F O L H E T O I N F O R M A T I V O D O P R O D U T O

Immucor Transplant Diagnostics, Inc. 550 West Avenue, Stamford, CT 06902, E.U.A. Tel.: +1 (203) 328-9500 ou (888) 329-0255 (número gratuito), Fax: +1(203) 328-9599 WWW.IMMUCOR.COM

Documentação e traduções do produto disponíveis em:

www.Immucor.com

LIFECODES ID Classe I:

LIFECODES IDv2 Classe II:

Para Utilização de Diagnóstico In Vitro.

ÍNDICE

Definição dos Símbolos ...

Utilização Prevista ...

Resumo e Explicação ...

Princípios do Procedimento ...

Reagentes ...

A. Identificação ...

B. Advertências e Cuidados ...

C. Instruções de Armazenamento ...

D. Purificação ou Tratamento para Utilização...

E. Indicações de Instabilidade ...

Requisitos do Instrumento ...

Colheita e Preparação de Amostra ...

1

2

2

2

2

2

2

3

3

3

3

3

Procedimento ...

A. Materiais Fornecidos ...

B. Materiais Necessários não

Fornecidos ...

Instruções para Uso ...

Resultados ...

Controlo de Qualidade...

Limitação do Procedimento ...

Reparação de Avarias...

Características do funcionamento

específico ...

Referências ...

3

3

3

4

5

4

5

6

6

6

DEFINIÇÃO DOS SÍMBOLOS

(Etiquetas do Produto e Documentos Suplementares)

Código do lote Número do

catálogo Prazo de validade Intervalo de temperatura (armazenamento) Diluir antes de utilizar DIL Sensível à luz (Conservar ao abrigo da luz) Suficiente para N testes Consulte as instruções de utilização Nome do Paciente NAME Número de

Identificação ID# Data DATE Técnico TECH

Grânulo BEAD Grupo étnico ETHN Dador DONOR Data da Colheita

de Sangue BDT Factor de ajuste de ruídos de fundo BAF Mediana da intensidade de fluorescência MFI Anticorpos Reactivos ao Painel

PRA Interpretação INTRP

Grânulo de Controlo Negativo CON Grânulo de Controlo Positivo (Imunoglobina G)

IgG Antigénio AG Amostra SAMPLE

Classe I CLI Classe II CLII Linha ROW Coluna COL

Número de Grânulos que

possuem Antigénio

Intervalos previstos EXPECTED RANGES Fabricante

Representante autorizado na Comunidade Europeia Advertência

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UTILIZAÇÃO PREVISTA

Os LIFECODES ID Classe I e IDv2 Classe II são imunoensaios baseados em grânulos, utilizados para detectar qualitativamente anticorpos HLA IgG reactivos ao painel (PRA).

RESUMO E EXPLICAÇÃO

Os antigénios leucocitários humanos (HLA) são um sistema de glicoproteínas que têm um papel funcional na apresentação de péptidos no sistema imunológico.1,2 Contudo, como sistema altamente polimórfico, as moléculas HLA podem tornar-se no alvo das respostas de anticorpos em pessoas durante gravidez, transfusão de produtos sanguíneos, ou rejeição de transplante de órgãos. Geralmente, a

aloimunização conduz à produção de anticorpos HLA em aproximadamente 33% dos indivíduos expostos.3 A presença ou ausência destes anticorpos específicos ao HLA tem um papel na determinação da sobrevivência dos alotransplantes.4

Os grânulos LIFECODES ID Classe I são concebidos para detectar anticorpos IgG a glicoproteínas antigénio HLA Classe I. Os grânulos LIFECODES ID Classe I são compostos por grânulos diferentes Luminex, com os quais são conjugados glicoproteínas antigénio HLA Classe I, purificadas por afinidade, de diferentes indivíduos.

Os grânulos LIFECODES ID Classe II são concebidos para detectar anticorpos IgG a glicoproteínas antigénio HLA Classe II. Os grânulos LIFECODES IDv2 Classe II são compostos por grânulos diferentes Luminex, com os quais são conjugados glicoproteínas antigénio HLA Classe II, purificadas por afinidade, de diferentes indivíduos.

PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO

Deixar incubar uma alíquota dos grânulos com um pequeno volume da amostra do soro padrão. Os grânulos sensibilizados são depois lavados para remoção do anticorpo não fixado. É então acrescentado um anticorpo IgG anti-humana conjugada com picoeritrina. Após outra incubação, a amostra de ensaio é diluída e analisada no instrumento Luminex. A intensidade de sinal de cada grânulo é comparada à intensidade de sinal de um grânulo de controlo negativo incluído na preparação do grânulo para determinar se o grânulo é positivo ou negativo a aloanticorpo ligado.

REAGENTES

A. Identificação

628200: Os LIFECODES LM1 ID Classe I são compostos por cinco (5) componentes em quantidades suficientes para 24 testes. 1. Grânulos HLA I LM1B (120 µl): Uma combinação de grânulos , cada um conjugado com glicoproteínas HLA Classe I de um indivíduo

diferente mais quatro (4) grânulos de controlo. O tampão de memória é um tampão de fosfato que contém NaCl, Tween-20, ProClin 300 de albumina sérica de bovinos. SENSÍVEL À LUZ. Assegurar que a exposição à luz seja até um máximo de três horas. Guardar entre 2 e 8ºC no escuro.

2. Conjugado Concentrado LMCJ (170 µl): IgG de cabra anti-humana conjugada com picoeritrina num tampão de memória de fosfato

contendo NaCl, Tween-20, azida de sódio e albumina sérica de bovino. DIL DEVE SER DILUÍDO na proporção 1:10 na Solução Tampão

antes de ser utilizado. SENSÍVEL À LUZ. Conservar ao abrigo da luz directa durante períodos prolongados de tempo. Guardar entre 2 e 8ºC no escuro.

3. Solução Tampão LMWB (30 ml): Um tampão de fosfato contendo NaCl, Tween-20, azida de sódio e albumina sérica de bovino.

Armazenar a uma temperatura entre 2 e 8ºC, e antes de utilizar equilibrar à temperatura ambiente (20 a 24oC).

4. Soro Controlo Positivo LMPC (80 µl): Esta mistura de soro ou soros obtém-se de indivíduo(s) que mostraram ser aloimunes a antigénios HLA (>85% PRA). Guardar entre 2 a 8°C.

5. Soro Controlo Negativo LMNC (80 µl): Esta mistura de soro ou soros obtém-se de indivíduo(s) que se sabe não terem anticorpos para antigénios HLA (<10% PRA). Guardar entre 2 a 8°C.

628223: Os LIFECODES LM2Q IDv2 Classe II são compostos por cinco (5) componentes em quantidades suficientes para 24 testes.

1. Grânulos HLA II LM2B (120 µl): Uma combinação de grânulos , cada um conjugado com glicoproteínas HLA Classe II de um indivíduo diferente mais quatro (4) grânulos de controlo. O tampão de memória é um tampão de fosfato que contém NaCl, Tween-20, azida de sódio e albumina sérica de bovino. SENSÍVEL À LUZ. Assegurar que a exposição à luz seja até um máximo de três horas. Guardar entre 2 e 8ºC no escuro.

2. Conjugado Concentrado LMCJ (170 µl): IgG de cabra anti-humana conjugada com picoeritrina num tampão de memória de fosfato

contendo NaCl, Tween-20, azida de sódio e albumina sérica de bovino. DILDEVE SER DILUÍDO na proporção de 1 para 10 em Solução

Tampão antes de ser utilizado

.

2 e 8ºC no escuro.

3. Solução Tampão LMWB (30 ml): Um tampão de fosfato contendo NaCl, Tween-20, azida de sódio e albumina sérica de bovino.

Armazenar a uma temperatura entre 2 e 8ºC, e antes de utilizar equilibrar à temperatura ambiente ( 20 a 24oC).

4. Soro Controlo Positivo LMPC (80 µl): Esta mistura de soro ou soros obtém-se de indivíduo(s) que mostraram ser aloimunes a antigénios HLA (>85% PRA). Guardar entre 2 a 8°C.

5. Soro Controlo Negativo LMNC (80 µl): Esta mistura de soro ou soros obtém-se de indivíduo(s) que se sabe não terem anticorpos para antigénios HLA (<10% PRA). Guardar entre 2 a 8°C.

