Resolução de Problemas Complexos em Imunohematologia

(1)

Maria Giselda Aravechia

HIAE

-

São Paulo

Participantes :

• Marcia R. Dezan

• Vanessa Oliveira

• Dra Mariza Mota

• Dra Lilian Castilho

(2)

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

• Anticorpos incomuns (< 1% na população geral)

• Soro reage de maneira uniforme com todas as

hemácias do painel (Auto controle -).

• Podem ter ou não significado clínico

Como identificá-los ?

(3)

Hemácias

TAD

-Painel de soros

de alta freq

Painel de soros

de alta freq

Transfusão

recente?

Transfusão

recente?

Sim

Não

Genotipagem

Fenotipagem

P/ Ags comuns

Fenotipagem

P/ Ags comuns

(4)

Soro reativo c/ todas as hemácias

Soro

Mesma

intensidade c/

todas as céls

(AGH)

Mesma

intensidade c/

todas as céls

(AGH)

Intensidades de

reação variadas

c/ diferentes

células (AGH)

Intensidades de

reação variadas

c/ diferentes

células (AGH)

Reações

variadas em

diferentes fases

Reações

variadas em

diferentes fases

Reatividade à

TA/AGH

Reatividade à

TA/AGH

Confirmar a especificidade c/

hemácias Ag- / deleções /

fenótipos nulos ou celulas

tratadas com AET / DTT

Confirmar a especificidade c/

hemácias Ag- / deleções /

fenótipos nulos ou celulas

tratadas com AET / DTT

Efeito de dose :

KEL/LU/YT/CO/DI/SC

Efeito de dose :

KEL/LU/YT/CO/DI/SC

Anticorpos

HTLA

Anticorpos

HTLA

Especificidades

contra Ags

comuns e alta freq

Especificidades

contra Ags

comuns e alta freq

Anticorpos :

Anti-H (bombay)

Anti-PP1Pk

Anti-I

Anticorpos :

Anti-H (bombay)

Anti-PP1Pk

Anti-I

↑ Título

Neutralização com

plasma AB

Neutralização com

plasma AB

Neutraliza

Ch- ou

Rg-Neutraliza

Ch- ou

Rg-Não neutraliza

Outros HTLA

Não neutraliza

Outros HTLA

Adsorver o soro c/

hemácias c/ fenótipo

semelhante ao do

paciente

Adsorver o soro c/

hemácias c/ fenótipo

semelhante ao do

paciente

Identificar o

Ac no eluato/soro

Identificar o

Ac no eluato/soro

(5)

Características Sorológicas de Anticorpos de Alta Freqüência

HEMÓLISE A 37

o

C

• Anti-Jk3 e Anti-Vel.

REATIVIDADE REDUZIDA OU AUSENTE COM ENZIMAS

• Anti-Ch/Rg, Anti-JMH, Anti-Yt

a

_{, Anti-Ge2, Anti-Ge3, Anti-Ge4, Anti-ENEH.}

RAÇA

• Anti-U, Anti-Js

b

, Anti-Hy e Anti-At

a

(africanos); Anti-Jk3 (Polinésios); Anti-Kp

b

(brancos); Anti-Di

b

_{(populações asiáticas).}

(6)

Técnicas Utilizadas

NEUTRALIZAÇÃO:

Antígeno solúvel para inibir a reatividade de certos anticorpos em testes de hemaglutinação

(Pool de Plasma AB ⇒ Chido / Rodgers)

DTT (DITHIOTHREITOL) :

Compostos contendo sulfidrila que desnaturam anticorpos da classe IgM ao romper pontes

dissulfeto

.

AET (

brometo

de 2

-

aminoetilisoutiourânio)

Exceto Kx (K15), inativa os antígenos do sistema Kell, JMH, Yk

a

_{, Hy, Kn}

a

_{, McC}

a

_{e Yt}

a

_.

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

(7)

Técnicas Utilizadas

DIFOSFATO DE CLOROQUINA

Utilizado na remoção de anticorpos IgG da superfície das hemácias

sensibilizadas.

ADSORÇÃO

Remoção de anticorpos do soro com hemácias apropriadas.

