AVALIAÇÃO DOS EFEITOS ANALGÉSICOS E ANTIINFLAMATÓRIO DO
EXTRATO BRUTO DE Amburana cearensis EM CAMUNDONGOS.
Naiara Rosa de Souza Valente1, Lígia Camargo dos Santos2, Luciana Nowacki3, Wesley Maurício de Souza4.
1
Naiara de Rosa Souza Valente do curso de Tecnologia em Bioprocessos e Biotecnologia da Universidade Tuiuti do Paraná (Curitiba, PR).
2 Lígia Camargo dos Santos do curso de Tecnologia em Bioprocessos e Biotecnologia da Universidade Tuiuti do
Paraná; (Curitiba, PR).
3 Luciana Nowacki Bióloga Prof. Drª. Universidade Tuiuti.
4 Wesley Maurício de Souza Farmacêutico Prof. .Drº. Universidade UFPR.
Endereço para correspondência: Luciana Nowacki , lunowacki@hotmail.com
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RESUMO:Amburana cearensis pertence à família Leguminoseae Papilionoideas (Fabacea)
popularmente, é conhecida por diversas designações, como imburana-de-cheiro, cerejeira e cumaru. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos analgésicos e antiinflamatórios do extrato bruto de Amburana cearensis em camundongos. No testes de contorção abdominal
induzida por acido acético as doses de 1000, 3000 e 5000 mg/kg inibiram as contorções em
66% ,67,6% e 57, 85%, respectivamente. No de edema de pata induzido por carragenina a
dose 3000 mg/kg do extrato inibiu 31,194 %, a formação do edema, após 30 minutos. A fração aquosa inibe o número de contorções abdominais, reduz o edema de pata. Os resultados sugerem que as sementes de Amburana Cearensis contêm compostos com atividade antiinflamatória e analgésica.
Palavras-chave: Amburana Cearensis, contorções, edema.
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ABSTRACT: Amburana cearensis belongs to the family Leguminoseae Papilionoidea
(Fabaceae) popularly is known by various names, such as imburana-pea, cherry wood and tonka bean. The aim of this study was to evaluate the antiinflammatory and analgesic effects of crude extract of Amburana cearensis in mice. In the abdominal writhing test induced by acetic acid doses of 1000, 3000 and 5000 mg / kg inhibited the reflex in 66%, 67.6% and 57% respectively 85. In the paw edema induced by carrageenan dose 3000 mg / kg of extract
inhibited 31.194%, the formation of edema, after 30 minutes. The aqueous fraction inhibits the number of contortions, reducing the paw edema. The results suggest that the seeds of Amburana cearensis to contain compounds with anti-inflammatory and analgesic.
Keywords: Amburana cearensis, contortions, edema.
1. INTRODUÇÃO
Amburana cearensis pertence à família Leguminoseae Papilionoideas (Fabacea), sendo ao
lado da A. acreana os únicos representantes do gênero. Popularmente, é conhecida por diversas designações, como imburana-de-cheiro, cerejeira e cumaru. (MARQUES e ROCHA,2006).
A. cearensis possui uma ampla distribuição no Brasil, ocorrendo no Norte, Nordeste e
Centro-Oeste, nas florestas estacionais nos ecótonos floresta/cerrado ou floresta/caatinga, apresentando-se como uma árvore frondosa, a qual pode atingir até 15m de altura, com flores brancas, vagem achatada e casca do caule vermelho-pardacenta cujo agradável odor é conferido pela cumarina, suas sementes são pretas, aladas e exalam forte cheiro de cumarina (semelhante à baunilha), a floração ocorre no início da estação seca, entre maio e julho, e a frutificação se dá de agosto a outubro. (RAMOS, et al 2004).
A casca do caule é utilizada na medicina popular na preparação de “lambedôs” caseiros para tratamento de doenças respiratórias, como gripe, resfriado, bronquites e asma. Industrialmente, a forma farmacêutica disponível é o xarope de cumaru, produzido pelo Programa Farmácias Vivas, Farmácia-Escola/UFC. (AGRA, et al, 2007).Ensaios farmacológicos pré-clínicos demonstram atividade antiinflamatória, broncodilatadora e analgésica para extrato hidroalcoólico.
Levantamentos revelaram que, apesar da ação comprovada e do uso difundido do xarope cumaru, os constituintes químicos haviam sido relatados na literatura somente para as cascas do caule de A. cearensis, sendo eles cumarina, isocampferídio, amburosídio A e amburosídio B. (MARQUES e ROCHA, 2006).