B. Advertências ou Cuidados

1. Para Utilização de Diagnóstico In Vitro

2. O material de origem humana usado na produção deste kit foi testado através de métodos aprovados pelo FDA e considerado negativo quanto a anticorpos para HIV, HCV e HbsAg. No entanto, nenhum método de teste pode oferecer garantia total quanto à ausência de agentes infecciosos. Por essa razão, observe as Precauções Universais quando trabalhar com estes materiais.

3. A substituição de componentes por outros que não fazem parte deste sistema pode conduzir a resultados erróneos. 4. Os reagentes contêm 0,1% de azida de sódio como conservante, que pode reagir com as instalações de tubo de chumbo e

cobre de maneira a formar azidas de metal potencialmente explosivas. Utilize grandes quantidades de água quando eliminar materiais através da canalização do lavatório.

5. A contaminação bacteriológica de amostras ou a presença de imunocomplexos ou outros agregados de imunoglobulina podem causar ligação não específica aumentada e resultados erróneos.

6. Este produto detecta anticorpos IgG que podem ou não ser linfocitotóxicos.

7. Não se espera que este produto detecte anticorpos de imunoglobulina das classes IgA ou IgM.

8. Resultados que tenham vários grânulos DQ positivos que não partilhem tipos de beta DQ, podem indicar a presença de um anticorpo específico de alpha DQ. Examine estes dados ao pormenor. .

9. Os anticorpos específicos de DQ que produzem resultados positivos nos grânulos conjugados do dador DQ homozogótico não apoiados por resultado positivo no dador DQ heterozogótico compatível pode indicar um anticorpo pouco reactivo.

10. A determinação de % PRA não constitui a única base para uma decisão clínica que afecta o tratamento do paciente. É efectuada sistematicamente uma referência cruzada final antes do transplante.

11. Estes produtos são concebidos para ser usados com o instrumento Luminexem conformidade com as recomendações do fabricante.

12. Deitar fora os materiais após utilização de acordo com regulamentação local. 13. Ver informação nas folhas de dados relativa à segurança do material.

C. Instruções de Armazenamento

1. Ver as indicações de armazenagem nas etiquetas do produto.

2. Os grânulos e os conjugados são SENSÍVEIS À LUZ. Assegurar que a exposição à luz seja de até um máximo de três horas.

D. Purificação ou Tratamento Necessário para Utilização

1. Ver “Colheita e Preparação de Amostra.”

2. O Conjugado Concentrado deve ser diluído 1:10 em Solução Tampão antes da utilização.

E. Indicações de Instabilidade

1. Não utilizar os componentes ou controlos que estejam túrbidos ou cujo prazo de validade tenha sido ultrapassado. 2. Deitar fora todos os controlos e conjugados positivos e negativos diluídos que não tenham sido utilizados.

REQUISITOS DO INSTRUMENTO

Instrumento Luminex e Plataforma XY (Lifecodes Número de Produto 888300, 888302)

COLHEITA E PREPARAÇÃO DE AMOSTRA

O sangue deve ser colhido sem anticoagulante, usando técnica asséptica e deve ser testado enquanto ainda fresco para minimizar a possibilidade de obter reacções falso-positivas ou falso-negativas devido a conservação inadequada ou contaminação da amostra. O soro deve ser conservado entre 2 e 8 °C, por um período não superior a 48 horas. Se o soro tiver de ser armazenado para além de 48 horas, deve ser congelado a –20 ° C ou -80 ° C ou menos, durante até 2 anos. Laboratórios individuais devem estabelecer e validar métodos para armazenar soros por mais de 2 anos. O soro deve ser separado dos glóbulos vermelhos quando for guardado ou transportado. Evitar a congelação e descongelação repetida das amostras de soro.

Não utilizar soros com contaminação microbiana, hemolizados, lipémicos ou inactivados pelo calor, uma vez que estes poderão conduzir a resultados inconsistentes.

Antes do ensaio, todas as amostras deverão ser colocadas num agitador tipo vórtice e rapidamente centrifugadas (30 segundos a 10.000 xg) por forma a sedimentar qualquer matéria particulada que possa estar presente.

PROCEDIMENTO

A

.

Materiais Fornecidos

• Grânulos HLA

• Conjugado Concentrado

• Solução Tampão

• Soro Controlo Positivo

• Soro Controlo Negativo

• Ficha de Registo

• Folhas de Formato das Placas

B

.

