i a e d e h e m a g l u t i n a ç ã o , c o m l i m i t e s d e c o n f i a n ç a d e 9 5 % e m é d i a s g e o m é t r i c a s d e t í t u l o s ( M G T ) , e m s o r o s d e 8 8 m a l á r i c o s c o m p a r a s i t e m i a .
T e s te s
S e n s i b i l i d a d e %
( L . C . 9 5 % ) M G T
Im u n o flu o re scência:
Ig G co m P . f a l c i p a r u m ( IF fG ) 9 0 , 9 ( 8 2 , 9 - 9 6 ,0 ) 2 3 7 I g G c o m P . v i v a x ( IF v G ) 9 4 ,3 ( 8 7 , 2 - 9 8 ,1 ) 161 IgM cp m P. f a l c i p a r u m (IF fM ) 3 7 ,5 ( 2 7 , 4 - 4 8 ,5 ) 2 0 Ig M co m P . v i v a x (IF v M ) 8 1 , 8 ( 7 2 , 2 - 8 9 ,2 ) 35
I F f G + I F v G 9 8 ,9 (9 3 ,8 - 1 0 0 , 0 )
-I F fM + -I F v M 8 1 ,8 ( 7 2 , 2 - 8 9 ,2 )
-H em a g lu tin aç ão :
S a n ch e z-R u iz M C A , C a m a rg o M E , C e n eviva A C , F erreira A W . T este d e h e m a g lu tin a çã o n a so ro lo g ia d a m a lá ria h u m a n a em pregando h e m á c ia s p a r a s ita d a s p e lo Plasmodium berghei R e v is ta d a S o cied a d e B ra sile ir a d e M e d ic in a T ro p ica l 1 8:8 5 -9 3 , A b r J u n , 1 9 8 5
T a b e la 4 - R e s u l t a d o s c o m p a r a t i v o s d o s te s te s d e h e m a g l u t i n a ç ã o c o m a n t í g e n o d e P . b erg h e i ( H A b ) o u d e P . g a llin a c e u m ( H A g ) , e m s o r o s d e 8 8 m a l á r i c o s c o m p a r a s i t e m i a .
T e s te H A b T e s t e H A g
---R e a g e n t e s > 4 0 N ã o r e a g e n te s T o t a l
R e a g e n te s > 1 0 86 1 87
N ã o re a g e n te s 1 0 1
T o ta l 8 7 1 88~
P a r a o te ste d e im u n o flu o re sc ê n c ia co m co n ju gado a n ti-Ig G , o b te v e -se se n sib ilid a d e de 9 8 ,9 % (L . C . 9 5 % = 9 3 ,8 - 1 0 0 ,0 ), q u a n d o u tiliza d o s an tígenos d e P . f a l c i p a r u m e d e P . v i v a x . O ín d ic e de c o n c o rd â n c ia v erific a d o e n tre o s te ste s H A b e de im u n o flu o re sc ê n c ia -Ig G e en tre o s te ste s H A g e de im u n o flu o re sc ê n c ia -Ig G foi, e m am b o s o s c a so s, de 0 ,9 7 7 .
D o s 4 7 6 so ro s e m p re g a d o s n a v e rific a ç ã o d a esp ec ificid a d e d o te ste H A b , 2 0 s o ro s fo ra m rea g e n te s p elo te ste H A g , o q u e c o rre sp o n d e a u m a esp ecifici d ad e d e 9 5 ,9 % (L . C . 9 5 % = 9 3 ,7 - 9 7 ,5 ) p a r a e ste ú ltim o te ste . O ín d ic e d e c o n c o rd â n c ia e n tre os te ste s foi d e 0 ,9 6 0 .