Em virtude do uso difundido de A. cearensis para fins medicinais e da escassez de relatos fotoquímicos na literatura, tornou-se imprescindível à realização do seu estudo, visando à descoberta dos possíveis responsáveis pelas propriedades terapêuticas da espécie.
O presente trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos analgésicos e antiinflamatórios do extrato bruto aquoso de Amburana cearensis em camundongos.
2. MATERIAIS E MÉTODOS 2.1 Processo de Extração
As sementes de Amburana cearensis foram coletadas das vagens diretamente das árvores na cidade de Barro Alto Bahia 2008, com altitude 705m e latitude -11 45’ 39’’. Os caracteres morfológicos observados foram: tamanho, forma e ausência de fungos, as sementes foram mantidas em condições ambiente. Com o auxílio de um moinho foi efetuado o processo de moagem com a finalidade de reduzir mecanicamente, o material vegetal a fragmentos de pequenas dimensões, preparando-o para a etapa de extração a quente, foi utilizado 1000g da semente de A. cearensis para 3000ml. A solução obtida passou pelo rota vapor com finalidade de obter uma solução com quantidade de água reduzida, a solução foi despejada em béquer e levada ao liofilizador para obtenção do extrato bruto. (Matos et al., 2000).
2.2 Animais
Em todos os experimentos foram utilizados camundongos Swiss (25-35g) machos, mantidos na sala de aclimatação do laboratório de Farmacologia da Universidade Tuiuti do Paraná durante duas semanas antes dos experimentos, em condições de temperatura 21-22ºC constante, luminosidade 12hs claro/12hs escuro, água e ração ad libitum.
2.3 Contorções Abdominais Koster et al. 1959
O método de contorções abdominais foi realizado de acordo com o método descrito por Koster et al. 1959. O extrato bruto aquoso de A. cearensis foi administrado nas doses de 1000, 3000 e 5000 mg/kg, n=8 para cada grupo) por via oral. O grupo controle recebeu salina (NaCl 0,9%, 10 ml/kg vo). Os tratamentos foram realizados 60 minutos antes da administração intraperitoneal (ip) de ácido acético (0,6% v/v salina, 10 ml/kg). O ácido acetilsalicílico (AAS - 400 mg/kg, sc) foi usado como droga controle. O número de contorções dos animais foram contadas de forma somatória durante o período de 20 minutos e a porcentagem de inibição do número de contorções foi calculada.
2.4 Determinações da atividade antiinflamatória no teste de Edema de pata
O edema de pata foi induzido com carragenina 100µg/20µl administrado intraplantar (ipl.) na pata direita dos camundongos, sendo que a pata esquerda recebeu o mesmo volume de salina (20µl/ipl). Os animais foram previamente tratados com extrato (1000, 3000 e 5000 mg/kg, vo), Indometacina (20 mg/kg, ip) ou com salina (10 ml/kg vo) 60 minutos antes da
carragenina. Após a administração da carragenina, o edema de pata foi avaliado nos tempos de 30, 60, 120 e 180 minutos utilizando micrômetro (Mitutoyo IP 65 Coolant Proof / Japan) A diferença do edema (mm) entre as patas direita e esquerda foi calculada, determinando o delta da diferença (CARLINI, et al, 1973).
2.5 Análise Estatística
Os resultados estão expressos em media ± erro padrão da media. O teste ANOVA foi usado para analisar a diferença entre os grupos, seguido do teste de Tukey para determinar a diferença estatística em relação ao grupo controle, sendo considerado significante quando p<0.05.
2.6 Drogas
As drogas usadas foram ácido acetilsalicílico , carragenina, (Sigma Chemical Company, St. Louis USA), indometacina (VICO Farma).
3. RESULTADOS E DISCUSSÃO 3.1 Contorções abdominais
Nas contorções abdominais grupo controle foi o que, apresentou o maior número de contorções (66,12 ± 6,849), no intervalo de 20 min. As médias obtidas representam uma redução de 66%, 67,6% e 57,85% nas doses 1000, 3000, e 5000 mg/Kg respectivamente quando comparado ao grupo controle.