Materiais, Reagentes e Equipamento Necessários mas não Fornecidos

(conforme listagem ou equivalente)

• Pipetas ajustáveis 5 µl – 50 µl com ponteiras de pipeta adequadas

• Pipetas multicanais de 250 µl com ponteiras a condizer e

bebedouro do tampão

• Tubos de 1,5 ml para microcentrifugadora para diluições do

conjugado

• Tubos de teste para amostras de pacientes e de controlo

• Temporizador

• Caneta marcador

• Rotador ou agitador tipo vórtice com adaptador de prato

• Bainha de Fluido Luminex (1x ou 20x Lifecodes Cat # 628005 ou

628025)

• Grânulos de calibração Luminex (CAL 1, CAL 2, CON 1, CON 2;

Lifecodes Cat #’s 628006, 628007, 628008, 628009)

• Água destilada

• Distribuidor de vácuo multifiltro (Millipore Cat # MAVM 0960R,

Qiagen Cat#19504, Lifecodes Cat#888315)

• Coberturas plásticas adesivas

• Painéis filtrantes multifiltro Millipore (Cat # MSBVN1210,

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INSTRUÇÕES PARA USO

• TEM QUE HAVER cuidado para evitar a contaminação da Solução Tampão e do reagente para IgG anti-humana. A contaminação inadvertida destes reagentes com soro humano resultará na neutralização da IgG anti-humana e, consequentemente, na falha do teste.

• Tem de se ter cuidado ao controlar a força do vácuo. A elevada pressão de vácuo pode provocar a aderência dos grânulos à membrana, induzindo em erro na contagem dos grânulos.

• Devem ser tomadas precauções durante o processo de pipetagem na placa de filtro, para que os grânulos não adiram às partes laterais dos poços da microplaca. Os grânulos devem ser pipetados na solução já introduzida no poço, devendo haver o cuidado de não tocar na membrana com a ponteira. O contacto da ponteira da pipeta com a membrana poderá causar a perfuração da membrana e consequentemente a falha do ensaio.

• Devem ser tomadas precauções para assegurar, durante os passos da incubação, que os grânulos não salpiquem e não adiram às partes laterais dos poços. Ao executar o ensaio pela primeira vez, executar alguns controlos positivos e/ou negativos para

determinar a velocidade ideal da plataforma de rotação ou misturador tipo vórtice. Uma velocidade de aproximadamente 200 rotações por minuto tem demonstrado ser eficaz com alguns instrumentos.

• A presença de níveis significativos de anticorpo não fixado na finalização da lavagem, devido ao soro em excesso ou à lavagem deficiente, pode reduzir a capacidade do ensaio detectar IgG ligada a grânulos sensibilizados, causando resultados erróneos. • Deve ser incluída uma amostra de soros de controlo positivo e negativos em cada teste, para ajudar a determinar a ocorrência de

erros técnicos ou falhas do reagente.

1. Deixar os outros componentes entre 2 e 8ºC no escuro até serem necessários, deixar a Solução Tampão atingir a temperatura ambiente (20 a 24ºC) antes da utilização. Durante este tempo, utilizar a Ficha de Formato da Placa para indicar uma posição na placa para cada um dos soros e controlos a ser analisados. Os soros de controlo fornecidos com o kit são usados para ilustrar um alosoro positivo largamente reactivo e um soro negativo.

2. Cobrir os poços da Placa de filtro não utilizados com cobertura plástica adesiva. Molhar previamente os poços que vão ser utilizados com 100-300 µl de água destilada. Após 2 a 5 minutos, retirar a água por meio de aspiração cuidadosa da placa utilizando o distribuidor de vácuo. (Ver as recomendações do fabricante para utilização adequada.)

3. Preparar rapidamente (30 segundos) os grânulos HLA centrifugando o frasco-ampola a 600 – 800 x g, para remoção de quaisquer grânulos ou líquido que tenham ficado na tampa ou paredes do frasco. Agitar bem em vórtice (~1 minuto) de forma a ressuspender uniformemente os grânulos .

4. Adicionar 40 µl de Solução Tampão a cada poço de teste da Placa de filtro, em seguida, 12,5 µl de soro do paciente ou de Soro Controlo e misturar.