A e sp e c ific id a d e d o te ste d e im u n o flu o rescên - c ia -Ig G foi, n e ste g ru p o d e so ro s, d e 9 7 ,5 % (L . C . 9 5 % = 9 5 ,6 - 9 8 ,7 ), c o m a n tíg en o d e P . f a l c i p a r u m e d e 9 9 ,2 % (L . C . 9 5 % = 9 8 , 0 - 9 9 , 6 ) , c o m a n tíg en o de
P . v i v a x . O s ín d ic e s d e c o n c o rd â n c ia o b se rv a d o s en tre o te ste d e im u n o flu o re sc ê n c ia -Ig G e os te ste s H A b e H A g fo ra m 0 ,9 5 2 e 0 ,9 4 5 , resp e ctiv am e n te.
O s re su lta d o s o b tid o s co m so ro s d e resid e n te s em á r e a e n d ê m ic a , u tiliz a n d o o s te ste s de im u no flu o re sc ê n c ia e d e h e m a g lu tin a ç ã o e s tã o n a T a b e la 5. N e s te g ru p o , a p o sitiv id a d e d o s te ste s d e h em ag lu tin a ç ã o foi d e 4 8 ,5 % (L . C . 9 5 % = 4 1 ,4 - 5 5 ,6 ), p a r a o te ste H A b e d e 3 7 ,0 % (L . C . 9 5 % = 3 0 ,3 - 4 4 ,1 ), p a r a o H A g , c o m ín d ic e d e c o n c o rd â n c ia d e 0 ,7 6 5 . O s títu lo s o b tid o s n o te ste H A b fo ram significati v a m e n te m a is e le v a d o s q u e o s e n c o n tra d o s n o teste H A g ( t = 1 7 ,3 5 ;g r a u s d e liberdade = 199; p < 0 ,0 0 1 ) . O c o e ficie n te d e c o rre la ç ã o lin e a r de P ea rso n , r = 0 , 6 1 ( t = 1 0 ,8 1 ; g rau s d e lib e rd a d e = 198, p < 0 ,0 0 1 ), in d ic o u a e x istê n c ia de ele v a d o g rau d e c o rre la ç ã o lin e a r en tre o s títu lo s o b tid o s p o r am b o s os te ste s.
T a b e la 5 - P o r c e n t a g e n s d e p o s i t i v i d a d e , c o m l i m i t e s d e c o n f i a n ç a d e 9 5 % , e m é d i a s g e o m é t r i c a s d e t í t u l o s p a r a te s t e s d e h e m a g l u t i n a ç ã o e d e i m u n o f l u o r e s c ê n c i a e m s o r o s d e 2 0 0 r e s id e n t e s e m á r e a e n d ê m ic a .
T e s te s
P o s i t i v i d a d e ( % )
( L . C . 9 5 % ) M G T * M G T P * *
Im u n o flu o re sc ê n c ia :
I g G co m i* , f a l c i p a r u m ( I F f G ) 8 0 ,5 ( 7 3 , 8 - 8 5 , 3 ) 117 21 3 I g G co m i* , v i v a x ( I F v G ) 7 3 ,5 ( 6 7 , 3 - 7 9 , 9 ) 67 133 Ig M c o m P . f a l c i p a r u m (IF fM ) 1 2 ,0 ( 7 , 9 - 1 7 , 4 ) 12 5 0 Ig M c o m P . v i v a x ( IF v M ) 10,5 ( 6 , 6 - 1 5 , 6 ) 12 4 4
I F f G + I F v G 8 8 , 0 ( 8 2 , 7 - 9 2 , 1 ) - —
I F f M + I F v M 1 5 , 5 ( 1 0 , 8 - 2 1 , 3 )
-H e m a g lu tin a ç ã o :
" m m * h & g h e i (H A b ) 4 8 ,5 ( 4 1 , 4 - 5 5 , 6 ) 29 88 c o m P . g a l l i n a c e u m (H A g ) 3 7 , 0 ( 3 0 , 3 - 4 4 , 1 ) 8 21
H A b + H A g 5 5 ,0 ( 4 7 , 8 - 6 2 , 0 ) -
-M G T * - -M édia geom étrica de títulos.