A presença de bioativos com atividade analgésica foi evidenciada no teste das contorções abdominais que inibiu significamente as mesmas. A resposta nociceptiva do acido acético envolve a liberação de compostos endógenos como a bradicinina, prostaglandina e outros mediadores como descrito por Deraedt et al. (1980), que observaram altos níveis destas estruturas durante os primeiros 20 minutos após a injeção de acido acético. Estudo realizado utilizando-se do modelo de contorção abdominal provocado pelo ácido acético tem mostrado que as prostaglandinas (principalmente as prostaciclinas) são as principais mediadores envolvidos neste processo álgico (BERKENKOPF J & WEICHMAN, 1998; MURATA et al, 1997). De acordo com resultados descritos percebe-se que a Amburana cearensis é eficaz na redução das contorções abdominais provocadas pelo ácido acético caracterização analgésica, porém ainda sem mecanismo de ação determinado.
SAL 1000 3000 5000 0 25 50 75 Amburana cearensis mg/kg vo *** ** *** AAS ** n u m e ro d e c o n to rç õ e s ( 2 0 m in )
Fig. 01 – Avaliação do efeito do extrato bruto aquoso de Amburana cearensis (AC) nas contorções abdominais induzidas por acido acético. Os camundongos foram tratados vo com salina (controle), com Acido Acetil Salicilico (400 mg/kg) ou com AC nas doses de 1000, 3000 e 5000 mg/kg.
No teste de contorções todos os tratamentos foram via oral. Após 60 minutos das administrações os animais receberam acido acético 0,6% no volume de 10ml/Kg ip. O numero de contorções foi contado no intervalo de 20 minutos. Os dados estão expressos em media±epm (n= 7-8) onde ***p< 0,001 e **p<0, 01, no teste de ANOVA seguido de Tukey.
3.2 Edema de pata
O edema de pata no modelo de inflamação não variou proporcionalmente nos grupos controle, padrão e experimental (Anova <0,05).
Neste experimento, considerou-se o resultado obtido nos animais controles como uma reação normal a carragenina, a qual foi mais intensa em animais tratados apenas com solução salina. Os resultados apresentados com os animais do controle (indometacina 20 mg/kg, ip) e experimental (A. cearensis 1000, 3000 e 5000 mg/kg) são considerados uma resposta à agressão do agente flogístico e à ação das substâncias utilizadas no experimento.
A dose 3000 mg/kg do extrato inibiu 31,194 % , a formação do edema, após 30 minutos da injeção do estimulo inflamatório. Esse resultado foi significativo estatisticamente quando comparado ao grupo controle (0,129±0,038). Observamos a redução do edema quando administrado a indometacina após 60 minutos da administração da carragenina, com 28,74 % de inibição do edema quando comparado ao controle (0,13±0,035).
Os demais resultados não apresentaram efeito significativo em relação ao grupo controle após 3 horas. Este experimento é utilizado em resposta aguda, pois a presença de mediadores como a prostaglandina e outros compostos de reação lenta é intensa na terceira hora depois do estimulo (VINEGAR et al., 1969; DI ROSA et al., 1971). A injeção intraplantar de
carragenina em camundongos provoca a liberação de bradicinina, substância com ação vasodilatadora, a qual posteriormente induz a biossíntese de prostaciclinas e outros autacóides, os quais são responsáveis pelo processo inflamatório (UENO et al., 2000).
O edema de pata induzido por carragenina é um modelo de inflamação aguda que consiste de duas fases: a primeira, detectada em torno de uma hora, é chamada de fase rápida, com liberação de histamina e serotonina; a segunda fase é chamada de tardia, com os mediadores (cininas e prostaglandinas) liberados após duas e três horas respectivamente (VINEGAR et
al., 1969; DI ROSA et al., 1971).
A indometacina, considerada um inibidor da cicloxigenase é capaz de impedir esse processo inflamatório. Portanto, sugere-se que o mecanismo de ação do extrato esteja relacionado à inibição de síntese de prostaglandina, como ocorre no mecanismo antiinflamatório da indometacina, no processo inflamatório induzido por carragenina (DI ROSA; PAPADIMITRIOU; WILLOUGHBY, 1971). Observaram que o extrato bruto aquoso de A.