5. Adicionar 5 µl de grânulos HLA a cada um dos poços em utilização. Voltar a agitar em vórtice o frasco dos grânulos HLA de 2 em 2 minutos, de forma a manter os grânulos em suspensão enquanto se procede à distribuição dos mesmos.

ATENÇÃO: É importante manter os grânulos em suspensão para assegurar que seja alocado um número suficiente de grânulos em cada poço, e para assegurar tempos de contagem reduzidos. A ausência de agitação intermitente em vórtice dos grânulos, provocará a sedimendação destes no fundo do tubo. Isto provocará uma diferença na quantidade dos grânulos dispensados para cada poço, o que terá efeitos adversos nos tempos de execução e na análise dos resultados.

6. Cobrir a placa com a cobertura plástica adesiva, embrulhando depois em folha de estanho ou meter em caixa para conservar ao abrigo da luz. Incubar durante 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 24°C) no escuro, numa plataforma rotativa (200 rotações por minuto). Repor as porções de soros de controlo e de grânulos que não foram utilizadas no local de armazenagem, entre 2 e 8ºC, no escuro, para futura utilização.

7. Diluir o conjugado com solução tampão e guardar no escuro (5 µl de conjugado por 45 µl de solução tampão por amostra). Para compensar as perdas na pipetagem, é desejável fazer um (1) volume extra de conjugado diluído. Cobrir com folha de estanho e/ou guardar no escuro à temperatura ambiente até à sua utilização. Repor a porção de Conjugado Concentrado que não foi utilizada no local de armazenagem, entre 2 e 8ºC, no escuro, para futura utilização.

8. Após a incubação de 30 minutos, remover a cobertura plástica adesiva e adicionar 100 µl de Solução Tampão a cada poço. Misturar dando pancadas leves na parte lateral da placa e aspirar cuidadosamente a placa.

ATENÇÃO: A utilização de elevada força de vácuo irá provocar a aderência dos grânulos à membrana e poderá resultar em erro da amostra. Para a aspiração das amostras, aplicar a pressão mínima de vácuo.

9. Adicionar 250 µl de Solução Tampão a cada poço, aspirar e repetir mais duas vezes, num total de três passagens.

ATENÇÃO: Caso a lavagem não seja devidamente feita, a capacidade do conjugado detectar IgG ligada a grânulos sensibilizados poderá ficar reduzida, causando resultados falso-negativos.

10. Adicionar 50 µl de conjugado diluído a cada poço. Cobrir a placa com folha de estanho ou meter numa caixa para conservar ao abrigo da luz. Colocar numa plataforma rotativa (ajustada em 200 rotações por minuto) ou agitar ligeiramente em vórtice a cada 5 ou 10 minutos. Incubar durante 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 24°C).

11. Usando uma ponteira limpa de pipeta, adicionar 130 - 150 µl de Solução Tampão a cada poço e mexer para voltar a suspender os grânulos.

12. Recolher os dados com o instrumento Luminexseguindo as recomendações do fabricante. Atrasos superiores a 3 horas podem aumentar a possibilidade de obter reacções falso-positivas ou falso-negativas. Repor a porção de Solução Tampão que não foi utilizada no local de armazenagem, entre 2 e 8ºC, para futura utilização.

RESULTADOS

Para determinar se um grânulo é positivo, dividir a MFI ( Mediana da Intensidade de Fluorescência) média do grânulo pela MFI de cada Grânulo de Controlo Negativo (CON1, CON2, CON3). A partir destes quocientes, subtrair o Factor de ajuste dos ruídos de fundo (BAF) para

a combinação grânulo/COM apropriada. O BAF é um rácio pré-determinado da MFI para cada combinação grânulo/COM, para compensar o ruído de fundo devido à variação do grânulo e pode ser encontrada na Ficha de Registo específica do lote fornecida com o kit.