S a n c h e z -R u iz M C A , C a m a rg o M E , C en eviva A C , F erreira A W. T este d e h em a g lu tin a ç ã o n a so ro lo g ia d a m a lá ria h u m a n a em p reg a n d o h e m á c ia s p a r a s ita d a s p elo Plasmodium berghei R ev is ta d a S o cied a d e B ra sile ir a d e M e d ic in a T ro p ica l 1 8 :8 5 -9 3 , A b r-Ju n, 1 9 8 5
P a r a o te ste d e im u n o flu o rescên c ia co m co n ju gado an ti-Ig G , o b se rv o u -se p o sitiv id a d e d e 8 8 ,0 % (L . C . 9 5 % = 8 2 , 7 - 9 2 , 1 ) , u tiliza n d o -se an tíg en o s de P . f a l c i p a r u m e de P . v i v a x . O s ín d ic es de c o n c o r d â n c ia en tre o te ste de im u n o flu o re sc ê n c ia -Ig G e o s te ste s H A b e H A g fo ra m 0 ,5 6 5 e 0 ,4 9 0 re sp e c tiv a m ente.
D IS C U S S Ã O
N o p re se n te tra b a lh o , d esen v o lv e u -se u m te ste de h e m a g lu tin aç ão p a ra a so ro lo g ia d a m a lá ria h u m a na, com re a g e n te co n stitu íd o d e su sp e n sã o de h e m ácias de cam u n d o n g o s in fec tad o s p e lo P . b e r g h e i e p rese rv a d as p o r fix aç ão ald eíd ica. F o ra m d e term i n a d a s diferentes co n d iç õ e s p a ra a o b te n ç ã o de re a gente sensível e estáv e l, p erm itin d o le itu ra n ítid a de so ro s reag en tes e n ão -reag en tes.
C o m re la ç ã o à fix aç ão a ld e íd ic a d a s h e m á c ia s, o b se rv a ra m -se re su lta d o s m a is h o m o g ê n eo s q u a n d o se u tilizo u ta m p ã o fo sfato 0 ,1 5 M d e p H 7 ,6 e co n c e n tra ç ã o final de fo rm a ld e íd o de 2 ,8 % . C o m o d ilu en te d a s h em á c ia s fo rm o liza d as, em p re g o u -se a so lu ç ão p re p a ra d a seg u n d o H o sh in o -S h im iz u 13, estu d a n d o -se v aria çõ e s q u a n to ao co n se rv a n te e q u a n to à m olari- d ad e e a o p H d o ta m p ã o fo sfato em p re g ad o . O b tiv e- ram -se b o n s re su lta d o s co m ta m p ã o fo sfa to 0 ,0 7 5 M de p H 6 ,4 e a z id a só dica. N e s ta s c o n d içõ e s, o re a g en te m o stro u -se estáv e l, sem fen ô m e n o s de au to -ag lu ti- n ação , ap re se n ta n d o re a ç ã o d e fácil le itu ra e títu lo s m ais elevados.
O re a g e n te p a d ro n iz a d o a p re se n to u , n o p erío d o de d ez m e ses em q u e foi e stu d a d o , b o a e sta b ilid ad e , n ã o re v e lan d o q u a isq u e r alte ra ç õ e s, q u a n d o c o n s e r vad o a 4 °C , e m su sp e n sã o , o u n a te m p e ra tu ra am b ien te, q u a n d o liofilizado.