TÉCNICAS ENZIMÁTICAS

Hemácias tratadas com enzima (tripsina, ficina, papaína) potencializa a

reatividade de algumas especificidades de anticorpos, mas reduz ou elimina as

especificidades de outros anticorpos.

(8)

CASO 1 :

• Paciente AAT, 69 anos, branca, portadora de Diabetes Mellitus e

anemia microcítica

• Gestações : G11P10A1

• Data última transfusão : Pode ter recebido sangue há 20 anos em

cirurgia neurológica.

• Solicitado transfusão : Provas cruzadas incompatíveis

CASO 1

:

•

• Paciente AAT, 69 anos, branca, portadora de Diabetes

Paciente AAT, 69 anos, branca, portadora de Diabetes

Mellitus

e

anemia

microcítica

•

• Gestações :

Gestações :

G11P10A1

•

• Data última transfusão : Pode ter recebido sangue há 20 anos em

Data última transfusão : Pode ter recebido sangue há 20 anos em

cirurgia neurológica.

•

• Solicitado transfusão : Provas cruzadas incompatíveis

Solicitado transfusão : Provas cruzadas incompatíveis

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

(9)

Grupo sangüíneo : A RhD Negativo

TAD : Negativo

PAI : Positivo (PEG

-

AGH)

PEG

1+

0

+ 0 + + 0 + + 0 + + + + + + 0 + 0 + 0 0 + + + 0 + R₂R₂ II

1+

0

+ + + + + + 0 + 0 + + + + + 0 + 0 + + 0 + 0 0 + + R₁R₁ I AGH TA Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Jsa Kpb Kpa k K Cw e c E C D Donor Lutheran MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr

PAI : Positivo (Gel Liss/Coombs e Enzima)

0 2+

+ + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 0 0 rr III

0 2+

0 + 0 0 + + + 0 0 + + 0 + + + + 0 + 0 0 0 + + 0 + R₂R₂ II

0 2+

0 + 0 + + + + + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + 0 0 + + R₁w_r I ENZ LISS Dia Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb Kpa k K Cw e c E C D Doado r GEL DI LU MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr

(10)

Painel tubo – PEG-AGH

0 0 Auto controle PC 1+ 0 + + + 0 + 0 + 0 0 0 + 0 0 + + + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 16 1+ 0 + 0 + 0 + + + + w 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 15 1+ 0 + 0 + + + + + + 0 0 + 0 0 + + + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 14 1+ 0 + 0 + 0 + + + 0 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 13 1+ 0 + 0 0 + 0 + + + 0 + + + + + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 12 1+ 0 + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0 + 0 0 + + + + + R₁R₂ 11 1+ 0 + 0 + + + + 0 + 0 + + + + + 0 0 + 0 0 0 + + 0 + + R₁r 10 1+ 0 + 0 + + 0 + 0 0 + + + + + + 0 + 0 + + 0 + 0 0 + + R₁R₁ 9 2+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 8 1+ 0 + 0 + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 0 rr 7 2+ 0 + 0 + + + + 0 0 + + 0 0 + + 0 + 0 + 0 0 + + + 0 0 r"r 6 1+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 + 0 r´r 5 1+ 0 + 0 0 + + + + 0 0 0 + 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + R_or 4 1+ 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 0 0 + + 0 + R₂R₂ 3 2+ 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + R₁w_R 1 2 1+ 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 + + + R_ZR₁ 1 AGH TA Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Jsa Kpb Kpa k K Cw e c E C D Donor PEG Lutheran MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

(11)

0 0 Auto 0 2+ 0 + 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + 0 0 + + 0 + + R1r 11 0 2+ 0 + + + 0 + + + 0 0 0 + 0 0 + + 0 + 0 0 + + 0 + + R1r 10 0 2+ 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + + + + + + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 9 0 2+ 0 0 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + + + + 0 0 + + 0 0 + R_or 8 0 2+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + + + 0 + + 0 + + 0 0 0 rr 7 0 2+ 0 + 0 + 0 + + + + 0 0 + + 0 + + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 6 0 2+ 0 + 0 + 0 + + + + 0 + + + + + + 0 + 0 0 + + + 0 0 r"r 5 0 2+ + + 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + + 0 + 0 r´r 4 0 2+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + + + 0 + 0 0 0 + + 0 + R₂R₂ 3 0 2+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + + + 0 + + 0 + 0 0 + + R₁R₁ 2 0 2+ 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + 0 0 + + R₁w_R 1 1 Enz Liss Dia Lub Lua s S N M P Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb Kpa k K Cw e c E C D Doador GEL DI Lutheran MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr

Painel Gel

(12)

-2+

Anti-Vel

901 -09140.18.11

12

0 1+

O

Anti-Yt

a

YT

A

1296871

11

0 1+

O

Anti-Yt

a

YT

A

0371585

10 -4+

Anti-Wr

b

DI

-MIMA49

9 -4+

Anti-Lu3

LU

-286

8 -2+

Anti-JMH

JMH

-4211422

7 -4+

Anti-Ge2

GE

-MIMA (1435)

6 -3+

Anti-k

KEL

-PR41A

5 -3+

Anti-Lu

b

KEL

-PR42A

4 -2+

Anti-Js

b

KEL

-08860.09.12

3 -4+

Anti-Kp

b

KEL

-PR41A

2 -4+

Anti-Di

b

DI

A

WAGR

1 Ctl-Ctl+

Liss

Reações

Anticorpo (s) presente (s)

Sistema

Grupo

sanguíneo

Identificação

Nº

Painel de soros de alta freqüência

Fenotipagem estendida

(13)

0

0 +

0

0 +

0

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

r"r

5

0

0 +

+

0 +

+

0

0 +

0

0 +

+

0 +

0

0 +

+

0

0 +

R

_o

r

9 2+

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

₁

2

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

0 r´r

III

2+

0 +

0

0 +

+

0

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

0 +

R

₂

R

₂

II

2+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0

0 +

+

R

₁w

_r

I

Liss Dia Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kp b Kpa k K Cw e c E C D Doador

Conclusão

:

Anti

-

Yt

a

_,

_Anti

_-

_Fy

a

0 0 0 0 + + + + 0 0 + + 0 + 0 + 0 0 + 0 + + Yt(a-) 1296871 0 2+ 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + Yt(a-) 371585 ENZ LISS AGH TA s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya k K e c E C D Fenótipo Doador GEL PEG MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr

Painel de hemácias selecionadas Yt(a-)

(14)

Caso 2

Paciente LSP, 81 anos, afro

-

brasileira

Diagnóstico : Infarto Agudo Miocárdio + Hipertensão

Arterial Sistêmica +

Fibrilação

Atrial

Crônica +

Diabetes

Mellitus

Data da última transfusão : 23/10/2006 (15 dias)

Gestações : Nenhum histórico sobre gestações

anteriores

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

(15)

Grupo sangüíneo : A

RhD

Positivo

TAD : Negativo

PAI : Positivo (PEG

-

AGH)

PAI : Positivo (Gel Liss/Coombs e Enzima)

4+ 3+ + + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 0 0 rr 4+ 3+ 0 + 0 0 + + + 0 0 + + 0 0 + + + 0 + 0 0 0 + + 0 + R₂R₂ 4+ 2+ 0 + 0 + + + + + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + R₁w_r ENZ LISS Dia Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb Kpa k K Cw e c E C D Doador GEL - TESTE DI Lutheran MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr 3+ 0 + 0 0 + + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + + 0 + R₂R₂ II 0 0 0 + + + 0 0 + + + 0 + + + + 0 0 + 0 0 + + R₁R₁ I AGH TA s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb k K Cw e c E C D Wiener PEG MNS P1 Lewis Kidd Duffy Kell RH-hr

(16)