Exemplo: MFI Individual do Grânulo - (BAF) = Rácio 1 ajustado MFI Grânulo de Controlo Negativo 1 (CON 1)

MFI Individual do Grânulo - (BAF) = Rácio 2 ajustado MFI Grânulo de Controlo Negativo 2 (CON 2)

MFI Individual do Grânulo - (BAF) = Rácio 3 ajustado MFI Grânulo de Controlo Negativo 3 (CON 3)

Os kits Classe I e IIv2 aplicam também um quarto cálculo de controlo negativo, “CalcCON”, baseado no comportamento de grânulos que contêm antigénios não reactivos. O CalcCON é determinado da seguinte forma: CalcCON = MFI grânulo antigénio de ordem mais baixa + 20. Deste modo, o quarto cálculo será:

MFI Individual do Grânulo - (BAF) = Rácio 4 ajustado

CalcCON

 Um valor positivo para dois ou mais valores dos quatro cálculos, significa que a reacção do grânulo é positiva.

 Um valor negativo para três ou mais valores dos quatro cálculos, significa que a reacção do grânulo é negativa. A percentagem PRA (Anticorpos Reactivos ao Painel) dos kits ID é calculada por:

Classe I ID

% PRA = Número de reacções de grânulos positivas X 100 Número de grânulos do teste (não incluindo os grânulos de controlo) Classe II IDv2

%PRA = (Número de grânulos enriquecidos de DR de reacção positiva) + (Número de grânulos enriquecidos de DR de reacção negativa que também contêm um antigénio DQ positivo) X100

Número total de grânulos enriquecidos de DR

CONTROLO DE QUALIDADE

O Controlo de Qualidade de ID Classe I e IDv2 Classe II é introduzido no sistema de teste pela inclusão de Soros Controlo Positivo e Negativo. Estes controlos devem ser incluídos em cada execução de teste para permitir a determinação de ocorrência de erros técnicos ou de falhas de reagente. Nos kits ID, os Soros Controlo Positivo reagirão com a maioria ou com todos os grânulos conjugados de HLA (>85%), com o pico de grânulo conjugado HLA que produz uma intensidade de fluorescência média mínima  10.000. O Soro Controlo Negativo será negativo (<10%).

Os conjuntos de grânulos incluem quatro grânulos de controlo para controlar o desempenho de cada amostra. O grânulo de controlo positivo é revestido com IgG humana, devendo apresentar valores MFI > 10.000 com os soros de controlo. Caso se obtenham valores inferiores a 10.000 MFI com os soros de controlo, o ensaio poderá ter sido lavado de forma insuficiente ou o conjugado pode estar comprometido. As amostras dos pacientes apresentam um intervalo de reactividade alargado com o grânulo de controlo positivo, mas devem produzir um sinal > 3500 MFI. Analogamente, os grânulos de controlo negativo devem apresentar valores MFI baixos. Consulte a folha de registo específica do lote para obter os intervalos previstos para os grânulos de controlo negativo. Os dados que se encontrem fora deste intervalo devem ser cuidadosamente examinados. Na ausência de soros, o controlo positivo dará um sinal forte enquanto os grânulos restantes darão em média cerca de 50 MFI ou menos. Caso uma amostra produza estes valores muito baixos, a amostra poderá ter sido inadvertidamente omitida. Estas amostras deverão ser repetidas.

O ensaio deve ser executado conforme recomendado na folha de dados, devendo igualmente ser executado com quaisquer outros procedimentos de controlo de qualidade que estejam em conformidade com os requisitos locais, estaduais, federais e/ou das agências de acreditação.

LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO

Podem ocorrer resultados erróneos devidos a contaminação bacteriológica dos materiais de teste, a períodos de incubação desajustados, à lavagem ou decantação inadequada dos grânulos, à exposição do conjugado a luz acidental, ou à omissão de reagentes ou de passos do teste.

A presença de imunocomplexos ou outros agregados de imunoglobulina na amostra do paciente podem causar uma ligação não específica aumentada e produzir resultados erróneos no ensaio.

Para os kits ID, os anticorpos detectados são os reactivos incluídos na população de antigénios disponíveis, listados na Ficha de Registo. Alguma avidez baixa, alguns títulos baixos, IgA, IgM e anticorpos de alelos raros, não serão detectados com os testes LIFECODES ID. Os grânulos fenótipos que indicam a presença de antigénios DR e/ou DQ são enriquecidos em relação ao DR, portanto, podem mostrar maior sensibilidade a anticorpos DR. Por outro lado, os grânulos DQ Classe II específicos são enriquecidos em relação ao DQ e mostram maior sensibilidade a anticorpos DQ. Experiências efectuadas até à data não conseguiram detectar a presença de DR nos grânulos DQ enriquecidos, aumentando a especificidade de anticorpos DQ. A densidade do antigénio em relação ao DR e DQ nas versões de dois grânulos (enriquecido com DR e enriquecido com DQ) podem explicar padrões de reactividade do grânulo durante a análise do soro. A adição de grânulos DQ Classe II ao ensaio IDv2 Classe II ajudará a determinar a presença de anticorpos DQ em soros com elevados PRA.