O te ste de h e m a g lu tin a ç ã o com /*. b e r g h e i (H A b ), ap lic a d o a so ro s d e 8 8 m a lá ric o s c o m p a ra sitem ia a p re se n to u sen sib ilid ad e d e 9 8 ,9 % (L . C . 9 5 % = 9 3 ,9 - 1 0 0 ,0 ) , p a r a títu lo s iguais o u su p e rio re s a 4 0 . U m ú n ic o so ro foi n ã o -rea g en te , p o is a p re se n ta v a títu lo in ferio r a 4 0 . E sse so ro p e rte n c ia a p a c ie n te com p rim o in fec çã o p o r P . f a l c i p a r u m e e ra n ã o -re a g ente nos te ste s d e im u n o flu o rescên c ia -Ig M , co m am b o s o s p la sm ó d io s, e m b o ra rea g isse a 1 /2 0 co m P . v i v a x n o te ste d e im u n o flu o re sc ê n c ia -Ig G e a 1 /1 0 no teste de h em ag lu tin ação com P . g a l l i n a c e u m (H A g ). O te ste H A b m o stro u igual se n sib ilid ad e à d o s te ste s d e im u n o flu o rescên c ia -Ig G e à d o te ste H A g (9 8 ,9 % ), h a v e n d o e le v a d a c o n c o rd â n c ia en tre eles. C o m p a
ra n d o -se os títu lo s o b tid o s n o s te ste s H A b e H A g , o b se rv a ra m -se v a lo re s sig n ific ativ am en te m a is ele v a d o s n o te ste H A b , h a v e n d o a lto g rau d e c o rre la ç ã o lin e a r en tre o s títu lo s de am b o s o s te ste s ( r = 0 ,6 1 ;
p < 0 , 0 0 1 ) .
P a r a o s te ste s d e im u n o flu o rescên c ia , em p reg a- ra m -se an tíg e n o s o b tid o s a p a rtir de sa n g u e de in d iv íd u o s co m p a ra site m ia . E m b o ra esse s an tíg en o s te n h a m se m o stra d o a d e q u a d o s p a ra a p e s q u isa de a n tic o rp o s Ig G , o m e sm o n ã o o c o rre u p a r a an tic o rp o s IgM , co m o p o d e se r v erific ad o p e la b a ix a se n sib ili d a d e e n c o n tra d a n o s te ste s d e im u n o flu o rescên - c ia -Ig M , q u e foi d e 3 7 ,5 % (L . C . 9 5 % = 2 7 ,4 - 4 8 ,5 ) p a r a o a n tíg en o de P . f a l c i p a r u m e de 8 1 ,8 % (L . C . 9 5 % = 7 2 ,2 - 8 9 ,2 ) p a ra o d e P . v i v a x . P a r a a p e s q u isa de a n tic o rp o s Ig M , e m te ste s de im u n o flu o re sc ên c ia, an tíg en o s de P . f a l c i p a r u m o b tid o s de c u ltiv o in v itr o m o stra ra m se r a d e q u a d o s^ . E m re la ç ã o ao te ste d e im u n o flu o re sc ê n c ia -Ig G , c o n sid e ra d o te ste de re fe rê n c ia n a so ro lo g ia d a m a lá ria , os te ste s H A b e H A g a p re s e n ta ra m ín d ic e d e c o -p o sitiv id a d e d e 0 ,9 8 9 .
A e sp e c ificid a d e d o te ste H A b foi d e 9 6 ,0 % (L . C . 9 5 % = 9 3 ,8 - 9 7 ,6 ), em so ro s d ilu íd o s a 1 /4 0 , n o g ru p o d e 4 7 6 so ro s. F o r a m re a g e n te s so ro s d e três d o a d o re s de sa n g u e e de 16 p e s so a s c o m o u tra s infecções. E m c a so s d e d o e n ç a d e C h a g a s ag u d a e de m o n o n u c leo se, o b tiv e ra m -se títu lo s d e a té 1 60, d ev id o à p re se n ç a d e an tic o rp o s h eteró filo s. P o ré m , e s sa in e sp ec ificid ad e d o te ste p a r a a n tic o rp o s h eteró filo s p o d e se r d e te c ta d a e m p re g an d o -se u m rea g e n te -te ste - m u n h a , p re p a ra d o a p a r tir de h e m á c ia s d e c a m u n d o n g o s n ã o -in fe c ta d o s. A e sp ec ificid a d e d o te ste H A b foi b e m p ró x im a à d o te ste d e im u n o flu o re sc ê n c ia -Ig G co m P . f a l c i p a r u m . E m re la ç ã o ao te ste d e referên cia, os te ste s H A b e H A g a p re s e n ta ra m ín d ic e d e co- n e g a tiv id ad e d e 0 ,9 6 9 e 0 ,9 6 5 , resp e c tiv a m e n te .