cearensis apresentou atividade antiinflamatória relacionado com a inibição de síntese de
prostaglandina em camundongos. Sal indo 1000 3000 5000 0.0 0.1 0.2 0.3 AC mg/kg vo A E d e m a ( m m ) sal indo 1000 3000 5000 0.0 0.1 0.2 * AC mg/kg vo B E d e m a ( m m ) sal indo 1000 3000 5000 0.0 0.1 0.2 * AC mg/kg vo C E d e m a ( m m ) sal indo 1000 3000 5000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 AC mg/kg vo D E d e m a ( m m ) sal indo 1000 3000 5000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 AC mg/kg vo E E d e m a ( m m )
Fig. 02 – Avaliação do efeito do extrato bruto aquoso de Amburana cearensis (AC) no edema de pata induzido por carregenina. Os camundongos foram tratados vo com salina (controle), com indometacina (20 mg/kg, ip)) ou com (AC) nas doses de 1000, 3000 e 5000 mg/kg. No teste de edema de pata os tratamentos foi via oral e intraperitoneal. Após 60 minutos das administrações os animais receberam carragenina100µg/20µl. o edema de pata foi avaliado nos tempos de 30, 60, 120 e 180 minutos utilizando micrômetro. Os dados estão expressos em media±epm (n= 8) onde *p< 0,1 e *p<0, 1, no teste de ANOVA seguido de Tukey.
4. CONCLUSÃO
Os resultados do teste das contorções abdominais induzidas por ácido acético surgerem que a fração aquosa do extrato das sementes de Amburana cearensis apresenta atividade analgésica quando administrado via oral reduzindo as contorções abdominais de forma significativa.
A utilização do extrato de A. cearensis no tratamento antiinflamatório reduziu o edema de pata de camundongo na dose de 3000 mg/Kg provocado pela administração de carragenina em relação ao grupo controle. Este efeito comparado ao da indometacina foi menor, mas não estatisticamente diferente, os demais efeitos não foram significativos. Observou-se um pequeno efeito antiinflamatório, principalmente na dose de 3000 mg/kg do extrato de A.
cearensis, entretanto este não chega a ser significante.
Os resultados obtidos no teste de edema de pata surgerem que outros estudos sejam realizados com outras frações do extrato bruto de A. cearensis para de detectar ações antiinflamatórias mais evidentes e caracterizar o principio ativo responsável por esta ação.
5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
AGRA, Maria de Fátima, BARACHO, George Sisney, BASÍLIO, Ionaldo J.Diniz, NURIT, Kiriaki, COELHO, Victor Peçanha, BARBOSA, Danila de Araújo.Sinopse da flora medicinal do cariri paraibano. João Pessoa, Paraíba, p323-330,out.2007.
BERKENKOPF, J& WEICHMAN, B.M. Production of prostacyclin in mice following intraperitoneal injection of acetic acid, phenylbenzoquinone and zymosan: its role in the writhing response .Prostaglandins, 36:693-709,1998.
CARLINI, E.L.A. Farmacologia prática sem aparelhagem. São Paulo: SARVIER,1973. DERAEDT, R. et al. Release of prostaglandins E and F in algogenic reation and its inhibition.
European Journal of Pharmacology, v. 61, p.17, 1980.
DI ROSA, M.; PAPADIMITRIOU, J. M.; WILLOUGHBY, D. A. A histophathological and pharmacological analysis of the mode of action of nonsteroidal anti-inflammatory drugs. J
Pathol, v. 105, n. 4, p. 239-256, 1971.
KOSTER, R., ANDERSON, M., DE-BEER, E.J., 1959. Acetic acid for analgesic screening. Federation Proceedings 18, 412–418.
MARQUES, Kirley Canuto, ROCHA, Edilberto Silveira. Constituintes Químicos casca do caule de A. Cearensis. Química Nova, São Paulo SP. Vol.29 no. 6, Nov./Dec.2006.
MATOS, L.G.; SANTOS,L.D.A.R.; VILELA, C.F.; PONTES, I.S.; TRESVENZOL, L.M.F.; PAULA, J.R.; COSTA, E.A. Estudo das atividades analgésica e antiinflamatória ETOH bruto da raiz da S. odoratissima (Manacá).Revista Brasileira de Farmacologia, Recife, p.14, 20 outub.2000.
RAMOS, Kennya Mara Oliveira, FELFILI, Jeanine Maria, FAGG, Christopher William. Desenvolvimento inicial e repartição de biomassa de A. cearensis (Allemao) A.C. Smith, em diferentes condições de sombreamento. Acta Botânica Brasílica. São Paulo, vol.18, no. 2, P.351-358, Apr./June.2004.
UENO, A. et al. Intrinsic prostacyclin contributes to exudation induced by bradikinin or carrageenin: a study on the paw edema induced in ip-receptor-deficient mice. Life Sci, v. 66, p.155-160, 2000.
VINEGAR, R.; W. SHREIBER & R. HOGO. 1969. Biphasic development of carrageenin oedema in rats. J.Pharm acol. Exp. 166: 96-103.