Devido à natureza complexa dos testes a HLA, a interpretação dos dados deve ser verificada por pessoal qualificado. A determinação da especificidade de anticorpos pela utilização dos kits LIFECODES ID deverá ter em conta os resultados de todos os grânulos, incluindo aqueles que estejam no ou perto do valor de limite. O conhecimento do historial do paciente assim como a compreensão dos grupos com

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REPARAÇÃO DE AVARIAS

PROBLEMA CAUSA POSSÍVEL SOLUÇÃO

Baixa Contagem de Grânulos

Má suspensão da Mistura dos grânulos Impulsionar o vórtice para voltar a suspender completamente Falhas do instrumento - descalibrado Ver o Manual do Instrumento Falhas do instrumento - passagem da amostra

bloqueada Ver o Manual do Instrumento

Foto-descoloração dos grânulos Utilizar novo kit Pressão de vácuo muito elevada/grânulos colados à

membrana Diminuir a força do vácuo

Limiar de Controlo Ultrapassado Lavagem deficiente Repetir e verificar as lavagens

Má qualidade da amostra Voltar a fazer a colheita

Falha do Limiar de Controlo Positivo

Foto-descoloração do conjugado Utilizar novo kit

Lavagem deficiente Repetir e verificar as lavagens

CARACTERÍSTICAS DO FUNCIONAMENTO ESPECÍFICO

Quando os kits LIFECODES ID são utilizados de acordo com o procedimento anteriormente descrito, os resultados revelam a presença ou a ausência de anticorpos IgG HLA. Utilizando um limite PRA de 10%, o kit ID Classe I apresentou 97,1% de co-positividade (90,2-99,2%), 86,4% de co-negatividade (75,5-93,0%) e 92,2% de concordância (86,3-95,7%) em 129 amostras analisadas, quando comparado com resultados obtidos por métodos de citometria de fluxo (intervalo de confiança de 95%). O kit ID v2 Classe II revelou 99,7% de co-positividade (98,3% - 99,9%), 72,2% de co-negatividade (66,6 – 77,1%) e 87,2% de concordância (84,3 – 89,6%) em 600 amostras analisadas, em comparação com os resultados obtidos com o LIFECODES ID Classe II. Os valores relativos à co-negatividade e concordância reflectem uma melhor detecção de anticorpos reactivos DQ com o kit ID v2 Classe II. O kit ID v2 Classe II demonstrou 100% de concordância em resultados reportáveis para sete amostras testadas por seis operadores em três locais de ensaio, e 100% de concordância em resultados reportáveis para sete amostras testadas com três lotes diferentes por um só operador.

Os seguintes reagentes foram avaliados em testes de laboratório e não interferiram com o LIFECODES LifeScreen Deluxe: Remicade (Centocor), Rituxin (Genentech), Zenapax (Roche), Campath (Genzyme) e Gammaguard (Baxter). Em contrapartida, mostrou-se que a Timoglobulina (Genzyme) provoca resultados falso-positivos. Amostras que contenham Timoglobulina poderão dar resultados incorrectos.

REFERÊNCIAS

1. Klein, J, Sato, A. The HLA System. New England Journal of

Medecine. 2000; 343:702 e 343:782.

2.

Londres. 2000; 55.

3. Rodey, GE. HLA Beyond Tears (2ª Edição). DeNovo, Inc. Durango,

Colorado; E.U.A. 2000; 163.

4. McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies

after Solid Organ Transplantation. Transplantation 2000; 69:319.

FABRICANTE E REPRESENTANTE AUTORIZADO

Fabricante: Immucor Transplant Diagnostics, Inc., 550 West Avenue, Stamford, Connecticut 06902; E.U.A. Tel.: +1 (203) 328-9500 ou (888) 329-0255 (nos E.U.A. e no Canadá), Fax: +1 (203) 328-9599

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Edição: Rev 15, 2016-07-22