si-S a n ch e z- R u iz M C A , C a m a rg o M E , C eneviva A C , F erreira A W. T este d e h em a g lu tin a çã o n a so ro lo g ia d a m a lá ria h u m a n a em p regando h em á c ia s p a r a s ita d a s p e lo Plasmodium berghei. R ev is ta d a S o cied a d e B r a sile ir a d e M e d ic in a T ro p ica l 1 8:8 5-93 , A br-Jun, 1 9 8 5
tem ia, po is a p o sitiv id a d e d o s te ste s H A b e H A g foi bem m e n o r q u e a o b tid a p e lo te ste d e im u n o flu o res- cên cia-Ig G . E s te c o m p o rta m e n to p o d e se r d ev id o ao fato d e o te ste H A b d e te c ta r p rin c ip a lm e n te a n tico rp o s IgM , os q u a is e s tã o a s so c ia d o s co m in fec çõ e s atu ais, rec en te s8, e n q u a n to q u e o s a n tic o rp o s Ig G , d e te c ta d o s pelos te ste s d e im u n o flu o re sc ê n c ia in d ire ta , in d ic a m tan to in fe c ç ã o a tu a l c o m o p r e g r e s s a '5 . E m re la ç ã o ao teste d e refe rê n c ia , o te ste H A b a p re se n to u ín d ic e de c o -p o sitiv id ad e d e 0 ,5 2 8 e d e co -n e g ativ id ad e de 0 ,8 3 3 , co m ín d ic e d e c o n c o rd â n c ia de 0 ,5 6 5 .
A n e g a tiv a ç ã o d o s so ro s d e m a lá ric o s co m p a ra site m ia a p ó s tra ta m e n to p elo 2 -m e rc a p to e ta n o l, a p a r d a p e rm a n ê n c ia d o s títu lo s p e lo te ste de im u no- flu o re sc ê n c ia -Ig G , sugere q u e o te ste H A b d e te c te , p red o m in a n te m e n te , an tic o rp o s d a c la sse IgM . E n tre ta n to , são n e c e s sá rio s e stu d o s c o m p le m e n ta re s a fim de q u e se p o s s a afirm a r q u a l é a p rin c ip a l c la sse de an tico rp o s en volvidos.
O e s tu d o d a rep ro d u tib ilid a d e d o te ste m o stro u h a v e r u m a b o a c o n c o rd â n c ia d e títu lo s, ta n to em te ste s rea liz a d o s e m trip lic a ta , n o m e sm o d ia, co m o m e sm o rea g en te , c o m o e m te s te s e x e c u ta d o s c o m v á rio s lo te s de rea g e n te s n o m e sm o d ia o u em d ia s diferen tes.