0 0 autocontrole 3+ 0 0 + + + + 0 0 0 + 0 0 + + + 0 0 + + 0 0 0 rr 16 3+ 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 rr 15 3+ 0 0 + + + + + 0 + + + + + + + 0 0 + + 0 0 0 rr 14 3+ 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + + + 0 0 + + 0 0 0 rr 13 3+ 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 0 + + + 0 0 r"r 12 3+ 0 0 + 0 + + 0 + + + + + + + + 0 0 + + 0 0 0 rr 11 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + 0 + + + RzR1 10 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + + + + 0 + 0 0 + + R1R1 9 3+ 0 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 0 + + 0 + 0 + + 0 0 0 rr 8 3+ 0 + 0 + + + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 rr 7 3+ 0 + + + + 0 + 0 + + + + + + + 0 0 + + 0 + 0 r"r 6 2+ 0 0 + + + + + 0 0 + + 0 + + + 0 0 + + + 0 0 r´r 5 3+ 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + 0 0 + + 0 0 + Ror 4 3+ 0 + 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + + + + 0 0 0 + + 0 + R2R2 3 0 0 0 + 0 + + + 0 0 + + 0 + + + + + + 0 0 + + R1w_R1 2 0 0 + 0 0 + + 0 0 + 0 0 + + + + 0 0 + 0 + + + RzR1 1 AGH TA s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb k K Cw e c E C D Wiener PEG MNS P1 Lewis Kidd Duffy Kell RH-hr

Painel tubo – PEG-AGH

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

(17)

0 0 Autocontrole 4+ 2+ 0 + 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + 0 0 + + 0 + + R₁r 11 4+ 2+ 0 + + + 0 + + + 0 0 0 + 0 0 + + 0 + 0 0 + + + + + R₁R₂ 10 4+ 3+ 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + + + + + + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 9 4+ 3+ 0 0 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + + + + 0 0 + + 0 0 + R_or 8 4+ 3+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + + + 0 + + 0 + + 0 0 0 rr 7 4+ 3+ 0 + 0 + 0 + + + + 0 0 + + 0 + + 0 + 0 0 + + 0 0 0 rr 6 4+ 3+ 0 + 0 + 0 + + + + 0 + + + + + + 0 + 0 0 + + + 0 0 r"r 5 4+ 2+ + + 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + + 0 + 0 r´r 4 4+ 3+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + + + 0 + 0 0 0 + + 0 + R₂R₂ 3 0 1+ 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + + + 0 + + 0 + 0 0 + + R₁R₁ 2 0 1+ 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + + 0 0 + + R₁w_R 1 1 ENZ LISS Dia Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb Kpa k K Cw e c E C D Doador GEL - TESTE DI Lutheran MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr

Painel Gel – Liss/Coombs e Enzima

(18)

1+

(+)

1+

LISS Gel

0

Enz

0 +

+

0

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

_Z

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

₁ 9

+

0 +

0

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

₁

0 +

0

0 +

+

0

0 +

+

0

0 +

+

0 +

0

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

₁ 2

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0

0 +

+

R

1w

_R

1 1 Dia Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb Kpa k K Cw e c E C D Doador DI Lutheran MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr

Titulação – Neutralização com Plasma AB

Painel de Hemácias Selecionadas

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

Resolução de problemas complexos

em imunohematologia

46 128 0 (+) (+) 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ Soro LSP c/ Salina x R₁R₁ Controle -0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Soro Neutralizado Plasma AB x R₁R₁ Teste 50 512 0 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ Soro LSP x R₁R₁ Titulação Score Título 1024 512 256 128 64 32 16 8 4 2 P

(19)

Painel de Hemácias Selecionadas x Soro

Neutralizado com Pool de Plasma AB

Painel de Hemácias Selecionadas x Soro

Neutralizado com Pool de Plasma AB

Conclusão : Anti-c, Anti-CH

0

0 +

+

0

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

_Z

I

0

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

₁

9

0

0 +

+

0 +

0

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

₁

I

0

0 +

0

0 +

+

0

0 +

+

0

0 +

+

0 +

0

0 +

0

0 +

+

R

₁

R

₁

2

0

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0 +

+

0

0 +

+

R

₁w

_R

1

Enz LISS Dia Lub Lua s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Jsb Kpb Kpa k K Cw e c E C D Doador Gel DI Lutheran MNS P Lewis Kidd Duffy Kell RH-Hr 0 0 + 0 0 + 0 + 0 + + + + + 0 0 + 0 0 + + R₁R₁ 72090 Enz Liss s S N M P1 Leb Lea JKb Jka Fyb Fya Kpb Kpa K e c E C D Donor

Prova cruzada com hemácia