O fu n d a m e n to d o te ste de h e m a g lu tin a ç ã o co m P . g a l l i n a c e u m e s tá n a se n sib iliza çã o in v iv o d as h e m á c ia s d e av e s p elo s an tíg en o s e x o p la sm o d ia is8 . T a is an tíg en o s fo ra m d e s c rito s n o so ro d e av es co m in fec çã o a g u d a p elo P . g a l l i n a c e u m ^ e rea g em cru- z a d a m e n te co m a n tic o rp o s d esen v o lv id o s n a m a lá ria h u m a n a 2 7 . A n tíg e n o s so lú v eis fo ra m d e te c ta d o s no so ro d e ca m u n d o n g o s c o m in fec çã o ag u d a p elo P. b e r g h e i, a p ó s 4 d ia s2^ e 10 d ia s d e in o c u laç ão ^ . E sse s an tíg en o s p a re c e m se r lib e ra d o s, p re d o m in a n te m e n te , d u ra n te a ru p tu ra d o s e sq u iz o n te s m a d u r o s ^ . E m p re g a n d o o te ste de im u n o flu o re sc ê n c ia in d ire ta c o m an tíg e n o d e P . b e r g h e i, p a r a p e sq u isa d e a n tic o rp o s n a m a lá ria h u m a n a , o b se rv o u -se q u e a té c n ic a d e e x te n sã o d e sa n g u e to ta l fo rn e c e u resu l ta d o s sa tisfa tó rio s, e n q u a n to q u e, e m p re g an d o -se a p e n a s os p a ra s ito s lib e ra d o s das, cé lu la s lisa d a s, os re su lta d o s fo ra m in c o n sta n te s, v a ria n d o d e lo te p a r a lo te 2 2 . A ssim , e m alg u n s lo tes, o s p a ra s ito s a p re se n ta ra m flu o re sc ên cia, e n q u a n to q u e, n a m a io ria deles, o b se rv o u -se u m a flu o re sc ê n c ia d ifu sa, n ã o -c a ra c te - rístic a , em to d o o ca m p o . O s an tíg en o s so lú v eis sã o re le v a n te s n a re a tiv id a d e ao P . b e r g h e i, e m b o ra os an tíg e n o s p e rte n c e n te s o u lig ad o s a o c o rp o d o p la s- m ó d io ta m b é m d e v a m a p re se n ta r im p o rtâ n cia .
E stu d o s re a liz a d o s p o r P o e ls e co ls21 em he m á c ia s d e ca m u n d o n g o s in fec tad o s p elo P. b e r g h e i, em p re g a n d o so ro h o m ó lo g o h ip erim u n e, d em o n stra ram q u e a p e n a s p a ra sito s livres e reticu ló c ito s co n te n d o m a is d e u m p a ra sito m a d u ro rea g iam co m os an tico rp o s; as h e m á c ia s m a d u ra s n ã o reagiam . O s re tic u ló c ito s ex p u n h a m an tíg en o s p la sm o d ia is n a super fície d a m e m b ra n a o u d e n tro d o c ito p la sm a, sendo que ap ro x im a d a m e n te 1 0 % a 2 0 % d e ssa s c é lu la s in fecta d a s p o ssu ía m an tíg en o s p la sm o d ia is in c o rp o ra d o s às su a s m e m b ra n a s. B ro w n e co ls.6 v erific aram q u e no so ro d e ra to s im u n es a o P . b e r g h e i h a v ia an tico rp o s esp ec ífico s p a ra iso a n tíg e n o s e p a ra an tíg en o s do p a ra sito , a m b o s p re se n te s n a m e m b ra n a d o s reticu ló c ito s in fec tad o s. E m b o ra e sse s e stu d o s te n h a m sido re a liz a d o s em p re g a n d o -se so ro s hom ólo gos, pode-se su p o r que ta is an tíg en o s p la sm o d ia is, ex p o sto s na m e m b ra n a d a s h e m á c ia s p a ra s ita d a s p o r fo rm a s m a d u ra s, se jam ta m b é m resp o n sá v eis, p elo m en o s em p a rte , p e la s re a ç õ e s c ru z a d a s q u e se o b se rv a m n o te ste de h e m a g lu tin a ç ã o c o m h e m á c ia s de cam u n d o n g o s in fec tad o s p e lo P . b e r g h e i.
E m co n c lu sã o , o te ste H A b , o ra p ad ro n iz ad o , p e la a lta se n sib ilid a d e em c a so s d e m a lá ria h u m a n a a tu a l, p o d e rá te r a p lic a ç ã o p a ra a d e te c ç ã o d e p acien tes p o rtad o res de p arasitem ia. T a l diagnóstico se faz ne c e ssá rio ta n to p a ra fins clínicos, co m o p a ra triagem de d o ad o re s de sangue, d e m igran tes que venham p a ra reg iõ e s em q u e a m a lá ria e s tá n a fase de v ig ilância, e p a r a estu d o s epidem iológicos, esp ecialm en te n o acom p a n h a m e n to d e p ro g ra m a s d e c o n tro le d a m a lária . P o r se r d e e x e c u ç ã o sim p les e rá p id a , p o d e rá s e r re a liza d o p o r p e sso a l d e nível té cn ic o , m e sm o em áre a s de p o u c o s re c u rso s ec o n ô m ic o s. P o ré m , sã o n e c essário s estu d o s ad ic io n a is, a fim de se co n h e c e r m e lh o r o seu c o m p o rta m e n to em á re a s en d ê m ic a s e em a m o stra s de so ro s se ria d a s d e um m e sm o in d iv íd u o a n te s e a p ó s o tra ta m e n to esp ecífico .
S U M M A R Y
A h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t is d e s c r i b e d f o r h u -m a n -m a l a r i a s e r o d i a g n o s i s w ith a l d e h y d e - f i x e d P la sm o d iu m b erg h e i i n f e c t e d m o u s e e r y th r o c y te s . I n p a t i e n t s w ith a P . fa lc ip a ru m o r P . v iv ax p a t e n t p a r a s i t e m i a p o s i t i v e r e s u lts w e r e s e e n in 9 8 . 9 % o f t h e 8 8 c a s e s te s te d . T itr e s r a n g e d f r o m 4 0 t o 6 4 0 . A 9 6 . 0 % s p e c i f i c i t y w a s f o u n d f o r 4 7 6 n o n - m a l a r i a l p a t i e n t s . A c l o s e r e p r o d u c i b i l i t y w a s o b s e r v e d f o r t h e te st, e v en f o r d i j f e r e n t r e a g e n t b a tc h e s . T h e t e s t w a s p o s i t i v e in
S a n c h e z -R u iz M C A , C a m a rg o M E , C en eviva A C , F erreira A W . T este d e h em a g lu tin a çã o n a so ro lo g ia d a m a lá ria h u m a n a em p reg a n d o h em á c ia s p a r a s ita d a s p e lo Plasm odium berghei R ev is ta d a S o cied a d e B ra sile ir a d e M e d ic in a T r o p ic a l 1 8 :8 5 -9 3 , A b r J u n , 1 9 8 5
p o s i t i v i t y o f t h e I g G - i m m u n o f l u o r e s c e n c e te st. T h i s lo w e r p o s i t i v i t y f o r th e h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t c o u l d r e s u l t f r o m i t s r e a c t i v i t y w i th I g M a n t i b o d i e s . A f t e r 2 - m e r c a p t o e t h a n o l tr e a tm e n t , a l i s e r a f r o m p a t i e n t s w ith p a t e n t p a r a s i t e m i a w e r e n o n - r e a c tiv e . T h e h e m a g g l u t i n a t i o n te st, w i th r e fe r e n c e to t h e I g G - i m - m u n o f l u o r e s c e n c e te s t, s h o w e d a 0 . 9 8 9 c o - p o s i t i v i t y f o r p a t i e n t s w ith a p a t e n t p a r a s i t e m i a a n d a 0 . 9 6 9 c o -
n e g a t i v i t y f o r n o n - m a l a r i a l p a t i e n t s . F o r r e s i d e n t s in e n d e m i c a r e a s a c o - p o s i t i v i t y o f 0 . 5 2 8 a n d a c o - n e g a t i v i t y o f 0 . 8 3 3 w e r e o b s e r v e d .
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